1-2-1-微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)-課件

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用什么是培養(yǎng)基？如何配制？什么是無菌技術(shù)？怎樣進(jìn)行酵母菌的純培養(yǎng)？錄目Contents1234培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration無菌技術(shù)Aseptictechnique微生物的純培養(yǎng)Pureculture習(xí)題鞏固Exercisestoconsolidate問題探討Problemsdiscussed

向經(jīng)過殺菌處理的牛奶中添加某些對(duì)人體有益的細(xì)菌，再經(jīng)過發(fā)酵就可以制成酸奶，由于制作工藝并不復(fù)雜，一些人會(huì)在家里自制酸奶，自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適的事件屢見不鮮，主要原因是在制作過程中有雜菌混入。那么，怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？

應(yīng)該先對(duì)制作用具和原料進(jìn)行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進(jìn)入。這需要應(yīng)用無菌技術(shù)和微生物的培養(yǎng)技術(shù)微生物的類群Thetaxaofmicroorganisms微生物個(gè)體無法用肉眼觀察的微小生物。無細(xì)胞結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞真核細(xì)胞真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履蟲、變形蟲等微生物的類群病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌體等DNA病毒細(xì)菌:藍(lán)細(xì)菌、大腸桿菌、乳酸菌等；放線菌:鏈霉菌等培養(yǎng)微生物的條件Conditionsforcultureofmicroorganisms①要為人們需要的微生物提供合適的___________條件。②要確保

，并將需要的微生物分離出來。營養(yǎng)和環(huán)境其他微生物無法混入微生物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、形體微小，眼睛看不到，若想得到純凈的微生物，就必須對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)和分離。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的條件——培養(yǎng)基——無菌技術(shù)Part1培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration培養(yǎng)基1.概念：3.類型：2.作用：人們按照微生物對(duì)

的不同需求，配制出供其_________的營養(yǎng)基質(zhì)。營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或

。（①提供微生物繁殖所需各種營養(yǎng)，②異養(yǎng)微生物的能源）積累其代謝物固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無瓊脂分離、計(jì)數(shù)、鑒定等擴(kuò)大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration注意說明①加入培養(yǎng)基中的凝固劑（如瓊脂），一般不能被微生物

利用，只起到凝固作用。②微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。③擴(kuò)大培養(yǎng)獲得大量菌種時(shí)，常用液體培養(yǎng)基。一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration4.營養(yǎng)構(gòu)成：（1）基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽①碳源：無機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機(jī)碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物②氮源：無機(jī)氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源③無機(jī)鹽：Ca、K、Mg為大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素牛肉膏、蛋白胨來源于動(dòng)物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)各種有機(jī)物蛋白質(zhì)、核酸培養(yǎng)基的配置Mediumconfiguration（2）特殊需求：滿足微生物對(duì)

、

、

的需求。特殊營養(yǎng)物質(zhì)pHO2④培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)，需要提供

的條件。①培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，需要在培養(yǎng)基中添加

；②培養(yǎng)霉菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至

；③培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至

；維生素酸性中性或弱堿性無氧表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000ml水維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等

主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的類型及用途培養(yǎng)基中加氨芐青霉素具有抗氨芐青霉素能力的菌落沒有氨芐青霉素抗性的細(xì)菌選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基+氨芐青霉素培養(yǎng)基沒有抗氨芐青霉素能力的菌落被淘汰怎樣選擇出抗氨芐青霉素能力的細(xì)菌?培養(yǎng)基的類型及用途具體處理原理目的選擇培養(yǎng)基加入青霉素青霉素能抑制細(xì)菌生長，對(duì)真菌無作用不加氮源固氮微生物能利用空氣中的氮?dú)獠患佑袡C(jī)碳源自養(yǎng)型微生物能利用無機(jī)碳源鑒別培養(yǎng)基加入酚紅培養(yǎng)基尿素被分解產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑變紅。加入剛果紅

剛果紅與纖維素能形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈。分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)微生物鑒別分解尿素的細(xì)菌鑒別纖維素分解菌Part2無菌技術(shù)Aseptictechnique無菌技術(shù)Aseptictechnique1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是

。防止雜菌污染①消毒：是指使用較為

的物理、化學(xué)或生物等方法

殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。②滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死

的微生物，

包括芽孢和孢子。2.防止雜菌污染的方法：溫和物體內(nèi)外所有目的：①防止培養(yǎng)物被污染；②防止感染實(shí)驗(yàn)操作者。避免已經(jīng)滅菌的材料用具與周圍物品接觸；為了避免周圍環(huán)境微生物污染，操作應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在酒精燈火焰旁進(jìn)行。無菌技術(shù)Aseptictechnique消毒使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法，殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。（1）概念：（2）消毒的方法：①煮沸消毒法：②巴氏消毒法：③化學(xué)藥劑消毒法：④紫外線消毒法：用紫外燈照射接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)。100℃煮沸5-6min。62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min。

