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考點(diǎn)一基因工程的概念及基本操作工具考點(diǎn)二基因工程的基本操作程序考點(diǎn)三基因工程的應(yīng)用與蛋白質(zhì)工程考點(diǎn)四DNA的粗提取與鑒定經(jīng)典真題?高考預(yù)測(cè)教師備用習(xí)題第36講基因工程1.基因工程的誕生(Ⅰ)。2.基因工程的原理及技術(shù)(含PCR技術(shù))(Ⅱ)3.基因工程的應(yīng)用(Ⅱ)4.蛋白質(zhì)工程(Ⅰ)5.實(shí)驗(yàn):DNA的粗提取與鑒定(實(shí)驗(yàn)與探究能力)??键c(diǎn)一基因工程的概念及基本操作工具基礎(chǔ)自主梳理
素養(yǎng)全面提升一、基因工程概念的理解別名基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)原理基因重組操作環(huán)境生物體外操作水平分子水平結(jié)果獲得符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙;定向改造生物的遺傳性狀二、基因工程的操作工具1.限制性核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱限制酶)(1)來(lái)源:主要是從原核生物中分離純化出來(lái)的。(2)作用:識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列并切開特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。(3)結(jié)果:產(chǎn)生
。黏性末端或平末端2.DNA連接酶種類E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來(lái)源大腸桿菌T4噬菌體特點(diǎn)只縫合黏性末端縫合黏性末端和平末端作用恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵3.質(zhì)粒動(dòng)植物病毒受體細(xì)胞限制酶切割位點(diǎn)自我復(fù)制進(jìn)行同步復(fù)制標(biāo)記基因[解析]限制性核酸內(nèi)切酶能將DNA切成兩個(gè)或多個(gè)片段,DNA水解酶能將DNA水解?!疽族e(cuò)辨析】(1)基因工程用到的工具酶有限制酶、DNA連接酶、載體。 (
)(2)在基因工程的操作過(guò)程中,利用限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行DNA的水解。(
)(3)限制酶識(shí)別的序列均由6個(gè)核苷酸組成。 (
)×[解析]基因工程用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶?!痢羀解析]限制酶識(shí)別的序列主要由6個(gè)核苷酸組成,也有少數(shù)限制酶的識(shí)別序列由4、5或8個(gè)核苷酸組成?!疽族e(cuò)辨析】(4)DNA連接酶能將兩堿基通過(guò)氫鍵連接起來(lái)。 (
)(5)質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為標(biāo)記基因。 (
)[解析]
DNA連接酶連接的是磷酸二酯鍵?!羀解析]載體質(zhì)粒上抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇?!?/p>
圖中的甲和乙分別表示的是EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶的作用示意圖,據(jù)圖分析:(1)請(qǐng)說(shuō)出EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶識(shí)別的堿基序列及切割的位點(diǎn)。EcoRⅠ限制酶識(shí)別的堿基序列是GAATTC,切割位點(diǎn)在G和A之間;SmaⅠ限制酶識(shí)別的堿基序列是CCCGGG,切割位點(diǎn)在C和G之間
圖中的甲和乙分別表示的是EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶的作用示意圖,據(jù)圖分析:(2)以上實(shí)例說(shuō)明限制酶有何特性?限制酶具有專一性
圖中的甲和乙分別表示的是EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶的作用示意圖,據(jù)圖分析:(3)要將圖甲中的末端再連接起來(lái),需要用哪類連接酶,若連接圖乙的末端呢?連接圖甲中的黏性末端既可用E·coliDNA連接酶,也可用T4DNA連接酶,連接圖乙中的平末端只能用T4DNA連接酶
圖中的甲和乙分別表示的是EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶的作用示意圖,據(jù)圖分析:(4)若質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoRⅠ切割,為使運(yùn)載體與目的基因相連,圖甲中含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,還可用另一種限制性核酸內(nèi)切酶切割,該酶切割后得到的末端必須具有什么特點(diǎn)?該酶切割產(chǎn)生的DNA末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的末端相同1.與DNA有關(guān)的酶的比較名稱作用部位作用底物作用結(jié)果限制酶磷酸二酯鍵DNA將DNA切成兩個(gè)片段DNA連接酶磷酸二酯鍵DNA片段將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子DNA聚合酶或熱穩(wěn)定DNA聚合酶磷酸二酯鍵脫氧核苷酸
將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端(續(xù)表)名稱作用部位作用底物作用結(jié)果DNA(水解)酶磷酸二酯鍵DNA將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸解旋酶堿基對(duì)之間的氫鍵DNA將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈,形成兩條長(zhǎng)鏈RNA聚合酶磷酸二酯鍵核糖核苷酸將單個(gè)核糖核苷酸依次連接到單鏈末端2.限制酶的特點(diǎn)與使用(1)限制酶具有特異性,即一種限制酶只能識(shí)別特定的核苷酸序列,并在特定的位點(diǎn)上進(jìn)行切割;限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾。(2)在獲取目的基因和切割載體時(shí)通常用同一種限制酶,以獲得相同的黏性末端。但如果用兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同,在DNA連接酶的作用下目的基因與載體也可以連接起來(lái)。2.限制酶的特點(diǎn)與使用(3)為了防止載體或目的基因的黏性末端自己連接即所謂“環(huán)化”,可用不同的限制酶分別處理含目的基因的DNA和載體,使目的基因兩側(cè)及載體上各自具有兩個(gè)不同的黏性末端。1.[2020·四川攀枝花市二模]根據(jù)與基因工程有關(guān)的知識(shí),回答下列問題:(1)限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段,其末端類型有
和
。[解析]
(1)限制性核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱限制酶)切割DNA分子后,產(chǎn)生的片段末端類型有黏性末端和平末端。黏性末端平末端1.[2020·四川攀枝花市二模]根據(jù)與基因工程有關(guān)的知識(shí),回答下列問題:(2)質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段為AATTC……G
G……GTTAA
,為使運(yùn)載體與目的基因相連,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,還可用另一種限制性核酸內(nèi)切酶切割,該酶必須具有的特點(diǎn)是
。[解析]
(2)目的基因與運(yùn)載體具有相同的黏性末端才能連接,若用包括EcoRⅠ在內(nèi)的兩種限制酶切割目的基因,則另一種限制酶必須具有的特點(diǎn)是切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的末端相同。切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的末端相同1.[2020·四川攀枝花市二模]根據(jù)與基因工程有關(guān)的知識(shí),回答下列問題:(3)根據(jù)酶的來(lái)源不同,基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類,即
DNA連接酶和
DNA連接酶。[解析]
(3)根據(jù)酶的來(lái)源不同,基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類,即E·coliDNA連接酶(來(lái)源于大腸桿菌)和T4DNA連接酶(來(lái)源于T4噬菌體)。T4E·coli1.[2020·四川攀枝花市二模]根據(jù)與基因工程有關(guān)的知識(shí),回答下列問題:(4)基因工程中除質(zhì)粒外,
和
也可作為運(yùn)載體。[解析]
(4)基因工程中常用的運(yùn)載體是質(zhì)粒,此外還有λ噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒。動(dòng)植物病毒λ噬菌體的衍生物1.[2020·四川攀枝花市二模]根據(jù)與基因工程有關(guān)的知識(shí),回答下列問題:(5)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,一般情況下,不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,原因是
。[解析]
(5)由于未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱,因此若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,一般情況下,不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,而通常用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞,使其成為感受態(tài)細(xì)胞,此時(shí)大腸桿菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的通透性增大,容易吸收重組質(zhì)粒。未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱2.
