第2章 細胞工程（知識清單）期中考點大串講

學而優(yōu)·教有方PAGEPAGE1第二章細胞工程第一節(jié)植物細胞工程一、植物細胞工程的基本技術(shù)（一）細胞工程概念：細胞工程是指應用細胞生物學、分子生物學和發(fā)育生物學等多學科的原理和方法，通過細胞器、細胞或組織水平上的操作，有目的地獲得特定的細胞、組織、器官、個體或其產(chǎn)品的一門綜合性生物工程。①原理方法：細胞生物學、分子生物學和發(fā)育生物學；②操作水平：細胞器、細胞或組織水平；③目的：得特定的細胞、組織、器官、個體或其產(chǎn)品；④分類：植物細胞工程、動物細胞工程。（二）植物細胞的全能性1．概念：細胞經(jīng)分裂和分化后，仍然具有產(chǎn)生完整生物體或分化成其他各種細胞的潛能。2.在生物生長發(fā)育過程中，并不是所有細胞都表現(xiàn)出全能性，比如：芽原基的細胞發(fā)育為芽，葉原基的細胞發(fā)育為葉。這是因為在特定的時間和空間條件下，細胞中的基因會選擇性地表達。3.是否表現(xiàn)出全能性的判斷標準：細胞經(jīng)分裂和分化后是否產(chǎn)生完整生物體。4.細胞具有全能性的原因（物質(zhì)基礎）：一般來說，生物體的細胞中都含有該物種的全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成為完整個體所需的全部遺傳信息。5.生物體生長發(fā)育過程中細胞不表現(xiàn)全能性的原因（不離體的細胞無法表現(xiàn)出全能性的原因）：在特定的時間和空間條件下，細胞中的基因會選擇性地表達（從而形成生物體的不同組織和器官）。6.是不是所有的活細胞都具有全能性？不是，例如哺乳動物成熟的紅細胞、植物成熟的篩管細胞。7.細胞具有的全能性一定能表現(xiàn)出來嗎？不是，例如動物的體細胞。8.比較一般情況下下列細胞全能性的大小(1)受精卵＞生殖細胞＞體細胞(2)分化程度低的細胞＞分化程度高的細胞、(3)分裂能力強的細胞＞分裂能力弱的細胞(4)植物細胞＞動物細胞(5)幼嫩的細胞＞衰老的細胞9.以下例子哪些能夠表現(xiàn)出了細胞的全能性：（1）（3）（4）（6）（7）(1)利用菊花莖段培養(yǎng)獲得試管苗。(2)芽原基的細胞發(fā)育為芽，葉原基的細胞發(fā)育為葉。(3)受精卵發(fā)育成個體。(4)蜜蜂的孤雌生殖中，卵細胞直接發(fā)育成雄蜂。(5)造血干細胞可分化形成多種血細胞。(6)通過花藥離體培養(yǎng)，獲得單倍體幼苗。(7)胚胎干細胞可分化發(fā)育成為各種組織器官的細胞。(8)種子發(fā)育成完整植株。（三）植物組織培養(yǎng)技術(shù)1．植物組織培養(yǎng)概念：將離體的植物器官、組織或細胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導其形成完整植株的技術(shù)。2.離體培養(yǎng)的植物器官、組織或細胞被稱為外植體。3.植物組織培養(yǎng)的原理：植物細胞的全能性。植物組織培養(yǎng)的生殖方式：無性生殖。植物組織培養(yǎng)的分裂方式：有絲分裂。4.菊花植物組織培養(yǎng)（1）菊花植物組織培養(yǎng)的原理①植物細胞一般具有全能性；②脫分化：在一定的激素和營養(yǎng)等條件的誘導下，讓已經(jīng)分化的細胞經(jīng)過誘導后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能，轉(zhuǎn)變成未分化細胞的過程。結(jié)果：形成愈傷組織。③愈傷組織的特點：不定形的薄壁組織團塊。一般不需要光照。此過程中涉及的生命活動只有細胞增殖（有絲分裂），沒有細胞分化。④再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織，在一定的培養(yǎng)條件下，再分化出芽、根等器官，進而形成完整的小植株。需要給予適當時間和強度的光照，誘導葉綠素的合成，使試管苗能夠進行光合作用。此過程中涉及的生命活動既有細胞增殖（有絲分裂），又有細胞分化。再分化實質(zhì)：基因的選擇性表達。⑤激素的作用：植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素。它們的濃度、比例等都會影響植物細胞的發(fā)育方向；生長素用量與細胞分裂素用來的比值結(jié)果比值高有利于根的分化，抑制芽的形成比值低有利于芽的分化，抑制根的形成比值適中促進愈傷組織的形成（2）選材：經(jīng)常選擇根尖（分生區(qū)）、莖的韌皮部（形成層）等。原因：分裂能力強、分化程度低，容易誘導形成愈傷組織。（3）操作流程：①外植體的消毒：將流水沖洗后的外植體用酒精消毒30s，用無菌水清洗2～3次后，再用次氯酸鈉溶液處理30min，用無菌水清洗2～3次。若想縮短次氯酸鈉溶液處理時間應適當提高次氯酸鈉溶液的濃度。②外植體的分割：用無菌濾紙吸去表面的水分，用解剖刀將外植體切成0.5～1cm長的小段。