抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響評價技術導則（試行）（HJ1344-2023）

HJ1344—2023

抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響評價技術導則（試行）

1適用范圍

本標準規(guī)定了抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響評價的原則、程序、內容和方法。

本標準適用于在開放環(huán)境條件下進行生產性試驗和生產應用的抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響

的評價。

2規(guī)范性引用文件

本標準引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標準。

凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。

GB/T30989高通量基因測序技術規(guī)程

GB/T32722土壤質量土壤樣品長期和短期保存指南

GB/T32725實驗室測定微生物過程、生物量與多樣性用土壤的好氧采集、處理及貯存指南

HJ710.1生物多樣性觀測技術導則陸生維管植物

HJ710.3生物多樣性觀測技術導則陸生哺乳動物

HJ710.4生物多樣性觀測技術導則鳥類

HJ710.6生物多樣性觀測技術導則兩棲動物

HJ710.7生物多樣性觀測技術導則內陸水域魚類

HJ710.8生物多樣性觀測技術導則淡水底棲大型無脊椎動物

HJ710.9生物多樣性觀測技術導則蝴蝶

HJ710.10生物多樣性觀測技術導則大中型土壤動物

HJ710.13生物多樣性觀測技術導則蜜蜂類

農業(yè)部953號公告—8.4—2007轉基因植物及其產品環(huán)境安全檢測抗蟲水稻第4部分：生物多

樣性影響

農業(yè)部953號公告—10.4—2007轉基因植物及其產品環(huán)境安全檢測抗蟲玉米第4部分：生物

多樣性影響

農業(yè)部953號公告—12.4—2007轉基因植物及其產品環(huán)境安全檢測抗蟲棉花第4部分：生物

多樣性影響

3術語和定義

下列術語和定義適用于本標準。

3.1

抗蟲轉基因植物insect-resistanttransgenicplants

通過基因工程技術引入或修飾基因，改變受體植物基因組構成而培育出的具有抗蟲性狀的植物。

1

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3.2

靶標生物targetorganisms

轉基因抗蟲性狀所針對的生物。

3.3

非靶標生物non-targetorganisms

抗蟲轉基因植物中轉基因性狀所針對的靶標生物以外的其他生物。

3.4

生物多樣性biodiversity

生物（動物、植物、微生物）與環(huán)境形成的生態(tài)復合體以及與此相關的各種生態(tài)過程的總和，包括

生態(tài)系統、物種和基因三個層次。本標準主要指調查區(qū)域內可能受到抗蟲轉基因植物影響的物種多樣性。

4評價原則

4.1預先防范原則

對于可能會對生物多樣性產生不利影響的抗蟲轉基因植物，即使目前缺乏充分的試驗證據，也應對

該抗蟲轉基因植物的生物多樣性影響進行評價，并采取適當措施預防可能出現的不利影響。

評價區(qū)域存在重點保護物種等敏感對象（如農作物的野生近緣種）的，需要采取專門措施將抗蟲轉

基因植物局限在最小影響范圍內或者禁止轉基因植物在該區(qū)域種植。

4.2科學性原則

必須基于嚴謹的科學態(tài)度、采用科學的方法和技術評價抗蟲轉基因植物對生物多樣性的影響，對調

查到的試驗數據進行科學的統計分析，得出可驗證的評價結果，并對評價結果進行科學的解釋。

4.3個案分析原則

針對外源基因特征、受體植物類型、釋放環(huán)境及用途、待調查生物的特性等，采用適當流程和方法，

開展抗蟲轉基因植物對生物群落或特定生物種群的影響評價。

4.4比較分析原則

抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響評價需要以非轉基因植物為對照，在條件一致的環(huán)境中進行比較

和分析。

5評價程序

抗蟲轉基因植物對生物多樣性的影響評價程序見圖1，一般包括如下5個步驟：

a）收集和整理抗蟲轉基因植物的相關生物學背景資料、種植狀況和管理措施等信息；

b）確定生物多樣性調查的對象、區(qū)域、時間和方法；

c）根據評價目的開展群落或者種群水平生物多樣性調查，包括對自然保護地等環(huán)境中可能受到抗

蟲轉基因植物影響的重點保護物種、極小種群動植物進行調查；

d）判斷抗蟲轉基因植物對生物群落或特定生物種群是否具有顯著影響。如果評價結果顯示抗蟲轉

基因植物對生物群落或特定生物種群無顯著影響，則進入確定評價結論環(huán)節(jié)；如果評價結果顯

示抗蟲轉基因植物對生物群落或特定生物種群具有顯著影響，則進一步判斷該影響的范圍、持

續(xù)性、程度、原因等是否明確，如未明確則繼續(xù)開展資料收集和調查，直至明確影響的范圍、

2

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持續(xù)性、程度、原因等才可以進入確定評價結論環(huán)節(jié)；

