微生物檢驗技能-細菌的生化試驗

原理：有觸酶的細菌能催化過氧化氫生成水和初生態(tài)氧，繼而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。觸酶試驗方法：用接種環(huán)取備檢菌少許，置于潔凈的玻片上，滴加3%的過氧化氫1～2滴，觀察結(jié)果。試管法：用潔凈的玻棒蘸取待檢菌少許，置于裝有3%過氧化氫的試管內(nèi)，觀察結(jié)果。應(yīng)用：用于革蘭陽性球菌初步分屬。觸酶試驗方法觸酶試驗結(jié)果原理：膽鹽、取氧膽酸鈉和硫磺膽酸鈉能選擇性地溶解肺炎鏈球菌，其它鏈球菌則能耐受這些試劑。膽汁溶菌試驗方法：平板法：取膽酸鈉溶液一環(huán)，放在平板的菌落上，35℃30min觀察結(jié)果。試管法：于0.9ml培養(yǎng)了18～24小時的菌液中，加入取氧膽酸鈉試劑0.1ml或牛膽鹽0.2ml混勻，37℃水浴10～30min，觀察結(jié)果。應(yīng)用：主要用于肺炎鏈球菌與甲型鏈球菌。膽汁溶菌試驗方法膽汁溶菌試驗結(jié)果細菌的生物化學(xué)試驗知道細菌鑒定常用的生化試驗原理學(xué)會細菌鑒定常用的生化試驗方法能正確判斷常用生化試驗結(jié)果糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗葡萄糖氧化／發(fā)酵試驗（O/F試驗）β-半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）七葉苷水解試驗甲基紅試驗V-P試驗碳水化合物代謝試驗靛基質(zhì)試驗硫化氫試驗苯丙氨酸脫氨酶試驗?zāi)蛩孛冈囼灥鞍踪|(zhì)類代謝試驗枸櫞酸鹽利用試驗硝酸鹽還原試驗有機鹽類試驗細胞色素氧化酶試驗過氧化氫酶試驗?zāi)堂冈囼灻割愒囼災(zāi)懼芫囼濩AMP試驗氫氧化鉀拉絲試驗其他生化試驗原理：含有色氨酸酶的細菌，能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，吲哚能與對二甲氨基苯甲醛作用，形成紅色玫瑰吲哚。吲哚（靛基質(zhì)）試驗方法：將待檢菌接種于胰蛋白胨水中，35℃培養(yǎng)24～48h，取出后沿試管壁緩慢加入靛基質(zhì)試劑數(shù)滴，在兩液面觀察結(jié)果。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中產(chǎn)氣腸桿菌與大腸埃希菌的鑒別，常與MR試驗聯(lián)用。吲哚（靛基質(zhì)）試驗方法吲哚（靛基質(zhì)）試驗結(jié)果枸櫞酸鹽利用試驗原理：能利用枸櫞酸鹽的細菌，也能利用銨鹽作為唯一的碳源，分解后生成碳酸鈉和氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍由淺綠色變?yōu)樯钏{色。方法：將待檢菌接種于含有枸櫞酸鹽和銨鹽的西蒙和柯氏培養(yǎng)基培養(yǎng)18～24h后，觀察結(jié)果。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科屬間的鑒別。枸櫞酸鹽利用試驗方法藍色為陽性綠色為陰性+-枸櫞酸鹽利用試驗結(jié)果硫化氫試驗原理：有些細菌能分解含硫氨基酸，產(chǎn)生H2S與培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽發(fā)生反應(yīng)，生成黑色的硫化鉛或硫化亞鐵沉淀。

方法：將細菌穿刺接種到醋酸鉛培養(yǎng)基中，35℃、24～48h，觀察結(jié)果。應(yīng)用：腸桿菌科的屬間鑒定。硫化氫試驗方法硫化氫試驗結(jié)果原理：多糖－→單糖－→丙酮酸－→酸性產(chǎn)物(或產(chǎn)酸產(chǎn)氣)－→pH↓

－→指示劑呈酸性變色(若產(chǎn)氣者有氣泡出現(xiàn))。糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗方法

將純種細菌以無菌操作接種到含有指示劑的培養(yǎng)基中，置35℃溫箱培養(yǎng)數(shù)小時至兩周，觀察結(jié)果。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科的鑒定。糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗方法糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗結(jié)果氧化酶試驗原理：某些細菌具有細胞色素氧化酶，能將二甲基對苯二胺或四甲基對苯二胺試劑氧化成紫紅色醌類化合物方法：

濾紙法：用潔凈濾紙蘸取菌落，加一滴試劑，觀察結(jié)果菌落法：直接在菌落上加試劑，觀察結(jié)果紙片法：使用試劑浸泡制成的試劑紙片，取足夠的菌落，觀察結(jié)果。應(yīng)用：用于科別鑒定試驗。氧化酶試驗方法濾紙法：陽性結(jié)果紙片法：陽性、陰性結(jié)果氧化酶試驗結(jié)果原理：產(chǎn)生尿素酶的細菌,能分解尿素產(chǎn)生氨和CO2,氨在溶液中形成碳酸銨，使培養(yǎng)基變堿，酚紅指示劑變紅。尿素分解試驗方法：將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)18～24h取出觀察。應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒別。尿素分解試驗對照陽性陰性尿素分解試驗結(jié)果原理：細菌分解葡萄糖對O2需求不同，氧化型細菌只在有氧環(huán)境中分解葡萄糖，發(fā)酵型細菌可在有氧、無氧環(huán)境中分解葡萄糖，產(chǎn)堿型細菌在有氧、無氧環(huán)境中都不分解葡萄糖。葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗方法：取2支HL葡萄糖培養(yǎng)管煮沸驅(qū)氧，待冷后接種菌種。一管管口敞開，一管用液體石蠟封管，培養(yǎng)18~24h觀察結(jié)果。應(yīng)用：主要用于革蘭陰性桿菌的鑒別。葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗方法

