化學(xué)品 亞慢性吸入毒性試驗(yàn)方法 征求意見(jiàn)稿

4GB/T21786—XXXX化學(xué)品亞慢性吸入毒性試驗(yàn)方法本文件規(guī)定了嚙齒類(lèi)動(dòng)物亞慢性吸入毒性試驗(yàn)的范圍、術(shù)語(yǔ)和定義、試驗(yàn)基本原則、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告。本文件適用于檢測(cè)化學(xué)品（包括納米材料）的亞慢性吸入毒性。2規(guī)范性引用文件本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)下列術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)適用于本文件。3.1亞慢性吸入毒性subcbronicinhalationtoxicity在試驗(yàn)動(dòng)物壽命的一部分期間內(nèi)（不超過(guò)壽命的10%試驗(yàn)動(dòng)物每天重復(fù)吸入受試物所發(fā)生的有害效應(yīng)。4試驗(yàn)原則在試驗(yàn)確定的時(shí)間內(nèi)，不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組每天吸入一定梯度的受試物，每組一個(gè)濃度，連續(xù)染毒90d。為制備動(dòng)物吸入空氣中合適濃度的受試物而使用賦形劑，時(shí)需設(shè)賦形劑對(duì)照組。染毒期間每天觀察動(dòng)物的毒性效應(yīng)。試驗(yàn)期間死亡和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死的存活動(dòng)物均作大體解剖檢查。5試驗(yàn)方法5.1受試樣品5.1.1氣體或揮發(fā)性化學(xué)物、氣溶膠／顆粒性物質(zhì)（包括納米材料5.1.2名稱(chēng)和識(shí)別碼；5.1.3受試物的純度（雜質(zhì)和含量5.1.4液態(tài)物：飽和蒸氣壓、沸點(diǎn)；5.1.5氣溶膠／顆粒物：粒度、形狀和密度分布、肺部的滯留和動(dòng)力學(xué)方面信息；5.1.6閃點(diǎn)；5.1.7爆炸性；5.1.8任何體外或體內(nèi)毒性試驗(yàn)的結(jié)果；5GB/T21786—XXXX5.1.9預(yù)期用途和人類(lèi)接觸的可能性；5.1.10如果是混合物，提供配方的分析濃度；5.2試驗(yàn)準(zhǔn)備5.2.1健康成年動(dòng)物至少飼養(yǎng)5d，以使其適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境，在試驗(yàn)前，將動(dòng)物隨機(jī)分組；5.2.2如有必要，可在受試物中加入適合的賦形劑，以助受試物在空氣中形成適宜的濃度，但應(yīng)證實(shí)賦形劑不影響受試物的吸收，也不產(chǎn)生毒性反應(yīng)。5.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境5.3.1動(dòng)物的選擇采用常用品系的健康成年哺乳動(dòng)物。首選的物種是大鼠。如果使用其他物種，應(yīng)進(jìn)行說(shuō)明。隨機(jī)化分組時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)該是7至9周齡的成年鼠。動(dòng)物的體重差異不得超過(guò)同性別平均體重的20%。每只動(dòng)物都要做好標(biāo)記，以方便識(shí)別，并在試驗(yàn)開(kāi)始前至少在籠中飼養(yǎng)5天，以便適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。5.3.2飼養(yǎng)環(huán)境試驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的溫度應(yīng)為22℃士3℃,相對(duì)應(yīng)濕度為30%~70%。人工光照時(shí)，應(yīng)12h明，12h暗。