DB51T 2166-2016 微生物檢測領(lǐng)域培養(yǎng)基和試劑驗證指南　

DB51DB51/T2166—2016微生物檢測領(lǐng)域培養(yǎng)基和試劑驗證指南2016-05-18發(fā)布2016-10-01實施四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 3 4 7 9 1DB51/T2158實驗室服務(wù)和供應(yīng)品注2：傾注到平皿內(nèi)的固體培養(yǎng)基一般稱之為“平板”；倒入試管并擺放注：運輸培養(yǎng)基中通常不允許包含使微生物增殖的物質(zhì)，但是培養(yǎng)基應(yīng)能保護菌株。典型的運輸培養(yǎng)基如緩沖甘2選擇性增菌培養(yǎng)基selectiveenric非選擇性增菌培養(yǎng)基non-selectiveenri鑒別培養(yǎng)基(特異性培養(yǎng)基)differentia3通常用于培養(yǎng)基性能測試的微生物。注：國家標(biāo)準(zhǔn)中提到的培養(yǎng)基通?？梢灾苯邮褂?。但因其中一些培養(yǎng)基成分(4.2.2實驗室應(yīng)按批量的不同，選擇適量的培養(yǎng)基在適當(dāng)條件下培養(yǎng)，檢測其微生物污染。通44.2.3生長特性要求包括生長率、選擇性、生化特性。實驗室應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基或試劑的用途，選4.2.4對不含指示劑和選擇劑的培養(yǎng)基，通常只需采用測試菌株進行生長率測試；對含有選擇劑的培注1：采用定量方法時，應(yīng)使用參考培養(yǎng)基進行對照；采用半定量和定性方法時，使用參考培養(yǎng)基或能得到“陽性”結(jié)果的培養(yǎng)基進行對照有助于結(jié)果的解釋。參考培養(yǎng)基應(yīng)選擇近期批次中質(zhì)量良好的培養(yǎng)基或是來自其他供注2：試菌株具有其代表種的穩(wěn)定特性，是能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株。測試菌株主要購置于標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心，也可以是實驗室自己分離的具有良好特性的菌株。測試菌株的來源應(yīng)盡量與檢測對象注3：測試菌株通常需要采用組合菌株進行驗證，如具典型反應(yīng)特性的生長良好的陽性菌株；弱陽性菌株（對培養(yǎng)基中選擇劑等試劑敏感性強的菌株）；不具有該特性的陰性菌株；部分或完全受抑制的菌株，使用這四類菌通常要加入18mL～20mL瓊脂培養(yǎng)基），冷卻至47℃~50℃后添加試劑。傾注后將平板放c)選擇合適稀釋度的工作菌懸液0.1mL，均勻涂布接種于待測注：參比培養(yǎng)基的選擇，一般細菌采用TSA，一般霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖瓊脂，對營養(yǎng)有特殊要求的微生物采5e)要求目標(biāo)菌在培養(yǎng)基上應(yīng)呈現(xiàn)典型的生長形態(tài)。對于非選擇性固體培養(yǎng)基、選擇性計數(shù)固體培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率應(yīng)不小于0.7；選擇性分離固體培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率一般不小于5.2.2保藏培養(yǎng)基、運輸培養(yǎng)基和d)剩余已接種菌液的待測培養(yǎng)基置20℃~25℃放置45min后，再吸取1mL傾注平板，每管b)將測試菌株接種到非選擇性肉湯培養(yǎng)過夜或采用其他6f)對于選擇性增菌培養(yǎng)基，劃線接種后，目標(biāo)菌在選擇性平板上的菌落應(yīng)>10CFU。無選擇性的液體培養(yǎng)基和選擇性計數(shù)液體培養(yǎng)基，濁度值應(yīng)為2,且有目標(biāo)菌的生長特征。如乳糖膽鹽培養(yǎng)基，產(chǎn)氣應(yīng)為1/3或以上。當(dāng)實驗室采用商品化即用型固體培養(yǎng)基，以及使用新批次的商品化脫水合成培養(yǎng)基時，可采用半定量測試方法，按下列程序進行評價：a)按照5.1.1.a)的要求制備與保存平板。b)將標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株接種到非選擇性肉湯培養(yǎng)過夜，此為工作菌懸液。按0.5cm的間隔劃4條平行線，再在D區(qū)域內(nèi)劃一條連續(xù)的曲線?？稍谂囵B(yǎng)皿下面放一個模板圖，以便于準(zhǔn)確劃線。按同樣的方法同時接種兩個平板，按檢測方法規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。菌落生長，則此劃線的G值記為1;如果劃線上僅一半有稠密菌落生長，則G值為0.5;如果劃線上沒有菌落生長，或生長量少于劃線的一半，或菌落生長微弱，則G值為0。在培養(yǎng)皿上G值為10。d)目標(biāo)菌在培養(yǎng)基上應(yīng)呈現(xiàn)典型的生長，且目標(biāo)菌的生長指數(shù)G大于或等于6時，培養(yǎng)基可接受。本方法通常作為液體培養(yǎng)基的補充測試。當(dāng)實驗室使用商品化即用型液體培養(yǎng)基，以及使用新批次的商品化脫水合成培養(yǎng)基時，可采用本方法進行測試。5.4.2增菌培養(yǎng)基7注：有時可以觀察到微生物生長后聚集成細胞團，沉積在試管或瓶子底部5.4.3保藏培養(yǎng)基、運輸培養(yǎng)基和剩余已接種菌液的待測培養(yǎng)基置于20℃~25℃環(huán)境中8圖2非目標(biāo)菌半定量劃線法接種模式圖d)培養(yǎng)后計算培養(yǎng)基的生長指數(shù)G。