發(fā)酵型兩管均分解葡萄糖葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗結(jié)果葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗結(jié)果

氧化型開管分解葡萄糖液體石蠟封閉管不分解葡萄糖。產(chǎn)堿型開管、封管均不分解葡萄糖葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗結(jié)果血漿凝固酶試驗原理：有些細菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可以使人和動物血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白，從而使血漿凝固。方法：玻片法：取潔凈玻片一張，加生理鹽水兩小滴于玻片兩端，用接種環(huán)挑取待檢菌落和對照菌均勻涂于鹽水中，制成濃菌液，加兔或人血漿一滴于菌液中，觀察結(jié)果。試管法：于3支試管中分別加入1:4稀釋的血漿0.5ml，1支管加入待檢菌肉湯培養(yǎng)物0.5ml,另兩支分別加陰陽性對照菌肉湯培養(yǎng)物0.5ml，35℃培養(yǎng)3～4h后觀察結(jié)果。應(yīng)用：主要用于金葡菌的鑒定。血漿凝固酶試驗方法血漿凝固酶試驗結(jié)果血漿凝固酶試驗結(jié)果CAMP試驗原理：B群鏈球菌能產(chǎn)生一種胞外因子——CAMP,它能增強金黃色葡萄球菌β-溶血毒素的活性，因此，在兩菌交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血增強區(qū)。方法：取血平板一塊，用產(chǎn)生β-溶血毒素的金葡菌在中央劃一道線，將待檢菌據(jù)此線0.5cm處垂直劃線。35℃18~24小時培養(yǎng)，觀察結(jié)果。應(yīng)用：用于鑒定B群鏈球菌。CAMP試驗方法CAMP試驗結(jié)果苯丙氨酸脫氨酶試驗原理：有苯丙氨酸脫氨酶的細菌，可以使苯丙氨酸脫氨形成苯丙酮酸，苯丙銅酸與三氯化鐵作用形成綠色化合物。方法：瓊脂斜面法：將待檢細菌接種到苯丙氨酸瓊脂斜面上，35℃培養(yǎng)24～48h，取出，將三氯化鐵試劑4～5滴滴于斜面上，觀察結(jié)果?？焖偌埰ǎ簩⒋龣z菌涂于苯丙氨酸紙片上，孵育15min，取出，滴加三氯化鐵試劑，立即觀察結(jié)果。應(yīng)用：多用于腸桿菌科的鑒定。苯丙氨酸脫氨酶試驗方法

綠色陽性黃色陰性+-苯丙氨酸脫氨酶試驗結(jié)果說出糖發(fā)酵試驗的原理及應(yīng)用。說出VP試驗原理及應(yīng)用。說出硝酸鹽試驗原理及應(yīng)用。說出觸酶試驗原理及應(yīng)用。說出氧化酶試驗原理及應(yīng)用。歸納細菌生化試驗的類型。原理：七葉苷可以被細菌分解為葡萄糖和七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的Fe2+反應(yīng)，形成黑色化合物，使培養(yǎng)基變黑。七葉苷水解試驗方法：將待檢菌接種于七葉苷培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果。

應(yīng)用：主要用于D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別。

七葉苷水解試驗方法七葉苷水解試驗甲基紅試驗原理：細菌分解培養(yǎng)基中的葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸→培養(yǎng)基pH↓4.4以下→甲基紅試劑→培養(yǎng)基變紅。方法：

將待檢菌種接種于葡萄糖蛋白胨水中,35℃培養(yǎng)6～18小時后,往培養(yǎng)基中加入甲基紅指示劑少許,觀察結(jié)果。應(yīng)用：主要用于大腸和產(chǎn)氣腸桿菌鑒定。甲基紅試驗方法空白對照陰性陽性甲基紅試驗結(jié)果原理：使硝酸鹽還原的細菌能從硝酸鹽中獲得氧，使其成為亞硝酸鹽或其它還原物。培養(yǎng)基中的亞硝酸基能與α-萘氨和苯磺酸形成紅色的N-α-萘氨偶氮苯磺酸。若出現(xiàn)紅色現(xiàn)象則說明該菌還原硝酸鹽。

硝酸鹽還原試驗方法：取一環(huán)待檢菌接種到硝酸鹽瓊脂斜面上，35℃培養(yǎng)18~24小時，然后依次加入含α-萘氨和對氨基苯磺酸的試劑各1mL，30s后觀察結(jié)果。應(yīng)用：有助于鑒別腸桿菌科、嗜血桿菌屬、奈瑟菌屬、布蘭漢菌屬、假單胞菌屬等。硝酸鹽還原試驗方法紅色為陽性無色為陰性+-硝酸鹽還原試驗結(jié)果無色+鋅粉→無色：陽性無色+鋅粉→紅色：陰性+-硝酸鹽還原試驗結(jié)果原理：某些細菌分解糖類→丙酮酸→繼續(xù)脫羧→乙酰甲基甲醇（堿性）→空氣氧化→雙乙酰+α-萘酚、肌酸→紅色化合物。V-P試驗方法：將待檢菌種接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)48h后按每毫升培養(yǎng)基加入0.1ml含2％肌酸或肌酐的40％KOH溶液,數(shù)分鐘或數(shù)小時后觀察結(jié)果。應(yīng)用：主要用于鑒別大腸和產(chǎn)氣腸桿菌。V-P試驗方法空白對照陰性陽性V-P試驗結(jié)果原理：有β-半乳糖苷酶的細菌，可以分解鄰硝基酚β-半乳糖苷(ONPG),而釋放黃色的鄰硝基酚。