飼以實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)飼料，飲水不限；動(dòng)物按性別單籠飼養(yǎng)，也可群養(yǎng)，但每籠的動(dòng)物數(shù)以不影響對(duì)每只動(dòng)物的觀察為宜。當(dāng)使用口鼻方式染毒時(shí)，約束管不應(yīng)給動(dòng)物帶來(lái)不必要的物理、熱或固定的壓力。應(yīng)用全身暴露方式染毒時(shí)，暴露期間可單獨(dú)飼養(yǎng)，以防止它們通過(guò)籠中同伴的皮毛再次暴露于受試物。除暴露期間外，試驗(yàn)動(dòng)物給予常規(guī)飼料和飲水。5.3.3數(shù)量和性別每一濃度組至少應(yīng)有20只動(dòng)物（雌雄各半）。雌性應(yīng)為未妊娠和未分娩的動(dòng)物。如試驗(yàn)設(shè)計(jì)中包括定期處死動(dòng)物，需按要求增加動(dòng)物數(shù)。另外，如果設(shè)置恢復(fù)組(20只動(dòng)物，雌雄各半該組以高濃度染毒90d，在染毒結(jié)束后的觀察期一般不少于28d，用以觀察毒性效應(yīng)的可逆性、持久性以及有無(wú)遲發(fā)毒性效應(yīng)。5.3.4氣體染毒設(shè)施亞慢性吸入毒性研究總是在動(dòng)態(tài)染毒設(shè)施中進(jìn)行。不能使用靜態(tài)染毒柜。選擇染毒方式的依據(jù)是測(cè)試化學(xué)品的性質(zhì)和測(cè)試的目的。對(duì)于液體或固體氣溶膠的研究以及可能凝結(jié)成氣溶膠的蒸汽的研究，首選的接觸方式是口鼻式（單純鼻子或口鼻子）。有特殊目前的試驗(yàn)可應(yīng)用全身暴露模式染毒，并將染毒方式在研究報(bào)告中說(shuō)明理由。在全身暴露染毒時(shí)，為確保染毒柜中氣體相對(duì)穩(wěn)定，試驗(yàn)動(dòng)物的總體積不應(yīng)超過(guò)染毒柜容積的5%。5.4染毒濃度的設(shè)計(jì)5.4.1限定濃度測(cè)試的最大濃度應(yīng)考慮：1）可達(dá)到的最大濃度，2）需要保持足夠的氧氣供應(yīng)，3）動(dòng)物福利因素。如果沒(méi)有數(shù)據(jù)可參考，可使用聯(lián)合國(guó)全球化學(xué)品統(tǒng)一分類(lèi)和標(biāo)簽制度的急性限值（即氣溶膠的最大濃度為5mg/L，蒸汽為20mg/L，氣體為20000ppm）。如果在測(cè)試氣體或高揮發(fā)性測(cè)試化學(xué)品（如制冷劑）時(shí)有必要超過(guò)這些限制，應(yīng)提供理由。對(duì)于顆粒物，只有在能夠保持/達(dá)到可吸入顆粒大小的情況下，6GB/T21786—XXXX可進(jìn)行>2mg/L的氣溶膠的測(cè)試。5.4.2劑量范圍研究如果沒(méi)有足夠的信息進(jìn)行劑量設(shè)計(jì)，就應(yīng)該進(jìn)行劑量范圍研究。雖然范圍探索研究的主要目的是為研究選擇濃度水平提供信息，但它也可以提供受試物的其他信息，以確保主體研究的順利進(jìn)行，尤其是在測(cè)試溶解性差的固體氣溶膠時(shí)，這一點(diǎn)尤其重要。劑量范圍研究可以提供受試物顆粒大小分布、系統(tǒng)毒性、毒物動(dòng)力學(xué)、測(cè)試化學(xué)品在肺部的溶解度、顆粒的轉(zhuǎn)移、毒作用機(jī)制、臨床病理學(xué)（即血液學(xué)/臨床化學(xué)）、組織病理學(xué)、肺損傷的生物標(biāo)志物、性別敏感性、BALF數(shù)據(jù)，以及主要研究中可能的為觀察到有害作用的濃度(NOAEC)、觀測(cè)到有害作用的最低濃度(LOAEC)、最大耐受濃度(MTC)和/或基準(zhǔn)劑量（BMC）的估計(jì)。研究人員可利用濃度范圍研究來(lái)確定在不對(duì)動(dòng)物造成過(guò)度應(yīng)激狀況下可以容忍的最高濃度，以及最能體現(xiàn)試驗(yàn)化學(xué)品毒性的參數(shù)。BAL可以在濃度范圍研究終止時(shí)進(jìn)行，也可以在暴露后階段定期進(jìn)行。