《規(guī)?；驁霎a(chǎn)氣莢膜梭菌病診斷與 防治技術規(guī)程》

ICICS01.040.65

CCSB04TB

團體標準

T/NAIA×××-××××

規(guī)?；驁霎a(chǎn)氣莢膜梭菌病診斷與

防治技術規(guī)程

Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandtreatmentof

pathogenicClostridiumperfringensdiseaseinlarge-scalesheep

farms

(征求意見稿)

××××-××-××發(fā)布××××-××-××實施

寧夏化學分析測試協(xié)會發(fā)布

發(fā)布

規(guī)?；驁霎a(chǎn)氣莢膜梭菌病診斷與防治技術規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了規(guī)?；驁霎a(chǎn)氣莢膜梭菌病診斷與防治技術規(guī)程的術語和定義、診斷、預防和治

療。

本文件適用于規(guī)?；驁霎a(chǎn)氣莢膜梭菌病的防治。其他羊場參照執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用

文件，僅該日期對應的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）

適用于本文件。

GB19489實驗室生物安全通用要求

GB/T39915動物飼養(yǎng)場防疫準則

SN/T2025動物檢疫實驗室生物安全操作規(guī)范

SN/T2984檢驗檢疫動物病原微生物實驗活動生物安全要求細則

NY/T3073-2017家畜魏氏梭菌病診斷技術

NY/T5151無公害食品肉羊飼養(yǎng)管理準則

NY/T3052-2016舍飼肉羊飼養(yǎng)管理技術規(guī)范

NY/T388畜禽場環(huán)境質(zhì)量標準

NY/T1167畜禽場環(huán)境質(zhì)量及衛(wèi)生控制規(guī)范

NY/T3075-2017畜禽養(yǎng)殖場消毒技術

NY/T5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準則

NY/T5151-2002無公害食品肉羊飼養(yǎng)管理準則

NY5149無公害食品肉羊飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準則

農(nóng)業(yè)部農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1產(chǎn)氣莢膜梭菌Clostridiumperfringens

又稱為產(chǎn)氣莢膜芽孢桿菌、魏氏梭菌，革蘭氏陽性厭氧耐氧桿菌，根據(jù)致死毒素可分為A-E五

種，是動物氣性壞疽和腸毒血癥的病原體，引起動物氣性壞疽、食物中毒、腸炎、腸毒血癥等多種

疾病。

3.2伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基eosin-methyleneblueagar，EMBagar

即大腸桿菌鑒別培養(yǎng)基，主要用于大腸桿菌的分離和培養(yǎng)。

3.3血平板培養(yǎng)基Bloodplateculturemedium

主要用于細菌的分離和培養(yǎng)。

3.4產(chǎn)氣莢膜梭菌鑒別培養(yǎng)基IdentificationmediumforClostridiumperfringens

主要用于分離大腸桿菌和梭菌。

4診斷

4.1流行病學

產(chǎn)氣莢膜梭菌廣泛分布于土壤中，該菌進入家畜體內(nèi)后,通過釋放毒素導致腹瀉、多器官出血

和神經(jīng)系統(tǒng)紊亂；通常以2-12月齡、膘情好的羊為主，經(jīng)過消化道發(fā)生內(nèi)源性感染。在不同季節(jié)之

間，羊發(fā)病主要集中在夏季，春季和秋季牧草結(jié)籽后的一段時間發(fā)病較多。綿羊多發(fā)，山羊較少，

多呈散發(fā)性流行。

4.2臨床癥狀

產(chǎn)氣莢膜梭菌導致的癥狀在臨床主要有腸道疾病、痢疾猝狙、羊腸毒血癥、犢牛、羔羊痢疾，

分別由A型、B和C型、D型和E型病原菌引起。A型導致黃羊病，患病羊以貧血、血紅蛋白尿為特

征；B型患病羊運動失調(diào)，C型為出血性腸炎；D型突然死亡、角弓反張等癥狀；E型羊不常見；詳

見附錄E.2。

4.3病理變化

A型產(chǎn)氣莢膜梭菌剖檢見肝脾腫大充血、蒼白等；鏡下肺、大、小腸充血和水腫，腎病伴血紅

蛋白管型等。B型和C型出現(xiàn)彌漫性或多灶性出血性和壞死性腸炎、局灶性或?qū)ΨQ性腦軟化癥。D型

剖檢眼觀可見血液凝固不良、各個組織臟器出血腫脹；全身淋巴結(jié)腫大，切面黑褐色,見附錄A.1。

2

鏡下觀察見心內(nèi)膜、肌纖維、肝臟、脾臟、腎臟腎小球、腸組織上皮細胞、睪丸組織生精小管等臟

器組織出現(xiàn)出血、壞死等一系列的病變，見附錄A.2。病理變化詳見附錄E.3。

4.4實驗室診斷

4.4.1樣本采集

采集：無菌采集種公羊的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎、睪丸、腸組織和腸系淋巴結(jié)等組織臟

器疑似氣性壞疽的病料樣本。

保存與運輸：樣本收集于密封的無菌容器中，并記錄樣品的組織、部位等信息，放置采樣箱中

運送到實驗室進行處理。

4.4.2分離培養(yǎng)

