化學品 急性吸入毒性試驗方法 征求意見稿

GB/T21605—XXXX化學品急性吸入毒性試驗方法本文件規(guī)定了化學品急性吸入毒性試驗方法的規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、試驗原則、試驗方法、試驗數(shù)據(jù)和報告。本文件適用于評價可吸入受試物，如氣體、揮發(fā)性物質(zhì)、氣溶膠或顆粒狀物可否經(jīng)呼吸道吸收及其急性毒性。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義下列定義和術(shù)語適用于本文件。3.1急性吸入毒性acuteinhalationtoxicity實驗動物在短時間內(nèi)（指24h或24h之內(nèi)）一次連續(xù)吸入較高濃度的受試物（氣體、蒸汽、氣溶膠或顆粒狀物）出現(xiàn)的健康損害效應(yīng)。3.2吸入劑量inhaleddose動物單位體重所吸入受試物的量。3.3半數(shù)致死濃度midianlethalconcentration（LC50）在規(guī)定的時間內(nèi)，經(jīng)呼吸道一次連續(xù)吸入受試物后，引起實驗動物總體中半數(shù)死亡的毒物的統(tǒng)計學濃度，以單位體積空氣中受試物的質(zhì)量（mg/m3）來表示。3.4質(zhì)量中值空氣動力學直徑massmedianaerodynamicdiameter（MMAD）由空氣動力學直徑大小不一的顆粒組成的氣溶膠樣品中，小于和等于某一空氣動力學直徑的顆粒占氣溶膠樣品總質(zhì)量或總重量50%時，則該氣溶膠顆?？諝鈩恿W直徑即為此氣溶膠樣品的質(zhì)量中值空氣動力學直徑。3.545GB/T21605—XXXX幾何標準差geometricstandarddeviation（GSD）用以描述氣溶膠顆粒粒徑范圍的無量綱數(shù)。幾何標準差越小，含相似大小的顆粒比例越高，亦即氣溶膠顆粒的均一性越好，離散度越低。通常，將幾何標準差小于或等于2的氣溶膠樣品稱為單相分散氣溶膠。3.6可吸入顆粒直徑inhalablediameter能夠通過動物的口和/或鼻吸入并沉淀在呼吸道任意部位的顆粒的空氣動力學直徑。通常將空氣動力學直徑在10μm以下的氣溶膠顆粒物稱為可吸入顆粒物。3.7劑量-反應(yīng)關(guān)系dose-responserelationship劑量與特定效應(yīng)的發(fā)生率間的關(guān)系。3.8最小致死濃度minimallethalconcentration（LC01）指一組試驗動物中，僅引起個別動物死亡的最小劑量。3.9絕對致死濃度absolutelethalconcentration（LC100）引起一組試驗動物全部死亡的最低劑量。4試驗?zāi)康脑u價可吸入受試物，如氣體、揮發(fā)性物質(zhì)、氣溶膠或顆粒物可否經(jīng)呼吸道吸收及其急性毒性，用于受試物危險性評估，并可按GHS對受試物進行毒性分類，同時還可為該物質(zhì)急性毒性強度及亞急性毒性、蓄積毒性和特殊毒性試驗選擇劑量提供依據(jù)。5試驗原則5.1在考慮根據(jù)本文件進行試驗之前，應(yīng)收集受試物相關(guān)的所有可用信息，包括已有的研究數(shù)據(jù)，如已有相關(guān)研究數(shù)據(jù)，可以不再開展新的試驗，以盡量減少動物的使用。