用70%酒精擦拭雙手；氯氣消毒水源。無菌技術(shù)Aseptictechnique滅菌濕熱滅菌法、干熱滅菌法、灼燒滅菌法1.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa、121℃下維持15-30min1.原理：高溫蒸汽破壞蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)構(gòu)使其變性。2.優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，效果可靠，可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體。基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。3.對(duì)象：培養(yǎng)基等。無菌技術(shù)Aseptictechnique滅菌②干熱滅菌法干熱滅菌箱內(nèi)160~170℃下加熱2~3h。1.原理：使微生物細(xì)胞膜破壞、蛋白質(zhì)變性和原生質(zhì)干燥等2.對(duì)象：耐高溫，需保持干燥的物品，適用于玻璃器皿

(如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器)金屬器具(如針頭、鑷子、剪刀等)的滅菌無菌技術(shù)Aseptictechnique滅菌③灼燒滅菌法常用于涂布器、接種環(huán)、接種針、試管口或其它金屬用具等的滅菌。直接在酒精燈火焰的充分燃燒層（外焰）灼燒。1.效果：最徹底2.原理：使微生物燃燒3.對(duì)象：接種工具如接種環(huán)、接種針，以及接種過程中的試管口或瓶口等易被污染部位類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時(shí)用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等,生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺(tái)Part3微生物的純培養(yǎng)Pureculture微生物的純培養(yǎng)Pureculture1.培養(yǎng)物：在微生物學(xué)中，將接種于

內(nèi)，在合適條件下形成的含

的群體。培養(yǎng)基特定種類微生物3.純培養(yǎng)：獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。2.純培養(yǎng)物：由

所獲得的微生物群體。單一個(gè)體繁殖步驟：1）配制培養(yǎng)基2）滅菌3）接種4）分離5）培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast菌落1.概念：2.特征：

分散的微生物(單一個(gè)體)在適宜的

表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的

。

固體培養(yǎng)基子細(xì)胞群體形狀、大小、光澤度、顏色、透明度等?！氰b定菌種的重要依據(jù)3.獲得單菌落的方法：①平板劃線法②稀釋涂布平板法酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟接種和分離培養(yǎng)酵母菌制備培養(yǎng)基1.制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基滅菌倒平板1）配制培養(yǎng)基稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向?yàn)V液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟2）滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃滅菌2h。包器材酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟3）倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。倒平板注意事項(xiàng)：①溫度：50℃左右②操作：在酒精燈火焰附近③冷凝后平板倒置酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟2.接種和分離酵母菌通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。平板劃線法平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。單個(gè)細(xì)胞微生物群?jiǎn)蝹€(gè)菌落連續(xù)劃線分散或稀釋生長繁殖①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液⑥將皿蓋打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃3-5條平行線，蓋上皿蓋。⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞③試管口通過火焰⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。平板劃線法Platemarking連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法劃3個(gè)平板（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）1個(gè)不劃線（空白對(duì)照）1）一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；2）存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落?！捌桨鍎澗€”實(shí)驗(yàn)操作平板劃線法Platemarking分區(qū)劃線法12345①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌④劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)平板劃線法注意事項(xiàng):平板劃線法Platemarking1.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。2.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。平板劃線法Platemarking3.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？灼燒時(shí)期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個(gè)細(xì)胞殺死接種環(huán)上原有微生物酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟3.培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-28h。既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染作對(duì)照，該培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟4.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1.在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？

如果有，說明了什么？

在未接種的培養(yǎng)基表面應(yīng)該沒有菌落生長，如果有，說明培養(yǎng)基被雜菌污染或滅菌不徹底。2.你是如何記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的？

可以在培養(yǎng)12h和24h后，觀察菌落的大小、形狀、顏色。培養(yǎng)24h后，菌落的大小、形狀是否發(fā)生變化，菌落顏色是否加深，光澤度是否增加，等等酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast方法步驟4.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)3.在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小是否一致？如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？

在接種酵母菌的培養(yǎng)基上可觀察到單菌落。如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特點(diǎn)，則說明純化酵母菌的操作成功；如果觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作不規(guī)范等原因引起的。酵母菌的純培養(yǎng)Purecultureofyeast評(píng)估論點(diǎn)的可信程度

所謂“酵素”，就是“酶”的另一種說法?！敖退亍敝谱骶褪抢梦⑸镞M(jìn)行無氧呼吸的原理，進(jìn)行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。這樣制作的“酵素”中可能有糖類(包括-些簡(jiǎn)單的糖和膳食纖維等)、蛋白質(zhì)(包括多種酶)、有機(jī)酸等成分，不存在它獨(dú)有的、特殊的營養(yǎng)物質(zhì)，其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，食用后可能會(huì)危害人體健康。因此，“吃水果酵素可以美容、減肥、促進(jìn)消化和提高免疫力”的論點(diǎn)值得懷疑。稀釋涂布平板法平板劃線法Part4習(xí)題鞏固Exercisestoconsolidate習(xí)題鞏固Exercisestoconsolidate1.微生物的純培養(yǎng)既需要適宜的培養(yǎng)基，又要防止雜菌污染。判斷下列相關(guān)表述是否正確。（1）培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對(duì)微生物的生長越有利。

（）（2）消毒和滅菌的殺菌程度存在差異。（）（3）微生物的純培養(yǎng)物就是不含有代謝廢物的微生物培養(yǎng)物。

（）×√×習(xí)題鞏固Exercisestoconsolidate2.日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長的？日常生活中保存食品的方法有干制、腌