[2021·云南師大附中高三月考]圖中甲、乙分別表示質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段。幾種可供選擇使用的限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)為EcoRⅠ:—G↓AATTC—;BamHⅠ:—G↓GATCC—;BclⅠ:—T↓GATCA—;Sau3AⅠ:—↓GATC-。注:Tetr表示四環(huán)素抗性基因;ampR表示氨芐青霉素抗性基因?;卮鹣铝袉栴}:(1)限制酶的作用是識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列,并且使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的
斷開。題中可供使用的限制酶,切割相應(yīng)DNA片段后能產(chǎn)生黏性末端的有
。磷酸二酯鍵EcoRⅠ、BamHⅠ、BclⅠ、Sau3AⅠ[解析]
(1)限制酶的作用是識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列,并且使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。題中可供使用的限制酶切割相應(yīng)片段后都會(huì)產(chǎn)生黏性末端,因此切割相應(yīng)DNA片段后能產(chǎn)生黏性末端的有EcoRⅠ、BamHⅠ、BclⅠ、Sau3AⅠ?;卮鹣铝袉栴}:(2)經(jīng)限制酶Sau3AⅠ切割后得到的DNA片段可以與上述其余限制酶中的
(填限制酶名稱)切割后得到的DNA片段連接,理由是
。圖甲質(zhì)粒經(jīng)Sau3AⅠ完全切割后可得到
種DNA片段。
BamHⅠ、BclⅠ它們切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端3[解析]
(2)經(jīng)限制酶Sau3AI切割后得到的DNA片段可以與題述其余限制酶中的BamHⅠ、BclⅠ切割后得到的DNA片段連接,理由是它們切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端。圖甲質(zhì)粒有三個(gè)Sau3AⅠ的酶切位點(diǎn),所以經(jīng)Sau3AⅠ完全切割后可得到3種DNA片段?;卮鹣铝袉栴}:(3)為防止限制酶切割后的DNA片段自身環(huán)化,在基因工程中通常使用兩種切割后產(chǎn)生不同黏性末端的限制酶切割同一DNA分子。由此分析,圖甲應(yīng)當(dāng)使用
(填限制酶名稱)進(jìn)行切割,圖乙應(yīng)當(dāng)使用
(填限制酶名稱)進(jìn)行切割。
BclⅠ和EcoRⅠSau3AⅠ和EcoRⅠ[解析]
(3)為避免限制酶切割后的DNA片段自身環(huán)化,應(yīng)該用不同的限制酶切割DNA的兩端,因此,圖甲應(yīng)當(dāng)使用BclⅠ和EcoRⅠ進(jìn)行切割,圖乙應(yīng)當(dāng)使用Sau3AⅠ和EcoRⅠ進(jìn)行切割?;卮鹣铝袉栴}:(4)圖甲中的Tetr和ampR在運(yùn)載體上可作為
,用于重組DNA的鑒定和選擇。
標(biāo)記基因[解析]
(4)圖甲中的Tetr和ampR都是抗性基因,在運(yùn)載體上可以作為標(biāo)記基因,用于重組DNA的鑒定和選擇。?
方法歸納“選擇限制酶的技巧(1)根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點(diǎn)確定限制酶的種類①應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶,如圖甲可選擇PstⅠ。②不能選擇切點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶,如圖甲不能選擇SmaⅠ。③為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒,如圖甲也可選擇用PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點(diǎn))。?
方法歸納“選擇限制酶的技巧(2)根據(jù)質(zhì)粒的特點(diǎn)確定限制酶的種類①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶一致,以確保具有相同的黏性末端。②質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等,所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu),如圖乙中限制酶SmaⅠ會(huì)破壞標(biāo)記基因。考點(diǎn)二基因工程的基本操作程序基礎(chǔ)自主梳理
素養(yǎng)全面提升一、基因工程的基本操作程序目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的
檢測(cè)與鑒定1.目的基因的獲取(1)目的基因:主要是指
的基因,也可以是一些具有
作用的因子。編碼蛋白質(zhì)調(diào)控(2)方法基因文庫(kù)
mRNA反轉(zhuǎn)錄DNA合成儀2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建——核心步驟(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的①使目的基因在
。②使目的基因能夠
和發(fā)揮作用。受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代表達(dá)(2)基因表達(dá)載體的組成啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因目的基因的受體細(xì)胞(3)構(gòu)建過(guò)程同種限制酶DNA連接3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(1)轉(zhuǎn)化含義:目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)
和
的過(guò)程。
穩(wěn)定維持表達(dá)3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(2)轉(zhuǎn)化方法生物種類植物動(dòng)物微生物方法
(常用)、基因槍法、花粉管通道法
Ca2+處理法受體細(xì)胞體細(xì)胞、受精卵受精卵原核細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)(續(xù)表)生物種類植物動(dòng)物微生物轉(zhuǎn)化過(guò)程農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法:目的基因插入Ti質(zhì)粒的
上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的
上→表達(dá)(體細(xì)胞)
目的基因的表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→具有新性狀的動(dòng)物
Ca2+處理細(xì)胞→
細(xì)胞→重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子
T-DNA
染色體DNA
感受態(tài)4.目的基因的檢測(cè)與鑒定類型檢測(cè)內(nèi)容方法(技術(shù))結(jié)果顯示分子水平檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體DNA上是否插入了目的基因
.