當(dāng)測(cè)試固體氣溶膠時(shí)，可以對(duì)測(cè)試化學(xué)品的溶解度和暴露后的肺部負(fù)擔(dān)進(jìn)行評(píng)估，以期為吸入研究的持續(xù)時(shí)間和暴露后觀察（PEO）時(shí)間點(diǎn)的間隔提供信息。另外，LALN負(fù)擔(dān)的測(cè)量可以提供關(guān)于受試物在肺部轉(zhuǎn)移的信息。濃度范圍研究試驗(yàn)可能包括受試化學(xué)品一個(gè)或多個(gè)濃度水平和一個(gè)對(duì)照組。根據(jù)所選擇的終點(diǎn)，每個(gè)濃度組的動(dòng)物不超過(guò)5只雄性和5只雌性。染毒時(shí)間至少持續(xù)5天，一般不超過(guò)28天。如果還包括停止暴露后的時(shí)間點(diǎn)觀察，動(dòng)物數(shù)量應(yīng)作相應(yīng)調(diào)整。當(dāng)測(cè)試溶解性差的顆粒狀化學(xué)品時(shí)，染毒時(shí)間可超過(guò)28天，以便尋找染毒劑量范圍；同時(shí)也可對(duì)測(cè)試化學(xué)品的溶解性和肺部負(fù)擔(dān)進(jìn)行評(píng)估。在研究報(bào)告中應(yīng)提供正式試驗(yàn)的濃度選擇的根據(jù)。5.4.3染毒方案每次試驗(yàn)至少應(yīng)有3個(gè)受試物濃度組和1個(gè)對(duì)照組，使用賦形劑時(shí)還應(yīng)設(shè)賦形劑對(duì)照組。對(duì)照組動(dòng)物除不給受試物外，其他處理均應(yīng)與染毒組相同。最高濃度組應(yīng)引起毒性效應(yīng)，但不引起動(dòng)物死亡，以免影響對(duì)結(jié)果的評(píng)價(jià)，最低濃度組不能出現(xiàn)任何毒性效應(yīng)，但濃度應(yīng)超過(guò)人類(lèi)預(yù)期接觸濃度。理想的中間濃度組應(yīng)引起動(dòng)物輕微的可觀察到毒性效應(yīng)。假如設(shè)計(jì)了一個(gè)以上的中間濃度，則應(yīng)設(shè)立適當(dāng)?shù)臐舛忍荻?，以產(chǎn)生不同程度的毒性效應(yīng)。低、中濃度組和對(duì)照組的動(dòng)物死亡發(fā)生率應(yīng)很低，以便對(duì)試驗(yàn)結(jié)果作出有意義的評(píng)價(jià)。若受試物具有潛在的爆炸性應(yīng)小心，避免達(dá)到爆炸的濃度。5.5染毒設(shè)施、環(huán)境和受試樣品濃度檢測(cè)動(dòng)物應(yīng)在吸入染毒設(shè)備中進(jìn)行試驗(yàn)。對(duì)設(shè)備設(shè)計(jì)基本要求：維持每小時(shí)12次～15次換氣，保證氧氣體積分?jǐn)?shù)為19％、受試物在空氣中為均勻分布。如果設(shè)備是染毒柜，除了上述要求外要保證動(dòng)物在柜內(nèi)不擁擠、并能最大程度的接觸空氣中的受試物?？傊_保染毒柜中氣流的穩(wěn)定，試驗(yàn)動(dòng)物的“總體積“不能超過(guò)染毒柜容積的5%。如采用口鼻式或頭部暴露吸入染毒法，可避免經(jīng)口和皮膚途徑接觸受試物。應(yīng)使用配有控制測(cè)定空氣中受試物濃度的動(dòng)式吸入染毒系統(tǒng)。通過(guò)調(diào)整空氣流速使整個(gè)設(shè)備的濃度分布等基本相同。染毒設(shè)備應(yīng)維持輕微的負(fù)壓，以免受試物從染毒柜逸出。在試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)進(jìn)行測(cè)量：a)氣流速度，最好連續(xù)監(jiān)測(cè)；b)在染毒期間，應(yīng)盡可能地使受試物的實(shí)際濃度維持恒定；c)在染毒空氣發(fā)生期間應(yīng)進(jìn)行粒度分析，對(duì)氣溶膠濃度的穩(wěn)定性做出估測(cè)（空氣動(dòng)力學(xué)直徑（MMAD）7GB/T21786—XXXX≤2μm，幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(σg或GSD）為1-3在染毒期間，需盡可能多的采樣進(jìn)行粒度分析，以測(cè)定粒度分布的一致性；d)最好連續(xù)監(jiān)測(cè)溫度和濕度。