劃線上有比較稠密菌落生長，則此劃線的G值為1。培養(yǎng)皿上有6條線，故G值最多為6。如果劃線上僅一半有稠密菌落生長，則G值為0.5。如果劃線上沒有菌落生長，或生長量少于劃線的一半，或菌落生長微弱，則G值為0。記錄每個平板的得分總和便得到G值。e)非目標(biāo)菌的生長指數(shù)G值一般小于或等于1,最多不大于5。6.2.2液體培養(yǎng)基按下列程序測試液體培養(yǎng)基的選擇性：將培養(yǎng)基分裝試管，每管10mL。按5.2.1b)的要求制備工作菌懸液。在裝有待測培養(yǎng)基的試管中接種1000CFU~5000CFU非目標(biāo)菌，接種量為1mL,同時接種兩個平行管，混勻。同時將1mL菌懸液(比試管接種小10~100倍稀釋度)傾注平板，接種兩個平板，作接種量計數(shù)用。按檢測方法中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度進行培養(yǎng)。吸取10μL經(jīng)培養(yǎng)后的非目標(biāo)菌培養(yǎng)液，均勻涂布接種到非選擇性平板(如TSA)上。同時每管接種一個平板。可使用傾注法進行接種，并按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)平板。該步驟僅針對選擇性增菌液體培養(yǎng)基。對平板進行目標(biāo)菌計數(shù)或目測培養(yǎng)液濁度值。非目標(biāo)菌在非選擇性平板上的菌落數(shù)應(yīng)<100CFU或非目標(biāo)菌的濁度值應(yīng)為0或1且無產(chǎn)氣等現(xiàn)象。6.3定性方法6.3.1本方法可作為液體培養(yǎng)基的補充測試。當(dāng)實驗室使用商品化即用型液體培養(yǎng)基或采用新批次商品化脫水合成培養(yǎng)基產(chǎn)品時，可采用本方法進行測試。6.3.2培養(yǎng)基的制備將培養(yǎng)基分裝試管，每管10mL。本步驟不適用于商品化即用培養(yǎng)基。6.3.3工作菌懸液的制備按照5.3.1b)的要求進行。6.3.4接種按照5.3.1c)的要求進行。6.3.5結(jié)果觀察目測其濁度值：0表示無混濁；1表示很輕微的混濁；2表示嚴(yán)重的混濁。6.3.6結(jié)果解釋非目標(biāo)菌的濁度值應(yīng)為0或1。選擇性液體計數(shù)培養(yǎng)基還應(yīng)無產(chǎn)氣現(xiàn)象。97.2.2.1平板的制備與保存,按照5.2.1a)的要求進行。本步驟不7.3.1.2工作菌懸液的制備,將標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株接種注1：高層斜面培養(yǎng)基，取新鮮質(zhì)控菌株斜面，用接種針挑取菌苔穿刺接注2：斜面培養(yǎng)基，取新鮮質(zhì)控菌株斜面，用接種環(huán)挑取菌苔在斜面上劃“之將純度滿意的質(zhì)控菌株培養(yǎng)物懸浮于TSB肉湯中，并調(diào)整濁度為0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)（約1×108CFU％～取干凈玻片，在玻片上劃出2個約1cm×2cm的區(qū)域，用接種環(huán)挑取1環(huán)測試菌株，各放1/2在無反射黑色背景下，觀察有無凝集現(xiàn)象。任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反應(yīng).大腸埃希氏菌Escherichiacoli單核細胞增生李斯特氏菌Listeri福氏志賀氏菌Shigellaflexne痢疾志賀氏菌Shigelladysenteriae小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌Yersiniaente宋內(nèi)志賀氏菌Shigellasonnei弗氏檸阪崎腸桿菌Enterobactersakazakii嬰兒雙產(chǎn)氣腸桿菌Enterobacteraerogenes德氏乳桿菌保加利亞亞種Lactobacillusdelbrueckii肺炎克雷伯氏菌Klebsiellapneumoniae糞產(chǎn)堿桿菌Alcaligene傷寒沙門氏菌Salmonellatyphi植物乳桿菌Lactobacillus鼠傷寒沙門氏菌Salmonellatyphimur腸炎沙門氏菌Salmonellaen金黃色葡萄球菌Staphylococ表皮葡萄球菌Staphylococcusepidermidis艱難梭菌Clostridium嗜熱鏈球菌Streptococcusthermophilus釀酒酵母Sac胰蛋白胨大豆瓊脂固體非選擇性分離生長率36℃±1℃24h±2h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.7—糞腸球菌ATCC29212 MC培養(yǎng)基固體非選擇性計數(shù)生長率36℃±1℃48h±2h嗜熱鏈球菌IFFI6038MC培養(yǎng)基定量PR≥0.7中等偏小，邊緣光滑的紅色菌落，可有淡淡的暈MRS培養(yǎng)基固體非選擇性計數(shù)生長率36℃±1℃48h±2h德氏乳桿菌保加利亞亞種CICC6032MRS培養(yǎng)基定量PR≥0.7無色不透明嗜熱鏈球菌IFFI6038無色不透明嬰兒雙歧桿菌CICC6069(厭氧培養(yǎng)）圓形，中等大小，邊緣整齊，瓷3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA)固體非選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h副溶血性弧菌ATCC178023%氯化鈉TSA定量PR≥0.7無色半透明菌落創(chuàng)傷弧菌落ATCC27562營養(yǎng)瓊脂固體非選擇性分離生長率36℃±1℃24h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.7 