(DNA-DNA雜交)
雜交帶目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA
(DNA-RNA雜交)雜交帶目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)
(蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)雜交)雜交帶DNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)抗原—抗體雜交技術(shù)(續(xù)表)類型檢測(cè)內(nèi)容方法(技術(shù))結(jié)果顯示個(gè)體水平鑒定個(gè)體是否出現(xiàn)相應(yīng)性狀抗病、抗蟲的接種實(shí)驗(yàn)是否有抗性及抗性的程度對(duì)基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行活性比較功能活性是否相同【易錯(cuò)辨析】(1)利用反轉(zhuǎn)錄法獲取的目的基因無(wú)啟動(dòng)子和內(nèi)含子。 (
)(2)dATP水解掉兩分子磷酸基團(tuán)后是組成RNA的基本單位之一。 (
)(3)基因表達(dá)載體中的啟動(dòng)子和終止子決定著翻譯的開始與結(jié)束。(
)×√×[解析]
dATP水解掉兩分子磷酸基團(tuán)后是組成DNA的基本單位之一。[解析]啟動(dòng)子和終止子決定著轉(zhuǎn)錄的開始與結(jié)束?!疽族e(cuò)辨析】(4)基因表達(dá)載體中的目的基因需插入啟動(dòng)子和終止子之間。 (
)(5)農(nóng)桿菌能在自然條件下感染單子葉植物和裸子植物。 (
)(6)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí),受體細(xì)胞只能選受精卵。 (
)(7)DNA分子雜交是在分子水平上進(jìn)行的目的基因的檢測(cè)。 (
)×[解析]農(nóng)桿菌能在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物。√√[解析]將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí),受體細(xì)胞也可以選體細(xì)胞,體細(xì)胞經(jīng)植物組織培養(yǎng)能發(fā)育成新個(gè)體。×
據(jù)圖分析抗蟲棉的培育過(guò)程。(1)該過(guò)程中的目的基因是
,載體是
。Bt毒蛋白基因Ti質(zhì)粒
據(jù)圖分析抗蟲棉的培育過(guò)程。(2)基因工程中,往往用兩種限制酶切割目的基因,原因是
。
為了避免目的基因和載體的自身環(huán)化和隨意連接
據(jù)圖分析抗蟲棉的培育過(guò)程。(3)目的基因在質(zhì)粒中的插入位點(diǎn)有什么要求?為什么?
目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子與終止子之間,因?yàn)榛虮磉_(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控
(4)該實(shí)例中,導(dǎo)入目的基因的方法是
。為什么目的基因可以整合到染色體的DNA上?
農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法由于Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞且能整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上,而目的基因又插入T-DNA,所以目的基因可以整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上
(5)該實(shí)例中,檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)的常見方法有
、
??乖贵w雜交用棉葉飼喂棉鈴蟲1.獲取目的基因的方法比較方法從基因文庫(kù)中獲取人工合成逆轉(zhuǎn)錄法從基因組文庫(kù)中獲取從部分基因文庫(kù)中獲取,如cDNA文庫(kù)化學(xué)合成法(續(xù)表)過(guò)程供體細(xì)胞中的DNA↓限制酶許多DNA片段↓插入
載體↓導(dǎo)入目的基因的mRNA↓逆轉(zhuǎn)錄單鏈DNA↓合成雙鏈DNA↓插入
載體
↓導(dǎo)入蛋白質(zhì)的氨基酸序列↓推測(cè)mRNA的核苷酸序列↓推測(cè)目的基因mRNA↓逆轉(zhuǎn)錄單鏈DNA↓合成雙鏈DNA即目的基因(續(xù)表)過(guò)程受體菌群(基因組文庫(kù))↓外源DNA擴(kuò)增產(chǎn)生特定性狀↓分離目的基因受體菌群(cDNA文庫(kù))↓分離目的基因結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列
↓化學(xué)合成目的基因2.PCR技術(shù)(1)原理:DNA復(fù)制。(2)前提:已知目的基因的一段核苷酸序列,以便根據(jù)這一序列合成引物。(3)擴(kuò)增過(guò)程過(guò)程說(shuō)明圖解變性溫度上升到95℃左右,雙鏈DNA解聚為單鏈復(fù)性溫度下降到55℃左右,兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合過(guò)程說(shuō)明圖解延伸溫度上升到72℃左右,Taq酶從引物起始合成互補(bǔ)鏈,可使新鏈由5'端向3'端延伸(續(xù)表)(4)體內(nèi)DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較項(xiàng)目體內(nèi)DNA復(fù)制PCR技術(shù)場(chǎng)所主要在細(xì)胞核內(nèi)生物體外酶
DNA聚合酶、解旋酶熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)條件模板、ATP、常溫模板、引物、溫度變化(90~95℃→55~60℃→70~75℃)原料四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸特點(diǎn)形成的是整個(gè)DNA分子,一個(gè)細(xì)胞周期只復(fù)制一次短時(shí)間內(nèi)形成大量含有目的基因的DNA片段1.
[2021·廣東珠海模底]為增加蓖麻種子的含油量,研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連,導(dǎo)入蓖麻細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因蓖麻品種。酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因所含的三種限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的切點(diǎn)如圖所示。回答下列問題:回答下列問題:(1)研究人員需使用工具酶SacⅠ、XbaⅠ、
處理酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因,以得到
(填圖中字母)端相連的融合基因。
ClaⅠ和DNA連接酶AD[解析]
(1)同種限制酶切割得到的黏性末端可以互補(bǔ),因此用ClaⅠ處理酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因,且用DNA連接酶進(jìn)行連接,可以得到AD端相連的融合基因?;卮鹣铝袉栴}:(2)將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中,構(gòu)建
,并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含
的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到單菌落,再利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行振蕩培養(yǎng),可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液。
重組質(zhì)粒四環(huán)素[解析]
(2)將融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中,構(gòu)建表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到單菌落,再利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行振蕩培養(yǎng),可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液?;卮鹣铝袉栴}:(3)研究人員通過(guò)
技術(shù)將獲得的轉(zhuǎn)基因蓖麻細(xì)胞培育成轉(zhuǎn)基因蓖麻植株;使用
技術(shù)可在分子水平檢測(cè)轉(zhuǎn)基因蓖麻植株中的融合基因是否成功表達(dá)。植物組織培養(yǎng)抗原—抗體雜交[解析]
(3)進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因蓖麻細(xì)胞,該細(xì)胞通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù),可培育成轉(zhuǎn)基因蓖麻植株;用抗原—抗體雜交法在分子水平上可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因蓖麻植株中的融合基因是否成功表達(dá)。2.
[2020·安徽馬鞍山一模]研究人員為了讓某種已經(jīng)滅絕生物的基因表達(dá)出產(chǎn)物,進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)流程如圖所示,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:(1)通過(guò)比對(duì)分析、補(bǔ)充滅絕生物基因中丟失的堿基序列,獲得多種目的基因堿基序列,有些不同堿基序列的目的基因能表達(dá)出相同產(chǎn)物,可能的原因是
。
密碼子具有簡(jiǎn)并性(或基因含有內(nèi)含子)[解析]
(1)由于密碼子具有簡(jiǎn)并性(或基因含有內(nèi)含子),有些不同堿基序列的目的基因能表達(dá)出相同產(chǎn)物。2.
[2020·安徽馬鞍山一模]研究人員為了讓某種已經(jīng)滅絕生物的基因表達(dá)出產(chǎn)物,進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)流程如圖所示,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:(2)流程圖中①表示
。人工合成目的基因[解析]
(2)通過(guò)對(duì)比分析、補(bǔ)充得到滅絕生物目的基因的堿基序列,再通過(guò)流程①人工合成目的基因,進(jìn)行基因工程操作。2.