受試物的有用信息包括受試物的特性（如純度化學結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)；任何體外或體內(nèi)毒性試驗結(jié)果；預(yù)期用途和人體暴露的可能性；能得到的結(jié)構(gòu)類似物的構(gòu)效關(guān)系數(shù)據(jù)和毒理學數(shù)據(jù)等。5.2應(yīng)盡可能避免在預(yù)計會導致嚴重疼痛和/或痛苦的濃度下測試腐蝕性和/或刺激性的受試物。受試物是否具有腐蝕性/刺激性，應(yīng)由專家綜合所有數(shù)據(jù)進行評估，并分析是否可以免除進一步的試驗。需收集的數(shù)據(jù)包括來自人和動物的數(shù)據(jù)（例如，在非腐蝕性/刺激性濃度下進行的重復(fù)劑量研究中獲得的數(shù)據(jù)）、已有的體外數(shù)據(jù)、pH值、類似物質(zhì)的信息或任何其他相關(guān)數(shù)據(jù)。如有特定的監(jiān)管需求，可以使用本文件對具有腐蝕性和/或刺激性的受試物進行測試，受試物的濃度不能引起嚴重的刺激/腐蝕性，但應(yīng)足以將濃度-反應(yīng)曲線擴展到達到監(jiān)管和科學目標的水平。需逐步選擇受試物的濃度，并提供濃度6GB/T21605—XXXX選擇的理由。5.3本文件旨在獲取足夠的受試物的急性毒性信息，以便對其進行分類，并為一個或兩個性別提供致死性數(shù)據(jù)（例如LC50、LC01和斜率以滿足定量風險評估的需要。本文件提供兩種試驗方法。第一種方法是傳統(tǒng)的LC50法，將幾組動物暴露于一個限定濃度（限度試驗）或按梯度設(shè)置的一系列濃度，通常持續(xù)4h。為了滿足特定的監(jiān)管目的，可能會應(yīng)用其他持續(xù)時間的暴露，但應(yīng)提供合理的理由。第二種方法是濃度-時間法（CXt將動物暴露在一個限定濃度或一系列不同濃度，而且每個濃度的暴露時間也不同。染毒結(jié)束將動物移至空氣清潔的室內(nèi)。需觀察染毒期間及終止染毒后試驗動物中毒體征與嚴重程度。死亡動物應(yīng)及時進行大體解剖，觀察期結(jié)束處死存活動物并作大體解剖和病理學檢查。瀕死動物或明顯處于痛苦中或表現(xiàn)出嚴重且持續(xù)痛苦跡象的動物應(yīng)實行安樂死，并等同于在試驗中死亡的動物。6試驗方法6.1動物種屬選擇應(yīng)使用剛成年健康的動物和實驗室常用品系。首選大鼠，如需選用其他品系需說明理由。6.2動物準備雌性動物應(yīng)該是未妊娠和未生產(chǎn)的。在暴露開始時，動物周齡一般8-12周，體重差異不得超過平均體重的±20%。動物應(yīng)是隨機選擇的，并具有唯一性的標識。動物應(yīng)至少在開始試驗前5d置于籠中以適應(yīng)實驗室條件。動物也應(yīng)該在試驗開始前適應(yīng)實驗設(shè)備一段時間以減少進入新環(huán)境引起的不適。每個濃度組需要雌雄性各5只動物。6.3飼養(yǎng)條件動物房的室溫控制在23±3℃。相對濕度30%-70%。試驗前和染毒后每個濃度組動物按性別和濃度分籠飼養(yǎng)，每籠動物數(shù)以不干擾動物個體活動及觀察反應(yīng)為宜，并盡量減少因搶食和打架造成的損失。當動物通過僅鼻部暴露染毒時，可能需要適應(yīng)染毒裝置一段時間。鼻部暴露裝置不應(yīng)對動物造成不適當?shù)膲毫Γ珞w溫變化或呼吸頻率的改變等。如有數(shù)據(jù)表明不引起以上改變，則不需要適應(yīng)。當動物通過全身暴露方式染毒時，在染毒期間，為避免動物從同伴的毛發(fā)吸入受試物氣溶膠，動物應(yīng)單籠飼養(yǎng)。