大小應適宜。③接種：在酒精燈火焰旁，并且實驗中使用的培養(yǎng)基和所有的器械及每次使用后的器械都要滅菌，將外植體的1/3～1/2插入誘導愈傷組織的培養(yǎng)基中。用封口膜或瓶蓋封蓋瓶口，并在培養(yǎng)瓶上做好標記。接種時注意外植體的方向，不要倒插。④培養(yǎng)：將接種了外植體的錐形瓶或植物組織培養(yǎng)瓶置于18～22℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。定期觀察和記錄愈傷組織的生長情況。誘導愈傷組織期間一般不需要光照，在后續(xù)的培養(yǎng)過程中，每日需要給予適當時間和強度的光照。⑤轉(zhuǎn)移培養(yǎng)（再分化過程）：培養(yǎng)15-20d后，將生長良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導生芽的培養(yǎng)基上。長出芽后，再將其轉(zhuǎn)接到誘導生根的培養(yǎng)基上，進一步誘導形成試管苗。⑥移栽：試管苗不可以直接移栽入土，需先打開封口膜或瓶蓋，讓試管苗在培養(yǎng)箱內(nèi)生長幾日，將試管苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖上，壯苗后再移栽入土。（4）若培養(yǎng)物取自植物的幼莖、葉片等含有葉綠體的部位，愈傷組織中是否會含有葉綠體？為什么？愈傷組織中不含有葉綠體；培養(yǎng)物經(jīng)過誘導后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細胞，因此，愈傷組織中不含有葉綠體。（5）植物組織培養(yǎng)中細胞表現(xiàn)出全能性的條件①離體（最關(guān)鍵）。②嚴格的無菌條件。③適宜的培養(yǎng)條件。④適宜濃度和比例的激素。⑤一定的營養(yǎng)條件。（6）為什么一定要離體才能表現(xiàn)出全能性？若細胞不離體，細胞中的基因會選擇性地表達，從而形成生物體的不同組織和器官，不能表現(xiàn)出全能性。（7）如何控制嚴格的無菌條件？①用體積分數(shù)為70%的酒精對手、超凈工作臺、外植體進行消毒,對外植體處理還需要質(zhì)量分數(shù)為5%左右的次氯酸鈉溶液,清洗外植體需要使用無菌水。②對培養(yǎng)基和器械進行滅菌；③接種操作必須在酒精燈火焰旁進行。（8）適宜的培養(yǎng)條件包括那些？①溫度（例如菊花植物組織培養(yǎng)應為18-22℃）。②光照（例如脫分化需避光，再分化需照光）。（9）一定的營養(yǎng)條件如何保證？配制合適的培養(yǎng)基，包括有機營養(yǎng)成分、無機營養(yǎng)成分、特定濃度和比例的激素。（10）培養(yǎng)基組成①無機營養(yǎng)成分（水和無機鹽）,②有機營養(yǎng)成分（蔗糖、氨基酸、維生素）,③特定濃度和比例的激素（主要是生長素和細胞分裂素）。注意：蔗糖的作用：提供能量，調(diào)節(jié)滲透壓。培養(yǎng)基滅菌方法為：濕熱滅菌法（高壓蒸汽滅菌）。（11）為什么整個過程要保證無菌操作？避免雜菌在培養(yǎng)基上迅速生長消耗營養(yǎng)，同時防止有些雜菌危害培養(yǎng)物的生長。（12）整個過程中使用的培養(yǎng)基中是一成不變的嗎？不是。分別為誘導愈傷組織的培養(yǎng)基→誘導生芽的培養(yǎng)基→誘導生根的培養(yǎng)基。（13）以上培養(yǎng)基中，生長素/細胞分裂素的比值大小是如何變化的？比值適中→比值低→比值高。（14）接種后，外植體被污染的可能原因：①培養(yǎng)基、接種工具滅菌不徹底。②外植體消毒不徹底。③操作過程不符合無菌操作要求等。（15）若想探究生長素與細胞分裂素的使用比例對植物組織培養(yǎng)的影響，則應如何設計對照實驗？空白對照：不加任何激素。實驗組1：生長素用量與細胞分裂素用量的比值為1；實驗組2：生長素用量與細胞分裂素用量的比值大于1；實驗組3：生長素用量與細胞分裂素用量的比值小于1。（四）植物體細胞雜交技術(shù)1.用傳統(tǒng)的有性雜交方法都能得到雜種后代嗎？為什么？不是，因為兩種生物之間存在著生殖隔離。2．植物體細胞雜交的概念：將不同來源的植物體細胞，在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新植物體的技術(shù)。3.植物體細胞雜交的主要步驟：植物細胞融合和植物組織培養(yǎng)。（1）在進行體細胞雜交之前，必須先去除細胞壁：用纖維素酶和果膠酶去除植物細胞壁，獲得原生質(zhì)體。去壁原因：細胞壁阻礙著細胞間的雜交（阻礙了原生質(zhì)體間的融合）。（2）誘導原生質(zhì)體融合的方法①物理法：電融合法、離心法等。②化學法：聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2＋－高pH融合法等。（3）細胞融合完成的標志：再生出新的細胞壁。

