如何寫好課題申請(qǐng)系列課程04逐個(gè)擊破（下）

如何寫好課題申請(qǐng)書系列講座一逐個(gè)擊破（下）Sunlight

Angel目錄一、課題申報(bào)的渠道二、課題申報(bào)的評(píng)審程序三、課題申報(bào)書的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)四、撰寫標(biāo)書的技巧（上）五、撰寫標(biāo)書的技巧（下）六、中標(biāo)必須注意的幾個(gè)問題七、醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)的原則及應(yīng)用研究目標(biāo)研究?jī)?nèi)容擬解決的關(guān)鍵問題擬采取的研究方案及可行性分析方法、技術(shù)路線、可行性分析特色與創(chuàng)新點(diǎn)年度研究計(jì)劃預(yù)期研究成果工作基礎(chǔ)經(jīng)費(fèi)預(yù)算項(xiàng)目組成員構(gòu)成五、撰寫標(biāo)書的技巧（下）1

研究目標(biāo)有限目標(biāo)（3-4點(diǎn)），與研究?jī)?nèi)容相呼應(yīng)如：探索……問題，明確……關(guān)系，揭示……規(guī)律，闡明……原理（機(jī)制），建立……方法等舉例：篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀體上皮變化的

角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)理，為防治白內(nèi)障提供線索。胸心外科手術(shù)中的暫時(shí)替代功能臨床觀察研究心臟手術(shù)中起搏器的替代功能觀察研究2

研究?jī)?nèi)容存在問題：內(nèi)容過(guò)多，一個(gè)研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。撰寫要求：內(nèi)容要適當(dāng)—確保研究周期內(nèi)完成；為目標(biāo)服務(wù)—與目標(biāo)相輔相成；要重點(diǎn)闡述—注意與技術(shù)路線區(qū)別。（做什么？怎么做？）（1）篩選白內(nèi)障相關(guān)基因：采用改良的消減雜交技術(shù)，獲得人老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞和正常晶狀體上皮細(xì)胞差異表達(dá)的基因片段，建立cDNA文庫(kù)。制備差異表達(dá)基因的基因芯片，利用基因芯片技術(shù)從多個(gè)標(biāo)本的老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中篩選出白內(nèi)障相關(guān)基因。舉例：研究白內(nèi)障相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)：…… 研究白內(nèi)障相關(guān)基因在晶狀體上皮細(xì)胞變化中的作用：……觀察指標(biāo)如下：①存活細(xì)胞數(shù)；②光鏡、透射電鏡下細(xì)胞形態(tài)的變化；③細(xì)胞凋亡檢測(cè)：用原位末端標(biāo)記和連接酶介導(dǎo)PCR方法，從形態(tài)和DNA水平分析細(xì)胞凋亡；④細(xì)胞增殖的檢測(cè)：……；⑤細(xì)胞骨架蛋白的檢測(cè)：……；⑥晶狀體蛋白的檢測(cè)：舉例（續(xù)）3擬解決的關(guān)鍵問題：存在問題：抓不住關(guān)鍵問題或抓得不準(zhǔn)。什么是關(guān)鍵問題？A.研究過(guò)程中對(duì)達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究?jī)?nèi)容或因素。（理論難點(diǎn)）B.為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。（技術(shù)難點(diǎn)）撰寫要求：找出關(guān)鍵問題，提出解決辦法。（1）建立差異表達(dá)的cDNA文庫(kù)：建立差異cDNA文庫(kù)是篩選老年性白內(nèi)障相關(guān)基因的前提。為使差異cDNA文庫(kù)具有代表性，我們采取以下解決方案：①選擇各種類型老年性白內(nèi)障晶狀體的前囊膜、取足夠大量的標(biāo)本（擬取50例標(biāo)本）作為建庫(kù)的mRNA的來(lái)源。②利用改良的消減雜交技術(shù)可快速、有效地獲得差異表達(dá)的完整cDNA片段。此技術(shù)是本課題組成員主要的研究成果，在應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)中已積累了較豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。舉例：（2）制備基因芯片：制備用于本研究的芯片是篩選老年性白內(nèi)障相關(guān)基因的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。制備基因芯片的關(guān)鍵是在1平方厘米的基片上放上成百上千的不同基因探針而不使它們發(fā)生任何混淆。在制作基因芯片時(shí)做到：①嚴(yán)格按操作程序進(jìn)行；②在標(biāo)本的處理及RNA提取時(shí)避免污染，否則即會(huì)造成嚴(yán)重的損失。只要嚴(yán)格按操作程序進(jìn)行操作就可以避免發(fā)生差錯(cuò)。（3）在體基因轉(zhuǎn)染：在體基因轉(zhuǎn)染是進(jìn)行白內(nèi)障相關(guān)基因功能研究的關(guān)鍵。在體的晶狀體上皮細(xì)胞大部分處在靜息狀態(tài)，只有位于赤道前區(qū)的少量細(xì)胞具有分裂活性，而且晶狀體表面有一層膠原性質(zhì)的囊膜包裹。在體晶狀體的基因轉(zhuǎn)染的關(guān)鍵是如何使大量分裂后細(xì)胞轉(zhuǎn)染，如何使病毒穿過(guò)晶狀體的囊膜，針對(duì)以上問題我們擬采取下列方法解決：①選用反轉(zhuǎn)錄病毒的慢病毒載體（

