親和層析法純化蛋白質虛擬仿真軟件操作手冊

親和層析法純化蛋白質虛擬仿真軟

件操作手冊

(VI.0)

目錄

1.背景概述1

2.系統登錄1

3.實驗介紹模塊2

4.實驗操作模塊5

5.實驗評價模塊錯誤!未定義書簽。

6.實驗報告模塊19

1.背景概述

“親和層析法純化蛋白質虛擬仿真實驗”，是基于嘉興學院核心課程進行設計開發(fā)虛擬

仿真軟件。在專業(yè)建設方面，由于進口層析設備費用昂貴，維護困難等原因。本著“以虛補

實”的教學宗旨，故針對親和層析法純化蛋白質實驗進行仿真開發(fā)。仿真軟件不僅彌補了教

學方面的缺失，也同M滿足了學生隨時隨地的進行操作實習的需求，而不再受困于場地和設

備的局限。也豐富了老師的教學手段，為人才目標的實現起到了保駕護航的作用！

2.系統登錄

>在文件夾或者桌面雙擊軟件程序圖標e打開進入系統界面；

>在系統登錄界面輸入對應賬號（admin）和密碼（123456）.點擊登錄系統.

>系統登錄成功后將直接跳轉到軟件模塊登錄接口界面（若無法進入該界面或無法登陸等

情況請于技術人員聯系）；登陸成功界面如圖所示:

3.實驗介紹模塊

實驗介紹模塊包括：實驗原理、親和層析的特點、實驗常見問題及解決方案、實驗設備介紹

等內容。

>點擊進入實驗介紹模塊后，如圖所示:

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?>實弱原理

親和層析是利用生物大分子所具有的專一親和力而設計的純化技術。6個組氨

酸殘基組合的融合標簽（His-tag）在原核蛋白表達中的應用最為顯著。His-tag可

結合在目的蛋白的C末端或N末端，形成特殊的結構，使之與金屬離子發(fā)生相互作

用，從而對蛋白質進行親和純化。

1/5

>點擊》后進行下一頁查看，如圖所示:

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?)避和居所的特點

親合層析具有配體簡單、吸附量大、分離條件溫和、通用性強等特點，所以可

選擇范圍廣，高鹽，存在變性劑以及去垢劑的上樣條件下進行純化，His-Tag正漸

成為分離純化蛋白質最有效的技術之一。His-tag作為蛋白純化時的首選標簽，其

優(yōu)勢在于：

1.N-端的His-Tag與細菌的轉錄翻譯機制兼容，有利于蛋白表達；?

2.His-tag對目的蛋白本身特性幾乎沒有影響，不會改變目的蛋白本身的可溶性和

生物學功能；

3.His?tag非常小，在融合蛋白結晶后對蛋白的結構沒有影響；His-tag的免疫原性

相對較低，可將純化的蛋白直接注射入動物體內進行免疫并制備抗體；

2/5

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?＞益和居所的特點.

4.與其它親和標簽構建成雙親和標簽，并可應用于多種表達系統；

His-tag融合蛋白的適用范圍也較廣，既可以在非離子型表面活性劑存在的條件下

/純化,也可以在變性條件下進行純化。前者通常用來純化疏水性強的目的蛋白，＞

X而后者則通常純化包涵體蛋白。'

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?>］實典常見問題及解決方案

蛋白不吸附:是本實驗最常見的問題，通常的原因有

①是標簽不暴露，被折疊在蛋白的結構內，可以在變性的條件下去純化，

②可以選擇作用力更強，配基密度更高的填料

③樣品的pH過低或者沉淀導致不能吸附，所以樣品和緩沖液的pH要盡量一致，避免沉淀。

④加吐溫可以可以降低表面張力，同時也可以降低疏水相互作用力了，使蛋白不會因為別

的作用力而被吸附到柱子上，同時增強了洗脫能力。

⑤緩沖液條件不正確，檢查漂洗緩沖液的pH值和組成，逸保體系中不含鰲合劑及還原劑。

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PDF文檔

A查看至實驗設名介紹，點擊1―，依次單擊查看相關PDF文檔。

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>視頻操作內容點擊"，進行視須觀看及暫停:

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4.實驗操作模塊

實驗操作內容主要由層析實驗、電泳實驗兩部分組成。

>在軟件主界面單擊實驗操作按鈕，進入實驗操作模塊:

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>實現操作引導如下圖所示示:

X

I操作幫助向前移動

按下井拖拽

點擊物品控制方向

Esc退出場景進行操作

W

Tab切換人稱視角

ASD

向左移動

向后移動向右移動

Ctrl第一人稱視角蹲下

1.通過鍵盤w、A、S、D鍵進行對應的前、左、后、右方向的移動操作；Tab鍵可進行

第一人稱與第三人稱切換；Ctrl鍵在第一《孚華軍可以蹲下，降低視角。

2.按住鼠標右鍵，上下左右拖動，可進行視角的修正；按住鼠標左鍵可進行觸發(fā)操作。

3.工具欄：實騏步驟中涉及清洗工具、物料桶、其他輔助設備均在工具欄獲取

4.全屏模式：界面右下角箭頭按鈕或快捷鍵P可切換至全屏，獲得最好體驗

根據左下角步驟提示和實時箭頭引導，進行交互操作，鼠標右鍵為功能觸發(fā)健，左鍵為

功能執(zhí)行鍵:

根據引導完成樣品的準備工作。

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>上樣前進行開機、裝柱、裝緩沖液。

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>根據理論教學內容填寫正確的洗脫液組分:

>按照引導文字進行上樣處理。

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>學習查看相關知識點。

>學習親和層析原理:

>查看親和層析圖譜:

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>正確填寫電泳樣品的成分比例;

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>電泳樣品的配置:

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>電泳上樣:

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>安裝電泳儀:

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>調節(jié)電壓開始電泳:

>拆洗電泳板:

>剝離電泳膠:

>染色處理:

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>搖床染色2小時:

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>染色液回收:

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>脫色40min處理:

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4

>杳看條帶:

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5.實驗評價模塊

實驗評價模塊主要由實驗評價試題組成。

>在軟件主界面單擊實驗操作按鈕，進入實驗評價模塊:

>試題由單選、多選題組成，在選擇答案后進行提交:

6.實驗報告模塊:

實驗報告模塊主要統計實驗操作和實驗評價中