植物體細胞雜交完成的標志：培育出雜種植株。（4）再生出細胞壁的相關(guān)的細胞器：高爾基體和線粒體。（5）驗證再生出新壁的實驗：質(zhì)壁分離和質(zhì)壁分離復原實驗。4.纖維素酶和果膠酶的酶溶液中一般加入一定濃度的無機鹽離子和甘露醇，試分析原因？使溶液具有一定的滲透壓，防止原生質(zhì)體吸水過多而漲破，保持原生質(zhì)體正常。5.①植物體細胞雜交的原理：細胞膜具有一定的流動性、植物細胞的全能性。②植物體細胞雜交的生殖方式：無性生殖。③植物體細胞雜交的分裂方式：有絲分裂。④植物體細胞雜交的涉及的可遺傳變異類型：染色體變異。6.獲得的所有細胞一定是需要的雜交細胞嗎？不一定；誘導融合后的產(chǎn)物有三類：未融合的細胞、兩兩融合的細胞、多細胞融合體。7.植物體細胞雜交的意義：打破生殖隔離，實現(xiàn)遠緣雜交育種，培育植物新品種等方面展示出獨特的優(yōu)勢。8.雜種植株包含兩個物種的全部遺傳物質(zhì)，各種基因都包含在內(nèi)，卻未按照人們的要求表現(xiàn)出親本所有的性狀，例如“番茄-馬鈴薯”并沒有地上結(jié)番茄，地下長馬鈴薯，這是為什么？生物體內(nèi)基因的表達不是孤立的，它們之間是相互調(diào)控、相互影響的，雜種植株的細胞中雖然具備兩個物種的遺傳物質(zhì)，但這些遺傳物質(zhì)的表達相互干擾，它們不能像在原植株細胞內(nèi)實現(xiàn)有序表達，因此不能按照人們的要求表現(xiàn)出親本所有的性狀。二、植物細胞工程的應用植物細胞工程的應用包括植物繁殖的新途徑、作物新品種的培育、細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。（一）植物繁殖的新途徑1.植物繁殖的新途徑包括快速繁殖（也叫微型繁殖）和作物脫毒。2.快速繁殖(1)快速繁殖概念：用于快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù)。(2)優(yōu)點：可以高效、快速地實現(xiàn)種苗的大量繁殖；無性繁殖可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性；可實現(xiàn)工廠化生產(chǎn)。注意：扦插、壓條、嫁接等不屬于微型繁殖技術(shù)。3．作物脫毒（1）適用范圍：無性繁殖的作物(馬鈴薯、草莓、香蕉）。（2）進行作物脫毒的原因：用無性繁殖的方式進行繁殖的作物，它們感染的病毒很容易傳給后代，病毒在作物體內(nèi)逐年積累，就會導致作物產(chǎn)量降低、品質(zhì)變差。（3）外植體選材部位：植物頂端分生區(qū)附近部位，如莖尖。（4）選分生區(qū)的原因：植物頂端分生區(qū)附近病毒極少，甚至無病毒。（5）優(yōu)點：脫毒作物的產(chǎn)量和品質(zhì)明顯優(yōu)于沒有脫毒的作物。（6）作物脫毒具體操作過程：切取一定大小的莖尖進行組織培養(yǎng)，再生的植株就有可能不帶病毒，從而獲得脫毒苗。（7）脫毒苗是否不會再感染病毒？不是，脫毒苗≠抗毒苗。（8）實例：目前采用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)來脫去病毒，在馬鈴薯、草莓、甘蔗、菠蘿、香蕉等主要經(jīng)濟作物上已獲得成功。（二）作物新品種的培育1.作物新品種的培育包括單倍體育種和突變體的利用。2.單倍體育種(1)過程：花藥（或花粉）離體培養(yǎng)（花藥取自二倍體植株）―→單倍體幼苗染色體加倍→純合子植株。當年就能培育出遺傳性狀相對穩(wěn)定的純合二倍體植株。(2)優(yōu)點①后代是純合子，能穩(wěn)定遺傳。②極大地縮短了育種的年限，節(jié)約了大量的人力和物力。③大多數(shù)單倍體植株可作為進行體細胞誘變育種和研究遺傳突變的理想材料。（3）為什么大多數(shù)單倍體植株可作為進行體細胞誘變育種和研究遺傳突變的理想材料？大多數(shù)單倍體植株的細胞中只含一套染色體，染色體加倍后得到的植株的隱性性狀容易顯現(xiàn)。3．突變體的利用（1）過程：（2）誘變處理對象：一般為愈傷組織。（3）產(chǎn)生原因：在植物的組織培養(yǎng)過程中，易受培養(yǎng)條件和誘變因素(如射線、化學物質(zhì)等)的影響而產(chǎn)生突變。（4）原理：基因突變和植物細胞的全能性。（5）誘變育種的缺點：突變具有不定向性和低頻性，因此需大量處理實驗材料。（6）誘變育種的優(yōu)點：通過人工誘變提高愈傷組織的突變率，從而篩選獲得抗病、抗鹽、高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的新品種，加快育種進程。(7)利用：篩選出對人們有用的突變體，進而培育成新品種。（三）細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)1.代謝產(chǎn)物的分類a.初生代謝產(chǎn)物：初生代謝是生物生長和生存所必需的代謝活動；產(chǎn)物：糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸等b.次生代謝產(chǎn)物：植物代謝會產(chǎn)生一些一般認為不是生物生長所必需的，一般在特定組織或器官中，并在一定的環(huán)境和時間條件下才進行。產(chǎn)物：一類小分子有機化合物（如酚類、萜類、含氮化合物等)2.細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)的目標產(chǎn)物：次生代謝產(chǎn)物。3.次生代謝物作用：在植物抗病、抗蟲等方面發(fā)揮作用，也是很多藥物、香料和色素等的重要來源。4.生產(chǎn)技術(shù)手段：植物組織培養(yǎng)技術(shù)（在離體條件下對單個植物細胞或細胞團進行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù)）。5.過程：6.細胞產(chǎn)物工廠化生產(chǎn)主要利用的是哪種結(jié)構(gòu)？愈傷組織。7.該過程中是否需要培養(yǎng)得到完整植株？一般不需要。8.優(yōu)點：不占用耕地，幾乎不受季節(jié)、天氣等的限制，對于社會、經(jīng)濟、環(huán)境保護具有重要意義；生產(chǎn)速度快。9．實例：利用紫草細胞的組織培養(yǎng)生產(chǎn)的紫草寧具有抗菌、消炎和抗腫瘤等活性。利用紅豆杉細胞的組織培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇具有高抗癌活性。第二節(jié)動物細胞工程動物細胞工程包括：動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、動物細胞核移植。一、動物細胞培養(yǎng)1.動物細胞培養(yǎng)概念：指從動物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術(shù)。2.動物細胞培養(yǎng)的原理：細胞增殖（有絲分裂）。3.動物細胞培養(yǎng)的地位：動物細胞工程的基礎。4.動物細胞培養(yǎng)的關(guān)鍵操作：原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。（一）動物細胞培養(yǎng)的條件1.動物細胞培養(yǎng)的條件：營養(yǎng)條件、無菌、無毒的環(huán)境、適宜的溫度、pH和滲透壓、適宜的氣體環(huán)境。2.營養(yǎng)物質(zhì)主要包括：糖類、氨基酸、無機鹽、維生素等。未知營養(yǎng)條件：使用合成培養(yǎng)基時，通常需加入血清等一些天然成分。其作用為：提供尚未全部研究清楚的細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)。動物細胞利用的營養(yǎng)物質(zhì)包括蔗糖和淀粉嗎？不包括。3.動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基的物理性質(zhì)：培養(yǎng)動物細胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為培養(yǎng)液。4.保證無菌、無毒環(huán)境的具體措施（1）對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行滅菌處理。（2）在無菌環(huán)境下進行操作。（3）還需要定期更換培養(yǎng)液。5.培養(yǎng)液的滅菌方法：濕熱滅菌法（高壓蒸汽滅菌）。培養(yǎng)用具的滅菌方法：濕熱滅菌法（+烘干）或干熱滅菌法。6.怎樣保證無菌操作？對操作空間、操作者衣著和手進行清潔和消毒，保證所有操作均在在超凈工作臺并在酒精燈火焰旁進行。7.為什么培養(yǎng)液需要定期更換？