lentiviral

vector），它克服了一般反轉(zhuǎn)錄病毒只能轉(zhuǎn)染有分裂能力細(xì)胞的局限性，對(duì)分裂后細(xì)胞也能有效的轉(zhuǎn)染。這對(duì)在體晶狀體的基因轉(zhuǎn)染有很大的優(yōu)越性。②采用直徑1-2μm玻璃微管在顯微鏡下將病毒載體注入晶狀體的前囊膜下，既不破壞晶狀體的完整性，又可使病毒接觸到囊膜下的上皮細(xì)胞。存在問題：過(guò)于簡(jiǎn)單：在方案中只有方法名稱而無(wú)具體步驟。過(guò)于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法。4

研究方法撰寫要求：以研究項(xiàng)目的需求為前提，盡量采用最適合的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。以方法為主線寫即每種方法研究的內(nèi)容及解決的問題、收集的數(shù)據(jù)和資料；以研究?jī)?nèi)容為主線寫即每項(xiàng)研究?jī)?nèi)容用哪些方法完成；4.1

研究方法先簡(jiǎn)要敘述采用的主要方法技巧：撰寫方法：—以時(shí)間順序?yàn)橹骶€設(shè)計(jì)技術(shù)路線；—以研究?jī)?nèi)容為主線設(shè)計(jì)技術(shù)路線；—分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系；—詳細(xì)地寫清楚每個(gè)具體步驟。4.2技術(shù)路線實(shí)驗(yàn)研究步驟、文字+框圖例：基于受益歸屬分析法的新型農(nóng)村合作醫(yī)療制度公平性評(píng)價(jià)及其政策研究人晶狀體上皮細(xì)胞的獲得：老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞取自白內(nèi)障患者手術(shù)中取出的前囊膜（晶狀體上皮細(xì)胞緊貼于前囊膜），直徑約5mm。正常晶狀體上皮細(xì)胞取自角膜移植供體眼的晶狀體，在顯微鏡下撕下前囊膜，直徑約8mm。按文獻(xiàn)提供的方法去除晶狀體纖維細(xì)胞，仔細(xì)清洗以去除血細(xì)胞污染。建立差異cDNA文庫(kù)：從50例白內(nèi)障手術(shù)患者的前囊膜上取下的晶狀體上皮細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，從25例正常晶狀體前囊膜上取下的晶狀體上皮細(xì)胞作為對(duì)照組，利用改良的消減雜交技術(shù)[19，20]，獲得差異表達(dá)的cDNA，并建立文庫(kù)。主要的實(shí)驗(yàn)流程如下：正常晶狀體上皮細(xì)胞

