臨床常見病毒的實驗室檢查（微生物學(xué)檢驗技術(shù)課件）

肝炎病毒掌握甲肝、乙肝病毒的主要生物學(xué)特點、傳播途徑掌握乙肝病毒臨床檢驗和防治原則熟悉其他肝炎病毒的致病性和傳播途徑了解肝炎道病毒結(jié)構(gòu)肝炎病毒一、甲型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性1、形態(tài)結(jié)構(gòu)屬小RNA病毒科,直徑約為27nm，呈球形，二十面體立體對稱甲型肝炎病毒形態(tài)模式圖第二節(jié)肝炎病毒HAV電鏡圖肝炎病毒2、抵抗力耐受乙醚、氯仿等脂溶劑耐酸：在pH3的酸性環(huán)境中穩(wěn)定不耐熱：100℃5

min可使之滅活在海水、淡水、毛蚶、泥沙中存活數(shù)天至數(shù)月肝炎病毒3、培養(yǎng)特性易感動物：黑猩猩，狨猴，鷹面猴，短尾猴允許性細胞：Vero、恒河猴胚腎細胞（FRHK-4）、人肝癌細胞株（PLC/PRF/S）等在培養(yǎng)細胞中生長緩慢，無CPE肝炎病毒（二）微生物學(xué)檢驗HAV-IgM檢測：早期、快速診斷最可靠的血清學(xué)指標HAV-IgG檢測：主要用于了解既往感染史、疫苗免疫效果評價或流行病學(xué)調(diào)查分離培養(yǎng)：原代肝細胞或恒河猴胚腎傳代株細胞對HAV敏感，生長緩慢，不引起細胞裂解肝炎病毒（三）臨床意義傳染源：主要為急性患者和隱性感染者傳播途徑：糞－口途徑傳播肝炎病毒HBV流行久遠、傳播廣泛，是全球性公共衛(wèi)生問題全球3.5億人攜帶HBV我國為高流行區(qū)感染率：60%

HBsAg攜帶率：8%~10%慢性乙肝病人：1000萬80%原發(fā)性肝癌與HBV慢性感染有關(guān)

肝炎病毒二、乙型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性1．形態(tài)與結(jié)構(gòu)

①小球形顆粒:直徑22nm；②管形顆粒:直徑22nm，長度在50～700nm之間；③大球形顆粒:即Dane顆粒，直徑42nm。肝炎病毒肝炎病毒2.抗原組成（1）表面抗原HBsAg存在于三型顆粒中,是HBV感染的主要標志pres1和preS2抗原的檢作為病毒復(fù)制的指標抗-preS抗體陽性常見于急性乙肝的恢復(fù)期，表示病毒正在或已經(jīng)被清除?？?HBs：保護性抗體（中和抗體）乙肝痊愈（臨床）或免疫成功（接種疫苗）的標志肝炎病毒（2）核心抗原HBcAg僅存在于Dane顆粒中，刺激機體產(chǎn)生抗HBc（IgG、IgM）可在感染的肝細胞核心部位的表面存在，表明病毒在復(fù)制到血液中即被降解為HBeAg，一般血清學(xué)方法檢測不到HBcAg，而只能檢測到抗-HBc。抗-HBc：對機體無保護作用抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動的標志抗HBc-IgG：持續(xù)時間長凡有過HBV感染者均可陽性，并可終身伴隨肝炎病毒（3）e抗原HBeAg僅存在于Dane顆粒中，HBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物，游離存在于血液中，為病毒復(fù)制及強傳染性的指標，產(chǎn)生抗－HBe，是預(yù)后良好的征象。抗-HBe隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)抗-HBe的出現(xiàn)標志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低保護作用？肝炎病毒（4）PreS1、PreS2與HBV-DNA成正比是病毒復(fù)制的指標

抗-PreS1、抗-PreS2在恢復(fù)期的早期出現(xiàn)陽性提示病毒正在或已經(jīng)被清除是預(yù)后良好的指標肝炎病毒（二）微生物學(xué)檢驗HBV抗原、抗體檢測血清HBV-DNA檢測血清DNA多聚酶檢測肝炎病毒（三）臨床意義傳染源：患者或無癥狀HBsAg攜帶者