以便清除代謝物，防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害。8.如何防止培養(yǎng)過程中的微生物污染？

在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素。9.哺乳動物細胞培養(yǎng)的溫度多以36.5±0.5℃為宜。10.多數(shù)動物細胞生存的適宜pH為7.2-7.4。11.維持適宜滲透壓的目的維持細胞正常的形態(tài)和功能。12.動物細胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2。其作用分別為：O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用維持培養(yǎng)液的pH。13.培養(yǎng)容器：通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶。培養(yǎng)儀器：含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱。因此動物細胞培養(yǎng)的氣體環(huán)境為95%空氣和5%CO2。（二）動物細胞培養(yǎng)的過程取動物組織→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液原代培養(yǎng)→分瓶→傳代培養(yǎng)1.動物細胞培養(yǎng)取材：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官。取材原因：細胞分化程度低，增殖能力強，容易培養(yǎng)。2.制成細胞懸液的步驟（1）將組織分散成單個細胞。（2）用培養(yǎng)液將細胞制成細胞懸液。3.將組織分散成單個細胞的原因（1）從動物體取出的成塊組織中，細胞與細胞靠在一起，彼此限制了生長和增殖；（2）能使細胞與培養(yǎng)液充分接觸，更易進行物質(zhì)交換。4.將組織分散成單個細胞的方法(1)機械法;(2)用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理一段時間。5.（1）用胰蛋白酶分散細胞，可以說明什么問題？動物細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。（2）可以用胃蛋白酶分散細胞嗎？不可以。為什么？胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當pH大于6時，胃蛋白酶就會失去活性，多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2-7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，所以用胃蛋白酶不行。6.酶解法較溫和，一定不會對動物細胞造成損傷嗎？不是，使用胰蛋白酶時，要控制好作用時間，因為胰蛋白酶不僅能分解細胞間的蛋白質(zhì)，長時間作用還會分解細胞膜蛋白等，對細胞造成損傷。7.體外培養(yǎng)的動物細胞的兩大類：（1）能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖。（2）大多數(shù)需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖（細胞貼壁）。8.兩類細胞的生長特點（1）懸浮生長類：會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻。（2）貼壁生長類：除會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻外，還會發(fā)生接觸抑制。9.“細胞增殖到互相接觸的時候，糖蛋白識別了這種信息，就會使細胞停止繼續(xù)繁殖，出現(xiàn)接觸抑制的現(xiàn)象”試結(jié)合上述解釋，舉例說明哪種細胞最可能無接觸抑制現(xiàn)象，并闡述原因：癌細胞，癌細胞的細胞膜上糖蛋白等物質(zhì)減少。10．原代培養(yǎng)（1）原代培養(yǎng)：通常將分瓶之前的細胞培養(yǎng)，即指動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)。（2）原代培養(yǎng)的具體做法：將初次制備好的細胞懸液放入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于適宜環(huán)境中培養(yǎng)。11．傳代培養(yǎng)（1）傳代培養(yǎng)：將分瓶后的細胞培養(yǎng)。（2）分瓶傳代培養(yǎng)的具體做法:①收集細胞a.懸浮生長類：直接用離心法收集。b.貼壁生長類：重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細胞，然后再用離心法收集。②將收集的細胞制成細胞懸液，分瓶培養(yǎng)。12.為什么動物細胞培養(yǎng)中需分瓶進行傳代培養(yǎng)？細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，貼壁細胞還會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象。13.離心的作用：在沉淀中得到細胞，同時去掉上清液中的胰蛋白酶。14.動物細胞培養(yǎng)技術(shù)有沒有體現(xiàn)動物細胞的全能性？