動物食用常規(guī)和經(jīng)認證的飼料，自由飲水（暴露期間除外）。應(yīng)該提供人工照明，12h明/12h暗。6.4受試物6.4.1受試物的形態(tài)可以是氣體、蒸汽、氣溶膠或它們的混合物，主要取決于受試物的物理化學性質(zhì)、選定的濃度，以及在處理和使用受試物時最可能存在的物理形態(tài)。吸濕性和化學反應(yīng)性受試物應(yīng)在干燥空氣條件下進行試驗。應(yīng)注意避免造成爆炸的濃度。6.4.2在染毒時受試物須在空氣中保持一定濃度，必要時應(yīng)加入適當?shù)馁x形劑（首選水）。賦形劑本身無毒性，不與受試物反應(yīng)并不影響受試物的吸收。依據(jù)受試物的理化性質(zhì)調(diào)試染毒裝置，包括確定受試物的氣化和配氣方法，載氣種類，氣流速度，排氣方式等。6.4.3顆粒物質(zhì)可能需要經(jīng)過機械處理以達到所需的粒徑分布，但是要注意不要分解或改變受試物。如果認為機械處理改變了受試物的組成，應(yīng)該通過分析方法驗證受試物的組成。應(yīng)該采取足夠的預(yù)防措施避免受試物受到污染。沒有必要測試那些特意配制成不可吸入的非易碎顆粒材料。6.4.4研究中盡可能地使用一組受試物，而且其樣本應(yīng)該在能保持其純度、同質(zhì)性、穩(wěn)定性的條件下保存。在研究開始之前，應(yīng)對受試物進行表征分析，包括其純度，如果技術(shù)上可行，還應(yīng)包括已識別的污7GB/T21605—XXXX染物和雜質(zhì)的特性和數(shù)量。可以通過以下數(shù)據(jù)來證明，但不限于：質(zhì)譜或氣相色譜分析中的保留時間、相對峰面積和分子量或其他值。6.5對照動物一般不設(shè)陰性對照組。當使用除水以外的賦形劑時，如果沒有其吸入毒性試驗的歷史數(shù)據(jù)，需加入一個賦形劑對照組。如果在已有毒性試驗中顯示賦形劑無毒，可以斷定這個賦形劑在測試濃度下是無毒的，因而可不設(shè)賦形劑對照組。6.6暴露條件監(jiān)測6.6.1暴露裝置動物應(yīng)在吸入染毒設(shè)備中進行試驗。根據(jù)受試物的物理特性和試驗?zāi)康倪x擇染毒裝置。首選的暴露方式是僅鼻部暴露，特別是在研究液體、固體氣溶膠或可凝結(jié)成為氣溶膠的蒸汽時。如有特殊目的必須采用全身暴露方式染毒，需在試驗報告中說明。采用全身暴露時，要保證染毒柜中氣流的穩(wěn)定性，試驗動物的總體積不應(yīng)超過染毒柜容積的5%。6.6.2室內(nèi)氣流染毒柜中氣流要連續(xù)監(jiān)測，至少每小時記錄一次。O2濃度不低于19%，CO2濃度不高于1%。如無法達到該標準，需說明理由，并監(jiān)測O2和CO2的濃度。6.6.3室內(nèi)溫度和相對濕度室內(nèi)溫度應(yīng)保持在22±3。C。無論是僅鼻道暴露還是全身暴露，動物呼吸區(qū)域的相對濕度應(yīng)至少監(jiān)測三次并記錄。暴露時間超過4h或小于4h時，應(yīng)每小時記錄一次。理想情況下，相對濕度應(yīng)保持在30%至70%的范圍內(nèi)，無法實現(xiàn)時需說明理由。6.6.4受試物：計算濃度應(yīng)計算并記錄吸入室中受試物的計算濃度。計算濃度是受試物的質(zhì)量除以通過暴露系統(tǒng)的空氣總體積。計算濃度不用于描述動物的暴露情況，但是計算濃度與實際濃度的比較可以指示試驗系統(tǒng)的生成效率，因此可以用來發(fā)現(xiàn)生成過程中存在的問題。6.6.5受試物：實際濃度6.6.5.1實際濃度是指吸入室動物呼吸區(qū)域受試物的濃度。