將無菌采集的羔羊臟器組織在無菌操作條件下接種至伊紅美藍瓊脂、血平板和產(chǎn)氣莢膜梭菌鑒

別培養(yǎng)基中，操作過程見附錄B.4;可觀察到伊紅美藍瓊脂上形成有金屬光澤的黑色單一菌落，見附

錄C.1（1）；血平板上有中等大小、具有溶血圓的灰色圓形單一菌落，見附錄C.1（2）；產(chǎn)氣莢膜

梭菌鑒別培養(yǎng)基中無菌落生長。

伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基配制見附錄B.1，血平板培養(yǎng)基配制見附錄B.2，產(chǎn)氣莢膜梭菌鑒別培養(yǎng)基

配制見附錄B.3。

4.5顯微鏡觀察

挑取產(chǎn)氣莢膜梭菌顯色培養(yǎng)基（CHROMagar公司）和血平板上的單一菌落進行革蘭氏染色，

光學顯微鏡下觀察可見兩端鈍圓的藍色革蘭氏陽性短粗桿菌。見附錄C.2。

4.6病原菌同源性比較及遺傳進化分析

根據(jù)GenBank中登錄的產(chǎn)氣莢膜梭菌基因全序列，合成細菌16SrRNA通用引物，見附錄D.1，

PCR片段大?。?465bp），見附錄D.2。

4.7結(jié)果判定

符合4.1、4.2和4.3的特征判斷為疑似病例。

同時符合4.4、4.5、4.6的特征判斷為確診病例。

5預防

5.1科學飼養(yǎng)管理

改變傳統(tǒng)的養(yǎng)殖管理模式，做到科學分群，科學養(yǎng)殖。農(nóng)區(qū)、牧區(qū)春夏之際少搶青、搶茬；秋

季避免吃過量結(jié)籽飼草；發(fā)病時搬圈至高燥地區(qū)。避免采食過量多汁飼料、結(jié)籽飼草和精料。冬季

節(jié)要做好保暖，避免采食霜凍牧草。飼養(yǎng)管理要求按照GB/T39915、NY/T5151和NY/T3052-2016

規(guī)定執(zhí)行，環(huán)境控制應符合NY/T388和NY/T1167的規(guī)定。

5.2消毒滅菌

防范該病的發(fā)生流行，應改善養(yǎng)殖條件，清理有利于致病原繁殖生長的污染物。另外，還應制

定嚴格的清洗消毒制度，定期對圈舍用具和環(huán)境進行嚴格衛(wèi)生消毒，及時更換消毒藥品，避免致病

原產(chǎn)生耐藥性。消毒滅菌要求按照農(nóng)業(yè)部農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號和NY/T3075-2017規(guī)定執(zhí)行。