[2020·安徽馬鞍山一模]研究人員為了讓某種已經(jīng)滅絕生物的基因表達(dá)出產(chǎn)物,進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)流程如圖所示,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:(3)基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體,其目的是
。
?;虮磉_(dá)載體中除了有目的基因、啟動(dòng)子、終止子外,還應(yīng)有
等,其中啟動(dòng)子是
識(shí)別和結(jié)合的部位。使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時(shí),使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用標(biāo)記基因RNA聚合酶[解析]
(3)基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體,其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時(shí),使目的基因可以表達(dá)和發(fā)揮作用?;虮磉_(dá)載體中除了有目的基因、啟動(dòng)子、終止子外,還應(yīng)有標(biāo)記基因,便于篩選,其中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。2.
[2020·安徽馬鞍山一模]研究人員為了讓某種已經(jīng)滅絕生物的基因表達(dá)出產(chǎn)物,進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)流程如圖所示,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:(4)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌前,用
處理細(xì)胞,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。大腸桿菌作為受體細(xì)胞具有
等優(yōu)點(diǎn)。Ca2+繁殖快、為單細(xì)胞生物、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少[解析]
(4)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌前,需要用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。大腸桿菌作為受體細(xì)胞具有繁殖快、為單細(xì)胞生物、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等優(yōu)點(diǎn)。3.[2020·山東濟(jì)寧三模]新型冠狀病毒(2019-nCoV)的核酸檢測(cè)使用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)。將待測(cè)樣本處理后,先將樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。請(qǐng)據(jù)此回答下列問題:(1)樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA的原料是
。四種脫氧核糖核苷酸[解析]
(1)合成DNA的原料是四種游離的脫氧核糖核苷酸,因此逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中需要四種脫氧核糖核苷酸作為原料合成cDNA。3.[2020·山東濟(jì)寧三模]新型冠狀病毒(2019-nCoV)的核酸檢測(cè)使用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)。將待測(cè)樣本處理后,先將樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。請(qǐng)據(jù)此回答下列問題:(2)逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)中使用的DNA聚合酶是從水生棲熱菌中分離提取,該DNA聚合酶優(yōu)勢(shì)在于
。耐高溫[解析]
(2)傳統(tǒng)的DNA聚合酶在高溫條件下易變性,水生棲熱菌在高溫環(huán)境下存活著,因此從該菌中分離提取出的DNA聚合酶具有耐高溫的優(yōu)勢(shì)。3.[2020·山東濟(jì)寧三模]新型冠狀病毒(2019-nCoV)的核酸檢測(cè)使用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)。將待測(cè)樣本處理后,先將樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。請(qǐng)據(jù)此回答下列問題:(3)如表所示是用于2019-nCoV的cDNA擴(kuò)增的兩種引物序列。引物名稱引物序列(5'—3')引物1TTCG引物2TCAC①引物1對(duì)應(yīng)的模板鏈序列(3'—5')為
。②如圖所示為cDNA的部分序列,引物1和引物2對(duì)應(yīng)的位置是
(填“Ⅰ”“Ⅱ”“Ⅲ”或“Ⅳ”)
AAGCⅡ、Ⅲ[解析]
(3)①根據(jù)表中引物的信息可知,結(jié)合堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,引物1對(duì)應(yīng)的模板鏈序列為AAGC。②由于DNA聚合酶都是從5'端到3'端復(fù)制子鏈,因此引物應(yīng)結(jié)合到模板的5'端,即圖中的Ⅱ和Ⅲ。3.[2020·山東濟(jì)寧三模]新型冠狀病毒(2019-nCoV)的核酸檢測(cè)使用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)。將待測(cè)樣本處理后,先將樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。請(qǐng)據(jù)此回答下列問題:(4)PCR技術(shù)獲取目的基因的優(yōu)勢(shì)是
??纱罅繑U(kuò)增目的基因[解析]
(4)PCR技術(shù)的優(yōu)勢(shì)為特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、可在體外大量復(fù)制DNA片段。因此PCR技術(shù)獲取目的基因的優(yōu)勢(shì)是可大量擴(kuò)增目的基因。3.[2020·山東濟(jì)寧三模]新型冠狀病毒(2019-nCoV)的核酸檢測(cè)使用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)。將待測(cè)樣本處理后,先將樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。請(qǐng)據(jù)此回答下列問題:(5)目前
(選填“能”或“不能”)利用2019-nCoV的遺傳物質(zhì)作為基因工程的載體,請(qǐng)說(shuō)明原因:
。
。
。不能2019-nCoV的遺傳物質(zhì)是RNA,細(xì)胞生物的遺傳物是DNA,目的基因無(wú)法整合到2019-nCoV的遺傳物質(zhì)上,且RNA無(wú)法在細(xì)胞中穩(wěn)定存在[解析]
(5)因?yàn)檩d體的作用是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,而細(xì)胞生物的遺傳物質(zhì)是DNA,不是RNA,因此目的基因無(wú)法整合到2019-nCoV的遺傳物質(zhì)上,且RNA無(wú)法在細(xì)胞中穩(wěn)定存在,因此不能利用2019-nCoV的遺傳物質(zhì)作為基因工程的載體??键c(diǎn)三基因工程的應(yīng)用與蛋白質(zhì)工程基礎(chǔ)自主梳理
素養(yǎng)全面提升一、基因工程的應(yīng)用1.植物基因工程:培育抗蟲轉(zhuǎn)基因植物、抗病轉(zhuǎn)基因植物和抗逆轉(zhuǎn)基因植物;利用轉(zhuǎn)基因改良植物的
。2.動(dòng)物基因工程:用于提高動(dòng)物
從而提高產(chǎn)品產(chǎn)量;用于改善畜產(chǎn)品的品質(zhì);用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物;用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作為器官移植的
等。3.基因工程藥物(1)方法:利用基因工程培育“
”來(lái)生產(chǎn)藥品。(2)成果:利用“工程菌”可生產(chǎn)細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。品質(zhì)生長(zhǎng)速度供體工程菌一、基因工程的應(yīng)用4.基因治療(1)概念:把
導(dǎo)入病人體內(nèi),使該基因的
發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療疾病的目的,這是治療遺傳病的最有效的手段。(2)類型:體外基因治療和
。正?;虮磉_(dá)產(chǎn)物體內(nèi)基因治療二、蛋白質(zhì)工程1.概念基礎(chǔ):蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與
的關(guān)系。手段:基因修飾或
。結(jié)果:對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行
或制造出一種
。生物功能基因合成改造新的蛋白質(zhì)二、蛋白質(zhì)工程2.基本途徑mRNA
蛋白質(zhì)【易錯(cuò)辨析】(1)Bt毒蛋白基因來(lái)源于蘇云金芽孢桿菌,對(duì)哺乳動(dòng)物有毒害作用。(
)(2)動(dòng)物基因工程的實(shí)施主要是為了改善畜產(chǎn)品的品質(zhì),不一定是為了產(chǎn)生體型巨大的個(gè)體。 (
)(3)乳腺生物反應(yīng)器是將藥用蛋白基因?qū)雱?dòng)物的乳腺細(xì)胞中。 (
)[解析]
Bt毒蛋白基因?qū)Σ溉閯?dòng)物無(wú)毒害作用?!獭痢羀解析]乳腺生物反應(yīng)器是將藥用蛋白基因?qū)胧芫??!疽族e(cuò)辨析】(4)由大腸桿菌工程菌獲得人的干擾素可直接應(yīng)用。 (
)(5)基因工程只能產(chǎn)生自然界已存在的蛋白質(zhì)。 (
)[解析]人的干擾素合成后需要經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的加工,而大腸桿菌細(xì)胞中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體。×√【易錯(cuò)辨析】(6)蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作,定向改造分子的結(jié)構(gòu)。 (
)[解析]蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過(guò)基因修飾或基因合成,對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求?!?/p>
圖為蛋白質(zhì)工程的基本流程,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:(1)請(qǐng)補(bǔ)充完整流程圖:
、
、
。預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)應(yīng)有的氨基酸序列新的基因
(2)關(guān)于天然蛋白質(zhì)的改造,應(yīng)該直接對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作,還是通過(guò)對(duì)基因的操作來(lái)實(shí)現(xiàn)呢?
