免疫學(xué)基礎(chǔ)-項目實訓(xùn)：凝集反應(yīng)

單元九免疫學(xué)基礎(chǔ)微生物學(xué)基礎(chǔ)

１目的要求及基本原理十一、凝集反應(yīng)

項目一傳染與免疫目的要求：掌握凝集反應(yīng)的操作方法,并能初步判斷凝集反應(yīng)的結(jié)果；基本原理：顆粒性抗原（細(xì)菌或紅血球)的懸液與含有特異性抗體的血清混合,在適量電解質(zhì)存在時,經(jīng)過一定時間,出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊,稱為凝集反應(yīng)。參加反應(yīng)的抗原稱為凝集原,其血清中的抗體,稱為凝集素。凝集反應(yīng)常用的方法有玻片法與試管法。利用已知抗血清可以鑒定未知細(xì)菌,因此,此法可用于診斷許多傳染病的病原,也可應(yīng)用已知細(xì)菌檢查未知血清的抗體。

２實訓(xùn)用品十一、凝集反應(yīng)

藥品：菌懸液、相對應(yīng)的血清、生理鹽水、PBS液（磷酸緩沖鹽溶液）；儀器及其它用具：試管、滴管、吸管、試管架、水浴鍋。

３實驗步驟--平板凝集反應(yīng)十一、凝集反應(yīng)

平板凝集反應(yīng)（以布氏桿菌為例)

第一步：取潔凈玻片一塊,用玻璃鉛筆劃成五行小格,并標(biāo)明待檢血清的號碼；

第二步：按下表滴加待檢血清、抗原（將牛、羊、豬三型布氏桿菌懸浮于甘油濃鹽水中，

加入煌綠及結(jié)晶紫制成)和生理鹽水（檢查綿羊、山羊血清時，用12%濃鹽水)。

血清用前需放室溫,使其溫度達(dá)20℃左右；成分試驗組對照1234鹽水--------0.03被檢血清0.080.040.020.01--抗原0.030.030.030.030.03

３實驗步驟--平板凝集反應(yīng)十一、凝集反應(yīng)

平板凝集反應(yīng)（以布氏桿菌為例)

第三步：用火柴棒自血清量最少格起，依次往前攪拌,使血清與抗原混勻,每份血清用一根

火柴棒；

第四步：混合完畢后,將玻片置于凝集反應(yīng)箱上均勻加溫,或放于離火焰稍高處,微微加溫至

30℃左右，3~5nmin內(nèi)記錄反應(yīng)結(jié)果；

第五步：結(jié)果記錄法：

?++++;出現(xiàn)大的凝集塊、液體完全透明；?+++；有明顯凝集塊、液體幾乎完全透明，即75%凝集；?++;有可見凝集片,液體不甚透明,即50%凝集；?+；液體渾濁,有小的顆粒狀物,即25%凝集；?液體均勻渾濁,無凝集物。

注：每次試驗須用標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和陰性血清作對照。

4實驗步驟--試管凝集反應(yīng)十一、凝集反應(yīng)

試管凝集反應(yīng)（以布氏桿菌為例)

第一步：每份血清用4支試管（1cmx8cm)，另取對照管3支。如待檢血清多時,只設(shè)一份

對照組；

第二步：用0.5%石炭酸生理鹽水,將被檢血清稀釋成4個稀釋度。第5管中不加血清,設(shè)抗原

對照。第6管中加1:25稀釋的布氏桿菌陽性血清0.5mL作陽性對照。第7管中加

1∶25稀釋的布氏桿菌陰性血清0.5mL作陰性對照；

第三步：各管中加入用0.5%石炭酸生理鹽水稀釋20倍的布氏桿菌抗原0.5mL(每1mL含菌8

億)；

第四步：各管加抗原后,將各管充分混勻,放37℃溫箱中4~10h,取出后放室溫18~24h,然后觀察并記錄結(jié)果；

第五步：檢查豬、羊、狗時血清稀釋度為1:25,1:50,1:100,1:200;綿羊、山羊血清用10%濃

鹽水稀釋。牛、馬和駱駝血清稀釋度為1:50，1:100，1:200,1:400，大規(guī)模檢疫可

只用兩個稀釋度,如狗、豬、羊為1:25，1:50;

4實驗步驟--試管凝集反應(yīng)十一、凝集反應(yīng)

試管凝集反應(yīng)（以布氏桿菌為例)

第六步：結(jié)果記錄法

?++++:液體完全透明，菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底,振蕩時，沉淀物呈片狀、

塊狀或顆粒狀（即100%的菌體被凝集)；

?+++:液體略渾濁,菌休大部分被凝集于管底,振蕩時，沉淀物呈片狀、塊狀或顆粒

狀(75%菌體被凝集)；

?++:液體不透明，管底有明顯凝集片，振蕩時有塊狀或小片絮狀物（50%菌體被

凝集)。

?+:液體不透明,僅管底有少許凝集,其余無顯著的凝集塊(25%菌體被凝集)；

?-:液體渾濁,管底無凝集,菌體不被凝集,但由于菌體自然下沉，在管底中央可見圓

點狀沉淀,振蕩后立即散開呈均勻渾濁；

4實驗步驟--試管凝集反應(yīng)十一、凝集反應(yīng)

試管凝集反應(yīng)注意事項：

?當(dāng)每份待檢血清僅用2個稀釋度進(jìn)行試驗時，無論任何一個稀釋度發(fā)生凝集現(xiàn)象,該