金黃色葡萄球菌ATCC6538枯草芽胞桿菌ATCC6633含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂（TSA-YE)固體非選擇性分離生長率30℃±1℃24h～48h單核細胞增生李斯特氏菌ATCC19115TSA定量PR≥0.7 平板計數(shù)瓊脂固體非選擇性計數(shù)生長率36℃±1℃48h±2h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.7—金黃色葡萄球菌ATCC6538枯草芽胞桿菌ATCC6633亞硫酸鉍瓊脂固體選擇性分離生長率36℃±1℃40h～48h傷寒沙門氏菌CMCC(B)50071TSA定量PR≥0.5黑色菌落，有金屬光澤鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028黑色或灰綠色菌落，有金屬光澤選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922—半定量G≤1—糞腸球菌ATCC29212HE瓊脂固體選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028TSA定量PR≥0.5綠-藍色菌落，有黑心福氏志賀氏菌CMCC(B)51572綠-藍色菌落選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922 半定量G＜5橙紅色菌落，可有膽酸沉淀糞腸球菌ATCC29212G≤1 木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD)固體選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028TSA定量PR≥0.5黑色菌落福氏志賀氏菌CMCC(B)51572無色菌落，無黑心選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922—半定量G＜5黃色菌落金黃色葡萄球菌ATCC6538G≤1—沙門氏菌顯色培養(yǎng)基固體選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028TSA定量PR≥0.5按說明書判定特異性大腸埃希氏菌ATCC25922—定性—按說明書判定奇異變形桿菌CMCC(B)49005—按說明書判定選擇性糞腸球菌ATCC29212半定量G≤1PALCAM瓊脂固體選擇性分離生長率36℃±1℃24h～48h單核細胞增生李斯特氏菌ATCC19115TSA定量PR≥0.5灰綠色菌落，中心凹陷黑色，周圍有黑色選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922—半定量G≤1—糞腸球菌ATCC29212麥康凱瓊脂(MAC)固體選擇性分離生長率36℃±1℃20h～24h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.5鮮桃紅色或粉紅色，可有膽酸沉淀福氏志賀氏菌CMCC(B)51572無色至淺粉紅色，半透明棕色或綠色菌落選擇性金黃色葡萄球菌ATCC6538—半定量G≤1—類阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基固體選擇性分離特異性36℃±1℃24h±2h阪崎腸桿菌ATCC29544TSA定量PR≥0.5按說明書判定特異性普通變形桿菌CMCC(B)49027—定性 按說明書判定大腸埃希氏菌ATCC25922—按說明書判定選擇性糞腸球菌ATCC29212半定量G≤1 CIN-I培養(yǎng)基固體選擇性分離生長率26℃±1℃48h±2h小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌CMCC(B)52204TSA定量PR≥0.5紅色牛眼狀菌落特異性大腸埃希氏菌ATCC25922-定性-圓形、粉紅色菌，邊緣有膽汁沉淀環(huán)選擇性金黃色葡萄球菌ATCC6538半定量G≤1-改良Y培養(yǎng)基固體選擇性分離生長率26℃±1℃48h±2h小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌CMCC(B)52204TSA定量PR≥0.5無色透明不粘稠菌落特異性大腸埃希氏菌ATCC25922-定性-粉紅色菌落選擇性金黃色葡萄球菌ATCC6538半定量G≤1-伊紅美藍瓊脂（EMB)固體選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.5黑色菌落，具金屬光澤特異性鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028-定性-菌落呈無色，半透明選擇性金黃色葡萄球菌ATCC6538-半定量G＜5-改良山梨醇麥康凱瓊脂（CT-SMAC)固體選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h大腸埃希氏菌O157：H7NCTC12900TSA定量PR≥0.5無色菌落特異性大腸埃希氏菌ATCC25922-定性-粉紅色菌落，周圍有膽鹽沉淀選擇性金黃色葡萄球菌ATCC6538半定量G≤1-類O157顯色培養(yǎng)基固體選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h大腸埃希氏菌O157：H7NCTC12900TSA定量PR≥0.5按說明書判定特異性大腸埃希氏菌ATCC25922-定性-按說明書判定選擇性糞腸球菌ATCC29212半定量G≤1-奇異變型桿菌CMCC(B)49005-半定量G≤1-李