。原因是
。
。應(yīng)該通過(guò)對(duì)基因的操作來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)天然蛋白質(zhì)的改造①蛋白質(zhì)具有十分復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu),基因的結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單,容易改造;②改造后的基因可以遺傳給下一代,被改造的蛋白質(zhì)無(wú)法遺傳
(3)蛋白質(zhì)工程實(shí)施的難度很大,原因是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能必須依賴正確的高級(jí)結(jié)構(gòu),而這種高級(jí)結(jié)構(gòu)往往十分復(fù)雜1.體外基因治療與體內(nèi)基因治療的區(qū)別方法比較體外基因治療體內(nèi)基因治療不同點(diǎn)途徑從患者體內(nèi)獲得某種細(xì)胞→體外完成基因轉(zhuǎn)移→篩選、細(xì)胞擴(kuò)增→輸入體內(nèi)直接向患者體內(nèi)組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因特點(diǎn)操作復(fù)雜,但效果可靠方法較簡(jiǎn)單,但效果難以控制相同點(diǎn)都是將外源基因?qū)氚屑?xì)胞,以糾正缺陷基因,目前兩種方法都處于臨床試驗(yàn)階段2.蛋白質(zhì)工程與基因工程的比較項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別過(guò)程預(yù)期蛋白質(zhì)的功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定(續(xù)表)項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別實(shí)質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)定向改造生物的遺傳特性,以獲得人類所需的生物類型和生物產(chǎn)品結(jié)果可生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程聯(lián)系
①蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上延伸出來(lái)的第二代基因工程
②基因工程中所利用的某些酶需要通過(guò)蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造(續(xù)表)角度一
基因工程的應(yīng)用1.
[2020·廣東廣州模擬]如圖是應(yīng)用生物工程技術(shù)獲得人們所需要的生物新品種或新產(chǎn)品的示意圖。據(jù)圖回答下列問題:據(jù)圖回答下列問題:(1)在培育轉(zhuǎn)人生長(zhǎng)激素基因牛過(guò)程中,①過(guò)程需要的工具酶是
,②過(guò)程常用的方法是
。③過(guò)程先通過(guò)早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)到
或囊胚階段,然后可以采用
技術(shù),培育出多頭相同的轉(zhuǎn)基因犢牛。
限制酶、DNA連接酶顯微注射法桑椹胚胚胎分割[解析]
(1)在培育轉(zhuǎn)人生長(zhǎng)激素基因牛過(guò)程中,①過(guò)程為基因表達(dá)載體的構(gòu)建,需要限制酶切割質(zhì)粒和目的基因并用DNA連接酶將目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接,②過(guò)程是將基因表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的受精卵中,常用顯微注射法。③過(guò)程是胚胎移植,先通過(guò)早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚階段,然后可以采用胚胎分割技術(shù),培育出多頭相同的轉(zhuǎn)基因犢牛。據(jù)圖回答下列問題:(2)prG能激發(fā)細(xì)胞不斷分裂,通過(guò)基因工程導(dǎo)入該調(diào)控基因來(lái)制備單克隆抗體,Ⅱ是
細(xì)胞,Ⅲ代表的細(xì)胞具有
的特點(diǎn)。既能無(wú)限增殖,又能產(chǎn)生特異性抗體漿[解析]
(2)能產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞必須具備既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生專一的抗體的能力,由圖可知,細(xì)胞Ⅱ本身具備產(chǎn)生抗體的能力,故為漿細(xì)胞。Ⅲ代表的細(xì)胞既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生專一的抗體。據(jù)圖回答下列問題:(3)在抗蟲棉的培育過(guò)程中,④過(guò)程中的受體細(xì)胞一般采用愈傷組織細(xì)胞,與葉肉細(xì)胞相比較,其優(yōu)點(diǎn)是
,⑤過(guò)程采用的是
。若從個(gè)體水平檢測(cè)抗蟲棉是否培育成功,請(qǐng)寫出具體的鑒定方法:
。
。愈傷組織的全能性高于葉肉細(xì)胞植物組織培養(yǎng)技術(shù)讓害蟲吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉子,觀察害蟲的存活情況,以確定轉(zhuǎn)基因棉花是否具有抗蟲性狀[解析]
(3)植物細(xì)胞具有全能性,愈傷組織的全能性比葉肉細(xì)胞高,因此在抗蟲棉培育過(guò)程中,④過(guò)程中的受體細(xì)胞如果采用愈傷組織細(xì)胞其全能性更易表達(dá)(或分生能力強(qiáng)、分化程度低)。⑤過(guò)程采用的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)技術(shù)。若從個(gè)體水平檢測(cè)抗蟲棉是否培育成功,可讓害蟲吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉子,觀察害蟲的存活情況,從而判斷轉(zhuǎn)基因棉花是否具有抗蟲性狀。2.