白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞Promega

PolyATtract?System

1000mRNA分離

mRNA分離oligo-dT18反轉(zhuǎn)錄 ntech

Cap-finder方法反轉(zhuǎn)錄pending-cDNAcDNABiotin-21-dUTP隨機(jī)引物PCR雜交Sephacryl

S-400柱除鹽及小片段鏈親和素-生物素磁性分離除去雜交體及過(guò)量正常晶狀體上皮細(xì)胞cDNA“長(zhǎng)距離”PCR目的cDNA的特異擴(kuò)增克隆、鑒定、轉(zhuǎn)化建立差異基因文庫(kù)制備基因芯片篩選白內(nèi)障相關(guān)基因：①基因芯片的制備：………②白內(nèi)障相關(guān)基因的篩選：……白內(nèi)障相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)分析：①序列測(cè)定：......②序列的計(jì)算機(jī)分析：......③獲得全長(zhǎng)基因：......基因轉(zhuǎn)染：①培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染：……②在體晶狀體的轉(zhuǎn)染：……對(duì)實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的分析理論分析研究手段方法分析預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析對(duì)相關(guān)條件的分析所用特殊實(shí)驗(yàn)材料（試劑）的分析（簡(jiǎn)略）對(duì)所具備的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析（簡(jiǎn)略）對(duì)項(xiàng)目組成員搭配及其運(yùn)用技術(shù)方法的能力分析4.3

可行性分析(1)關(guān)于建立差異cDNA文庫(kù)：老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞與正常晶狀體上皮細(xì)胞是處在不同狀態(tài)下的細(xì)胞，細(xì)胞基因表達(dá)的改變是細(xì)胞蛋白功能等改變的基礎(chǔ)。尋找這些有差異的基因是探索細(xì)胞功能、狀態(tài)變化原因的突破口。利用的消減雜交技術(shù)是篩選差異表達(dá)基因的有效方法。改良的消減雜交技術(shù)是我們研究組成員建立的方法，應(yīng)用此方法已經(jīng)從脂多糖刺激前后的人牙髓細(xì)胞的差異表達(dá)的基因中克隆到脂多糖刺激后特異表達(dá)的基因，其中5個(gè)為新基因，這一研究成果進(jìn)一步證實(shí)了該方法的可操作性，而且我們?cè)谶\(yùn)用此方法過(guò)程中也積累了較豐富的經(jīng)驗(yàn)，因此，本研究利用這一方法從兩種狀態(tài)的晶狀體上皮細(xì)胞中

篩選差異表達(dá)的基因并建立cDNA文庫(kù)是可行的。5特色與創(chuàng)新之處與前面的關(guān)鍵問題對(duì)應(yīng)，準(zhǔn)確簡(jiǎn)明歸納幾個(gè)方面?。?！存在問題：對(duì)創(chuàng)新點(diǎn)提煉不夠把運(yùn)用新技術(shù)、新方法理解為創(chuàng)新與研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容相混淆對(duì)創(chuàng)新的理解：原始創(chuàng)新：填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論發(fā)明創(chuàng)造新技術(shù)、新方法跟蹤創(chuàng)新：補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論修改、完善現(xiàn)有技術(shù)方法（1＋1＞2）提煉方法：用逆向思維方法提煉創(chuàng)新點(diǎn)基因篩選方法上的創(chuàng)新：首次采用改良的消減雜交技術(shù)建立白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞差異表達(dá)基因文庫(kù)，并制備相應(yīng)的基因芯片，利用此基因芯片篩選出老年性白內(nèi)障相關(guān)基因。上述兩種方法的有機(jī)結(jié)合使我們能快速、準(zhǔn)確、定性、定量地獲得多個(gè)白內(nèi)障相關(guān)基因。通過(guò)分析這些基因的結(jié)構(gòu)、研究它們的功能，揭示老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞變化的分子生物學(xué)機(jī)制，為防治白內(nèi)障提供新的思路?；蚬δ苎芯可系膭?chuàng)新：......年度研究計(jì)劃：按年度列出研究?jī)?nèi)容及其階段目標(biāo)擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動(dòng)、國(guó)際合作與交流計(jì)劃6

年度研究計(jì)劃預(yù)期研究結(jié)果：理論成果：建立/豐富/補(bǔ)充/填補(bǔ)......技術(shù)方法：建立/完善…...專 利：可望獲得……論 文：國(guó)際（SCI）、國(guó)內(nèi)（核心）人才培養(yǎng)：青年科技骨干、博碩研究生7