e）確定評價結論，編制評價報告。

步驟1：收集和整理抗蟲轉基因植物的

相關生物學背景資料及種植狀況等信息

步驟2：確定生物多樣性調查的對象、區(qū)域、時間和方法

否

步驟3：群落或種群水平生物多樣性調查

判斷顯著影響的步驟4：對生物群

是

持續(xù)性、程度、落或特定生物種

原因等是否明確群是否具有顯著

影響

否

是

步驟5：確定抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響的評價結

論，編制評價報告

圖1抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響評價程序

6背景資料

6.1受體植物

受體植物的背景資料主要包括：

a）學名、分類學地位、生物學特性和進化史；

b）原產地及引進時間，用途和在國內的應用情況；

c）對人體健康和生態(tài)環(huán)境的安全性記錄；

d）生活史和在自然界中生存繁殖的能力；

e）在國內的地理分布和自然生境，生長發(fā)育、繁殖所要求的生態(tài)環(huán)境條件；

f）遺傳變異和遺傳穩(wěn)定性，監(jiān)測方法和監(jiān)控的可能性；

g）在無法獲得受體植物時，可參考上述要求調查非轉基因對照植物的有關背景資料。

6.2基因操作

基因操作方面的背景資料主要包括：

a）引入或修飾基因的核苷酸序列和推導的氨基酸序列及其功能和安全性；

b）引入或修飾基因序列在植物細胞中的定位及其確定方法；

c）引入或修飾基因表達的器官和組織，如根、莖、葉、花、果、種子等；

3

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d）引入或修飾基因表達的穩(wěn)定性；

e）其他類型的基因操作。

6.3抗蟲轉基因植物

抗蟲轉基因植物的背景資料主要包括：

a）抗蟲性；

b）雜草性和入侵性；

c）基因漂移及其環(huán)境影響；

d）種植情況；

e）耕作栽培措施的變化。

6.4種植區(qū)域生物多樣性本底

種植區(qū)域生物多樣性本底的背景資料主要包括：

a）生境特征（如土壤性質、氣象特點、生態(tài)類型）；

b）植物物種多樣性；

c）動物物種多樣性；

d）土壤微生物多樣性；

e）其他可能涉及的生物物種多樣性。

7評價內容

7.1對主要靶標生物的影響

評價抗蟲轉基因植物對主要靶標生物生長發(fā)育、繁殖、種群動態(tài)的影響。

7.2對物種多樣性的影響

對物種多樣性的影響評價應包括以下內容：

a）優(yōu)勢種種群動態(tài)；

b）指示種種群動態(tài)；

c）具有重要經濟價值、生態(tài)價值、文化價值、觀賞價值等物種種群動態(tài)；

d）國家重點保護物種、極小種群動植物、特有種等種群動態(tài)；

e）其他可能涉及的物種多樣性動態(tài)。

7.3對生物群落多樣性的影響

對生物群落多樣性的影響評價應包括以下內容：

a）草本、木本等植物群落多樣性；

b）植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動物群落多樣性；

c）細菌、真菌等微生物群落多樣性；

d）其他可能涉及的生物群落多樣性。

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8調查方案

8.1一般要求

評價抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響的調查方案一般包括調查對象、調查區(qū)域和采樣點、調查時

間和頻次、調查內容、調查方法等。

8.2調查對象

直接或者間接暴露于抗蟲轉基因植物的生物，主要包括取食抗蟲轉基因植物的動物、生存于抗蟲轉

基因植物內部和表面的微生物。

8.3調查區(qū)域和采樣點

調查區(qū)域主要為抗蟲轉基因植物生長地及周邊的農田、林地、水體。

采樣點應具有所評價環(huán)境中生物多樣性的代表性；采樣點面積應根據抗蟲轉基因植物的生物學特性、

對生物多樣性影響的方式和特點、調查對象的生長繁殖特性等確定；采樣點數量應滿足統計學的基本要

求。

8.4調查時間和頻次

根據抗蟲轉基因植物的生活周期確定調查時間和頻次。

短期影響應進行3次以上的調查，調查時間應包括抗蟲轉基因植物的旺盛生長期和抗蟲基因表達高

峰期。中長期影響應進行不少于5年的調查，可根據抗蟲轉基因植物的生活周期，每年在其重要生長階

段（如苗期、花期、結實期、收獲期）進行調查。

8.5調查內容及方法

8.5.1調查內容

8.5.1.1靶標生物多樣性

在抗蟲轉基因植物及其對照植物的主要生育期，調查主要靶標生物的種類及其落卵量、幼蟲齡期和

數量、為害率等。

8.5.1.2非靶標生物物種多樣性

8.5.1.2.1優(yōu)勢種

在抗蟲轉基因植物及其對照植物的主要生育期，調查優(yōu)勢種的種類、數量、密度和分布等。

8.5.1.2.2指示種

在抗蟲轉基因植物及其對照植物的主要生育期，調查指示種的種類、數量、密度和分布等。

8.5.1.2.3具有重要經濟價值、生態(tài)價值、文化價值、觀賞價值的物種

在抗蟲轉基因植物及其對照植物的主要生育期，調查具有重要經濟價值、生態(tài)價值、文化價值、觀

賞價值等物種的種類、數量、密度和分布等。

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8.5.1.2.4國家重點保護物種、極小種群動植物、特有種

在抗蟲轉基因植物及其對照植物的主要生育期，調查國家重點保護物種、極小種群動植物、特有種

的種類、數量、密度和分布等。

8.5.1.3非靶標生物群落多樣性

8.5.1.3.1草本、木本等植物群落多樣性

調查主要草本、木本等植物的種類、數量、高度、蓋度、生長狀態(tài)、群落結構等。

8.5.1.3.2植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動物群落多樣性

調查主要植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動物的種類、數量、密度、群落結構和分布等。

8.5.1.3.3土壤細菌、真菌等微生物群落多樣性

調查土壤細菌、真菌等微生物的種類及其數量。

8.5.2調查方法

應根據評價時間、調查內容和調查對象生物學特性的不同，確定具體的調查方法。不同生物種群或

生物群落的調查方法可參考附錄A。

抗蟲轉基因植物對生物群落影響評價中主要生物多樣性指標的計算公式見附錄B。

9評價結論判定

采用方差分析等統計學方法對根據本標準“7評價內容”和“8調查方案”獲得的調查數據進行統

計分析，得到抗蟲轉基因植物生長區(qū)域與受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)域的生物多樣性指標