基因工程的興起給基因治療帶來(lái)了曙光。1990年9月,美國(guó)對(duì)一名患有嚴(yán)重復(fù)合型免疫缺陷綜合征的4歲女童,實(shí)施了基因治療?;卮鹣铝袉栴}:(1)基因治療是把
導(dǎo)入病人體內(nèi),使其表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療疾病的目的。先從病人體內(nèi)獲得淋巴細(xì)胞,進(jìn)行培養(yǎng),然后在體外完成基因轉(zhuǎn)移,再將轉(zhuǎn)移成功的細(xì)胞重新輸入患者體內(nèi),這種方法稱為
基因治療。
正?;蝮w外[解析]
(1)基因治療是把正?;?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療疾病的目的?;蛑委煼譃轶w外基因治療和體內(nèi)基因治療兩種,題中4歲女童的治療過(guò)程就是體外基因治療的例子,即先從病人體內(nèi)獲得淋巴細(xì)胞,進(jìn)行培養(yǎng),然后在體外完成基因轉(zhuǎn)移,再將轉(zhuǎn)移成功的細(xì)胞重新輸入患者體內(nèi),使正?;虮磉_(dá),進(jìn)而達(dá)到治療的目的。(2)淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境。保證培養(yǎng)細(xì)胞處于無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境的具體措施有
。
(至少寫出兩點(diǎn))。目前使用的淋巴細(xì)胞通常為10代以內(nèi),原因是
。當(dāng)貼壁的淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的
。對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理;在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素;定期更換培養(yǎng)液能保持細(xì)胞正常的二倍體核型接觸抑制[解析]
(2)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程需要在無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境中進(jìn)行。為了創(chuàng)造上述條件,通常需要對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理;并在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素;還要做到定期更換培養(yǎng)液等。目前使用的淋巴細(xì)胞通常為10代以內(nèi),原因是10代以內(nèi)的細(xì)胞能保持細(xì)胞正常的二倍體核型。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)接觸抑制的現(xiàn)象,具體表現(xiàn)為當(dāng)貼壁的細(xì)胞生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖。(3)體外導(dǎo)入目的基因的過(guò)程通常使用
法。若受體細(xì)胞中未檢測(cè)出轉(zhuǎn)入的目的基因的表達(dá)產(chǎn)物,可能的原因是
?;ǚ酃芡ǖ婪?、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和感受態(tài)細(xì)胞目的基因沒有轉(zhuǎn)錄或者是目的基因轉(zhuǎn)錄完成卻不能正常翻譯[解析]
(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞通常采用花粉管通道法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和感受態(tài)細(xì)胞法等。在受體細(xì)胞成功導(dǎo)入目的基因的情況下,受體細(xì)胞中卻未檢測(cè)出目的基因的表達(dá)產(chǎn)物,可能是因?yàn)槟康幕驔]有轉(zhuǎn)錄或者是目的基因轉(zhuǎn)錄完成卻不能正常翻譯。角度二
蛋白質(zhì)工程3.已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(P),該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,由305個(gè)氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸,240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸,改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留P的功能,而且具有了酶的催化活性?;卮鹣铝袉栴}:(1)從上述資料可知,若要改變蛋白質(zhì)的功能,可以考慮對(duì)蛋白質(zhì)的
進(jìn)行改造。氨基酸序列(或結(jié)構(gòu))[解析]
(1)由題干信息可知改造蛋白質(zhì)的功能,可通過(guò)改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)。回答下列問題:(2)以P基因序列為基礎(chǔ),獲得P1基因的途徑有修飾
基因或合成
基因,所獲得的基因表達(dá)時(shí)遵循中心法則,中心法則的內(nèi)容可表示為
。PP1[解析]
(2)依據(jù)蛋白質(zhì)工程的定義及題中信息可知獲得P1基因的途徑有修飾現(xiàn)有P基因或合成新P1基因。中心法則內(nèi)容可表示為?;卮鹣铝袉栴}:(3)蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程,其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā),通過(guò)
和
,進(jìn)而找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列,據(jù)此獲得基因,在經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)之后,還需要對(duì)蛋白質(zhì)的
進(jìn)行鑒定。設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)[解析]
(3)蛋白質(zhì)工程的基本途徑:從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)。通過(guò)蛋白質(zhì)工程合成的蛋白質(zhì)還需要進(jìn)行生物活性的鑒定,即功能鑒定,看是否達(dá)到人們的需求。推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列生物功能考點(diǎn)四DNA的粗提取與鑒定基礎(chǔ)自主梳理
素養(yǎng)全面提升1.實(shí)驗(yàn)原理0.14
NaCl2.操作流程DNA蒸餾水NaCl溶液酒精二苯胺藍(lán)色【易錯(cuò)辨析】(1)用不同濃度的NaCl溶液反復(fù)溶解與析出DNA可去除蛋白質(zhì)。 (
)(2)提取DNA時(shí),如果沒有雞血材料,可用豬血代替。 (
)(3)洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度。 (
)[解析]豬為哺乳動(dòng)物,其成熟紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核。√××[解析]洗滌劑不能增加DNA在NaCl溶液中的溶解度。【易錯(cuò)辨析】(4)將制備的含有DNA的濾液加入60~75℃的恒溫水浴箱中保溫10~15min,可以將DNA析出。(
)(5)實(shí)驗(yàn)中兩次使用蒸餾水的目的不同。 (
)(6)在DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中,將絲狀物溶解在2mol/LNaCl溶液中,加入二苯胺試劑即呈藍(lán)色。 (
)[解析]由于DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同,60~75℃的恒溫水浴能去除濾液中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)?!獭痢羀解析]用二苯胺鑒定DNA時(shí),需沸水浴加熱。
圖為“DNA粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作,請(qǐng)仔細(xì)觀察并分析:(1)操作①和④都是加入蒸餾水,其目的一樣嗎?不一樣。①是使雞血細(xì)胞吸水漲破釋放出核物質(zhì);④是稀釋NaCl溶液使其濃度接近0.14mol/L,去除溶于低濃度NaCl溶液的雜質(zhì)
圖為“DNA粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作,請(qǐng)仔細(xì)觀察并分析:(2)操作②中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精的目的是什么?此時(shí)攪拌要注意什么?析出DNA,去除其中溶于酒精的雜質(zhì),這時(shí)攪拌要沿一個(gè)方向,輕緩地進(jìn)行
圖為“DNA粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作,請(qǐng)仔細(xì)觀察并分析:(3)操作③中的黏稠物是如何獲取的?加入2mol/LNaCl溶液的目的是什么?黏稠物是經(jīng)過(guò)單層紗布過(guò)濾獲得的;加入2mol/LNaCl溶液的目的是使DNA再次溶解1.
DNA和蛋白質(zhì)在不同NaCl溶液中溶解度的比較項(xiàng)目2mol/LNaCl溶液0.14mol/LNaCl溶液溶解規(guī)律DNA溶解析出蛋白質(zhì)部分發(fā)生鹽析沉淀溶解
NaCl溶液濃度從2mol/L逐漸降低的過(guò)程中,溶解度逐漸增大2.
