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文檔簡(jiǎn)介
ICS67.050
CCSX04
團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)
T/GDFCAxxx—2023
光果甘草根提取物的真?zhèn)舞b別高效液相色
譜法
IndentificationofGlycyrrhizaglabraLRootExtractbyHPLCmethod
2023–XX–XX發(fā)布2023-XX–XX實(shí)施
廣東省食品流通協(xié)會(huì)發(fā)布
T/GDFCAxxx—2023
光果甘草根提取物的真?zhèn)舞b別高效液相色譜法
1范圍
本文件描述了光果甘草根提取物（主要為光甘草定40%，不適用于高濃度光甘草定，其他藥材的適
用度未考察過(guò)，若藥材中含有本方法中所檢測(cè)的物質(zhì)，可以參考使用。）中黃酮類(lèi)標(biāo)志物光甘草定、芒
柄花黃素，三萜類(lèi)標(biāo)志物甘草酸、光甘草醇、甘草內(nèi)酯含量的高效液相色譜測(cè)定方法。
本文件適用于甘草提取粉末中光甘草定、芒柄花黃素、甘草酸、光甘草醇、甘草內(nèi)酯含量的測(cè)定，
其他固體、半固體植物提取物可參照?qǐng)?zhí)行。本方法通過(guò)對(duì)潛在的廉價(jià)甘草提取物和光果甘草根提取物
Glabridin-40中的主要功效成分和含量測(cè)定，實(shí)現(xiàn)光果甘草根提取物Glabridin-40真?zhèn)舞b定，保障消費(fèi)者
權(quán)益。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，
僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本
文件。
GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
3術(shù)語(yǔ)和定義
本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。
4原理
試樣經(jīng)甲醇超聲提取，過(guò)濾，續(xù)濾液中各物質(zhì)經(jīng)液相色譜柱分離后，用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，用保
留時(shí)間進(jìn)行定性，外標(biāo)法定量。
5試劑和材料
除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。
甲醇（CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1）：色譜純。
乙腈（C2H3N，CAS號(hào)：75-05-8）：色譜純。
磷酸（H3PO4，CAS號(hào)：7664-38-2），分析純。
0.05%磷酸水溶液：取500μL磷酸（5.1），加一級(jí)水定容至1L。
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：
光甘草定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（Glabridin，C20H20O4，CAS號(hào)：59870-68-7），純度≥98%。
芒柄花黃素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（Formononetin，C16H12O4，CAS號(hào)：485-72-3），純度≥98%。
甘草酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（Glycyrrhizicacid，C42H62O16，CAS號(hào)：1405-86-3），純度≥98%。
光甘草醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（Glabrol，C25H28O4，CAS號(hào)：59870-65-4），純度≥98%。
甘草內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（Glabrolide，C30H44O4，CAS號(hào)：10401-33-9），純度≥98%。
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱(chēng)取10mg（精確至0.1mg）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.3），用甲醇（5.1）溶
解并定容到10mL，混合均勻。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液避光于≤4℃下儲(chǔ)存，有效期2個(gè)月。
標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：
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T/GDFCAxxx—2023
芒柄花黃素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取適量的芒柄花黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4）至10mL容量瓶中，用
甲醇稀釋至刻度，配成5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶
液（可根據(jù)樣品含量適當(dāng)調(diào)節(jié)溶液的濃度），臨用現(xiàn)配。
光甘草定、甘草酸、光甘草醇、甘草內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取適量的光甘草定、甘草酸、甘草內(nèi)
酯、光甘草醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4）至10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配成200mg/L、400mg/L、
600mg/L、800mg/L、1000mg/L、1200mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（可根據(jù)樣品含量適當(dāng)調(diào)節(jié)溶液的濃度），
臨用現(xiàn)配。
5.8：實(shí)驗(yàn)材料：離心管、燒杯、量筒、移液槍、注射器、微孔濾膜（孔徑0.22μm，有機(jī)系）。
6儀器和設(shè)備
高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器（或二極管陣列檢測(cè)器）。
分析天平：感量0.01g和0.0001g。
超聲波清洗器。
高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。
7測(cè)定步驟
樣品預(yù)處理
精密稱(chēng)取0.5g（精確至0.01）甘草提取物粉末于50mL離心管中，加入25mL甲醇充分溶解，稱(chēng)
量。在超聲水浴溫度25℃條件下超聲提取30min，冷卻至室溫后稱(chēng)量，用甲醇補(bǔ)足余量，避光儲(chǔ)存，
以4000r/min離心5min，取上清液過(guò)0.22μm微孔濾膜，取續(xù)濾液為供試品溶液。
液相色譜參考條件
7.2.1色譜柱：C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），或性能相當(dāng)者。
7.2.2柱溫：35℃。
7.2.3流動(dòng)相：乙腈、0.05%磷酸水溶液，梯度洗脫。
7.2.4洗脫程序：
（1）檢測(cè)光甘草定、芒柄花黃素
時(shí)間（min）A%（乙腈）B%（0.05%磷酸水溶液）
02080
52080
457030
55955
652080
702080
（2）檢測(cè)甘草酸、光甘草醇、甘草內(nèi)酯
時(shí)間（min）A%（乙腈）B%（0.05%磷酸水溶液）
02080
52080
3
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406040
55955
652080
702080
7.2.5檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。
7.2.6進(jìn)樣量：20μL。
7.2.7流速：1.0mL/min。
液相色譜測(cè)定
按照上述色譜條件下分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品試液進(jìn)行檢測(cè)，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品試
液中光甘草定、芒柄花黃素、甘草酸、光甘草醇、甘草內(nèi)酯的色譜峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為
縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；以保留時(shí)間對(duì)樣品進(jìn)行定性，保留時(shí)間允許誤差范圍為1%，標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法對(duì)
樣品定量。當(dāng)檢測(cè)樣品基質(zhì)復(fù)雜，雜質(zhì)干擾后續(xù)檢測(cè)時(shí)，可適當(dāng)調(diào)整色譜條件。典型色譜圖參見(jiàn)附錄A。
空白試驗(yàn)
除不加試樣外，采用與試樣完全相同的分析步驟進(jìn)行。
8結(jié)果計(jì)算和表述
試樣中物質(zhì)含量按式(1)計(jì)算：
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