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文檔簡(jiǎn)介
?CRISPR-Cas9dCas9相關(guān)應(yīng)用解螺旋|
知識(shí)金牌知識(shí)金牌解
螺
旋
| 陪
伴
醫(yī)
生
科
研
成
長(zhǎng)Contents課程目錄第一部分第二部分第三部分下節(jié)課程dCas9基本原理dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活
dCas9用于轉(zhuǎn)錄抑制CRISPR-Cas9
dCas9相關(guān)應(yīng)用dCas9相關(guān)應(yīng)用2dCas9基本原理01知識(shí)金牌解
螺
旋
| 陪
伴
醫(yī)
生
科
研
成
長(zhǎng)dCas9基本原理Nishimasu
H,
et
al.
Crystal
structure
of
Cas9
incomplex
with
guide
RNA
and
target
DNA.Cell.2014
Feb27;156(5):935-49.
PMID:
24529477ABD互補(bǔ)鏈知識(shí)金牌解
螺
旋
| 陪
伴
醫(yī)
生
科
研
成
長(zhǎng)第一部分|
dCas9基本原理正向反向轉(zhuǎn)錄VP64(激活)KRAB(抑制)甲基化DNMT3A
or
MQ1(甲基化)TET1(去甲基化)組蛋白乙?;痯300(乙?;?LSD1(去甲基化)單堿基編輯胞苷脫氨酶切割FokI位點(diǎn)可視化GFP//xinwenzixun/168.htmldCas9融合不同蛋白實(shí)現(xiàn)不同的功能dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活02知識(shí)金牌第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活PI時(shí)間機(jī)制文獻(xiàn)PMIDRonald
D.Vale2014.10dCas9-SunTagCell25307933ZhangFeng2015.1dCas9-SAMNature.25494202Lim
WA2015.1scRNACell25533786George
Church2015.10dCas9-VPRNat
Methods25730490dCas9-SAM解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)dCas9-VPRdCas9-SunTag知識(shí)金牌第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活VP64轉(zhuǎn)錄激活因子dCas9-SunTagTanenbaum
ME,
et
al.
A
protein-taggingsystem
for
signal
amplification
in
geneexpression
and
fluorescence
imaging.
Cell.2014
Oct
23;159(3):635-46.
PMID:
25307933解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9-SunTagpHRdSV40-dCas9-10xGCN4_v4-P2A-BFPPlasmid
#60903pHRdSV40-scFv-GCN4-sfGFP-VP64-GB1-NLSPlasmid
#
60904解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9-VPR020,00040,00060,00080,000100,000Median
fluorescence
intensity
(a.u.)*p65RtasgRNAdCas9VP64(GS)n
linkersC-terminusabReporter
ControlVP64VP64-p65VP64-RtaVP64-p65-Rta10-810-610-210010010210410610-4Basal
gene
expression解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)Relative
RNA
ExpressionTTNRHOXF2ASCL1MIATNEUROD1ACTC1VEGFNEUROG2Chavez
A
,
et
al.
Highly
efficient
Cas9-mediated
transcriptionalprogramming.
NatMethods.
2015
Apr;12(4):326-8.
PMID:25730490知識(shí)金牌第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9-VPRSP-dCas9-VPRPlasmid
#63798SP-dCas9-VPR解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)lenti-EF1a-dCas9-VPR-PuroPlasmid
#99373知識(shí)金牌解
螺
旋
| 陪
伴
醫(yī)
生
科
研
成
長(zhǎng)dCas9-scRNA第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活Zalatan
JG,
et
al.
Engineering
complex
synthetictranscriptional
programs
with
CRISPR
RNA
scaffolds.
Cell.2015
Jan
15;160(1-2):339-50.
PMID:
25533786https://www.addgene.org/browse/article/9593/知識(shí)金牌dCas9-SAM第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9-SAM解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌解
螺
旋
| 陪
伴
醫(yī)
生
科
研
成
長(zhǎng)第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活lenti
sgRNA(MS2)_puro
optimized
backbonePlasmid
#73797Joung
J
,
et
al.Genome-scale
CRISPR-Cas9
knockoutand
transcriptional
activation
screening.
Nat
Protoc.2017
Apr;12(4):828-863.
PMID:
28333914lentiSAMv2Plasmid
#75112lentiMPH
v2Plasmid
#89308知識(shí)金牌解
螺
旋
| 陪
伴
醫(yī)
生
科
研
成
長(zhǎng)第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活Chavez,
et
al.
Comparison
of
Cas9
activatorsin
multiple
species.
Nat
Methods.
2016Jul;13(7):563-567.PMID:
27214048知識(shí)金牌解
螺
旋
| 陪
伴
醫(yī)
生
科
研
成
長(zhǎng)第二部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9用于轉(zhuǎn)錄抑制03知識(shí)金牌第三部分|
dCas9用于轉(zhuǎn)錄抑制dCas9-scRNAThakore
PI,
et
al.
Highly
specific
epigenome
editing
by
CRISPR-Cas9
repressors
for
silencing
of
distal
regulatory
elements.
NatMethods.
2015
Dec;12(12):1143-9.
PMID:26501517解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌Gilbert
LA
,
et
al.
CRISPR
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