傳播途徑：密切接觸、血液及體液、母嬰傳播乙型肝炎的臨床表現(xiàn)呈多樣性，可由無癥狀攜帶至急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎等。病毒不僅存在于肝內(nèi)，也存在于脾臟和血細胞等。一般認為，病毒在細胞內(nèi)增殖對肝細胞的直接破壞作用不大，而機體對肝臟的免疫病理損害才是引起肝炎發(fā)生的主要原因。肝炎病毒三、丙型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性有包膜的單正鏈RNA病毒。病毒體呈球形，直徑為30～60nm（二）微生物學(xué)檢驗1.檢測病毒抗體：用ELISA法檢測抗-HCV2.檢測病毒RNA：因HCV在血液中含量很少，常用敏感的RT-PCR法肝炎病毒（三）臨床意義主要通過血液/體液傳播，其他如性傳播、垂直傳播是引起輸血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因HCV感染極易轉(zhuǎn)為慢性無癥狀HCV攜帶者和慢性丙肝者多見人群普遍易感，HCV感染的母親所生嬰兒感染率高誘發(fā)肝外損傷：腎小球腎炎免疫力不牢固肝炎病毒四、丁型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性

HDV是一種缺陷病毒由HBsAg構(gòu)成其外殼HDV定位于肝細胞核內(nèi)在血液中由HBsAg包被形成35-37nm顆粒單負鏈環(huán)狀RNAHDV結(jié)構(gòu)模式圖

肝炎病毒（二）微生物學(xué)檢驗

HDAg是HDV感染的直接標志

抗-HD抗體檢測抗HDV-IgM：是HDV早期感染標志抗HDV-IgG：是HDV既往感染的標志慢性HDV感染時，兩種抗體可長期共存

HDV-RNA HDVRNA是HDV存在及復(fù)制的一個有用指標肝炎病毒（三）臨床意義只能感染HBsAg陽性的病人

共同感染(coinfection)：與HBV同時感染；

重疊感染(superinfection)：在慢性乙型肝炎或HBsAg攜帶者的基礎(chǔ)上再感染HDV。肝炎病毒五、戊型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性屬杯狀病毒科，球形，無包膜，直徑32～34nm，單正鏈RNA一個血清型（二）微生物學(xué)檢驗檢測HEV：電鏡或免疫電鏡觀察檢測抗-HEV抗HEV-IgM：是近期內(nèi)HEV感染的標志，有早期診斷價值抗HEV-IgG：HEV感染后可長期存在，可用于流行病學(xué)調(diào)查HEVRNA肝炎病毒（三）臨床意義主要通過糞-口途徑傳播，患者多見于20～40歲成年人，潛伏期為2～9w，多數(shù)患者于病后6w即好轉(zhuǎn)或痊愈。少數(shù)患者可表現(xiàn)為重癥肝炎，甚至可導(dǎo)致死亡。孕婦感染時，發(fā)病率高，病情嚴重，常發(fā)生流產(chǎn)或死產(chǎn)。HEV致病機制尚不明了，可能是病毒本身作用及機體免疫應(yīng)答造成肝細胞損傷。病后有一定免疫力。肝炎病毒六、其他肝炎相關(guān)病毒1.庚型肝炎病毒

屬黃病毒科，為單股正鏈RNA。主要通過輸血等非腸道途徑傳播，呈全球分布，我國主要在非甲至戊型肝炎病人、獻血員、血透病人、器官移植患者及肝癌患者中存在。2.TT型肝炎病毒

是從一例日本輸血后非甲至庚型肝炎病人（TT）血液中發(fā)現(xiàn)的一類新型DNA病毒，屬細小DNA病毒科，通過血液和血制品傳播，也可經(jīng)消化道傳播。逆轉(zhuǎn)錄病毒掌握HIV病毒的主要生物學(xué)特點掌握HIV防治原則掌握HIV病毒的傳播途徑熟悉HIV感染的檢驗