未體現(xiàn)，動物細胞培養(yǎng)只是細胞增殖的過程。15.正常細胞不能一直傳代培養(yǎng)下去；細胞的傳代培養(yǎng)一般傳至10代后就不易傳下去，這時細胞能保持細胞正常的二倍體核型；傳至10-50代左右時，增殖會逐漸緩慢，以至于完全停止，這時部分細胞的細胞核型可能會發(fā)生變化，這一階段的細胞稱為細胞株;

繼續(xù)傳代培養(yǎng)時，少部分細胞會克服細胞壽命的自然極限，獲得不死性，這些細胞已經(jīng)發(fā)生了突變，正在朝著等同于癌細胞的方向發(fā)展，這一階段的細胞稱為細胞系，細胞系的遺傳物質(zhì)一定改變了。（三）干細胞的培養(yǎng)及其應用1．干細胞功能：在一定條件下，可以分化成其他類型的細胞。2．干細胞的分布：早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中。3．干細胞的種類：包括胚胎干細胞、成體干細胞和誘導多能干細胞等。4.胚胎干細胞（簡稱ES細胞）（1）分布：存在于早期胚胎中。（2）特點：具有分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細胞，并進一步形成機體的所有組織和器官甚至個體的潛能。5.成體干細胞（1）分布：存在于成體組織或器官內(nèi)中。（2）常見類別：包括骨髓中的造血干細胞、神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)干細胞、睪丸中的精原干細胞等；（3）特點：一般認為，成體干細胞具有組織特異性，只能分化成特定的細胞或組織，不具有發(fā)育成完整個體的能力。（4）發(fā)現(xiàn)最早、研究最多的、應用最成熟的實例：造血干細胞，主要存在于成體的骨髓、外周血和臍帶血中。6.誘導多能干細胞概念：通過體外誘導成纖維細胞，獲得類似胚胎干細胞的一種細胞，稱為誘導多能干細胞，簡稱iPS細胞。7.誘導多能干細胞優(yōu)點：（1）誘導過程無需破壞胚胎。（2）iPS細胞可以來源于病人自身的體細胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排斥反應。8.干細胞的應用：有著自我更新能力及分化潛能的干細胞，與組織、器官的發(fā)育、再生和修復等密切相關(guān)。（1）造血干細胞可以治療白血病及一些惡性腫瘤放療或化療后引起的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病。（2）神經(jīng)干細胞可以治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾?。ㄈ缗两鹕?、阿爾茨海默病等）。（3）誘導多能干細胞（iPS細胞）可治療小鼠的鐮狀細胞貧血癥，在治療阿爾茲海默病、心血管疾病等領域的研究也取得了新進展。9.干細胞可以治療某些頑癥的原理是什么？干細胞可以被誘導分化形成新的組織細胞，經(jīng)移植可使壞死或退化部位得以修復并恢復正常功能。10.胚胎干細胞的局限性：必須從胚胎中獲取

，涉及倫理問題。11.普遍認為iPS細胞的應用前景優(yōu)于胚胎干細胞。12.iPS細胞用于治療人類疾病過程取成纖維細胞→轉(zhuǎn)入相關(guān)因子→細胞轉(zhuǎn)化為iPS細胞→誘導iPS細胞定向分化為多種組織細胞→移植回病人體內(nèi)。13.制備iPS細胞的其他方法（1）借助載體將特定基因?qū)爰毎姓T導形成iPS細胞。（2）直接將特定蛋白導入受體細胞中誘導形成iPS細胞。（3）用小分子化合物來誘導形成iPS細胞誘導形成iPS細胞。14.iPS細胞的來源：成纖維細胞以及已分化的T細胞、B細胞。15.如果想將iPS細胞用于緊急情況，應該提前采取什么措施？建立iPS細胞庫（HLA多態(tài)性豐富的iPS細胞庫），可以為需要的人找到HLA匹配度較高的iPS細胞。16.如果誘導iPS細胞定向分化為生殖細胞的技術(shù)發(fā)展成熟，該技術(shù)可能會有哪些應用？可以用來治療不孕癥，可以用來進行瀕危物種的克隆，可以對獲得的生殖細胞進行轉(zhuǎn)基因操作，再經(jīng)過受精、胚胎發(fā)育等過程來獲得轉(zhuǎn)基因動物。二、動物細胞融合技術(shù)與單克隆抗體（一）動物細胞融合技術(shù)1．動物細胞融合技術(shù)概念：使兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的技術(shù)。2.誘導的結(jié)果：形成的雜交細胞，具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息。3.誘導的原理：細胞膜具有一定的流動性。4．誘導方法：PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等。其中，滅活病毒誘導法是動物細胞融合特有的誘導融合方法。5．意義：突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。6.“滅活病毒”中滅活的具體含義是什么？用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)。7.滅活病毒誘導細胞融合的原理是什么？病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。8.融合實質(zhì)及完成的標志：細胞核的融合。9．動物細胞融合技術(shù)的應用(1)細胞融合技術(shù)成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)利用動物細胞融合技術(shù)發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)，為制備單克隆抗體開辟了新途徑。（二）單克隆抗體及其應用1.早期獲得抗體的方法：向動物體內(nèi)反復注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。2.上述抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低、特異性差。3.B細胞的特點（優(yōu)點和局限性）：能產(chǎn)生單一的特異性抗體，但不能無限增殖。4.癌細胞的特點：能在體外大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體。5.雜交瘤細胞特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，既能無限增殖又能產(chǎn)生大量特定抗體。6.米爾斯坦和科勒由于發(fā)明了單克隆抗體的制備技術(shù)，于1984年獲得了諾貝爾生理學或醫(yī)學獎。7．制備過程：8.實驗最初應如何處理小鼠？