實際濃度可以通過特定方法（例如直接采樣、吸附或化學反應(yīng)方法，以及后續(xù)表征分析）或非特定方法（如重量分析法）獲得。重量分析僅限于單一成分粉末氣溶膠或低揮發(fā)性液體氣溶膠，并且應(yīng)有適當?shù)念A(yù)試驗數(shù)據(jù)支持。如有分析數(shù)據(jù)證明空氣中物質(zhì)的組成與起始物質(zhì)相似，多組分粉末氣溶膠的濃度也可以通過重量分析來確定。如無可用信息，在研究過程中可能需要定期對受試物（理想情況下是其空氣中的狀態(tài)）進行再分析。對于可能蒸發(fā)或升華的氣溶膠物質(zhì)，應(yīng)通過所選方法證明已收集所有相。研究報告中應(yīng)提供目標濃度、計算濃度和實際濃度，但僅實際濃度用于統(tǒng)計分析以計算致死劑量。6.6.5.2應(yīng)盡可能地使受試物的實際濃度維持恒定，并根據(jù)分析方法連續(xù)和/或間歇監(jiān)測。當使用間歇采樣時，暴露時間為4h時，至少采集兩次室內(nèi)氣體樣本。如果由于空氣流速有限或濃度低而無法實現(xiàn)，可以在整個暴露期間收集一個樣本。如果樣本間波動明顯，下一步試驗的濃度應(yīng)每次暴露采集4個樣本。單個室濃度樣本不應(yīng)超過平均濃度的±10%（氣體和蒸汽）或±20%（液體或固體氣8GB/T21605—XXXX溶膠）。應(yīng)計算并記錄吸入室受試物濃度達到平衡的時間（t95）。暴露持續(xù)時間應(yīng)涵蓋受試物生成的時間。6.6.5.3對于氣體/蒸汽和氣溶膠組成非常復(fù)雜的混合物，每個相在吸入室中可能表現(xiàn)不同，因此至少應(yīng)選擇每個相（氣體/蒸汽和氣溶膠）的一個指示物質(zhì)（分析物通常是受試物配方中的主要活性物質(zhì)。當受試物是混合物（例如，一種配方）時，應(yīng)報告總配方的分析濃度，而不僅僅是活性成分或組分（分析物）的濃度。6.6.6粒徑分布6.6.6.1應(yīng)對所有氣溶膠以及可能凝結(jié)成氣溶膠的蒸汽進行粒徑分析。在4h的暴露期間，應(yīng)至少使用級聯(lián)撞擊器或如空氣動力學粒徑分析儀等替代儀器，兩次確定氣溶膠的粒徑分布。如果能夠證明級聯(lián)撞擊器或替代儀器獲得的結(jié)果具有等效性，那么在整個研究中可以使用替代儀器。應(yīng)與主要儀器并行使用第二臺設(shè)備，如重量分析濾器、沖擊式吸收管、氣體泡沫吸收管等，以確認主要儀器的收集效率。通過粒徑分析獲得的質(zhì)量濃度應(yīng)與通過濾器分析獲得的質(zhì)量濃度一致。6.6.6.2為了使呼吸道的所有相通區(qū)域均有受試物，推薦使用MMAD在1-4μm，GSD在1.5-3.0的氣溶膠。如無法實現(xiàn)，應(yīng)經(jīng)專家評估判斷。例如，金屬煙霧的粒徑可能小于此標準，而帶電粒子、纖維和吸濕性材料（在呼吸道濕潤環(huán)境中粒徑會增加）的粒徑可能超過此標準。6.7試驗程序有兩種試驗方法：傳統(tǒng)的LC50法和濃度-時間法（CXt）。兩種方法都可能包括預(yù)試驗、主試驗和/或限度試驗（傳統(tǒng)方法）或在限定濃度下進行試驗（CXt）。如果已知一個性別更易感，可以選擇只使用易感性別進行研究。如果暴露的嚙齒動物種類不是大鼠，并且采用的是僅鼻道暴露方式，最大暴露持續(xù)時間可能需要調(diào)整以減少特定物種的痛苦。6.7.1傳統(tǒng)的LC50法在傳統(tǒng)法中，暴露時間通常為4h。