編制說明《蝦蟹類飼料中β-蛻皮甾酮的測定 高效液相色譜法（征求意見稿）》

1《蝦蟹類飼料中β-蛻皮甾酮的測定高效液編制說明21項目背景 32工作簡況 42.1任務來源 42.2主要工作過程 42.2.1標準初稿的起草 42.2.2標準計劃立項 42.3征求意見稿的起草 52.4標準的征求意見 52.5本標準與國內外標準關系的說明 53標準編制原則和主要內容的依據(jù) 63.1標準編制原則 63.2確定標準主要內容的依據(jù) 64方法研究報告 74.1試劑和材料 74.2儀器和設備 74.3方法原理 74.4實驗方案 74.4.1標準溶液配制 74.4.2試樣制備過程 74.4.3參考色譜條件 84.4.4空白試驗 84.4.5分析結果的表述 84.5結果與討論 94.5.1色譜行為 94.5.2色譜條件的選擇 94.5.3前處理的優(yōu)化 5試驗驗證情況 5.1基本情況 5.2方法驗證單位結果 5.2.1標準曲線 5.2.2方法檢出限和定量限 5.2.3方法重復性 5.2.4方法正確度 5.2.5實際典型樣品測定 5.3結論 6預期的社會經(jīng)濟效益 7貫徹實施標準的要求、措施等建議 8其他應當說明的事項 9附件材料 3β-蛻皮甾酮（稱為“蛻皮激素，蛻皮甾酮和20-羥基蛻皮甾酮等”）是從鴨跖作為飼料添加劑，已被廣泛應用于蝦蟹類飼料中。蝦蟹類飼料不僅提供了蝦蟹等水產(chǎn)所需的能量和基本營養(yǎng)素，還包含了增強免疫力、促進生長發(fā)育的特殊添加劑。該類飼料具有多種分類和型號，以滿足不同生長階段和養(yǎng)殖需求的營養(yǎng)供給。蝦蟹類硬殼動物的蛻殼是其生長和發(fā)育的標志特征，蛻殼貫穿于蝦蟹類飼料中β-蛻皮甾酮含量必須適中，如果含量過低類型主要集中在露水草提取物、昆蟲血清、中藥草和藥劑等。而且并無現(xiàn)行有（2020年版）二部露水草提取物項下”，該方法規(guī)定了：露水草提取物中主要成分(β-蛻皮甾酮）的含量測定，該方法并不完全適用于蝦蟹類飼料中β-蛻皮甾酮含量的測定。飼料基質比較復雜，采用上述分析方法時，會出現(xiàn)：基質干擾較大，提取不充分等問題。本項目擬通過優(yōu)化前處理條件和色譜條件，建立長和脫殼的效果。3.提高養(yǎng)殖效率：適量的β-蛻皮甾酮能夠促進的食用安全。5.科研與技術創(chuàng)新：建立蝦蟹類飼料中β-蛻4測協(xié)字〔2023〕08號廣東省分析測試協(xié)會下達了編制“飼料中B-蛻皮甾酮的4月，標準起草小組對該方法進行全面調研，查閱相關文獻和標準方法等資料，2023年3月，標準起草小組將完成的團標初稿和標準制修訂計劃項目任務書提在2023年3月由廣東省分析測試協(xié)會組織召開的團體標準立項評估會上，5參與標準的制修訂。標準起草單位擴充后分別為廣東省科學院測試分析研究所波長的選擇，流動相種類的選擇和梯度優(yōu)化等建立蝦蟹類飼料中β-蛻皮甾酮和建議，對本標準方法進行完善，并完成《蝦蟹類飼料中B-蛻皮甾酮的測定高完成《蝦蟹類飼料中B-蛻皮甾酮的測定高效液相色譜法》（送審稿）及相應的下”，該方法規(guī)定了：露水草提取物中主要成分(β-蛻皮甾酮）的含量測定，該6采用上述分析方法時，會出現(xiàn)：基質干擾較大制定《蝦蟹類飼料中β-蛻皮甾酮的測定高效液致，對方法提要、分析步驟、結果計算和試驗報告皮甾酮含量的測定，目前還未有現(xiàn)行有效的標準方法，相關研究文獻較少。β-檢測方法有高效液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質譜法和紫外分光光度法等，其中7因此，本項目擬通過優(yōu)化前處理條件（包括：選擇合適的提取劑，提和提取參數(shù)等）和色譜條件（色譜柱的選擇，流動相的優(yōu)化等建立具有干擾析純一級水（實驗用水應符合GB/T6682要求的一級水規(guī)格β-蛻皮甾酮Agilent1260型高效液相色譜儀，配紫外檢測器；BT125D電子天平；系列標準工作溶液：分別準確移取β-蛻皮甾0.500mg/L和0.200m劑，加入30mL后超聲提取20min，4000r/min離心5min，上清液轉移至50mL8容量瓶，殘渣再加入15mL的40%甲醇，重復超聲提取一次，合并上清液并定容表1梯度洗脫條件055X——試樣中各組分的含量，單位為毫克每千克(m9采用本試驗方法對β-蛻皮甾酮標準溶液和試樣溶液進行測定，所得色譜圖見圖1β-蛻皮甾酮標準溶液和樣品色譜圖采用紫外分光光度計在(190-400nm)范圍內對β-蛻皮甾酮進行全波長掃描。