之間差異顯著性檢驗結果，再結合本標準“6背景資料”的信息對評價結果進行分析，綜合給出抗蟲轉

基因植物對生物多樣性影響的評價結論，以及評價的置信度、不確定性因素、其它支持評價結果的證據、

評價結果的解釋等。

10風險管理策略和方案

根據評價結論制訂風險管理策略，并提出預防和控制抗蟲轉基因植物對生物多樣性可能產生不利影

響的風險管理內容和方案等。

11評價報告

抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響的評價報告應包括但不限于以下內容：

a）抗蟲轉基因植物的背景資料；

b）評價單位的能力與經驗的陳述或相關證明，實施評價的人員情況；

c）評價的時間、地點及環(huán)境狀況等；

d）調查方案（包括調查內容、調查方法等）；

e）抗蟲轉基因植物對生物多樣性影響評價的主要過程及其結論；

f）建議采用的風險管理策略、內容和方案等。

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附錄A

（資料性附錄）

不同生物種群或生物群落的調查方法

A.1植物

按照HJ710.1、農業(yè)部953號公告—8.4—2007、農業(yè)部953號公告—10.4—2007等標準中規(guī)定的

方法，調查抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)域內及周圍自然環(huán)境中的植

物。

A.1.1調查樣方的設置

在抗蟲轉基因植物和受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)域內，以及生長區(qū)域周邊（距離生