動物暴露在一個限定濃度（限度試驗）或在至少3組不同的濃度下（主試驗）。除已知受試物信息外，在開展主試驗前，需要進行預(yù)試驗。6.7.1.1預(yù)試驗預(yù)試驗可用來估計受試物的毒性效應(yīng)，確定易感性的性別差異，并為限度試驗或主試驗的濃度選擇提供幫助。在選擇預(yù)試驗的濃度水平時，應(yīng)該充分利用所有可獲得的信息，比如構(gòu)效關(guān)系數(shù)據(jù)和類似化學物的信息。試驗中，每個濃度水平的每種性別的試驗動物不超過3只。通常使用一個濃度水平。但如果需要，也可以測試更多濃度。已經(jīng)進行過的其他研究可以用來替代預(yù)試驗。6.7.1.2限度試驗當受試物已知或預(yù)期基本無毒時，可采用限度試驗。受試物的毒性作用信息，可以來源于已測試過的類似化合物或混合物或產(chǎn)品的特性和具有毒理意義的組成成分。在限度試驗中，雌雄各3只動物暴露在限定濃度中。按照GHS的分類系統(tǒng)，氣體、蒸汽、氣溶膠的限定濃度分別為20000ml/m3(μl/L）、20如果在限定濃度發(fā)現(xiàn)動物死亡或瀕死，則限度試驗的結(jié)果可作為其他濃度試驗（如主試驗）的預(yù)試驗。如果受試物的理化性質(zhì)決定其不可能達到限定濃度，則需測試其最大可及濃度。如果最大可及濃度的死亡率小于50%，則不需進行進一步試驗。9GB/T21605—XXXX6.7.1.3主試驗進行主試驗時，一般每個濃度組有10只動物，雌雄各半（或5只易感性別的動物且至少有3個濃度水平。必須有足夠多的濃度水平足以繪制出濃度死亡曲線，并在可能情況下求出LC50值。各暴露組之間的時間間隔取決于中毒體征的出現(xiàn)、持續(xù)時間與嚴重程度。是否需要對下一濃度水平進行試驗，取決于先前的試驗動物是否能夠成活。6.7.2濃度-時間法（CXt）濃度-時間法（CXt）是傳統(tǒng)的LC50法的一種替代方法。這種方法使試驗動物暴露在不同濃度的受試物水平，而且暴露時間也不同。所有的試驗都采用僅鼻部吸入的方法。具體方法見附錄1。與傳統(tǒng)法相比，濃度-時間法得到的LC01與LC100的值更加穩(wěn)定。當在4個濃度水平和5種暴露持續(xù)時間的主試驗采用濃度-時間法時，每個濃度-時間間隔只需使用2只動物（雌雄各半或易受影響的單一性別）。在某些情況下，在每濃度-時間間隔，也可以選擇兩種性別的動物各2只。這能減少參數(shù)估計的誤差和變異性，增加成功率，提高置信區(qū)間的覆蓋范圍。當用來參數(shù)估計的數(shù)據(jù)擬合不好時，可能需要第5個濃度水平。6.7.2.1預(yù)試驗預(yù)試驗一般用各性別、各濃度3只動物，它可以為主試驗選擇一個合適的初始濃度和最大化減少動物使用。暴露時間通常為4h。如果能從其他試驗中得到死亡數(shù)據(jù)，那么可以不進行預(yù)試驗。在選擇研究中的初始目標濃度時，應(yīng)該考慮在其他試驗中觀察到的各性別和各濃度的死亡率。6.7.2.2主試驗初始濃度（第一步暴露）可能是限定濃度，也可能是根據(jù)預(yù)試驗選擇的濃度。每組雌雄各1只動物暴露于此濃度下，持續(xù)時間不同（如15、30、60、120、240min總共用到10只動物（附錄1）。限定濃度可根據(jù)監(jiān)管要求選擇，按照GHS，氣體、蒸汽、氣溶膠的限定濃度分別為20000ml/m3(μl/L）、20mg/L和5mg/L（或為最大可及濃度）。如果在第一步暴露中發(fā)現(xiàn)死亡，則引起死亡的最小暴露濃度將為下一步試驗的濃度建立提供指導。每一個后續(xù)的試驗都將取決于先前的試驗結(jié)果。