DNA的粗提取與鑒定中的“2、3、4”加蒸餾水2次
(1)加到雞血細(xì)胞液中,使血細(xì)胞吸水破裂
(2)加到含DNA的2mol/L的NaCl溶液中,使NaCl溶液的物質(zhì)的量濃度下降到0.14mol/L,使DNA析出用紗布過(guò)濾3次
(1)過(guò)濾血細(xì)胞破裂液,得到含細(xì)胞核物質(zhì)的濾液
(2)濾取0.14mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物)
(3)過(guò)濾溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液(續(xù)表)4次使用NaCl溶液
(1)加2mol/L的NaCl溶液,溶解提取的細(xì)胞核物質(zhì)
(2)用0.14mol/L的NaCl溶液使DNA析出
(3)用2mol/L的NaCl溶液,溶解濾取的DNA黏稠物
(4)用2mol/L的NaCl溶液,溶解絲狀物用于鑒定DNA[2020·安徽合肥肥東中學(xué)調(diào)研]如圖為“DNA的粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的一些重要操作示意圖,請(qǐng)分析回答有關(guān)問題:(1)正確的操作順序是
(用字母和箭頭表示)。C→B→E→D→A[解析]
(1)DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中,正確的操作順序是實(shí)驗(yàn)材料的選取→破碎細(xì)胞,獲取含DNA的濾液→去除濾液中的雜質(zhì)→DNA的析出與鑒定,所以正確的操作順序是C→B→E→D→A。(2)圖中C、E步驟都加入蒸餾水,但其目的不同,分別是
和
。加速細(xì)胞的破裂降低NaCl溶液的濃度,使DNA析出[解析]
(2)C步驟加入蒸餾水是為了讓雞血細(xì)胞吸水,加速細(xì)胞的破裂,釋放細(xì)胞核內(nèi)容物;DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低,E步驟加入蒸餾水是為了降低NaCl溶液的濃度,使DNA析出。(3)圖中A步驟中所用酒精必須是經(jīng)過(guò)
的,該步驟的目的是
。充分預(yù)冷提取含雜質(zhì)較少(或較純凈)的DNA[解析]
(3)A步驟是為了析出較純凈的DNA,去除雜質(zhì)蛋白,所用酒精必須經(jīng)過(guò)充分預(yù)冷才能使用。(4)為鑒定A中所得到的絲狀物的主要成分是否為DNA,可滴加
試劑后沸水浴,如果出現(xiàn)
,則證明該絲狀物的主要成分為DNA。二苯胺藍(lán)色[解析]
(4)DNA遇二苯胺變藍(lán),滴加二苯胺試劑后沸水浴5min,如果出現(xiàn)藍(lán)色,則證明該絲狀物的主要成分為DNA。經(jīng)典真題?高考預(yù)測(cè)1.[2020·全國(guó)卷Ⅲ]W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某研究小組擬仿照制備乳腺生物反應(yīng)器的研究思路,制備一種膀胱生物反應(yīng)器來(lái)獲得W,基本過(guò)程如圖所示。回答下列問題:(1)步驟①中需要使用的工具酶有
。步驟②和③所代表的操作分別是
和
。步驟④稱為
。限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶顯微注射體外培養(yǎng)胚胎移植[解析]
(1)步驟①是基因表達(dá)載體的構(gòu)建,需要使用的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶;步驟②是把含有目的基因即W基因的表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞受精卵中,一般采用顯微注射技術(shù);步驟③是在體外進(jìn)行早期胚胎培養(yǎng),采用體外培養(yǎng)技術(shù);步驟④是把發(fā)育到桑椹胚或囊胚時(shí)期的胚胎移植到代孕母體內(nèi)的過(guò)程,稱為胚胎移植?;卮鹣铝袉栴}:(2)與乳腺生物反應(yīng)器相比,用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)W的優(yōu)勢(shì)在于不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的
(答出2點(diǎn)即可)的限制。性別、年齡[解析]
(2)利用乳腺生物反應(yīng)器獲得W物質(zhì)只能是在雌性生物泌乳期,而膀胱生物反應(yīng)器不受轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的性別和年齡的影響。回答下列問題:(3)一般來(lái)說(shuō),在同一動(dòng)物個(gè)體中,乳腺上皮細(xì)胞與膀胱上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息
(填“相同”或“不同”),原因是
。相同兩種上皮細(xì)胞都是體細(xì)胞,且來(lái)源于同一個(gè)受精卵[解析]
(3)一般來(lái)說(shuō),在同一動(dòng)物個(gè)體中,乳腺上皮細(xì)胞與膀胱上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中染色體DNA所含的遺傳信息是相同的,因?yàn)閮煞N細(xì)胞來(lái)源于同一個(gè)受精卵?;卮鹣铝袉栴}:(4)從上述流程可知,制備生物反應(yīng)器涉及胚胎工程,胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有
(答出2點(diǎn)即可)。體外受精、胚胎移植[解析]
(4)由題干信息可知,制備生物反應(yīng)器涉及胚胎工程,胚胎工程中所用到的主要技術(shù)有胚胎移植、體外受精等。2.
[2020·山東卷]水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉,直鏈淀粉所占比例越小糯性越強(qiáng)??蒲腥藛T將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻,實(shí)現(xiàn)了對(duì)直鏈淀粉合成酶基因(Wx基因)啟動(dòng)子序列的定點(diǎn)編輯,從而獲得了3個(gè)突變品系。(1)將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時(shí),所需的酶是
,重組載體進(jìn)入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為
。限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶轉(zhuǎn)化[解析]
(1)將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時(shí),所需的酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。重組載體進(jìn)入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化。2.
[2020·山東卷]水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉,直鏈淀粉所占比例越小糯性越強(qiáng)??蒲腥藛T將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻,實(shí)現(xiàn)了對(duì)直鏈淀粉合成酶基因(Wx基因)啟動(dòng)子序列的定點(diǎn)編輯,從而獲得了3個(gè)突變品系。(2)根據(jù)啟動(dòng)子的作用推測(cè),Wx基因啟動(dòng)子序列的改變影響了
,從而改變了Wx基因的轉(zhuǎn)錄水平。與野生型水稻相比,3個(gè)突變品系中Wx基因控制合成的直鏈淀粉合成酶的氨基酸序列
(填“發(fā)生”或“不發(fā)生”)改變,原因是
。
RNA聚合酶與啟動(dòng)子的識(shí)別和結(jié)合不發(fā)生編碼直鏈淀粉合成酶的堿基序列中不含啟動(dòng)子[解析]
(2)啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的首端,它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。Wx基因啟動(dòng)子序列的改變影響了RNA聚合酶與啟動(dòng)子的識(shí)別和結(jié)合,從而改變了Wx基因的轉(zhuǎn)錄水平。與野生型水稻相比,由于3個(gè)突變品系中編碼直鏈淀粉合成酶的基因堿基序列中不含啟動(dòng)子(題干中指出只對(duì)Wx基因的啟動(dòng)子序列進(jìn)行定點(diǎn)編輯),所以突變品系中Wx基因控制合成的直鏈淀粉合成酶的氨基酸序列不發(fā)生改變。2.
[2020·山東卷]水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉,直鏈淀粉所占比例越小糯性越強(qiáng)??蒲腥藛T將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻,實(shí)現(xiàn)了對(duì)直鏈淀粉合成酶基因(Wx基因)啟動(dòng)子序列的定點(diǎn)編輯,從而獲得了3個(gè)突變品系。(3)為檢測(cè)啟動(dòng)子變化對(duì)Wx基因表達(dá)的影響,科研人員需要檢測(cè)Wx基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA(WxmRNA)的量。檢測(cè)時(shí)分別提取各品系胚乳中的總RNA,經(jīng)
過(guò)程獲得總cDNA。通過(guò)PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性地?cái)U(kuò)增出Wx基因的cDNA,原因是
。
。
逆轉(zhuǎn)錄(或反轉(zhuǎn)錄)引物是根據(jù)Wx基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的(或引物能與Wx基因的cDNA特異性結(jié)合)[解析]
(3)為檢測(cè)啟動(dòng)子變化對(duì)Wx基因表達(dá)的影響??蒲腥藛T需要檢測(cè)Wx基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA的量。檢測(cè)時(shí)分別提取各品系胚乳中的總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)過(guò)程獲得總cDNA。由于引物是根據(jù)Wx基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的(引物能與Wx基因的cDNA特異性結(jié)合),所以通過(guò)PCR技術(shù),可在總cDNA中專一性擴(kuò)增出Wx基因的cDNA。2.