長區(qū)100m～300m范圍內）生境中同時設置樣方。

對于森林植物群落，在選定建立調查樣地的位置時，用森林羅盤儀確定樣地的方向（一般是正南

北方向）和基線，然后用經緯儀（全站儀）將樣地劃分為20m×20m樣方；記錄測量點之間的水平

距、斜距和高差；對每個樣方的頂點編號并永久標記；最后，用卷尺、測繩或便攜式激光測距儀將每

個20m×20m樣方劃分為5m×5m小樣方，樣方頂點用臨時PVC管標記，邊界用塑料繩或其他材

料臨時標記，這些5m×5m樣方作為基本調查單元；調查任務完成后將這些臨時標記全部移除，并

作無害化處理。一般調查樣地面積（垂直投影面積）≤50hm2的設3個樣方，50hm2～500hm2的設5

個樣方；若面積＞500hm2，每增加100hm2增設1個樣方，但總樣方數量一般控制在10個以內。

對于農田植物群落，在選定的調查區(qū)域用卷尺或定制的模具設置1m×1m或2m×2m的樣方，

對樣方的頂點編號并永久標記，邊界用塑料繩或其他材料臨時標記。調查的樣方數量一般應不少于5

個1m×1m或2m×2m的樣方。

A.1.2森林植物調查

在設置的樣方中采用目測估計法進行喬木、灌木、草本等植物種類調查。所有個體應鑒定到種水

平，對調查現場不能鑒定或有疑問的種，須采集標本、拍照、記錄植物個體編號，請分類專家鑒定。

對于抗蟲轉基因植物及其對照植物的主要伴生種，應該調查該種的胸徑或基徑、冠幅、生長狀態(tài)、蓋

度等。

A.1.3農田植物調查

在設置的樣方中采用目測估計法進行植物種類調查。所有個體應鑒定到種水平，對調查現場不能

鑒定或有疑問的種，須采集標本、拍照、記錄植物個體編號，請分類專家鑒定。對于抗蟲轉基因植物

及其受體植物（或非轉基因對照植物）的主要伴生種，應該調查該種的多度、平均高度和冠幅、生活

力、蓋度等。

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A.2土壤微生物

按照GB/T30989、GB/T32722、GB/T32725等技術標準中規(guī)定的土壤樣品采集和保存、微生物

測定方法，調查抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)域內的土壤微生物。

A.2.1樣品采集

在抗蟲轉基因植物及其對照植物生長區(qū)域采集根際土和根圍土，采集深度主要取決于植物種類：

一般農作物為0～20cm，果林類作物為0～60cm。為了保證樣品的代表性，采取采集混合樣的方案。

每個采樣區(qū)可以是自然分割的一個田塊，也可以由多個田塊所構成，范圍不小于400m（220m×20m），

采樣區(qū)采用對角線、梅花點、棋盤式或蛇形取樣法調查5個樣點，每點1～2株植物。采樣前應去除地

表植被、苔蘚及凋落物，采樣時還需去除土壤中植物的根系、碎片、落葉及土壤動物等肉眼可見的生

物材料。

A.2.2樣品貯存

土壤樣品應避光通氣貯存，用于磷脂脂肪酸（PLFA）分析以及高通量測序的樣品應在-20℃條件

下保存。

A.2.3微生物多樣性分析

A.2.3.1磷脂脂肪酸法

土壤微生物中脂類的提取采用Bligh&Dyer提取法，受試土壤經土壤提取液振蕩分離去除水相，

有機相和懸浮液經干燥后形成脂類提取物。

磷脂脂肪酸的提取方法：將脂類提取物通過硅膠柱分離后，經中度堿水解，使磷脂轉化為脂肪酸

甲酯。利用固相萃取柱（包括強陽離子交換柱和氨丙基柱）將脂肪酸甲酯分離為飽和脂肪酸、單不飽

和脂肪酸、多不飽和脂肪酸、羥基脂肪酸、非酯鏈未取代脂肪酸和非酯鏈羥基取代脂肪酸，將不同的

脂肪酸經衍生化后用于氣相測定。

磷脂醚酯的提取方法：將脂類提取物通過硅膠柱分離后，經酸水解斷裂磷脂的極性基團以獲得醚

酯，經氫碘酸斷裂醚鍵來釋放醚酯中的醚鍵烴類（如碘代烷烴），最后通過鋅粉還原脫鹵后轉化為磷

脂醚酯用于氣相測定。

將不同的磷脂脂肪酸/磷脂醚酯采用氣相色譜/質譜進行分析測定，利用色譜分析軟件對各組分進

行定性與定量分析?？偽⑸锪靠赏ㄟ^土壤總磷脂脂肪酸含量進行估算。不同的脂肪酸甲酯含量可用

摩爾百分比表示。不同土壤類型或不同處理土壤之間的磷脂脂肪酸含量變化可采用主成分分析法進一

步分析相關性。

A.2.3.2高通量測序法

將提取的土壤微生物DNA進行高通量測序。擴增引物基于細菌16SrRNA和真菌18SrRNA的保

守區(qū)域片段（引物序列見表A.1），通過測序獲得樣本的細菌16SrRNA和真菌18SrRNA的保守區(qū)域

片段的序列信息，利用Mothur、QIIME或R軟件與數據庫中來源明確、鑒定可靠的細菌和真菌基因

序列相比對，以確定不同土壤微生物種類。

8

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表A.1擴增細菌16SrRNA和真菌18SrRNA保守區(qū)域片段的引物序列

分類引物類型引物名稱引物序列片段大小

8F5?-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3?

16SV1-V3520bp

533R5?-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3?

357F5?-CTCCTACGGGAGGCAGCAG-3?

16SV3-V5560bp

926R5?-AAACTYAAAKGAATTGACGG-3?

520F5?-AYTGGGYDTAAAGNG-3?

細菌16SV4280bp

802R5?-TACHVGGGTWTCTAATCC-3?

515F5?-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3?

16SV4-V5420bp

907R5?-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3?

338F5?-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3?

16SV3-V4480bp

806R5?-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3?

ITS5F5?-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3?

ITS1350bp

ITS1R5?-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3?

真菌

ITS3F5?-GCATCGATGAAGAACGCGC-3?

ITS2400bp

ITS4R5?-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3?

A.3地上節(jié)肢動物

參照HJ710.9、HJ710.13、農業(yè)部953號公告—8.4—2007、農業(yè)部953號公告—10.4—2007、農

業(yè)部953號公告—12.4—2007等技術標準中規(guī)定的方法，調查抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉

基因對照植物）生長區(qū)域內的昆蟲等地上節(jié)肢動物。

A.3.1直接觀察法

在轉基因植物生長旺盛期，根據不同調查對象，設置不同大小調查區(qū)域，調查區(qū)域應不小于150m2

或覆蓋植株數不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調查5個樣點，每點調查至少5株植

物。采用目測法調查整個植株或單個枝葉及植株附近地面各種節(jié)肢動物的數量、種類和發(fā)育階段。對

田間不易識別的種類進行采樣標記，放入75%乙醇溶液保存，供進一步鑒定。

A.3.2吸蟲器調查法

在轉基因植物生長旺盛期，根據不同調查對象，設置不同大小調查區(qū)域，調查區(qū)域應不小于150m2

或覆蓋植株數不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調查5個樣點。每點用吸蟲器吸取至

少5株植物或枝葉（全株）及其地面1m2范圍內的所有節(jié)肢動物種類。將抽取的樣品帶回室內清理和

初步分類后，放入75%乙醇溶液保存，供進一步鑒定。

A.3.3陷阱法

在轉基因植物生長旺盛期，根據不同調查對象，設置不同大小調查區(qū)域，調查區(qū)域應不小于150m2

或覆蓋植株數不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調查5個樣點，每點設置一個陷阱。

陷阱結構是：使用3個塑料杯（Φ15cm×10cm），間隔0.5m，埋入土壤中作為陷阱，杯口與地面相

平，每個陷阱上都有用鐵絲支撐的塑料碗做棚。杯中放有濃度為5%的洗滌劑水，不超過杯容積的1/3。

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在埋杯第2d調查杯中的節(jié)肢動物種類和數量，不易識別的種類編號后放入75%乙醇溶液保存，供進