5.6染毒步驟5.6.1整體設(shè)計(jì)根據(jù)試驗(yàn)化學(xué)品的性質(zhì)可選擇方案A或者方案B，具體見(jiàn)附件。方案A主要用于氣體、蒸汽、液體氣溶膠和可溶性氣體氣溶膠的化合物；方案B用于測(cè)試溶解性差的固體氣溶膠，這些化學(xué)品有可能停留在肺部。雖然附件中方案A和B對(duì)組別設(shè)計(jì)、測(cè)試的物質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但研究的實(shí)際設(shè)計(jì)方案由研究負(fù)責(zé)人來(lái)確定，可根據(jù)劑量范圍研究的信息和所有其他可用的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行研究設(shè)計(jì)和選擇暴露濃度。以受試物染毒動(dòng)物一般每周暴露5d，但也可每周暴露7d每天6h，為期13周（總研究時(shí)間為90d）。每天的吸入接觸時(shí)間也可根據(jù)需要確立。為觀察染毒結(jié)束后的毒性效應(yīng)的轉(zhuǎn)歸而設(shè)設(shè)立附加實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物在染毒90d后，不再給任何處理，至少再觀察28d，以檢測(cè)毒效應(yīng)的可逆性和持久性。進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)動(dòng)物呼吸帶的溫度維持在22℃士3℃。相對(duì)濕度，除了水性氣溶膠外，應(yīng)最好保持在30%~70%。染毒過(guò)程中，要停止供食供水。5.6.2附加組設(shè)計(jì)染毒分組時(shí)也可設(shè)立附加組，以評(píng)估治療后適當(dāng)時(shí)間內(nèi)的恢復(fù)性、持久性、延遲發(fā)生的毒性或肺部負(fù)擔(dān)。附加組的研究設(shè)計(jì)見(jiàn)附件。需要注意的是，試驗(yàn)負(fù)責(zé)人可以根據(jù)試驗(yàn)化學(xué)品的物理化學(xué)特性和動(dòng)力學(xué)來(lái)修改實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以獲得最可靠的數(shù)據(jù)。所有附加組與主試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同時(shí)接觸受試物，且濃度相同，必要時(shí)還應(yīng)設(shè)立空氣或空白對(duì)照。附加組的設(shè)計(jì)取決于試驗(yàn)化學(xué)品是否是固體氣溶膠，是否有可能導(dǎo)致肺部蓄積。如果試驗(yàn)化學(xué)品可能導(dǎo)致肺部滯留，則吸入試驗(yàn)按方案B所述進(jìn)行；否則，吸入研究按方案A所述進(jìn)行。在方案A中可設(shè)立附加組以評(píng)估恢復(fù)情況；方案B規(guī)定附加組的設(shè)計(jì)以評(píng)估恢復(fù)情況和/或測(cè)量肺部負(fù)擔(dān)。5.7實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察在染毒過(guò)程中，每天至少要進(jìn)行一次仔細(xì)的臨床觀察，必要時(shí)，還要增加觀察次數(shù)，來(lái)記錄試驗(yàn)動(dòng)物的死亡等狀況，當(dāng)發(fā)現(xiàn)死亡的動(dòng)物，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖檢查，或冷藏后以備檢查；對(duì)衰弱或?yàn)l死動(dòng)物進(jìn)行隔離或處死，作大體解剖檢查。