對于很多受試物，在初始濃度得到的結(jié)果與在其他3個濃度組得到的結(jié)果，如果暴露時間間隔適當，就能足以繪制濃度-時間-死亡曲線。對于處理濃度-時間法得到的試驗結(jié)果的統(tǒng)計分析方法，參見附錄1。6.8觀察6.8.1臨床觀察6.8.1.1動物在暴露期內(nèi)應(yīng)該頻繁進行臨床觀察。在暴露剛開始當天應(yīng)該至少進行兩次臨床觀察，或者根據(jù)動物對處理的反應(yīng)進行更頻繁的觀察。觀察期限最少為14d，以后每天至少進行一次觀察。觀察期限長短不做硬性規(guī)定，可依據(jù)臨床癥狀和體征的性質(zhì)和時間以及恢復(fù)期的時間長短來決定。中毒體征出現(xiàn)和消失的時間都十分重要，特別是在有中毒體征延遲趨勢時。動物瀕死、疼痛劇烈與嚴重且持久的痛苦皆應(yīng)予以安樂死。當動物被安樂死，或者發(fā)現(xiàn)死亡時，應(yīng)該盡可能的準確記錄死亡時間。所有的觀察應(yīng)該被系統(tǒng)的記錄，每一個動物應(yīng)該保持單獨記錄。6.8.1.2觀察內(nèi)容應(yīng)該包括皮毛，眼睛和黏膜，呼吸，循環(huán)，自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，肢體活動和行為的改變。應(yīng)該記錄可能的局部和全身反應(yīng)的差別。要注意有無震顫、驚厥、流涎、腹瀉、昏睡、睡眠和昏迷癥狀。直腸溫度的測量可為由于處理因素和限制引起的反應(yīng)性呼吸過緩或者低溫/高溫提供證據(jù)。6.8.2體重GB/T21605—XXXX每只動物體重應(yīng)該在暴露前一天到暴露（day0)，并且至少在第1天、第3天和第7天（以及此后每周)，以及在第1天后的死亡或安樂死時進行記錄。相比之前數(shù)據(jù)，若動物體重出現(xiàn)≥20%的持續(xù)遞減，應(yīng)該進行密切監(jiān)測。在暴露結(jié)束后，應(yīng)測量存活動物的體重，并人道處死。6.8.3病理學檢查6.8.3.1所有實驗動物，包括那些在試驗中死亡的，或者出于動物福利原因被安樂死以及從試驗中移除的動物，應(yīng)該進行大體解剖。如果動物被發(fā)現(xiàn)死亡后，不能被立即進行尸體解剖，那么動物應(yīng)該被冷藏，溫度應(yīng)足夠低，使試驗動物的損失減少到最低限度。應(yīng)盡可能快地進行尸體解剖，通常在1-2d內(nèi)。記錄每個動物的大體病理變化，并特別注意呼吸道改變。6.8.3.2附加檢查可為研究提供更為深入的解釋價值，例如測量存活大鼠肺的重量，和/或提供呼吸道刺激性的顯微鏡檢查證據(jù)。對表現(xiàn)出大體病理變化，器官已知或預(yù)期會受到影響的存活24h及以上的動物，應(yīng)該檢查相應(yīng)器官。對整個呼吸道的顯微鏡檢杳可為易與水發(fā)生反應(yīng)的受試物（例如）提供有用的信息，例如酸性和吸濕性受試物。7數(shù)據(jù)與報告7.1數(shù)據(jù)應(yīng)該提供每只動物的體重和尸檢發(fā)現(xiàn)的數(shù)據(jù)。臨床觀察數(shù)據(jù)應(yīng)該以表格的形式呈現(xiàn)，統(tǒng)計出各組使用的動物的數(shù)量，出現(xiàn)特殊中毒特征的動物數(shù)量，試驗中死亡或者人道處死的動物數(shù)量，動物個體的死亡時間，毒副作用的描述和時間進程，可逆體征以及尸檢發(fā)現(xiàn)。