一步鑒定。

A.3.4誘捕法

在轉基因植物生長旺盛期，根據不同調查對象，設置不同大小調查區(qū)域，調查區(qū)域應不小于150m2

或覆蓋植株數不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調查樣點，每150m2設置2至3個專

用誘捕器，各誘捕器間距離20m左右，在每個誘捕器內放置一定量的性誘劑或食物。甜菜夜蛾、斜

紋夜蛾等大型昆蟲在距離植物頂部20cm左右放置專用誘捕器；小菜蛾等體型相對較小的昆蟲于靠近

植物頂部處放置專用誘捕器。誘捕器使用轉換接口外接容器（如可樂瓶）作為貯蟲設備。誘蟲點每月

更換一次以保證誘蟲效果，通過統計單瓶誘蟲量，監(jiān)測昆蟲種類和數量動態(tài)變化。

A.3.5振落法

在轉基因植物生長旺盛期，根據不同調查對象，設置不同大小調查區(qū)域。調查區(qū)域應不小于150m2

或覆蓋植株數不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調查5個樣點，每點至少調查5株植

物；對于高大樹木上的昆蟲，可用振落的方法進行捕捉。其方法是：先在樹下鋪上白布，然后搖動或

敲打樹枝樹葉，利用昆蟲的假死習性，將其振落到白布上進行收集。用這種方法可以采集到鞘翅目

（Coleoptera）、脈翅目（Neuroptera）和半翅目（Hemiptera）的許多種類昆蟲。有些沒有假死習性的

昆蟲，可在振動后的飛行過程中用網捕捉。

A.3.6網捕法

A.3.6.1空網法、掃網法和刮網法

根據用處不同制作空網、掃網和刮網。網口直徑通常為1/3m，網長2/3m，手柄1至數m。空網：

用透氣、堅韌、淺色的珠羅紗、尼龍紗等制成，專門用來采集蝴蝶、蜂類、蜻蜓等飛翔迅速的昆蟲。

掃網：用來掃捕樹叢、雜草中隱蔽的昆蟲，采用較結實的白布或亞麻布制作網袋，網框和網柄都要選

擇堅固的材料，以承受掃網時較大的阻力。刮網：在樹皮上采集昆蟲時，可用粗鋁絲作架，前面連接

上一段有彈性的鋼條，縫上白布的網袋，底端可捆上個小瓶，以便接蟲。

在轉基因植物生長旺盛期，根據不同調查對象，設置不同大小的調查區(qū)域，但應不小于150m2

或覆蓋植株數不少于100株，每小區(qū)采用對角線或棋盤式取樣法調查5個樣點，使用合適的捕蟲網對

至少5株植物上的節(jié)肢動物進行采集，每次收集的標本均按號放入75%乙醇溶液保存，供進一步鑒定。

A.3.6.2馬來氏網法

在轉基因植物生長旺盛期，根據不同調查對象，設置不同大小調查區(qū)域，但應不小于400m2

（20m×20m）或覆蓋植株數不少于100株。

馬來氏網選用國際通用的馬來氏網Ⅰ型和Ⅱ型。馬來氏網Ⅰ型前部高180cm，后部高110cm，長

165cm，寬116cm；馬來氏網Ⅱ型前部高180cm，后部高110cm，長165cm，寬180cm；材質選用

聚乙烯100目以上紗網布，網布高度110cm以下部分網為黑色，110cm以上部分為白色，網紗在前

部與昆蟲收集器之間緊密連接，并留有直徑3cm～4cm的收集孔；收集器分為上下兩部分，上部與網

體連通，下部用于盛放無水乙醇收集液且可替換。在布設馬來氏網時，確保中部開口部分朝向樣點區(qū)