吸入染毒期間和染毒后都要觀察動(dòng)物，并在系統(tǒng)地觀察后進(jìn)行記錄，以保存每只動(dòng)物的觀察記錄；每天都要觀察所有動(dòng)物，記錄動(dòng)物的毒性特征，包括出現(xiàn)的時(shí)間、程度、持續(xù)時(shí)間；籠旁觀察應(yīng)包括但不限于皮膚和被毛、眼睛和黏膜的變化、呼吸、循環(huán)、自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)和行為方式等的變化。嚴(yán)格規(guī)定觀察程序，避免受試動(dòng)物由于自殘、組織自溶或遺忘等造成試驗(yàn)動(dòng)物的丟失。試驗(yàn)結(jié)束后，除附加組外，處死所有染毒組中存活的動(dòng)物。5.8檢測(cè)指標(biāo)5.8.1體重在第一次染毒前（第0天應(yīng)記錄動(dòng)物個(gè)體的體重，此后每周記錄兩次體重（例如，在周五和周一，以證明在無(wú)接觸的周末的恢復(fù)情況，或固定時(shí)間間隔，以便評(píng)估全身毒性在死亡或安樂(lè)死的時(shí)候也應(yīng)該稱(chēng)重。如果在前4周內(nèi)沒(méi)有明顯的體重影響，剩余時(shí)間內(nèi)可以每周測(cè)量一次體重。在研究終止時(shí)，8GB/T21786—XXXX應(yīng)在處死前稱(chēng)重，以便計(jì)算臟器系數(shù)。5.8.2食物和水的消耗應(yīng)每周測(cè)量食物消耗量和飲水的消耗量。如果研究方案包括暴露后不同時(shí)間點(diǎn)，應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行食物和水消耗的測(cè)量。5.9臨床檢查對(duì)所有動(dòng)物應(yīng)做下列項(xiàng)目的檢查：5.9.1眼部檢查在使用受試化學(xué)品之前，應(yīng)對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行眼底、屈光介質(zhì)、虹膜和結(jié)膜的眼科檢查，并在染毒研究結(jié)束時(shí)，對(duì)所有高濃度組和對(duì)照組進(jìn)行眼科檢查，使用眼科鏡或同等設(shè)備。如果發(fā)現(xiàn)眼睛有變化，應(yīng)檢查其他組的所有動(dòng)物，包括附加組。5.9.2實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行血液臨床生化測(cè)定。表1列出了所有毒理學(xué)研究中通常需要的臨床病理參數(shù)。尿液分析不是常規(guī)要求，但在根據(jù)預(yù)期或觀察到的毒性認(rèn)為有必要時(shí)，可以進(jìn)行尿液檢測(cè)。研究負(fù)責(zé)人可以選擇評(píng)估其他參數(shù)，以便更好地描述試驗(yàn)化學(xué)品的毒性，如：膽堿酯酶、脂質(zhì)、激素、酸堿平衡、高鐵血紅蛋白或海因小體、肌酸激酶、骨髓細(xì)胞學(xué)、肌鈣蛋白、乳酸脫氫酶、谷氨酸脫氫酶和-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶。表1.標(biāo)準(zhǔn)臨床病理參數(shù)血液學(xué)鈉9GB/T21786—XXXX鈣磷5.9.3支氣管肺泡灌洗檢測(cè)支氣管肺泡灌洗應(yīng)在暴露后觀察期（postexposureobservationPEO-1,暴露終止后24小時(shí)內(nèi)）和暴露后的一個(gè)間隔期（PEO-2）進(jìn)行（見(jiàn)附件，選項(xiàng)A）。當(dāng)測(cè)試低溶解性的氣溶膠時(shí)（見(jiàn)附件中的選項(xiàng)B應(yīng)在PEO-1（暴露終止后24小時(shí)內(nèi)）對(duì)兩個(gè)性別的動(dòng)物都進(jìn)行支氣管灌洗液（BAL）檢查，如果設(shè)置了恢復(fù)組，則在PEO-2對(duì)雌性動(dòng)物進(jìn)行BAL檢查。灌洗時(shí)一般首選右肺。暴露后的持續(xù)時(shí)間和PEO的時(shí)間由研究人員根據(jù)劑量范圍研究的結(jié)果和其他可用的相關(guān)信息決定。