DB21T 3458-2021 利用KASP 標(biāo)記鑒定蔬菜雜交種純度技術(shù)規(guī)程

CCSB04DB21TechnicalRegulationforidentificationofthepurityofvegetablehybridsbyKASPmarker遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件起草人：王玉剛、黃勝楠、冀瑞琴、劉志勇、李承彧、章云、任杰、孫云霞、張迎歡、本文件發(fā)布實(shí)施后，任何單位和個(gè)人如有問(wèn)題和意見(jiàn)建議，均可以通過(guò)來(lái)電和來(lái)函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時(shí)答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況依法進(jìn)行評(píng)估歸口管理部門(mén)通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽(yáng)市和平區(qū)太原北街2號(hào)），聯(lián)系電話(huà)：1利用KASP標(biāo)記鑒定蔬菜雜交種純度技術(shù)規(guī)程本文件適用于已完成全基因組測(cè)序的蔬菜作物雜交種純度快下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）GB/T3543（所有部分）農(nóng)作物種子檢驗(yàn)NY/T2472西瓜品種鑒定技術(shù)規(guī)程SNY/T2473結(jié)球甘藍(lán)品種鑒定技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T2474黃瓜品種鑒定技術(shù)規(guī)程SNY/T2475辣椒品種鑒定技術(shù)規(guī)程S全基因組重測(cè)序Whole-genomeRese指對(duì)已知基因組序列的物種進(jìn)行不同個(gè)體的基因組測(cè)序，并在此基礎(chǔ)上對(duì)個(gè)體或群體進(jìn)行差異入缺失位點(diǎn)（InDel）、結(jié)構(gòu)變異位點(diǎn)（SV，StructureVariation）和拷貝數(shù)NumberVariation)。KASP技術(shù)TheKompetitiveAlleleSp指可在廣泛的基因組DNA樣品中，對(duì)SNPs（EDTA：乙二胺四乙酸（EthyleneDiaminTris-HCl：三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（Trishydrochlor2KASP：競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性PCR（KompetitiPCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReact按照NY/T2471～2476給出的方法，借鑒番茄、西瓜、結(jié)球甘藍(lán)、黃根據(jù)雙親重測(cè)序篩選的SNP和InDel位置信息，設(shè)計(jì)特異正向引物兩條，通用反向引物一條。SNP引物設(shè)計(jì)網(wǎng)站http://www.Tris-HCl（1M），氯化鈉，EDTA31擴(kuò)增結(jié)束后，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)熒光信號(hào)并3N——檢測(cè)樣品種子數(shù)。4首先將兩對(duì)特異正向引物和通用反向引物分別