預(yù)期研究成果論文、論著、專利8

研究基礎(chǔ)相關(guān)的研究積累（把握度?。懗鏊暾?qǐng)項(xiàng)目方面所進(jìn)行的預(yù)研及所獲得結(jié)果

說(shuō)明你對(duì)申請(qǐng)項(xiàng)目的設(shè)想是合理的，也是可行的，但是也不要過(guò)多。研究基礎(chǔ)介紹與申請(qǐng)項(xiàng)目直接相關(guān)的預(yù)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果；提供相關(guān)的研究論文、成果及專利等材料；

以往應(yīng)用與申請(qǐng)項(xiàng)目有關(guān)的技術(shù)方法的經(jīng)歷；工作積累也要包括項(xiàng)目組成員的所有信息。工作條件實(shí)驗(yàn)室條件、主要儀器設(shè)備等；實(shí)驗(yàn)室所在單位具備的申請(qǐng)項(xiàng)目所需的實(shí)驗(yàn)條件、人力支持、主要技術(shù)的掌握等。項(xiàng)目組人員簡(jiǎn)歷所有人員均需介紹（重點(diǎn)是項(xiàng)目負(fù)責(zé)人）；介紹內(nèi)容根據(jù)在項(xiàng)目中的分工有所側(cè)重；

列出與申請(qǐng)項(xiàng)目相關(guān)的研究論文及成果。有關(guān)消減雜交技術(shù)和基因芯片技術(shù)的工作基礎(chǔ):本研究所用的基因篩選技術(shù)主要是改良的消減雜交技術(shù)，此技術(shù)是我們研究組成員主要參與建立的，并利用此技術(shù)從脂多糖刺激前后的人牙髓細(xì)胞的差異表達(dá)的基因中克隆到脂多糖刺激后特異表達(dá)的基因，其中5個(gè)為新基因，有關(guān)此技術(shù)的研究論文有：......有關(guān)基因轉(zhuǎn)染方面的研究工作基礎(chǔ)：......有關(guān)老年性白內(nèi)障相關(guān)基因的研究基礎(chǔ)：......參考科技支撐計(jì)劃，可簡(jiǎn)略；對(duì)于設(shè)備費(fèi)、國(guó)際合作費(fèi)等慎重；實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)60%-70%；儀器設(shè)備費(fèi)<40%，專項(xiàng)<5萬(wàn)；勞務(wù)費(fèi)：15%；管理費(fèi)：5%（不能四舍五入）；根據(jù)上年度平均資助強(qiáng)度，比額度多1-5萬(wàn)。9

經(jīng)費(fèi)申請(qǐng)與預(yù)算9

經(jīng)費(fèi)申請(qǐng)與預(yù)算10

項(xiàng)目組成員構(gòu)成研究人員6-10人即可，結(jié)構(gòu)合理，要有一個(gè)梯隊(duì)。如：主任醫(yī)/藥師+中級(jí)固定研究人員+博士生+碩士生副中級(jí)固定研究人員+博士生+碩士生主任醫(yī)/藥師+中級(jí)固定研究人員+博士生+碩士生必須要有研究生，否則財(cái)務(wù)預(yù)算中不能填寫勞務(wù)費(fèi)，而且目標(biāo)里面培養(yǎng)研究生？名！高級(jí)職稱一定注意限項(xiàng)問題！10