強(qiáng)制性BALF分析指標(biāo)包括：?1）乳酸脫氫酶（LDH2）總蛋白或白蛋白；3）肺泡巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的細(xì)胞計(jì)數(shù)和差值。5.9.4肺臟負(fù)荷在測(cè)試溶解性差的固體氣溶膠時(shí)，對(duì)肺負(fù)荷的測(cè)量可以提供受試物殘留狀況。當(dāng)劑量范圍研究或其他相關(guān)資料顯示試驗(yàn)化學(xué)品已經(jīng)或可能殘留在肺內(nèi)，并且有相應(yīng)的分析方法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行肺臟負(fù)荷測(cè)量。使用雄性進(jìn)行肺臟負(fù)荷策略是因?yàn)樗却菩悦糠昼姾舫鰵怏w量更高，因此可能有更大的肺臟負(fù)擔(dān)。如附件(選項(xiàng)B)所示，每個(gè)濃度組中要增加5個(gè)雄性動(dòng)物。PEO-1計(jì)劃在染毒終止后約24小時(shí)進(jìn)行，以便通過(guò)粘液纖毛運(yùn)輸從傳導(dǎo)氣道快速清除沉積的受試化學(xué)品。研究人員可選擇在PEO-2和PEO-3組中測(cè)量肺負(fù)荷。為了獲得關(guān)于肺部清除動(dòng)力學(xué)的信息，應(yīng)在暴露后的所有時(shí)間點(diǎn)測(cè)量同一肺部（建議使用右肺）的肺部負(fù)擔(dān)。暴露后的持續(xù)時(shí)間和PEO的間隔由研究人員根據(jù)范圍研究的結(jié)果和其他相關(guān)信息來(lái)決定。5.9.5病理學(xué)檢查所有的試驗(yàn)動(dòng)物，包括在試驗(yàn)過(guò)程中死亡的動(dòng)物；因動(dòng)物倫理等原因要安樂(lè)死的動(dòng)物，都應(yīng)進(jìn)行徹底的放血（如果可行的話）和大體的尸檢。如果發(fā)現(xiàn)動(dòng)物尸體后不能立即進(jìn)行尸檢，則應(yīng)將動(dòng)物冷藏(而不是冷凍)到足夠低的溫度，以減少自溶。尸體解剖應(yīng)盡快進(jìn)行，通常在一兩天內(nèi)完成。應(yīng)記錄每只動(dòng)物的所有大體病理變化，特別注意呼吸道的任何變化。為避免兔肝、腎、腎上腺和睪丸失水干燥，分離后應(yīng)盡快稱(chēng)其濕重。表2列出了組織病理學(xué)檢查大體剖檢時(shí)應(yīng)保存在適當(dāng)介質(zhì)中的器官和組織。GB/T21786—XXXX表2.尸檢時(shí)保存的器官和組織來(lái)自肺部肝區(qū)的淋巴結(jié)，特別是對(duì)于溶解性差的顆為重點(diǎn)的研究，可以考慮額外的引流淋巴結(jié)，例如來(lái)自后縱隔、內(nèi)頸、副頸、后頸、耳廓和/或頸/下胃氣管（至少2個(gè)層次，包括1個(gè)通過(guò)頸部的縱切面GB/T21786—XXXX濕潤(rùn)稱(chēng)重，以避免干燥。組織和器官應(yīng)在尸檢后立即用10%緩沖福爾馬林或其他合適的固定劑固定，根據(jù)使用的固定劑至少應(yīng)檢查4個(gè)水平的鼻咽組織，其中一個(gè)應(yīng)包括鼻咽管，以便充分檢查鱗狀上皮、過(guò)渡性（非纖毛性呼吸道）、呼吸性（纖毛性呼吸道）和嗅覺(jué)上皮，以及回流淋巴組織（NALT）。喉部的檢測(cè)至少包括會(huì)厭的底部[14]。氣管檢測(cè)應(yīng)該包括一個(gè)通過(guò)肺外支氣管分叉處的縱切面和一個(gè)橫切面。當(dāng)設(shè)有附加組時(shí)，應(yīng)對(duì)其他試驗(yàn)組確證有毒性的組織和器官進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。至少在給藥和恢復(fù)階段結(jié)束時(shí)，應(yīng)對(duì)所有暴露和對(duì)照動(dòng)物在暴露期和暴露后以及動(dòng)物處死時(shí)進(jìn)行臨床病理學(xué)評(píng)估。