7.2試驗報告試驗報告應(yīng)該包括以下內(nèi)容：7.2.1實驗動物和飼養(yǎng)條件——描述籠框條件，包括：每個籠子動物的數(shù)量(或者數(shù)量改變)，鋪蓋材料，周圍溫度以及相關(guān)濕度，光周期，以及飲食；——使用動物的種屬、品系，以及使用大鼠外其他物種的理由；——動物的數(shù)量，年齡和性別；——隨機化的方法；——詳細的飼料和水的質(zhì)量（包括飼料類型/來源，水源)；——試驗前的狀態(tài)，包括飲食，檢疫和疾病治療。7.2.2受試物——物理性質(zhì)，純度，以及相關(guān)的理化性質(zhì)（包括異構(gòu)化);——鑒定材料，CAS編號。7.2.3賦形劑——使用除水以外的賦形劑和選擇賦形劑的理由；——以往或者同期數(shù)據(jù)顯示賦形劑不影響研究結(jié)果。7.2.4吸入室——吸入室的描述，包括規(guī)格和體積；——用于動物暴露的設(shè)備和產(chǎn)生氣流的設(shè)備的來源和描述；——測量溫度，濕度，粒徑和實際濃度的設(shè)備；GB/T21605—XXXX——空氣來源，調(diào)節(jié)空氣的系統(tǒng)，供氣/排氣的方式；——用于校正保證氣流均一性的儀器的方法；——壓力差（正和負)；——每個吸入裝置的暴露端口（僅鼻部暴露時)；動物在染毒裝置中的位置(全身暴露時)；——即時的氣流均一性/穩(wěn)定性；——溫度和濕度傳感器的位置，以及吸入室的氣體抽樣；——氣流速度，暴露端口的氣流速度（僅鼻部暴露)，或吸入裝置的動物負荷（全身暴露)；——用來測量O2和CO2設(shè)備的信息；——吸入室中濃度達到平衡所需要的時間（t95)；——每小時的體積改變；——測量設(shè)備。7.2.5暴露數(shù)據(jù)——在主試驗中，選擇目標濃度的原因；——計算濃度（送入吸入室中受試物的總量除以通過的空氣的總體積)；——從動物呼吸帶位置收集的受試物實際濃度；對于產(chǎn)生的多種的物理形態(tài)（氣體，蒸氣，氣溶膠）的混合物，每一種形態(tài)應(yīng)該被單獨分析；——所有空氣中的濃度，應(yīng)該以質(zhì)量濃度為單位（如mg/L、mg/m3等）進行報告，也可附帶以體積分數(shù)為單位（如10-6，10-9等)；——粒徑分布、空氣動力學直徑中值（MMAD)，以及幾何標準差(σg）和它們的計算方法。還應(yīng)該報告?zhèn)€體粒徑分析。7.2.6試驗條件——準備受試物的詳細資料，包括降低固體材料的顆粒大小的過程的詳細資料，或者準備受試物溶液的詳細資料，如機械加工過程可能改變受試物的構(gòu)成，還應(yīng)包括確認受試物構(gòu)成的分析結(jié)果；——用于產(chǎn)生受試氣體和使動物暴露的在試驗氣體的設(shè)備的描述(最好包括圖表)；——詳細的化學分析的方法以及方法的有效性（包括采樣設(shè)備的分離受試物的效率)；——選擇試驗濃度的理由。7.2.7結(jié)果——吸入室的溫度、濕度和氣流的表格；——吸入室的計算、實際濃度數(shù)據(jù)的表格；——粒徑數(shù)據(jù)的表格，包括分析樣本收集數(shù)據(jù)、粒徑分布、MMAD和幾何標準差的計算：——每只動物的反應(yīng)數(shù)據(jù)和濃度水平的表格（動物表現(xiàn)出的毒性效應(yīng)，包括死亡率，嚴重程度，效應(yīng)發(fā)生和持續(xù)的時間)；——在研究期間，每只動物的體重，先于安樂死的死亡的日期和時間，毒性效應(yīng)開始和持續(xù)時間過程，以及它們對于每個動物是否可逆；——提供每只動物的解剖發(fā)現(xiàn)和病理組織學報告；——死亡參數(shù)（LC50，LC01）包括其95%置信區(qū)間和斜率；——統(tǒng)計學關(guān)聯(lián)，包括濃度-時間法中指數(shù)n的估計及使用的統(tǒng)計軟件名稱。