域，如需多個馬來氏網，間隔應大于500m。收集瓶內應灌滿無水乙醇，每10d～15d取樣一次，取

樣時將收集瓶擰下并迅速擰緊瓶蓋，每次收集的標本均按號放入75%乙醇溶液保存，供進一步鑒定。

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A.4浮游動物

A.4.1采樣點布設原則

調查區(qū)域為抗蟲轉基因植物種植區(qū)的農田水體以及周邊灌溉水、池塘、湖泊等自然水域。根據水

域的面積和形態(tài)、浮游動物的生態(tài)分布特點等決定采樣點數量（表A.2）。采樣點應有代表性，能反

映整個水體浮游動物的基本情況。

表A.2采樣點數量設置

水域面積（km2）采樣點數量（個）

＜23

2～53～5

5～205～7

20～507～10

50～10010～15

100～50015～20

＞50020～30

A.4.2采樣

定量樣品應在定性采樣之前用采水器采集。每個采樣點應采水樣1000ml。分層采樣時，可將各

層水樣分別定量取平均值，或將各層所采水樣等量混勻后取1000ml再定量，作為此點的定量樣品。

枝角類和橈足類動物的定量樣品應在定性采樣之前用采水器采集，每個采樣點應采水樣

10000ml～50000ml，再用25號浮游植物網過濾濃縮至100ml，用37%～40%（V/V）甲醛溶液固定，

用量為水樣體積的5%。

原生動物、輪蟲和無節(jié)幼體定量樣品，可采集10000ml～50000ml水樣混合后，除留一部分供活

體觀察不固定外，其余立即用魯哥氏液固定，用量為水樣體積的1%～1.5%（V/V）。如樣品需較長時

間保存，則需加入37%～40%（V/V）甲醛溶液，用量為水樣體積的4%（V/V）。

A.4.3水樣的沉淀和濃縮

原生動物和輪蟲樣品固定后，靜置沉淀24h。虹吸濃縮后的水量多少視原生動物和輪蟲濃度大小

而定，一般情況下可用透明度作參考，根據透明度確定水樣濃縮體積見表A.3。

表A.3根據透明度確定水樣濃縮體積的方法

透明度（cm）1L水樣濃縮后的體積（ml）

＞10030～50

50～100100～50

30～50500～100

20～301000（不濃縮）

＜20＞1000（稀釋）

枝角類和橈足類動物常用過濾法濃縮水樣。

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A.4.4計數

依據調查對象、樣品體積和具體情況，取水樣進行種類鑒定、個體計數和室內分析。

A.4.5浮游動物生物量的測定

原生動物、輪蟲可根據體積法求得生物量；枝角類和橈足類可用體長-體重回歸方程求得體重（濕

重），也可用電子天平直接稱重。

A.5土壤動物

在抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)域劃分網格，按照HJ710.10中

規(guī)定的簡單隨機抽樣法確定樣方，每個調查對象不少于3個樣方，每個樣方不小于5m×5m，樣方間

距離不小于10m。每樣方內按照隨機或者均勻設置5個樣點，樣點需包含或緊鄰被評價的植物。

A.5.1大型土壤動物

每個樣點調查面積不小于1m×1m×0.2m（長×寬×深），利用鐵鏟等工具將被調查樣點土塊

快速取出，通過目視手檢法對大型土壤動物種類和數量鑒別統計。對于不能夠準確鑒別的動物，應保

存于75%乙醇或防壓標本盒中，在實驗室中進一步鑒定。

蚯蚓等環(huán)節(jié)動物是土壤質量與生態(tài)功能的指示類群，在調查中應當重點關注。

A.5.2中型土壤動物

每個樣點調查面積不小于0.2m×0.2m（長×寬）土壤，采用取土器（半徑2.5cm）鉆取0～0.2m

土層，每樣點三點取樣，混勻后迅速帶回實驗室分離鑒定中、小型土壤動物，土壤樣品的運輸保存按

照GB/T32722執(zhí)行。利用高溫高梯度Tullgren干法設備（篩網網眼為2mm），將土壤動物（主要分

離小節(jié)肢類土壤動物類群）從土壤樣品中分離出來。收集溫度：從20℃開始，每12h升高5℃，升

到40℃為止，共持續(xù)48h。用Torne氏收集液（1000ml異丙醇，30ml冰醋酸，3ml福爾馬林）收

集，然后轉移到75%的乙醇中。

A.5.3小型土壤動物

土壤樣品采集方法按照A.5.2進行。利用Baermann淺盤法，將篩盤（網眼為2mm）放入相應的

淺盤中，在篩盤上放置一層濾紙，稱取20g～50g的樣土（視土壤動物的密度而定），均勻鋪在濾紙

上，小心加水至浸沒土壤，置于20℃室溫條件下分離。12h時，可直接取淺盤上層水體，直接顯微

鏡觀察原生動物數量和種類。48h后，用篩盤（網眼為25μm）對淺盤中的水進行過篩，沖洗，將收

集的土壤動物（主要為線蟲等類群）保存于75%的乙醇。

A.6兩棲動物

按照HJ710.6中規(guī)定的方法，調查抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)

域內的兩棲動物。

A.6.1樣線法

根據兩棲動物分布與生境因素的關系，如海拔梯度、植被類型、水域狀態(tài)等設置樣線。樣線盡可

能涵蓋不同生態(tài)系統類型。調查應在太陽落山一小時后開展，每次調查應重復3d。

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在農田或農田與自然生態(tài)系統交接區(qū)，可采用長樣線，長度500m～1000m之間；在生境較為復

雜的自然生態(tài)系統，可設置多條短樣線，每條樣線長度20m～100m之間。每個調查樣地的樣線應在

7條以內，短樣線可適當增加數量。樣線的寬度根據視野情況而定，一般為2m～6m。調查時速度應

保持在2km/h左右，行進期間記錄物種（成體、幼體、蝌蚪和卵）和個體數量，不宜拍照和采集。

A.6.2樣方法

在調查樣地內隨機或均勻設置一定數量的樣方，樣方應盡可能涵蓋不同的生境類型和環(huán)境梯度。

樣方一般設置為方形，大小可設置成5m×5m或10m×10m。樣方之間應間隔100m以上。每個觀

測樣地的樣方數應在7個以上。依次翻開樣方內的石塊，檢視石塊下的個體（包括卵），記錄樣方內

見到的所有兩棲動物種類和個體數量。

A.6.3人工庇護所法

在調查區(qū)內隨機設置3個10m×10m的樣方，樣方之間應間隔100m以上。在每個樣方內，挑

選樹蛙常選擇的產卵樹10株，每株樹捆綁固定6個竹筒（或PVC桶），2個在地面，2個離地面70cm，

2個離地面150cm，共布設60個竹筒（或PVC桶）。竹筒長15cm～18cm，內徑3cm～6cm，竹筒

內加入5cm～10cm深的水。每3d巡視檢查一次，記錄兩棲動物的種類以及成體、亞成體、幼體、

蝌蚪和卵的數量。連續(xù)進行3次。

A.6.4人工覆蓋物法

根據統計分析的要求和兩棲動物物種個體大小、種群數量等因素確定人工覆蓋物的數目和尺寸。

人工覆蓋物的材料為木板或波浪狀瓦片較好。尺寸一般為30cm×20cm或以上。樣地內應采用統一的

覆蓋物。人工覆蓋物的排列方式一般設置成平行線、網格等形狀。網格形狀的排列方式可采用5個×

5個覆蓋物的樣方，覆蓋物之間的間距為5m。可在放置覆蓋物的地方下挖5cm，形成足夠的隱蔽空

間，坑底鋪放一些草葉，形成一個適宜的隱蔽環(huán)境。每天早晨8～10時查看一次。查看時迅速拿起覆

蓋物，捕獲匿居其下的兩棲動物，并臨時放在塑料袋或廣口瓶中以備測量、標記和采樣。

A.7底棲動物

A.7.1調查樣地的設置

調查區(qū)域為抗蟲轉基因植物及對照植物種植區(qū)的農田水體以及周邊灌溉水、池塘、湖泊等自然水

域。根據調查水體（水田或者溝渠等）的形態(tài)特點、底質類型和底棲無脊椎動物的分布特征等因素，

在調查水體內設置若干具有代表性的樣線，使同一樣線上的差異程度盡可能小，在同一樣線上每隔一

定距離設置一個采樣點。

A.7.2樣品采集

使用底泥采泥器采集泥樣。采樣時每個采樣點累計采樣面積1/8m2～1/3m2。即使用1/16m2的彼

得生采泥器或改良的彼得生采泥器（1/12m2），采泥2～4次，采樣厚度一般為10cm～15cm。

A.7.2.1大型底棲動物

參照HJ710.8中規(guī)定的方法，調查抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)

域內的淡水底棲大型無脊椎動物。

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將獲得的底泥樣品置于40目篩中，在清水中輕輕搖蕩，洗去樣品中剩余的污泥，篩洗后挑出其中