項(xiàng)目組主要成員六、中標(biāo)必須注意的幾個(gè)問題選題不夠新穎無(wú)科學(xué)問題和假說(shuō)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)有明顯缺陷 研究基礎(chǔ)薄弱：主持人的背景、前期的工作基礎(chǔ)、研究團(tuán)隊(duì)的組成。有弄虛作假的成分。對(duì)照原則 例：絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥婦女體內(nèi)某些指標(biāo)變化程度的研究假對(duì)照：納入了30名健康年輕女性作為對(duì)照組 正確的對(duì)照組：選取絕經(jīng)后未患骨質(zhì)疏松癥女性研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容、研究方法的關(guān)系依據(jù)目標(biāo)確定研究?jī)?nèi)容，根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別研究?jī)?nèi)容：根據(jù)總體目標(biāo)分若干分題，重點(diǎn)回答做什么—觀察指標(biāo)、階段目標(biāo)。技術(shù)路線：重點(diǎn)回答怎么做—在具體步驟中體現(xiàn)研究?jī)?nèi)容和研究方法。六、中標(biāo)必須注意的幾個(gè)問題對(duì)擬解決的關(guān)鍵問題與可行性分析撰寫時(shí)的區(qū)別二者相同之處：擬解決的關(guān)鍵問題在可行性分析時(shí)也要提及二者不同之處：撰寫擬解決關(guān)鍵問題，重點(diǎn)回答如何解決。解決辦法包括：通過(guò)研究思路的設(shè)計(jì)巧妙；運(yùn)用最新出現(xiàn)的研究方法；通過(guò)不同方法各自優(yōu)點(diǎn)的有機(jī)結(jié)合。在進(jìn)行可行性分析時(shí)，重點(diǎn)回答能夠解決。分析問題角度：通過(guò)對(duì)現(xiàn)有理論分析提供理論依據(jù)；通過(guò)對(duì)預(yù)研結(jié)果分析提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；通過(guò)對(duì)他人研究成果描述提供佐證。六、中標(biāo)必須注意的幾個(gè)問題創(chuàng)新點(diǎn)、研究目標(biāo)和預(yù)期研究結(jié)果的區(qū)別三者的共同點(diǎn)：都包含一個(gè)“新”字。三者的不同點(diǎn)：概念的外延不同。創(chuàng)

新

點(diǎn)：

①

形態(tài)學(xué)證實(shí)在腦下垂體中確有神經(jīng)纖維存在②進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)是肽能神經(jīng)。研究目標(biāo)：通過(guò)各種形態(tài)學(xué)研究充分證明在腦下垂體中確有肽能神經(jīng)支配。預(yù)期研究結(jié)果：提出腦下垂體肽能神經(jīng)和體液雙重調(diào)節(jié)假說(shuō)，對(duì)原有理論提出挑戰(zhàn)。六、中標(biāo)必須注意的幾個(gè)問題1、在項(xiàng)目設(shè)計(jì)過(guò)程中要樹立整體觀念，要講述一個(gè)完整的故事。2、文字表達(dá)要精雕細(xì)琢，每一句話說(shuō)明什么要做到心中有數(shù)。3、文獻(xiàn)回顧不能回避國(guó)內(nèi)外最新研究進(jìn)展，尤其是不同學(xué)派的觀點(diǎn)。4、重點(diǎn)內(nèi)容、觀點(diǎn)要用黑體強(qiáng)調(diào)。七、醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)的原則及應(yīng)用醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)的四大原則對(duì)照原則：目的在于顯示處理的效應(yīng)。均衡原則：針對(duì)重要的、可控制的非處理因素。隨機(jī)原則：針對(duì)大量的、不可控制的非處理因素。重復(fù)原則：足夠的樣本量可以產(chǎn)生足夠的研究功效。（一）對(duì)照的原則 組間：處理因素、非處理因素例數(shù)：對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相等或相近1.空白對(duì)照(blankcontrol)：對(duì)照組不加任何處理因素例如：實(shí)驗(yàn)組兒童接種疫苗，對(duì)照組兒童不接種疫苗。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單易行，但容易引起心理差異，從而影響實(shí)驗(yàn)效應(yīng)的測(cè) 定?！参縿?duì)照(placebocontrol)2.實(shí)驗(yàn)對(duì)照(experimentalcontrol)：施加基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)條件（非處理因素）。含賴氨酸面包+非處理因素→賴氨酸效應(yīng)+面包效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)面包效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)面包+非處理因素→非處理因素→賴氨酸

→

賴氨酸效應(yīng)3.標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照(standardcontrol)：以現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)或正常值作對(duì)照。例

??某種新的方法能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法的研究；②某病患者與正常人的某生理、生化指標(biāo)是否相同。Gol