7.2.8結(jié)果的討論與解釋——特別強調(diào)的是，所用方法滿足試驗標準，例如限定濃度或者粒徑；——應(yīng)該處理顆粒的可吸入性，尤其是在粒徑標準不能被滿足時：——根據(jù)文件，應(yīng)該為那些處于疼痛中或者顯示出嚴重和持久的不適體征的動物而進行的安樂死作GB/T21605—XXXX出解釋；——按本文件進行試驗的理由；——研究評價中應(yīng)該有確定計算濃度與實際濃度的方法的一致性，以及兩者之間的關(guān)系；——應(yīng)該考慮死亡的可能原因以及占主導的反應(yīng)（全身和局部)。GB/T21605—XXXX濃度-時間法（CXt）1.逐步進行的濃度-時間法是用來吸入毒性試驗傳統(tǒng)法的替代方法。濃度-時間法可優(yōu)先用于檢測動物不同暴露持續(xù)時間的特殊監(jiān)管需要和科學研究中。濃度-時間法通常先在限定濃度進行試驗（暴露Ⅰ)，有5個不同的暴露持續(xù)時間（如15，30，60，120，240min)。根據(jù)全球化學品統(tǒng)一分類和標簽系統(tǒng)，氣體、蒸氣和氣溶膠的限定濃度分別為20000ml/m3(μl/L）、20mg/L和5mg/L。2．受試物的毒性資料缺乏或較少時，可能需要進行預(yù)試驗：各性別不超過3只動物暴露在目標濃度下240min。3．如果在暴露Ⅰ中，限定濃度動物的死亡率小于50%，沒必要進行下一步試驗。如果有監(jiān)管或科學研究需要在比限定濃度更高的濃度建立濃度-時間-反應(yīng)關(guān)系，下一步暴露需要更高的濃度進行試驗（如2倍限定濃度)。4.如果在限定濃度發(fā)現(xiàn)毒性效應(yīng)，需要進行下一步試驗（主試驗)。主試驗可能在更低濃度調(diào)整的暴露時間進行試驗(圖1中的暴露II，Ⅲ,IV’)或在更高濃度較短的暴露時間進行試驗（圖1中的暴露Ⅳ)。5．試驗各濃度/暴露時間需雌雄動物1只或2只更易受影響性別的動物。在某些情況下，也可在各濃度/暴露時間用雌雄動物各2只或4只更易受影響性別的動物進行試驗。這樣可以減少參數(shù)估計偏倚和變異性，增加參數(shù)估計成功率和置信區(qū)間的覆蓋范圍。6．理想情況下，每次暴露試驗進行1天。這樣可以在找到合適的生存率的置信度前延遲進行下一步暴露，或調(diào)整下一步暴露的目標濃度和持續(xù)時間。進行每步暴露試驗時，先選擇最長的暴露時間，如先240min，再120min。如果在240min的組發(fā)現(xiàn)動物在90min后出現(xiàn)死亡或嚴重的毒性效應(yīng)，則不需要進行120min的試驗（死亡率可能是100%)。在該濃度下，應(yīng)該選擇更短的暴露時間（如90、65、45、33、25min)。7．應(yīng)經(jīng)常測量每段暴露時間染毒柜中的時間加權(quán)平均濃度。只要可能，每只動物的死亡前的暴露時間（而不是整個暴露持續(xù)時間）應(yīng)該用到數(shù)據(jù)分析中去。8．應(yīng)仔細檢查前4步暴露的結(jié)果，已確認有無數(shù)據(jù)缺陷。當擬合不好時，可能需要第5步暴露，以填補數(shù)據(jù)缺陷。9．數(shù)據(jù)分析將使用到每步暴露的數(shù)據(jù)來得到濃度-