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基固體選擇性分離生長率36℃±1℃24h～48h單核細胞增生李斯特氏菌ATCC19115TSA定量PR≥0.5藍綠色菌落，帶白色暈環(huán)特異性英諾克李斯特氏菌ATCC33090-定性-藍綠色菌落，無白色暈環(huán)選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922半定量G≤1-糞腸球菌ATCC29212志賀氏菌顯色培養(yǎng)基固體選擇性分離生長率36℃±1℃20h～24h福氏志賀氏菌CMCC(B)51572TSA定量PR≥0.5白色，突起，無色素沉淀圈痢疾志賀氏菌CMCC(B)51105白色，突起，有清晰環(huán)，無色素沉淀圈特異性大腸埃希氏菌ATCC25922-定性-黃色，有清晰環(huán)，無色素沉淀圈產(chǎn)氣腸桿菌ATCC13048綠色菌落，無環(huán)和沉淀圈選擇性金黃色葡萄球菌ATCC6538半定量G≤1-改良CCD(mCCD)瓊脂固體選擇性分離生長率42℃±1℃24h～48h微需氧空腸彎曲菌ATCC33291無抗生素的CCD定量PR≥0.5菌落有光澤、潮濕、扁平，呈擴散生長傾向選擇性42℃±1℃24h～48h大腸埃希氏菌ATCC25922-半定量G≤1-金黃色葡萄球菌ATCC6538Skirrow瓊脂固體選擇性分離生長率42℃±1℃24h～48h微需氧空腸彎曲菌ATCC33291無抗生素的CCD定量PR≥0.5菌落灰色、扁平、濕潤有光澤，呈沿接種線向外擴散傾向選擇性42℃±1℃24h～48h大腸埃希氏菌ATCC25922-半定量G≤1-金黃色葡萄球菌ATCC6538改良纖維二糖-多粘菌素B-多粘菌素E(mCPC)瓊脂固體選擇性分離生長率39.5℃±0.5℃或36℃±1℃18h～24h創(chuàng)傷弧菌ATCC275623%氯化鈉TSA定量PR≥0.1圓型扁平，中心不透明，邊緣透明的黃色菌落特異性霍亂弧菌VBO-定性-紫色菌落選擇性副溶血性弧菌ATCC17802半定量G≤1-纖維二糖－多粘菌素E(CC)瓊脂固體選擇性分離生長率39℃~40℃或36℃±1℃18h～24h創(chuàng)傷弧菌ATCC275623%氯化鈉TSA定量PR≥0.5圓型扁平，中心不透明，邊緣透明的黃色菌落特異性霍亂弧菌VbO-定性-紫色菌落選擇性副溶血性弧菌ATCC17802半定量G≤1-硫代硫酸鈉-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂（TCBS）固體選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h副溶血性弧菌ATCC178023%氯化鈉TSA定量PR≥0.2綠色菌落選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922-半定量G≤1-弧菌顯色培養(yǎng)基固體選擇性分離生長率36℃±1℃18h～24h副溶血性弧菌ATCC178023%氯化鈉TSA定量PR≥0.5按說明書判定特異性霍亂弧菌VbO-定性-按說明書判定溶藻弧菌ATCC33787按說明書判定選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922-半定量G≤1-類Baird-Parker固體選擇性計數(shù)生長率36℃±1℃18h～24h或45h~48h金黃色葡萄球菌ATCC25923TSA定量PR≥0.7菌落黑色凸起，周圍有一混濁帶，在其外層有一透明圈特異性表皮葡萄球菌CMCC(B)26069-定性-黑色菌落，無混濁帶和透明圈選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922-半定量G≤1-結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）固體選擇性計數(shù)生長率36℃±1℃18h～24h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.7有或無沉淀環(huán)的紫紅色或紅色菌落弗氏檸檬酸桿菌ATCC43864選擇性糞腸球菌ATCC29212-半定量G＜5-VRB-MUG瓊脂固體選擇性計數(shù)生長率36℃±1℃18h～24h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.7帶有沉淀環(huán)的紫紅色或紅色菌落，有熒光特異性弗氏檸檬酸桿菌ATCC43864-定性-可帶有沉淀環(huán)的紅色菌落，無熒光選擇性糞腸球菌ATCC29212半定量G＜5-馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）固體選擇性計數(shù)生長率28℃±1℃5d釀酒酵母ATCC9763沙氏葡萄糖瓊脂定量PR≥0.7奶油色菌落黑曲霉ATCC16404白色菌絲，黑色孢子選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922-半定量G≤1-金黃色葡萄球菌ATCC6538孟加紅培養(yǎng)基固體選擇性計數(shù)生長率28℃±1℃5d釀酒酵母ATCC9763沙氏葡萄糖瓊脂定量PR≥0.7奶油色菌落黑曲霉ATCC16404白色菌絲，黑色孢子選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922-半定量G≤1-金黃色葡萄球菌ATCC6538莫匹羅星鋰鹽（Li-Mupirocin）改良MRS培養(yǎng)基固體選擇性計數(shù)生長率36℃±1℃48h±2h厭氧培養(yǎng)嬰兒雙岐桿菌CICC6069MRS培養(yǎng)基定量PR≥0.7圓形凸起，邊緣整齊，無色不透明選擇性德氏乳桿菌保加利亞亞種CICC6032-半定量G≤1-嗜熱鏈球菌IFFI6038甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂（MYP）固體選擇性計數(shù)生長率30℃±2℃24h～48h蠟樣芽胞桿菌CMCC(B)63303TSA定量PR≥0.7菌落為微粉紅色，周圍有淡粉紅色沉淀環(huán)特異性枯草芽胞桿菌ATCC6633-定性-黃色菌落，無沉淀環(huán)選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922半定量G≤1-胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂(TSC)固體選擇性計數(shù)生長率36℃±1℃20h～24h厭氧培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC13124TSA定量PR≥0.7黑色菌落選擇性艱難梭菌ATCC43593-半定量G≤1-含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉湯（TSB-YE）液體非選擇性增菌生長率30℃±1℃24h～48h單核細胞增生李斯特氏菌ATCC19115TSA半定量混濁度2液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FTG）液體非選擇性增菌生長率36℃±1℃18h～24h產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC13124哥倫比亞瓊脂半定量混濁度2緩沖蛋白胨水（BP）液體非選擇性增菌生長率36℃±1℃8h鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028TSA半定量取10μL增菌液傾注TSA平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，在TSA上＞100CFU腦心浸出液肉湯（BHI）液體非選擇性增菌生長率36℃±1℃18h～24h金黃色葡萄球菌ATCC6538TSA半定量混濁度2布氏肉湯液體非選擇性增菌生長率42℃±1℃48h±2h微需氧空腸彎曲菌ATCC33291無抗生素的CCD半定量混濁度1～2標(biāo)李氏增菌肉湯（LB1,LB2)液體選擇性增菌生長率30℃±1℃24h單核細胞增生李斯特氏菌ATCC19115+大腸埃希氏菌ATCC25922+糞腸球菌ATCC29212TSA半定量（LB2目標(biāo)菌接種量為300CFU~500CFU）在PALCAM上>10CFU，培養(yǎng)基變黑灰色至黑色菌落帶有黑色暈環(huán)選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922在TSA上<100CFU-糞腸球菌ATCC29212Bolton肉湯液體選擇性增菌生長率42℃±1℃24h～48h微需氧培養(yǎng)空腸彎曲菌ATCC33291+金黃色葡萄球菌ATCC6538+大腸埃希氏菌ATCC25922無抗生素的CCD半定量空腸彎曲菌在改良CCD平板上＞10CFU菌落呈灰白色選擇性金黃色葡萄球菌ATCC6538TSA在TSA上<100CFU-大腸埃希氏菌ATCC25922四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）液體選擇性增菌生長率42℃±1℃18h～24h鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028+大腸埃希氏菌ATCC25922+銅綠假單胞菌ATCC27853TSA半定量在XLD上＞10CFU菌落無色半透明，有黑心選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922在TSA上<100CFU-糞腸球菌ATCC29212亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）液體選擇性增菌生長率36℃±1℃18h～24h鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028+大腸埃希氏菌ATCC25922+銅綠假單胞菌ATCC27853TSA半定量在XLD上＞10CFU菌落無色半透明，有黑心選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922在TSA上<100CFU-糞腸球菌ATCC2921210%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯液體選擇性增菌生長率36℃±1℃18h～24h金黃色葡萄球菌ATCC6538+大腸埃希氏菌ATCC25922TSA半定量在Baird-Parker上＞10CFU菌落黑色凸起，周圍有一混濁帶，在其外層有一透明圈選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922在TSA上<100CFU-7.5%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯液體選擇性增菌生長率36℃±1℃18h～24h金黃色葡萄球菌ATCC6538+大腸埃希氏菌ATCC25922TSA半定量在Baird-Parker上＞10CFU菌落黑色凸起，周圍有一混濁帶，在其外層有一透明圈選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922在TSA上<100CFU-改良磷酸鹽緩沖液液體選擇性增菌生長率26℃±1℃48h～72h小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌CMCC(B)52204+糞腸球菌ATCC29212+銅綠假單胞菌ATCC27853TSA半定量在改良Y平板上>10CFU菌落圓形、無色透明，不粘稠選擇性金黃色葡萄球菌ATCC6538在TSA上<100CFU