注射特定的抗原，用特定的抗原對小鼠進行免疫。目的是為了獲得抗體嗎？不是。其目的：用特定的抗原對小鼠進行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞（獲得能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞）。9.誘導融合（1）誘導融合的方法：PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法（動物細胞特有）。（2）誘導融合后，能得到幾種細胞？（融合只考慮兩兩融合）①未融合的親本細胞（B淋巴細胞、骨髓瘤細胞）。②融合的具有同種核的細胞（B-B細胞、瘤-瘤細胞）。③融合的雜交瘤細胞。10.篩選（1）第一次篩選①如何篩選（篩選方法）：用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選。②篩選原理：在選擇培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。③獲得的雜交瘤細胞的特點：既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體。此時，抗體不是所需的特定抗體。④得到的該雜交瘤細胞一定是所需的嗎？雜交瘤細胞并不純，因為從脾臟獲得的B淋巴細胞不純（既有未免疫的B淋巴細胞，又有能產(chǎn)其他抗體的B淋巴細胞，以及能產(chǎn)所需抗體的B淋巴細胞），因此要進行第二次篩選。（2）第二次篩選①如何篩選（篩選方法）：用96孔板培養(yǎng)，在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞的情況下，進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測（一般進行多次篩選）。②獲得的雜交瘤細胞的特點：既能迅速大量繁殖，又能分泌所需抗體。③選擇抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞，即分泌的抗體能與特定的抗原結(jié)合。④抗體檢測原理：抗原和抗體能夠特異性結(jié)合(分子水平的檢測）。（3）第一次篩選的目的：篩選獲得雜交瘤細胞。第二次篩選的目的：獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。11.如何對所需雜交瘤細胞大規(guī)模培養(yǎng)在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)（接種于培養(yǎng)液中）或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。12.如何獲取單克隆抗體（1）體外培養(yǎng)：從細胞培養(yǎng)液中獲取。（2）小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)：從小鼠腹水中獲取。13.單克隆抗體制備的過程中涉及的原理：細胞膜具有一定的流動性、細胞增殖。14.單克隆抗體制備的過程中應用到的技術(shù)：動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)。15．單克隆抗體的優(yōu)點：能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備。16．單克隆抗體的應用(1)作為診斷試劑，具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。(2)用于治療疾病和運載藥物。17.用作診斷試劑的原理：單克隆抗體能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合。18.用作診斷試劑的實例：多種疾病的診斷和病原體鑒定。19.運載藥物（1）實例——ADC：與藥物結(jié)合，制成抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC），殺傷腫瘤細胞；ADC通常由抗體、接頭和藥物三部分組成。（2）原理：通過將藥物與能特異性識別腫瘤細胞抗原的單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)對腫瘤細胞的選擇性殺傷。發(fā)揮殺傷作用的為放射性同位素、化學藥物或細胞毒素；單克隆抗體作用為靶向運輸作用；（3）優(yōu)點：靶點清楚、毒副作用?。ú粫】导毎斐蓚Γ?。三、動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物1.動物細胞核移植技術(shù)概念：將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術(shù)。2.克隆動物：用核移植的方法得到的動物。3.動物細胞核移植技術(shù)原理：動物細胞核的全能性、細胞膜具有一定的流動性。培育多利羊的原理：動物體細胞核的全能性、細胞膜具有一定的流動性。4.動物細胞核移植技術(shù)生殖方式：無性生殖。5．哺乳動物核移植分類：胚胎細胞核移植和體細胞核移植。兩者中難度較高的是體細胞核移植。6.動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植；為什么？

動物胚胎細胞分化程度低，表現(xiàn)全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，表現(xiàn)全能性十分困難。7.非人靈長類動物體細胞核移植的困難原因（1）供體細胞的細胞核在去核卵母細胞中不能完全恢復其分化前的功能狀態(tài)，這導致了胚胎發(fā)育率低；（2）對非人靈長類動物胚胎進行操作的技術(shù)尚不完善。（一）體細胞核移植的過程1.采集的卵母細胞應培養(yǎng)至MⅡ期（減數(shù)分裂Ⅱ中期）2.選擇MⅡ期卵母細胞的原因（1）含有促進細胞核表現(xiàn)全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。（2）細胞體積大，易于操作。3.卵母細胞去核（1）卵母細胞去核的方法：顯微操作（去核）法。

除此之外，還有梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質(zhì)處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。（2）“去核”去的是什么？去除的為紡錘體-染色體復合物。注意：去核時，由于MⅡ期卵母細胞核的位置靠近第一極體，一般用微型吸管一并吸出細胞核和第一極體。（3）去核的原因：使核移植得到的胚胎或動物核內(nèi)遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物。（4）與直接注入核相比，將供體細胞注入卵母細胞的優(yōu)點：對卵母細胞損傷較小。注入位置：將供體細胞注入去核卵母細胞的透明帶內(nèi)（卵細胞膜和透明帶之間）。7.重組細胞（1）誘導供體細胞和去核卵母細胞融合的方法：電融合法。（2）融合的結(jié)果：供體核進入卵母細胞，形成重構(gòu)胚。8.重構(gòu)胚（1）重構(gòu)胚概念：人工重新構(gòu)建的胚胎，具有發(fā)育成完整個體的能力。（2）激活重構(gòu)胚的方法①物理方法：電刺激。②化學方法：Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制。（3）激活重構(gòu)胚的目的：激活重構(gòu)胚，使其完成細胞分裂和發(fā)育過程。9.實驗結(jié)論：證明了動物已分化的體細胞的細胞核具有全能性。10.實驗結(jié)果：生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛11.新生犢牛的細胞核遺傳物質(zhì)來自供體奶牛。