的雜物和植物枝條、葉片等（仔細檢查并揀出摻雜在其中的動物），將篩上肉眼能看得見的全部樣品

倒入白瓷盤中進行分揀，同時利用解剖鏡等工具進行物種分類，并記錄大型底棲動物數量；如不能夠

及時分選鑒定，應將初步淘洗后的樣品保存于70%乙醇中，可參考相關工具書或在相關分類學家的指

導下，對樣品進行形態(tài)分類和物種鑒別。

A.7.2.2小型底棲動物

將獲得的底泥層置于上層為40目、下層為325目的套篩中，在清水中輕輕搖蕩，洗去樣品中剩余

的污泥。中間截留物用于小型底棲動物的分離，如不能夠立即操作，將中間截留物保存于濃度為5%

的福爾馬林溶液中。采用ludox離心分選法分離小型底棲動物：將中間截留物倒入離心管中，再加入

4倍體積的ludoxHS-40凝膠（密度約為1.2g/ml），2000rpm離心約5min，完成后將離心管中上清

液倒在325目的網篩上，用自來水沖洗干凈。重復上述步驟三次。將網篩（包括截留物）放入含有0.1%

虎紅溶液的染色缸中染色1h后，自來水洗凈。用吸管將染色后截留物轉移到玻璃平皿中，于體視顯

微鏡或解剖鏡下對小型底棲動物鑒定并計數。

A.8魚類

按照HJ710.7中規(guī)定的方法，調查抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)

域內的內陸水域魚類。

A.8.1調查樣地的設置

根據待調查區(qū)域的水體底質、水生植物組成、水深、水體形態(tài)、水流等因素劃分成若干小區(qū)，使

同一小區(qū)內變異程度盡可能小。小區(qū)的面積和數量可根據調查水體的面積、形態(tài)和生境特征、工作條

件、經費情況等因素確定。一般設置的小區(qū)數量不少于3個。

A.8.2捕撈調查法

根據調查水體的形態(tài)以及生境特征等因素，利用合適的網具進行捕撈，鑒定記錄魚類的種類和數

量。對那些現場無法鑒定的物種，要盡可能采集完整的標本并做好記錄，包括文字、影像和北斗定位

系統記錄，以備室內鑒定之用。應盡可能記錄各物種所有能觀察到的形態(tài)、生物學現狀和生態(tài)環(huán)境信

息等。在調查過程中注意收集標本及其他相關資料，并記錄相關信息，保留作為憑證以備核查。

A.9鳥類

按照HJ710.4中規(guī)定的方法，調查抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉基因對照植物）生長區(qū)

域內的鳥類。

應根據待調查區(qū)域內鳥類活動高峰期確定一天中的調查時間。調查時的天氣應為晴天或多云天氣，

雨天或大風天氣不能開展調查。一般在早晨日出后3小時內和傍晚日落前3小時內進行調查。需準備

8～12倍的雙筒望遠鏡（用于行走時或在樹林中調查近距離的鳥類）、25～60倍單筒望遠鏡（用于調

查遠距離且較長時間停留在某地的鳥類）、鳥類野外手冊或鳥類圖鑒等工具書、野外記錄表、照相機、

北斗衛(wèi)星定位儀、溫度計、必要的防護用品和應急藥品等。

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A.9.1分區(qū)直數法

根據地貌、地形或生境類型對整個調查區(qū)域進行分區(qū)，逐一統計各個分區(qū)中的鳥類種類和數量，

得出調查區(qū)域內鳥類總種數及其個體數量。該方法適用于較小面積的抗蟲轉基因植物種植區(qū)的鳥類調

查。

A.9.2樣線法

根據生境類型和地形設置樣線，各樣線互不重疊，調查者沿著固定的線路行走，并記錄樣線兩側

所見到的鳥類。每種生境類型的樣線在2條以上，每條樣線長度以1km～3km為宜，若因地形限制，

樣線長度不應小于1km。調查時行進速度通常為1.5km/h～3km/h。

根據對樣線兩側調查記錄范圍的限定，樣線法又分為不限寬度、固定寬度和可變寬度3種方法。

不限寬度樣線法即不考慮鳥類與樣線的距離，固定寬度樣線法即記錄樣線兩側固定距離內的鳥類，可

變寬度樣線法需記錄鳥類與樣線的垂直距離。

該方法適用于大規(guī)?？瓜x轉基因植物種植區(qū)的鳥類調查。

A.9.3樣點法

樣點法是樣線法的一種變形，即調查者行走速度為零的樣線法。以固定距離設置調查樣點，樣點

之間的距離應根據生境類型確定，一般在0.2km以上，在每個樣點調查3min～10min。

根據對樣點周圍調查記錄范圍的界定，樣點法又分為不限半徑、固定半徑和可變半徑3種方法。

不限半徑樣點法即調查時不考慮鳥類與樣點的距離，固定半徑樣點法即記錄樣點周圍固定距離內的鳥

類，可變半徑樣點法需記錄鳥類與樣點的距離。

樣點法更適合在崎嶇的山地或抗蟲轉基因植物種植片段化的生境中使用。

A.9.4紅外相機自動拍攝法

紅外感應自動照相機能拍攝到活動隱蔽的地面活動鳥類。安置紅外相機前，應調查鳥類的活動區(qū)