-糞腸球菌ATCC29212改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素液體選擇性增菌生長率44℃±0.5℃24h±2h阪崎腸桿菌ATCC29544+大腸埃希氏菌ATCC25922+糞腸球菌ATCC29212TSA半定量在阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基上＞10CFU綠－藍色菌落或按說明書判定選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922在TSA上<100CFU-糞腸球菌ATCC29212胰酪胨大豆多粘菌素肉湯液體選擇性增菌生長率30℃±1℃24h～48h蠟樣芽胞桿菌CMCC(B)63303+大腸埃希氏菌ATCC25922TSA半定量在MYP上＞10CFU菌落為微粉紅色，周圍有淡粉紅色沉淀環(huán)選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922在TSA上<100CFU-志賀氏菌增菌肉湯（Shigellabroth）液體選擇性增菌生長率41.5℃±0.5℃18h±2h厭氧培養(yǎng)福氏志賀氏菌CMCC（B）51572+金黃色葡萄球菌ATCC6538金黃色葡萄球菌ATCC6538TSA半定量在XLD上＞10CFU無色至粉紅色，半透明菌落選擇性在TSA上<100CFU標(biāo)基GN增菌液液體選擇性增菌生長率36℃±1℃8h福氏志賀氏菌CMCC（B）51572+糞腸球菌ATCC29212TSA半定量在HE瓊脂上＞10CFU菌落呈綠－藍色選擇性糞腸球菌ATCC29212在TSA上<100CFU-3%氯化鈉堿性蛋白胨水液體選擇性增菌生長率36℃±1℃8h副溶血性弧菌ATCC17802+大腸埃希氏菌ATCC259223%TSA半定量在弧菌顯色培養(yǎng)基平板上＞10CFU品紅色菌落或按說明書判定選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922TSA在TSA上<100CFU-改良EC肉湯（mEC+n）液體選擇性增菌生長率36℃±1℃18h～24h大腸桿菌O157：H7NCTC12900+糞腸球菌ATCC29212TSA半定量在CT-SMAC上＞10CFU菌落無色，中心灰褐色選擇性糞腸球菌ATCC29212在TSA上<100CFU-改良麥康凱（CT-MAC）肉湯液體選擇性增菌生長率36℃±1℃17h～19h大腸桿菌O157：H7NCTC12900+大腸埃希氏菌ATCC25922+金黃色葡萄球菌ATCC6538TSA半定量在CT-SMAC上＞10CFU菌落無色，中心灰褐色選擇性大腸埃希氏菌ATCC25922在TSA上<100CFU-金黃色葡萄球菌ATCC6538月桂基磺酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST）液體選擇性液體計數(shù)生長率36℃±1℃24h～48h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA半定量混濁度2，且氣體充滿管內(nèi)1/3弗氏檸檬酸桿菌ATCC43864選擇性糞腸球菌ATCC29212混濁度0（不生長）煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）液體選擇性液體計數(shù)生長率36℃±1℃24h～48h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA半定量混濁度2，且氣體充滿管內(nèi)1/3弗氏檸檬酸桿菌ATCC43864選擇性糞腸球菌ATCC29212混濁度0（不生長）或渾濁度1（微弱生長）不產(chǎn)氣EC肉湯液體選擇性液體計數(shù)生長率44.5℃±0.2℃24h～48h大腸埃希氏菌ATCC25922TSA半定量混濁度2，且氣體充滿管內(nèi)1/3選擇性糞腸球菌ATCC29212混濁度0（不生長）磷酸鹽緩沖液（PBS）液體懸浮培養(yǎng)基生長率20℃~25℃45min大腸埃希氏菌ATCC25922TSA定量接種前后菌落數(shù)變化在±50%金黃色葡萄球菌ATCC65383%氯化鈉溶液液體懸浮培養(yǎng)基生長率20℃~25℃45min副溶血性弧菌ATCC178023%TSA定量接種前后菌落數(shù)變化在±50%0.1%蛋白胨水液體懸浮培養(yǎng)基生長率20℃~25℃45min產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC13124哥倫比亞瓊脂定量接種前后菌落數(shù)變化在±50%緩沖甘油-氯化鈉溶液液體運輸培養(yǎng)基生長率-60℃24h產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC13124哥倫比亞瓊脂定量接種前后菌落數(shù)變化在±50%MuellerHinton血瓊脂固體藥敏試驗培養(yǎng)基生化特性36℃±1℃22h±2h微需氧培養(yǎng)空腸彎曲菌ATCC33291定性頭孢唑啉鈉紙片無抑菌圈，萘啶酮酸紙片有抑菌圈三糖鐵瓊脂（TSI）高層斜面鑒定生化特性36℃±1℃24h大腸埃希氏菌ATCC25922定性生長良好，A/A；產(chǎn)氣；不產(chǎn)硫化氫腸炎沙門氏菌CMCC(B)50335生長良好，K/A；產(chǎn)氣；產(chǎn)硫化氫福氏志賀氏菌CMCC(B)51572生長良好，K/A；不產(chǎn)氣；不產(chǎn)硫化氫銅綠假單胞菌ATCC27853生長良好，K/K；不產(chǎn)氣；不產(chǎn)硫化氫西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面鑒定生化特性36℃±1℃24h±2h肺炎克雷伯氏菌MCC(B)46117定性生長良好，培養(yǎng)基變藍宋內(nèi)志賀氏菌CMCC(B