新生犢牛的細胞質(zhì)遺傳物質(zhì)來自去核卵母細胞。新生牛的性別與供體奶牛一致。12.通過動物細胞核移植獲得奶牛的過程中涉及的技術(shù)：（1）動物細胞核移植。（2）動物細胞培養(yǎng)。（3）動物細胞融合。（4）早期胚胎培養(yǎng)。（5）胚胎移植。注意：操作為“將供體細胞注入去核卵母細胞”時，才涉及該技術(shù)。13.用上述技術(shù)培育的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？不是。14.為什么克隆動物不是對體細胞供體動物進行了100%的復制？（1）克隆動物絕大部分DNA來自供體動物的細胞核，但線粒體中的DNA（細胞質(zhì)中的DNA）同時來自供體細胞和受體卵母細胞。（2）性狀是基因與環(huán)境共同作用的結(jié)果，克隆動物所處的環(huán)境與核供體細胞生活的環(huán)境不會完全相同。（3）克隆動物在個體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變、染色體變異等可遺傳變異。（二）體細胞核移植技術(shù)的應用前景及存在的問題1．應用前景(1)畜牧生產(chǎn)方面：加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育。(2)醫(yī)藥衛(wèi)生領域①轉(zhuǎn)基因克隆動物作為生物反應器，生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白。②轉(zhuǎn)基因克隆動物的細胞、組織和器官可作為異種移植的供體。③以患者作為供體培育的人核移植胚胎干細胞，經(jīng)過誘導分化能形成相應的細胞、組織或器官，將它們移植給患者時可以避免免疫排斥反應。(3)保護瀕危物種方面：保護瀕危物種，增加瀕危動物的存活數(shù)量。(4)科研①研究克隆動物可使人類更深入地了解胚胎發(fā)育及衰老過程。②克隆一批遺傳背景相同的動物，可以通過它們之間的對比來分析致病基因。③克隆特定疾病模型的動物，還能為研究該疾病機制和開發(fā)相應的藥物提供幫助。2．存在問題(1)體細胞核移植技術(shù)的成功率非常低。(2)各個技術(shù)環(huán)節(jié)有待進一步改進。(3)克隆動物存在健康問題，表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等第三節(jié)胚胎工程一、胚胎工程的理論基礎1.胚胎工程概念：對生殖細胞、受精卵或早期胚胎細胞進行多種顯微操作和處理，然后將獲得的胚胎移植到雌性動物體內(nèi)生產(chǎn)后代，以滿足人類的各種需求。2．胚胎工程技術(shù)(1)操作對象：動物生殖細胞、受精卵、早期胚胎細胞；(2)技術(shù)種類：體外受精、胚胎移植、胚胎分割；(3)特點：獲得的胚胎需移植到雌性動物體內(nèi)生產(chǎn)后代；(4)理論基礎：哺乳動物受精和早期胚胎發(fā)育的規(guī)律。（一）受精1．受精概念：精子與卵子結(jié)合形成合子(即受精卵)的過程。2．受精場所：在自然條件下，哺乳動物的受精在輸卵管內(nèi)完成。3．受精過程：包括受精前的準備階段和受精階段；前者又包括精子獲能和卵子的準備。4.精子獲能(1)概念：剛剛排出的精子不能立即與卵子受精，必須在相應的生理變化發(fā)生雌性動物的生殖道后，才能獲得受精能力，這一生理現(xiàn)象稱為“精子獲能”。注意：獲能的能指的是“受精能力”而不是“能量”。(2)使精子獲能的兩種方法:①直接利用雌性動物生殖道使精子獲能②將精子培養(yǎng)在人工配制的獲能液中使其獲能。獲能液的成分因動物種類不同而有所差異。獲能液常見有效成分有肝素、Ca2+載體等。(3)研究精子獲能機制的意義:實現(xiàn)了各種哺乳動物在體外條件下的獲能，為體外受精技術(shù)的建立奠定了基礎。5.卵子的準備(1)卵子一般在排出2-3h后才能被精子穿入。(2)動物排出的卵子成熟程度不同。有的可能是初級卵母細胞，如馬、犬等；有的可能是次級卵母細胞，如豬、羊等。(3)卵子成熟的場所:排出的卵子都要在輸卵管內(nèi)進一步成熟。(4)卵子具備與精子受精能力的時期