（190-220nm）接近常用有機溶劑（甲醇、乙腈等）的紫C30柱，C18柱和C8柱對試樣溶液進行測定，樣品中β-蛻皮甾酮均可實現(xiàn)良好分-水體系時，由圖1可知β-蛻皮甾酮具有較好的分離度、理論塔板數(shù)和不對稱因子，而且甲醇成本低于乙腈，毒性較小，綜合考慮選定甲醇-水體系作為色譜流圖2提取劑種類對β-蛻皮甾酮含量的影響圖3甲醇溶液濃度對β-蛻皮甾酮含量的影響圖4提取方式對β-蛻皮甾酮含量的影響市農業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農產(chǎn)品質量檢測中心2所示，可見在0.200μg/mL-10.0μg/mL濃度范圍內，β-蛻皮甾酮的濃度與峰面表2標準曲線和相關系數(shù)結果匯總驗證單位標準曲線范圍（0.200μg/mL-10.0μg/mL）回歸方程相關系數(shù)（r）廣東省科學院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）Y=26.14X+1.0540.99996西北農林科技大學Y=26.19X+1.2850.99961天津市農業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農產(chǎn)品質量檢測Y=27.39X-1.5300.99925廣州市華萊科檢測技術有限公司Y=62.8X-2.60.9999檢出限通常通過信噪比（S/N）來確定，以儀器信噪比(SN)=3時，β-蛻皮表3方法檢出限和定量限結果匯總驗證單位β-蛻皮甾酮（mg/kg）檢出限定量限廣東省科學院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）5.0西北農林科技大學2.06.0天津市農業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農產(chǎn)品質量檢測3.5廣州市華萊科檢測技術有限公司5.0表4方法重復性結果匯總驗證單位β-蛻皮甾酮精密度（%）蝦類飼料蟹類飼料廣東省科學院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）3.502.26西北農林科技大學4.51天津市農業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農產(chǎn)品質量檢測3.002.74廣州市華萊科檢測技術有限公司2.282.01方法的正確度通過加標回收率考查。蝦類飼料和蟹類飼料均稱取6份平行表5方法正確度結果匯總驗證單位蝦類飼料加標回收率加標1（低濃度）加標2（中濃度）加標3（高濃度）廣東省科學院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）95.095.92.16西北農林科技大學96.43.0395.33.5799.3天津市農業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農產(chǎn)品質量檢測中心96.45.6299.05.7397.24.93廣州市華萊科檢測技術有限公司91.53.6097.85.1698.04.56驗證單位蟹類飼料加標回收率加標1（低濃度）加標2（中濃度）加標3（高濃度）廣東省科學院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）95.896.83.9598.32.37西北農林科技大學99.35.9395.14.6595.94.17天津市農業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農產(chǎn)品質量檢測中心97.34.5499.72.3797.84.29廣州市華萊科檢測技術有限公司98.43.7794.94.6793.43.64的精密度為1.22%；蟹料中β-蛻皮甾酮的精密度為1.45%；斑表6實際典型樣品測定含量匯總驗證單位β-蛻皮甾酮羅氏蝦料蟹料斑節(jié)蝦料廣東省科學院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）37.425.52.76