)51592生長不良或不長，培養(yǎng)基不變色尿素瓊脂(pH7.2)斜面鑒定生化特性36℃±1℃24h普通變形桿菌CMCC(B)49027定性生長良好，培養(yǎng)基變桃紅色大腸埃希氏菌ATCC25922生長良好，培養(yǎng)基變黃色醋酸鹽利用試驗斜面鑒定生化特性36℃±1℃24h～48h大腸埃希氏菌ATCC25922定性陽性，培養(yǎng)基變藍色宋內(nèi)志賀氏菌CMCC(B)51592陰性，培養(yǎng)基不變色（綠色）3%氯化鈉三糖鐵瓊脂（TSI）高層斜面鑒定生化特性36℃±1℃18h～24h副溶血性弧菌ATCC17802定性生長良好，斜面變紅，底部變黃溶藻弧菌ATCC33787生長良好，斜面或底部均變黃改良克氏雙糖高層斜面鑒定生化特性26℃±1℃24h小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌CMCC(B)52204定性生長良好，A/A；不產(chǎn)氣；不產(chǎn)硫化氫鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028生長良好，A/A；產(chǎn)氣；產(chǎn)硫化氫福氏志賀氏菌CMCC(B)51572生長良好，K/A；不產(chǎn)氣；不產(chǎn)硫化氫糞產(chǎn)堿桿菌CMCC(B)40001生長良好，K/K；不產(chǎn)氣；不產(chǎn)硫化氫鄰硝基酚β-D半乳糖苷培養(yǎng)基（ONPG）液體鑒定生化特性36℃±1℃24h肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117定性陽性，培養(yǎng)基變深黃色傷寒沙門氏菌CMCC（B）50071陰性，培養(yǎng)基無色或淺黃色蛋白胨水（靛基質(zhì)試驗）液體鑒定實驗試劑生化特性36℃±1℃18h～24h大腸埃希氏菌ATCC25922定性陽性，滴加靛基質(zhì)試劑，顯紅色產(chǎn)氣腸桿菌ATCC13048陰性，滴加靛基質(zhì)試劑，黃色氰化鉀培養(yǎng)基（KCN）液體鑒定生化特性36℃±1℃24h普通變形桿菌CMCC(B)49027定性生長良好，培養(yǎng)基混濁傷寒沙門氏菌CMCC（B）50071不生長，澄清氰化鉀對照培養(yǎng)基（KCN）液體鑒定生化特性36℃±1℃24h普通變形桿菌CMCC(B)49027定性生長良好，培養(yǎng)基混濁傷寒沙門氏菌CMCC（B）50071生長良好，培養(yǎng)基混濁葡萄糖銨培養(yǎng)基斜面鑒定生化特性36℃±1℃20h～24h鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028定性生長良好，培養(yǎng)基變黃福氏志賀氏菌CMCC(B)51572不生長，培養(yǎng)基不變色緩沖葡萄糖蛋白胨水（甲基紅(MR)和V-P試驗）液體鑒定實驗試劑生化特性36℃±1℃48h大腸埃希氏菌ATCC25922定性生長良好，滴加MR試劑1滴，培養(yǎng)基變紅。滴加VP甲液0.5mL和乙液0.2mL，20min內(nèi)液面不顯紅色產(chǎn)氣腸桿菌ATCC13048生長良好，滴加MR試劑1滴，培養(yǎng)基變紅。滴加P甲液0.5mL和乙液0.2mL，20min內(nèi)液面顯紅色鼠李糖發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h±2h單核細胞增生李斯特氏菌ATCC19115定性陽性，培養(yǎng)基變黃傷寒沙門氏菌CMCC（B）50071陰性，培養(yǎng)基顏色不變0.5%蔗糖發(fā)酵管0.5%纖維二糖發(fā)酵管0.5%麥芽糖發(fā)酵管0.5%甘露醇發(fā)酵管0.5%水楊苷發(fā)酵管0.5%山梨醇發(fā)酵管0.5%棉子糖發(fā)酵管七葉苷發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h植物乳桿菌GIM1.140定性陽性，培養(yǎng)基變黃德氏乳桿菌保加利亞亞種CICC6032陰性，培養(yǎng)基紫色不變L-賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基液體鑒定生化特性36℃±1℃24h±2h以滅菌液體石蠟覆蓋培養(yǎng)基表面鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028定性陽性，培養(yǎng)基呈紫色普通變形桿菌CMCC(B)49027陰性，培養(yǎng)基呈黃色L-鳥氨酸脫羧酶培養(yǎng)基液體鑒定生化特性36℃±1℃24h±2h以滅菌液體石蠟覆蓋培養(yǎng)基表面鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028定性陽性，培養(yǎng)基呈紫色普通變形桿菌CMCC(B)49027陰性，培養(yǎng)基呈黃色氨基酸脫羧酶對照液體鑒定生化特性36℃±1℃24h±2h以滅菌液體石蠟覆蓋培養(yǎng)基表面與各種氨基酸脫羧酶的陽性和陰性質(zhì)控菌株對應(yīng)定性生長良好，培養(yǎng)基呈黃色L-精氨酸雙水解酶培養(yǎng)基液體鑒定生化特性36℃±1℃24h±2h以滅菌液體石蠟覆蓋培養(yǎng)基表面鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028定性陽性，培養(yǎng)基呈黃色普通變形桿菌CMCC(B)49027陰性，培養(yǎng)基呈黃色精氨酸雙水解酶對照液體鑒定生化特性36℃±1℃24h±2h以滅菌液體石蠟覆蓋培養(yǎng)基表面鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028定性生長良好，培養(yǎng)基呈黃色硝酸鹽肉湯液體鑒定生化特性30℃±1℃24h～48h蠟樣芽胞桿菌CMCC(B)63303定性陽性，