肺部功能如果負(fù)責(zé)人在盡量范圍研究中發(fā)現(xiàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物有反射性呼吸困難的證據(jù)，或其他信息（如低溫）表明可能發(fā)生這些病理反射，應(yīng)該定期測(cè)量肺功能和體溫進(jìn)行量化6試驗(yàn)數(shù)據(jù)和報(bào)告應(yīng)提供劑量范圍研究和主要染毒研究的動(dòng)物個(gè)體數(shù)據(jù)，包括體重、食物消耗、臨床病理、BALF分析、大體病理、器官重量、肺部負(fù)擔(dān)（如果有）和組織病理學(xué)。臨床觀察數(shù)據(jù)應(yīng)以表格形式總結(jié)，顯示每個(gè)試驗(yàn)組使用的動(dòng)物數(shù)量、顯示特定毒性癥狀的動(dòng)物數(shù)量、試驗(yàn)期間發(fā)現(xiàn)死亡或因人道原因被殺死的動(dòng)物數(shù)量、個(gè)別動(dòng)物的死亡時(shí)間、毒性效應(yīng)和可逆性的描述和時(shí)間過(guò)程，以及尸檢結(jié)果。并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。6.1結(jié)果處理將所有數(shù)據(jù)綜合并建議用表格形式表述，結(jié)果中應(yīng)該包括每組試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)各組的動(dòng)物數(shù)、出現(xiàn)損害的動(dòng)物數(shù)、損害類(lèi)型及每種類(lèi)型的動(dòng)物百分?jǐn)?shù)。所有觀察到的結(jié)果，無(wú)論定性的還是發(fā)生率，都應(yīng)以適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)與評(píng)價(jià)，建議在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)選好所采用的統(tǒng)計(jì)方法。6.2結(jié)果評(píng)價(jià)亞慢性吸入毒性試驗(yàn)的研究結(jié)果應(yīng)將出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、大體解剖、組織病理學(xué)的發(fā)現(xiàn)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，包括受試物的濃度與異常改變的有或無(wú)、發(fā)生率和嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。例如行為表現(xiàn)和臨床異常、肉GB/T21786—XXXX眼所見(jiàn)的損害、確證的靶器官、體重變化、對(duì)死亡率的影響以及任何其他特異或非特異的毒性效應(yīng)。合格的亞慢性吸入90d毒性試驗(yàn)，可提供未觀察到有害作用的劑量水平(NOAEL)的估計(jì)值。6.3試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告包括下列信息：6.3.1試驗(yàn)條件a)吸入染毒裝置的描述，包括設(shè)計(jì)、類(lèi)型、容積、空氣來(lái)源、微粒和氣溶膠的發(fā)生系統(tǒng)、調(diào)節(jié)空氣的方法、排出廢氣的處理和動(dòng)物在染毒時(shí)的放置方法。b)描述測(cè)量溫度、濕度、微粒／氣溶膠及其粒度的設(shè)備。6.3.2染毒資料染毒資料要列成表格，并用平均值和測(cè)量變異（標(biāo)準(zhǔn)差）來(lái)表示。應(yīng)包括：a)通過(guò)吸入裝置的氣流速度；b)空氣的溫度、濕度；c)標(biāo)識(shí)濃度（送入吸入裝置的受試物總量除以空氣的體積d)試驗(yàn)動(dòng)物呼吸帶區(qū)中的實(shí)際濃度；e)粒度分布（微粒的空氣動(dòng)力學(xué)直徑中值及其標(biāo)準(zhǔn)值）。6.3.3動(dòng)物資