MⅡ期。6.受精階段過程:（1）精子釋放多種酶溶解卵細胞膜外的一些結(jié)構(gòu)，精子穿越透明帶。（2）透明帶反應：阻止多精入卵的第一道屏障。（3）透明帶反應具體表現(xiàn)：精子觸及卵細胞膜的瞬間，透明帶會迅速發(fā)生生理反應，阻止后來的精子進入透明帶。（4）透明帶反應發(fā)生時間：精子觸及卵細胞膜的瞬間。（5）精子入卵：（卵細胞膜反應：阻止多精入卵的第二道屏障。）（6）卵細胞膜反應具體表現(xiàn)：精子入卵后，卵細胞膜會立即發(fā)生生理反應，拒絕其他精子再進入卵內(nèi)。（7）卵細胞膜反應發(fā)生時間：精子入卵后。（8）雄原核的形成：精子入卵后，尾部脫離，原有的核膜破裂并形成一個新的核膜，最后形成一個比原來精子的核還大的核，叫做雄原核。（9）雌原核的形成：精子入卵后,被激活的卵子完成減數(shù)分裂Ⅱ，排出第二極體后，形成雌原核。（10）受精的標志：①觀察到兩個極體（透明帶和卵細胞膜之間）。②觀察到雌、雄原核。注意：多數(shù)哺乳動物的第一極體不進行減數(shù)分裂Ⅱ，因而不會形成兩個第二極體，觀察到的兩個極體為一個第一極體一個第二極體。（11）受精完成的標志：雌、雄原核核膜消失，形成合子。（12）受精過程結(jié)束后，受精卵的發(fā)育也就開始了。（13）受精卵中細胞核遺傳物質(zhì)來源一半來源于精子，一半來源于卵子。細胞質(zhì)遺傳物質(zhì)來源幾乎全部來自于卵子。（二）胚胎早期發(fā)育1.受精卵是胚胎發(fā)育過程中全能性最高的階段。2.哺乳動物胚胎早期發(fā)育場所：輸卵管和子宮。3.胚胎早期發(fā)育階段：受精卵→桑葚胚→囊胚→原腸胚。4.卵裂（1）場所：透明帶內(nèi)。

（2）分裂方式：有絲分裂。（3）特點：①細胞數(shù)量不斷增加。

②胚胎總體積并不增加。（4）其他表現(xiàn)：每個細胞體積不斷減小；DNA總數(shù)目不斷增加；每個細胞的核DNA數(shù)目不變；有機物總量減少；有機物種類增加。5.桑葚胚（1）概念：當卵裂產(chǎn)生的子細胞逐漸形成致密的細胞團，形似桑葚時，這時的胚胎稱為桑葚胚。（2）特點：這一階段及之前的每一個細胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能，屬于全能細胞。6.囊胚（1）概念：胚胎進一步發(fā)育，細胞開始出現(xiàn)分化，形成內(nèi)細胞團、滋養(yǎng)層；隨著胚胎進一步發(fā)育，胚胎內(nèi)部出現(xiàn)了含有液體的囊腔—囊胚腔，這個時期的胚胎叫做囊胚。（2）特點：細胞逐漸分化。（3）結(jié)構(gòu)組成：內(nèi)細胞團、滋養(yǎng)層、囊胚腔。①內(nèi)細胞團：位置：聚集在胚胎一端。

作用：將來發(fā)育成胎兒的各種組織。②滋養(yǎng)層：位置：沿透明帶內(nèi)壁擴展和排列。作用：將來發(fā)育成胎膜和胎盤。③囊胚腔：胚胎內(nèi)部含有液體的腔。④孵化：囊胚進一步擴大，會導致透明帶破裂，胚胎從透明帶中伸展出來，這一過程叫做孵化。7.囊胚期的內(nèi)細胞團細胞具有全能性。8.原腸胚：囊胚孵化后，將發(fā)育形成原腸胚；原腸胚表面的細胞層為外胚層，向內(nèi)遷移的細胞形成內(nèi)胚層；隨著發(fā)育的進行，一部分細胞還會在內(nèi)外兩個胚層之間形成中胚層；這三個胚層將逐漸分化形成各種組織、器官等。9.牛在自然情況下，胚胎最早可在8-16細胞階段進入子宮，但在實踐中通常對發(fā)育到囊胚階段的胚胎進行移植的原因：提高移植后胚胎的發(fā)育率和妊娠率。注意：不同種動物精子的形態(tài)相似，大小略有不同，與動物的體型大小無關(guān)。二、胚胎工程技術(shù)及其應用（一）體外受精1．試管動物：通過人工操作使卵子在體外受精，經(jīng)培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再進行移植產(chǎn)生的個體。2．體外受精技術(shù)的主要過程：卵母細胞的采集、精子的獲取和受精。（1）采集到的卵母細胞和精子，要分別在體外進行成熟培養(yǎng)（即培養(yǎng)至MⅡ期）和獲能處理（可對精子進行離心處理），然后才能用于體外受精。（2）一般情況下，可以將獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵子置于適當?shù)呐囵B(yǎng)液中共同培養(yǎng)一段時間，來促進它們完成受精。3.體外受精的意義：是提高動物繁殖能力的有效措施，可以為胚胎移植提供可用胚胎。（二）胚胎移植1．概念：是指將通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術(shù)。2.胚胎來源：體外受精及其他方式得到的胚胎。其他方式包括：體內(nèi)受精、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、動物細胞核移植技術(shù)等。3．胚胎移植的基本程序：（1）供體、受體的選擇和處理。①提供胚胎的個體稱為供體。②供體選擇標準：遺傳性狀優(yōu)良、生產(chǎn)能力強。③供體職能：產(chǎn)生具有優(yōu)良遺傳特性的胚胎。④接受胚胎的個體叫受體。⑤受體選擇標準：有健康體質(zhì)和正常繁殖能力。⑥受體職能：承擔繁重而漫長的妊娠和育仔任務。⑦對受體進行的處理：同期發(fā)情處理。⑧該處理的目的：為胚胎移植前后提供相同的生理環(huán)境。⑨只對供體進行的操作：超數(shù)排卵處理。⑩該處理需要用的激素：外源促性腺激素。該處理的