滴加硝酸鹽還原試劑甲、乙液各2～3滴，培養(yǎng)基變紅棕色硝酸鹽陰性不動桿菌CMCC(B)25001陰性，滴加硝酸鹽還原試劑甲、乙液各2～3滴，培養(yǎng)基不變色葡萄糖發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h大腸埃希氏菌ATCC25922定性陽性，培養(yǎng)基變黃糞產(chǎn)堿桿菌CMCC(B)40001陰性，培養(yǎng)基不變色甘露醇發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h大腸埃希氏菌ATCC25922定性陽性，培養(yǎng)基變黃色普通變形桿菌CMCC(B)49027陰性，培養(yǎng)基顏色不變木糖發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h肺炎克雷伯氏菌MCC(B)46117定性陽性，培養(yǎng)基變黃色單核細胞增生李斯特氏菌ATCC19115陰性，培養(yǎng)基顏色不變蔗糖發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h普通變形桿菌CMCC(B)49027定性陽性，培養(yǎng)基呈黃色鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028陰性，培養(yǎng)基顏色不變纖維二糖發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h肺炎克雷伯氏菌MCC(B)46117定性陽性，培養(yǎng)基呈黃色大腸埃希氏菌ATCC25922陰性，培養(yǎng)基顏色不變麥芽糖發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h傷寒沙門氏菌CMCC（B）50071定性陽性，培養(yǎng)基呈黃色銅綠假單胞菌ATCC9027陰性，培養(yǎng)基顏色不變水楊苷發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h肺炎克雷伯氏菌MCC(B)46117定性陽性，培養(yǎng)基變黃傷寒沙門氏菌CMCC（B）50071陰性，培養(yǎng)基不變色山梨醇發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h肺炎克雷伯氏菌MCC(B)46117定性陽性，培養(yǎng)基變黃色宋內(nèi)志賀氏菌CMCC(B)51592陰性，培養(yǎng)基顏色不變棉籽糖液體鑒定生化特性36℃±1℃24h肺炎克雷伯氏菌MCC(B)46117定性陽性，培養(yǎng)基呈黃色普通變形桿菌CMCC(B)49027陰性，培養(yǎng)基顏色不變粘液酸利用試驗液體鑒定生化特性36℃±1℃24h～48h大腸埃希氏菌ATCC25922定性陽性，培養(yǎng)基呈黃色福氏志賀氏菌CMCC(B)51572陰性，培養(yǎng)基顏色不變含鐵牛乳培養(yǎng)基液體鑒定生化特性46℃±0.5℃2h與5h均觀察產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC13124定性（接種生長旺盛的FT培養(yǎng)液1mL）暴烈發(fā)酵大腸埃希氏菌ATCC25922不發(fā)酵無鹽胨水液體鑒定生化特性36℃±1℃24h霍亂弧菌VbO定性生長良好，混濁副溶血性弧菌ATCC17802不生長，澄清3%氯化鈉胨水液體鑒定生化特性36℃±1℃24h副溶血性弧菌ATCC17802定性生長良好，混濁創(chuàng)傷弧菌ATCC27562生長良好，混濁6%氯化鈉胨水液體鑒定生化特性36℃±1℃24h副溶血性弧菌ATCC17802定性生長良好，混濁嗜水氣單胞菌As1.172不生長，澄清8%氯化鈉胨水液體鑒定生化特性36℃±1℃24h副溶血性弧菌ATCC17802定性生長良好，混濁創(chuàng)傷弧菌ATCC27562不生長，澄清10%氯化鈉胨水液體鑒定生化特性36℃±1℃24h溶藻弧菌ATCC33787定性生長良好，混濁副溶血性弧菌ATCC17802不生長，澄清3.0%氯化鈉甘露醇液體鑒定生化特性36℃±1℃24h～48h副溶血性弧菌ATCC17802定性陽性，培養(yǎng)基呈黃色普通變形桿菌CMCC(B)49027陰性，培養(yǎng)基顏色不變3.0%氯化鈉賴氨酸脫羧酶液體鑒定生化特性36℃±1℃24h～48h以滅菌液體石蠟覆蓋培養(yǎng)基表面副溶血性弧菌ATCC17802定性陽性，培養(yǎng)基變紫色普通變形桿菌CMCC(B)49027陰性，培養(yǎng)基變黃色3.0%氯化鈉氨基酸脫羧酶對照液體鑒定生化特性36℃±1℃24h～48h副溶血性弧菌ATCC17802定性生長良好，培養(yǎng)基變黃色普通變形桿菌CMCC(B)49027生長良好，培養(yǎng)基變黃色七葉苷發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h肺炎克雷伯氏菌MCC(B)46117定性陽性，培養(yǎng)基變棕黑色奇異變形桿菌CMCC(B)49005陰性，培養(yǎng)基顏色不變3.0%氯化鈉MR-VP培養(yǎng)基液體鑒定生化特性36℃±1℃48h產(chǎn)氣腸桿菌ATCC13048定性MR試驗陰性，滴加MR試劑1滴培養(yǎng)基呈黃色副溶血性弧菌ATCC17802MR試驗陽性，滴加MR試劑1滴培養(yǎng)基V-P試驗陰性，滴加0.6mL甲液及0.2mL乙液，培養(yǎng)基不變色溶藻弧菌ATCC33787V-P試驗陽性，滴加0.6mL甲液及0.2mL乙液，培養(yǎng)基呈紅色乳糖發(fā)酵管液體鑒定生化特性36℃±1℃24h大腸埃希氏菌ATCC25922定性陽性，培養(yǎng)基變黃色傷寒沙門氏菌CMCC（B）50071陰性，培養(yǎng)基顏色不變Koser氏檸檬酸鹽肉湯液體鑒定生化特性36℃±1℃18h～96h弗氏