5.3免疫預防

該病常發(fā)地區(qū)，每半年注射次羊黑疫疫苗和羊梭菌三聯(lián)四防疫苗或五聯(lián)疫苗。對于妊娠母羊可

以在懷孕105d和120d時分別接種1次羊梭菌三聯(lián)四防疫苗預防新生羔羊發(fā)生梭菌病。如羔羊常發(fā)生

該病，最好的防控措施就是對母羊進行免疫。種母羊應在繁育前一年，用D型類毒素免疫2次，產(chǎn)羔

前4～6周進行1次強化免疫，以后每年免疫1次。防疫應符合NY5149的規(guī)定。

5.4藥物預防

可使用抗生素、磺胺藥、鎮(zhèn)靜劑和強心劑治療，對羊使用石灰水進行灌服。有羔羊痢疾病史的

羊場，羔羊出生后12h內(nèi)，灌服土霉素0.15g-0.2g/只，1次/d，連續(xù)灌服3d。

6治療

使用國家批準的針對本病的中西藥物，具體治療方法見附錄E，藥物的選用應符合NY/T5030

和NY/T5151-2002的規(guī)定。配合藥敏試驗結(jié)果進行抗生素治療，使用劑量參照說明書。

4

附錄A

（規(guī)范性附錄）

A.1羊腸毒血癥組織剖檢圖

眼觀可見血液凝固不良、呈醬油色；腎臟、心臟軟化如泥；腸道鼓脹、粘膜充血與出血；肝

臟被膜見有出血斑，膽囊脹大，脾臟淤血，腦膜出血。全身淋巴結(jié)腫大，切面黑褐色。

A.2羊腸毒血癥組織剖檢圖

鏡下觀察見心內(nèi)膜出血（圖1），肌纖維變性壞死；肝臟組織被膜出血，肝竇擴張淤血（圖

2）；脾臟組織白髓萎縮，淋巴細胞減少（圖3）；腎臟腎小球壞死，間質(zhì)炎性細胞浸潤和纖維組織

增生（圖6）；腸組織上皮細胞脫落，炎性細胞浸潤和血管淤血；睪丸組織生精小管萎縮、細胞壞

死，漿液性物質(zhì)滲出等病理變化。

附錄B

（規(guī)范性附錄）

產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)基配制及接種過程

B.1伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基

蛋白胨10.0g，乳糖10.0g，磷酸氫二鉀2.0g，瓊脂15.0g，伊紅0.4g，美藍0.065g，溶于1000mL

蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，傾入無菌平皿，4℃保存。

B.2血平板培養(yǎng)基

血平板培養(yǎng)基：牛心浸粉15.0g，氯化鈉5.0g，豌豆浸粉3.0g，瓊脂15.0g溶于1000mL蒸餾水

中，121℃高壓滅菌15min，冷卻至50-55℃時無菌操作加入10%無菌脫纖維羊血，混勻，傾入無菌平

皿，4℃保存。

B.3產(chǎn)氣莢膜梭菌顯色培養(yǎng)基

瓊脂15.0g，蛋白胨和酵母粉25.0g，鹽類6.0g，色素1.4g，生長因子3.5g溶于1000mL蒸餾水

中，121℃高壓15min，冷卻至45-50℃加入增補劑S120mL和增補劑S21mL，輕輕搖晃均勻，傾入平

皿，凝固，4℃保存。

B.4細菌接種操作過程

將無菌采集的病死羊的臟器組織、腸組織和腸系膜淋巴結(jié)等12份樣本表明火焰滅菌，剪取一

定量的深部組織，在無菌操作條件下接種至伊紅美藍瓊脂（Hopebiol，QingdaoChina）、血平板

（Hyclcome）和產(chǎn)氣莢膜梭菌顯色培養(yǎng)基（CHROMagar，ParisFrance）中，每份病料樣品各接種2

份。產(chǎn)氣莢膜梭菌顯色培養(yǎng)基加入?yún)捬醢胖迷趨捬醮校?7℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)24h后，觀察菌

落生長特性、形態(tài)等，挑取單個菌落進行革蘭氏染色并鏡檢。

6

使用一次性接種環(huán)，挑取可疑單一菌落，在新的平板上采用三字劃線法涂板，倒置于37℃恒

溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待新平板上長出新菌落，再次挑取單一菌落至腦心浸液肉湯液體培養(yǎng)基

（Hopebiol，QingdaoChina）中擴增，挑取菌落進行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察其形態(tài)。

附錄B

（規(guī)范性附錄）

C.1產(chǎn)氣莢膜梭菌菌落形態(tài)

C.2產(chǎn)氣莢膜梭菌顯微鏡觀察菌體形態(tài)

革蘭氏染色陽性，鏡檢呈兩端鈍圓的藍色短粗桿菌（1000×）

附錄D

（規(guī)范性附錄）

表D.1產(chǎn)氣莢膜梭菌基因片段的引物序列信息

引物名稱引物序列（5′-3′）片段大小

AGAGTTTGATCCTGGCTCAG

16SrRNA1465bp[25]

GGTTACCTTGTTACGACTT

GCTAATGTTACTGCCGTTGA

Cpa325bp[26]

CCTCTGATACATCGTGTAAG

ACTATACAGACAGATCATTCAACC

Cpb236bp[26]

TTAGGAGCAGTTAGAACTACAG

AGTATCTAATGAAATGTCCA

Etx585bp[26]

TTCCACTTACTTGTCCTAC

ACTACTCTCAGACAAGACAG

Itx445bp[26]

CTTTCCTTCTATTACTATACG

GGAGATGGTTGGATATTAGG

Cpe233bp[27]

GGACCAGCAGTTGTAGATA

D.216SrRNAPCR片段

M.DNA標準DL2000；1-12.心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、睪丸、腸系膜淋巴結(jié)、盲腸、結(jié)腸外回、結(jié)腸末

端、回腸、直腸分離菌擴增擴增產(chǎn)物；13.陰性對照；14.陽性對照

附錄E

（規(guī)范性附錄）

產(chǎn)氣莢膜梭菌病治療方案

8

E.1治療方法

該病由于病程短促，往往來不及治療。病程稍長者，可用青霉素肌注，1次80-160萬單位，1日2

次，或口服磺胺嘧啶，1日2次，1次5-6克，連服3-4次；或?qū)?0%安鈉咖10毫升加于葡萄糖溶液500-1000

毫升中靜脈滴注；也可口服10%-20%石灰乳，1次50-100毫升，連服1-2次。

治療羊產(chǎn)氣夾膜梭菌病應選擇使用頭孢類藥物，患病羊肌肉注射頭孢噻呋鈉注射液，使用劑量

為2.2mg/kg體重，2次/d，連續(xù)使用3d為1個療程。緩解中毒癥狀，靜脈注射5%的碳酸氫鈉注射液，

每頭羊靜脈注射50mL。同時在整個羊群的飼料中添加98%的阿莫西林可溶性粉劑，每千克飼料添

加10g，連續(xù)使用1周。

E.2臨床癥狀

腸道疾?。篈型產(chǎn)氣莢膜梭菌導致黃羊病，是一種較為罕見的羊產(chǎn)氣莢膜梭菌病，以患病羊精

神抑郁、貧血、黃疸和血紅蛋白尿為臨床特征。

痢疾猝狙：B