[2020·山東卷]水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉,直鏈淀粉所占比例越小糯性越強(qiáng)??蒲腥藛T將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻,實(shí)現(xiàn)了對(duì)直鏈淀粉合成酶基因(Wx基因)啟動(dòng)子序列的定點(diǎn)編輯,從而獲得了3個(gè)突變品系。(4)各品系WxmRNA量的檢測(cè)結(jié)果如圖8所示,據(jù)圖推測(cè)糯性最強(qiáng)的品系為
,原因是
。
。
品系3的WxmRNA最少,控制合成的直鏈淀粉合成酶最少,品系3直鏈淀粉合成量最少,糯性最強(qiáng)[解析]
(4)依據(jù)題干信息可知,直鏈淀粉所占比例越小,糯性越強(qiáng)。分析圖示結(jié)果可知,品系3的WxmRNA最少,控制合成的直鏈淀粉合成酶最少,直鏈淀粉合成量最少,故品系3糯性最強(qiáng)。3.
[2020·安徽皖南八校押題卷]將人X基因表達(dá)載體導(dǎo)入T細(xì)胞,可促進(jìn)T細(xì)胞的增殖分化,促進(jìn)淋巴因子分泌,增強(qiáng)效應(yīng)T細(xì)胞的殺瘤活性。回答下列問題:(1)基因工程中使用的載體,除質(zhì)粒外,還有
、
等。
λ噬菌體的衍生物動(dòng)植物病毒[解析]
(1)基因工程常用的三種載體分別是質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒。3.
[2020·安徽皖南八校押題卷]將人X基因表達(dá)載體導(dǎo)入T細(xì)胞,可促進(jìn)T細(xì)胞的增殖分化,促進(jìn)淋巴因子分泌,增強(qiáng)效應(yīng)T細(xì)胞的殺瘤活性?;卮鹣铝袉栴}:(2)構(gòu)建的X基因表達(dá)載體的組成有X基因、復(fù)制原點(diǎn)、
(答出3點(diǎn))等,將X基因表達(dá)載體導(dǎo)入T細(xì)胞常采用的方法是
。
啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因顯微注射法[解析]
(2)基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、目的基因、復(fù)制原點(diǎn),將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的常用方法為顯微注射法。3.
[2020·安徽皖南八校押題卷]將人X基因表達(dá)載體導(dǎo)入T細(xì)胞,可促進(jìn)T細(xì)胞的增殖分化,促進(jìn)淋巴因子分泌,增強(qiáng)效應(yīng)T細(xì)胞的殺瘤活性?;卮鹣铝袉栴}:(3)檢測(cè)X基因在T細(xì)胞中是否翻譯出蛋白X,可采用
法,若出現(xiàn)
,則成功翻譯。
抗原—抗體雜交雜交帶[解析]
(3)檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì),應(yīng)用抗原—抗體雜交技術(shù),若出現(xiàn)雜交帶,則證明目的基因表達(dá)出了相應(yīng)蛋白質(zhì)。3.
[2020·安徽皖南八校押題卷]將人X基因表達(dá)載體導(dǎo)入T細(xì)胞,可促進(jìn)T細(xì)胞的增殖分化,促進(jìn)淋巴因子分泌,增強(qiáng)效應(yīng)T細(xì)胞的殺瘤活性。回答下列問題:(4)研究表明,正常機(jī)體的T細(xì)胞導(dǎo)入X基因表達(dá)載體后抗體數(shù)量明顯增多,原因是
。
。
正常機(jī)體的T細(xì)胞導(dǎo)入基因X表達(dá)載體后,促進(jìn)T細(xì)胞分泌淋巴因子,進(jìn)而促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化為漿細(xì)胞,從而產(chǎn)生更多的抗體[解析]
(4)正常機(jī)體的T細(xì)胞在導(dǎo)入X基因表達(dá)載體后,可促進(jìn)T細(xì)胞分泌淋巴因子,進(jìn)而促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化為漿細(xì)胞,從而產(chǎn)生更多的抗體。1.重要概念(1)P1基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),并通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。(2)P9目的基因:主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因,也可以是一些具調(diào)控作用的因子。(3)P9基因文庫(kù)是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存,各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因。1.重要概念(4)P9基因組文庫(kù)是指包含了一種生物所有的基因的基因文庫(kù)。(5)P9部分基因文庫(kù)是指只包含了一種生物的一部分基因的基因文庫(kù)。(6)P10用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA(也叫cDNA)片段,與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中,這個(gè)受體菌群體就叫作這種生物的cDNA文庫(kù)。1.重要概念(7)P12轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。(8)P27蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過(guò)基因修飾或基因合成,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求。2.邊角知識(shí)(1)P2艾弗里等人通過(guò)不同類型肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),不僅證明了生物的遺傳物質(zhì)是DNA,還證明了DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體。(2)P3博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究證明了質(zhì)粒不僅可以作為基因工程的載體,重組DNA還可以進(jìn)入受體細(xì)胞,外源基因可以在原核細(xì)胞中成功表達(dá),并實(shí)現(xiàn)物種之間的基因交流。2.邊角知識(shí)(3)P6在進(jìn)行基因工程操作中,真正被用作載體的質(zhì)粒,都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過(guò)人工改造的。(4)P13由于原核生物具有一些其他生物沒有的特點(diǎn):繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等,因此,早期的基因工程操作都用原核生物作為受體細(xì)胞,其中以大腸桿菌應(yīng)用最為廣泛。(5)P21工程菌是指通過(guò)基因工程的方法,使外源基因得到高效率表達(dá)的菌類細(xì)胞株系。2.邊角知識(shí)(6)P21乳腺生物反應(yīng)器(乳房生物反應(yīng)器)是指科學(xué)家將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起,通過(guò)顯微注射等方法,導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵中,然后,將受精卵送入母體內(nèi),使其生長(zhǎng)發(fā)育成的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。2.邊角知識(shí)(7)P22干擾素是動(dòng)物或人體細(xì)胞受到病毒侵染后產(chǎn)生的一種糖蛋白,幾乎能抵抗所有病毒引起的感染。(8)P23基因治療是把正?;?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療疾病的目的。1.人類復(fù)合型免疫缺陷癥患者體內(nèi)缺失腺苷酸脫氨酶(ADA)的基因,導(dǎo)致體內(nèi)缺乏腺苷酸脫氨酶。隨著基因工程的不斷發(fā)展,科學(xué)家利用基因治療治愈了人類復(fù)合型免疫缺陷癥,過(guò)程如圖所示
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