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液相色譜的方法開發(fā)（二）梯度方法梯度洗脫的特點優(yōu)點單位時間的分離能力增加檢測靈敏度提高缺點儀器設備要求高不適合某些檢測方式柱需再生定量分析的重復性較低梯度的洗脫方式高壓梯度及低壓梯度如不用梯度：分離不理想梯度條件的優(yōu)化梯度曲線的變化∶凹線梯度曲線的變化∶凸線梯度平衡時間的影響（一）10分鐘的梯度，6分鐘的平衡時間色譜圖不重復梯度平衡時間的影響（二）平衡時間∶6分鐘平衡時間∶7分鐘平衡時間∶8分鐘平衡時間∶9分鐘平衡時間從6到7分鐘，第一個峰的保留時間有明顯的變化，說明6到7分鐘的平衡時間不足，而8到9分鐘變化不大因而大于這個時間時，平衡充足。有機污染物的影響（一）50ml超純水的有機物污染狀態(tài)有機污染物的影響（二）“三蒸水”有大量的有機污染物不適合梯度分析有機污染物的影響（三）典型的“實驗室水”有大量的有機污染物不適合高靈敏度梯度分析梯度方法開發(fā)實例-第一步開發(fā)一個有9個烷基苯酮化合物的梯度方法，用C18柱，在最初的條件下(0-100%水-乙腈)，分離不理想。整個色譜峰組保留時間太長，分離度也不好。梯度方法開發(fā)實例-第二步為使色譜峰前移，提高起始時乙腈的比例（50-100%，水-乙腈），分離得到改善。但是9個化合物出了10個色譜峰，說明有雜質(zhì)存在，很可能是流動相水中的。梯度方法開發(fā)實例-第三步從空白梯度圖顯示，在同樣的色譜條件，同樣的檢測靈敏度下，共有兩個雜質(zhì)峰。說明流動相水中的雜質(zhì)在此條件下可能會對檢測有影響。梯度方法開發(fā)實例-第四步空白梯度圖同樣品的色譜圖進行對照后，我們看到雜質(zhì)（共兩個峰）中的第一個小峰對第8個色譜峰有干擾，會使其定量分析結(jié)果不準確。梯度方法開發(fā)實例-第五步根據(jù)“梯度曲線下的面積越大，洗脫能力越強”的規(guī)律，試用#5曲線使3-9號峰提前(曲線5，50-100%B)，但是小峰仍沒有分出來。梯度方法開發(fā)實例-第六步根據(jù)“梯度曲線下的面積越大，洗脫能力越強”的規(guī)律，試用#5曲線使3-9號峰提前，改用50-95

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