反轉(zhuǎn)錄病毒包括腫瘤病毒亞科、泡沫病毒亞科和慢病毒亞科人類嗜T細胞病毒人類免疫缺陷病毒（HIV）

HIV-I型和HIV-II型

獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）中國AIDS流行現(xiàn)狀截至2014年2月28日，我國累計報告報告的HIV/AIDS587182例，死亡138956例。現(xiàn)存活艾滋病病毒感染者271624例，艾滋病病人176602例。我國艾滋病疫情總體上保持低流行態(tài)勢，但依然呈上升趨勢，幅度較以前有所減緩。據(jù)統(tǒng)計，自2005年至今，性傳播比例持續(xù)攀升。2014年3月新發(fā)現(xiàn)的HIV/AIDS中，異性性傳播4515例（69.8%），同性性傳播1260例（19.5%），注射毒品傳播430例（6.6%），母嬰傳播36例（0.6%），性接觸加注射毒品傳播13例（0.2%），既往輸血及使用血制品傳播11例（0.2%），既往采血漿傳播5例（0.1%），傳播途徑不詳203例（3.1%）。50歲以上群體和學(xué)生群體所占比例上升，這也是我國HIV傳播的新特點。知識拓展

反轉(zhuǎn)錄病毒一、人類免疫缺陷病毒（一）生物學(xué)特性1．形態(tài)與結(jié)構(gòu)RNA，有包膜球形病毒。

關(guān)鍵結(jié)構(gòu)：gp120gp412．HIV復(fù)制（1）吸附----gp120+CD4（2）穿入和脫殼（3）生物合成（4）裝配與釋放

反轉(zhuǎn)錄病毒

3．HIV的理化特性對熱敏感56℃處理30分鐘失去感染性，但不能完全滅活血清中的HIV

滅活方法是100℃20分鐘對化學(xué)因素敏感，在室溫下70%酒精只需1分鐘即不能檢出活性；對紫外線或γ射線不敏感，因此紫外線或γ射線不能滅活HIV病毒。反轉(zhuǎn)錄病毒反轉(zhuǎn)錄病毒（二）微生物學(xué)檢驗1．標本采集

采集血液、體液標本2．HIV檢驗

包括HIV抗體、P24抗原、HIV病毒載量、CD4+T細胞計數(shù)等

抗體檢測是診斷HIV感染的唯一標準（1)HIV-1P24

HIV-1P24------可用于“窗口期”及HIV-1抗體陽性的母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷（2）血清抗體檢測

分為篩查和確認試驗。免疫印跡法----是HIV血清學(xué)檢測中最常用的確證性試驗。篩查陽性者必須進行確認試驗反轉(zhuǎn)錄病毒（3）測定病毒核酸臨床常用于測定感染者體內(nèi)游離病毒的RNA含量即病毒載量。（4）CD4+T細胞計數(shù)應(yīng)用流式細胞儀（FCM）進行CD4+T細胞記數(shù)及占淋巴細胞的百分率（正常情況下與CD8+T細胞比例為2:1）CD4+T細胞數(shù):

＜0.5×109/L時，為抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療的指征；

＜0.2×109/L時，應(yīng)立刻進行卡氏肺孢子菌的預(yù)防治療；

＜0.1×109/L時，易感染巨細胞病毒和結(jié)核分枝桿菌。（5）耐藥性檢測檢測患者標本中HIV基因序列，監(jiān)控變異的發(fā)生，間接估計藥物耐藥情況。反轉(zhuǎn)錄病毒（三）臨床意義HIV無癥狀攜帶者和AIDS患者。傳播途徑性接觸、輸血或血制品、母-嬰傳播。傳染源病毒選擇性侵犯CD4+細胞，細胞變性、壞死，導(dǎo)致以CD4+細胞缺陷為主的嚴重免疫缺陷。1．致病機制

反轉(zhuǎn)錄病毒（1）急性期：（2）無癥狀潛伏期：（3）AIDS期:感染后2~6周內(nèi)一般為8~10年通常難以檢測到HIV抗體血清抗體陽性，具傳染性。持續(xù)發(fā)熱、盜汗、失重、不明原因的慢性腹瀉、濕疹、銀屑病、脂溢性皮炎、皮炎、皰疹-帶狀