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DB32DetectiontechnicalregulationforPorcineSap江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李彬、范寶超、孫杰、何孔旺、郭容利、周金柱、1豬薩佩羅病毒檢測(cè)技術(shù)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的RT-PCR法適用于本病毒的抗原確診，間接ELISA試驗(yàn)適用于血清凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修訂單）GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格NY/T541動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法AATACAGGATGACACAGGAAGGG-3`（見附錄B）。PCR相關(guān)試劑。豬薩佩羅病毒陽性病料R取物反轉(zhuǎn)錄為cDNA作為陽性對(duì)照，水作為陰性對(duì)照。高速離心機(jī)（10000r/min）、PCR儀、電泳儀、4.2.1DNA模板制備），），4.2.2PCR2別采用55℃進(jìn)行擴(kuò)增30s，72℃30s，35個(gè)循環(huán)72℃延緩沖液混合后，加樣到電泳孔中，9V/cm恒壓下電泳15min～30mi在試驗(yàn)結(jié)果成立的前提下，如果樣品擴(kuò)增到689檢測(cè)過程中的廢棄物，應(yīng)做好無害化處理，檢測(cè)過程中防止交叉污染的措施見附豬薩佩羅病毒重組3C表達(dá)抗原，酶標(biāo)抗體，標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，酶標(biāo)板及其他必要的試驗(yàn)溶液和酶標(biāo)儀、移液器等儀器。待檢血清樣品采集于疑似患病5.2.2洗滌：甩掉酶標(biāo)板孔內(nèi)的液體，加入洗滌液200加入洗滌液，連續(xù)洗3次，最后一次甩掉洗滌液后，拍5.2.4加入待檢血清和陰、陽性血清對(duì)照：待檢血清用稀釋液1:320稀釋，每5.2.6加入底物，每孔加100μL，室溫避光顯色8min。5.2.7終止反應(yīng)，每孔加入50μL終5.2.8測(cè)定光吸收值(OD)，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸用酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值，計(jì)算S/P值，S/P值=（樣品血清OD450nm值-陰性血清OD450nm值）/（陽性血清OD450nm值-陰性

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