域和日常活動路線。盡量將相機安置在目標動物經常出沒的通道上或其活動痕跡密集處。

可采用分層抽樣法或系統抽樣法設置觀測樣點。分層抽樣法中，每種生境類型設置7個以上樣點

（樣點之間間距0.5km以上）。系統抽樣法中，在觀測樣地內按照固定間距設置觀測樣點，每1km2

至少設置1個觀測樣點。

記錄各樣點名稱，進行編號，并用北斗衛(wèi)星定位儀定位。每個樣點于田間或樹干、樹樁上裝設1

或2臺紅外感應自動相機。相機架設位置一般距離地面0.3m～1.0m，架設方向盡量不朝東方太陽直

射處。相機鏡頭與地面大致平行，略向下傾，一般與鳥類活動路徑呈銳角夾角，并清理相機前的空間，

減少對照片成像質量的干擾。每一個樣點應該至少收集1000個相機工作小時的數據。在夏季每個樣點

需至少連續(xù)工作30d，以完成一個觀測周期。

根據設備供電情況，定期巡視樣點并更換電池，調試設備，下載數據。記錄各樣點拍攝起止日期、

照片拍攝時間、動物物種與數量、年齡等級、性別、外形特征等信息，建立信息庫，歸檔保存。

A.10嚙齒動物

參照HJ710.3等標準中規(guī)定的方法，調查抗蟲轉基因植物及其受體植物（或非轉基因對照植物）

生長區(qū)域內的嚙齒動物。

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A.10.1單公頃弓形夾法

對于晝間活動為主的嚙齒類動物（如旱獺、黃鼠等）可采用單公頃弓形夾法，根據生境和地形，

選擇若干塊面積為1hm2（100m×100m或者50m×200m）的樣地，為了保證樣地為規(guī)整的正方形

或長方形，可采用羅盤或者北斗衛(wèi)星定位儀來定位。確定好樣地后，邊堵洞邊計數，24h后查盜開洞

（有效洞）數量。同時，在盜開洞口布放好弓形夾，24h后收夾，期間每隔1h～2h檢查1次（夜間

可不必檢查），檢查中凡捕獲的鼠類全部取下，夾子仍布放原洞口。

鼠類密度的計算公式(A.1)：

N

D（A.1）

S

式中：D——鼠密度，只/hm2；

N——捕獲鼠總數量，只；

S——總樣方面積，hm2。

有效洞口系數的計算公式（A.2）：

D

R（A.2）

N

式中：R——有效洞口系數；h

D——鼠密度，只/hm2；

2

Nh——單公頃有效洞口數量，個/hm。

根據鼠密度和有效洞口系數評價大面積鼠類種群數量和危害程度，對于大面積估算的面積應不少

于該調查面積的0.5%。

A.10.2夾夜法

對于夜間活動為主的嚙齒類動物（如跳鼠、沙鼠等）可采用夾夜法，使用板夾每5m～10m布放

1夾，每行100夾，行間距20m～50m，用面粉加植物油或花生米等作餌料。一般天黑前布放，天亮

后檢查捕獲鼠類情況并收夾。以捕獲率表示鼠密度，捕獲率計算公式（A.3）：

Nr

R100%（A.3）

Ne

式中：R——捕獲率，%；

Nr——捕獲鼠的鼠夾數，夾；

Ne——有效鼠夾數，夾。

為了盡可能準確反映當地嚙齒動物種群的數量，建議在一個地區(qū)布放的板夾數不低于1000個。

A.10.3單公頃樣方捕盡法

此法適用于群居的嚙齒類動物（如長爪沙鼠、高原鼠兔等），即把樣地分為高、中、低3種類型

進行調查，每種類型設置2～3個樣方，將不同密度進行平均作為該地區(qū)該種類的密度。樣方設定好后

采用堵洞盜開法連續(xù)布夾48h，捕盡樣地內嚙齒類動物。

A.10.4標記重捕法

單次標記重捕法指根據第二次捕獲量中被標記個體所占比例推算目標動物種群數量的標記重捕法。

目標動物的種群大小N和方差Vn分別按下列公式（A.4～A.5）計算：

(M1)(n1)

N1（A.4）

m1

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式中：N——種群個體數，個；

M——第一次釋放的標記個體數，個；

n——第二次捕捉個體數，個；

m——n中被標記個體數，個。

(M1)(n1)(Mm)(nm)

V（A.5）

n(m1)2(m2)

式中：Vn——種群個體數的方差；

M——第一次釋放的標記個體數，個；

n——第二次捕捉個體數，個；

m——n中被標記個體數，個。

此法的前提假設是：目標動物種群是封閉的，即沒有個體遷入或遷出；所有動物有同等的被捕獲

率；捕獲率不受動物是否做標記的影響；標記不會丟失，抽樣是隨機的。實際應用時，如果個體受捕

率有明顯差異，可以將數據按性別、年齡等分組計算，以減少誤差。

開放種群的多次標記重捕法的假設前提是種群中任意個體在抽樣期i有相同的受捕率；所有標記

個體在此后有相同的存活率；抽樣必須瞬間完成，個體立即釋放。在時間節(jié)點i的種群數量按下列公

式（A.6～A.7）計算：

M'

i（）

Ni(ni1)A.6

(mi1)

式中：Ni——時間節(jié)點i的種群數量，個；

ni——時間節(jié)點i樣本中的捕獲總數，個；

Mi'——時間節(jié)點i標記個體在種群中的數量，個；

mi——時間節(jié)點i樣本中的標記個體總數，個。

z

i（）

Mi'mi(Ri1)A.7

(ri1)

式中：Mi'——時間節(jié)點i標記個體在種群中的數量，個；

mi——時間節(jié)點i樣本中的標記個體總數，個；

Ri——時間節(jié)點i中標記個體的釋放數，個；

zi——時間節(jié)點i以前被標記，在i中不被捕獲，i以后再捕獲的個體數，個；

ri——時間節(jié)點i中標記釋放，其后又被捕獲的個體數，個。

A.10.5紅外相機自動拍攝法

紅外感應自動照相機可用于調查活動隱蔽的地面活動嚙齒類動物。