HIV SOP艾滋病篩查實驗室資料

目錄TOC\o"1-2"\h\u5235第一章、艾滋病篩查實驗室的設(shè)置及人員情況 第一章、艾滋病篩查實驗室的設(shè)置及人員情況為了更好發(fā)揮艾滋病檢測在艾滋病防治工作中的作用，根據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》對于艾滋病的檢測要求，我院檢驗科設(shè)置了獨立的艾滋病篩查實驗室。為了使檢測工作能夠正常進行，保證艾滋病檢測結(jié)果的正確性和準確性，我們不僅對工作環(huán)境條件和檢測設(shè)施加以整改，而且建立了完整的實驗室標準化操作規(guī)程，以確保艾滋病檢測結(jié)果的準確有效。艾滋病檢測實驗室分為清潔區(qū)、半污染區(qū)和操作區(qū)，配備了專用的的生物安全柜、電腦、冰箱、酶標儀、離心機、高壓消毒鍋等設(shè)備和安全防護用品等。根據(jù)艾滋病檢測實驗室工作的需要，我科配備從事艾滋病檢測工作人員3名，全部都是臨床檢驗中級，所有人員從業(yè)年限均在7年以上。并積極參加省級、省級舉辦的艾滋病檢測技術(shù)培訓，不斷提高質(zhì)量意識、技術(shù)水平和業(yè)務能力，保證艾滋病檢測工作的質(zhì)量。艾滋病篩查實驗室負責人：**人員：****第二章、艾滋病篩查實驗室工作管理程序一、目的 對艾滋病篩查實驗室工作全過程進行質(zhì)量保證，保證檢驗工作符合規(guī)定要求，提供可靠的檢驗數(shù)據(jù)和有效的檢驗報告。二、范圍適用于本實驗室開展的相關(guān)醫(yī)學檢驗工作的各個環(huán)節(jié)。三、職責1、工作人員負責門診檢驗樣品的采集。2、工作人員負責住院檢驗樣品的接收。3、實驗室負責人負責組織協(xié)調(diào)完成檢驗任務，并對檢驗工作質(zhì)量的監(jiān)督。4、工作人員負責執(zhí)行檢驗任務，做好檢驗記錄，填報檢驗數(shù)據(jù)。5、實驗室報告審核人負責檢驗報告的簽發(fā)、發(fā)放。6、實驗室負責人負責檢驗資料的歸檔保管(計算機)工作。四、工作程序（一）、檢驗工作分類本實驗室的檢驗工作，我院標本的來源為采樣檢驗，工作性質(zhì)為常規(guī)標本檢驗。（二）、樣本記錄工作需按下列程序執(zhí)行：1、當面核對標本姓名、性別、年齡及標本質(zhì)量等資料；2、按要求進行檢驗；3、如實的完善檢驗單，真實的填寫檢測結(jié)果（三）、采樣及樣品管理采樣執(zhí)行本科程序文件。樣品接收、分發(fā)和保管處理，樣品一旦受理即給予受理唯一編號。（四）、標本檢驗檢驗執(zhí)行本科程序文件和操作規(guī)范（五）、檢驗依據(jù)1、國家標準方法；2、部頒標準方法和檢驗規(guī)范；3、衛(wèi)生技術(shù)部門推薦使用方法；4、有關(guān)科技文獻或雜志上發(fā)表的方法；（六）、檢驗實施檢驗人員按檢驗標準或作業(yè)指導書的要求按時完成檢驗任務，做好原始記錄。（七）、檢驗報告的編制、復核和簽發(fā)按本科程序文件嚴格執(zhí)行。（八）、檢驗方法控制檢驗必須按國家規(guī)定的方法或標準檢驗方法進行，也可用經(jīng)本科技術(shù)負責人批準的非標準檢驗方法進行。其他檢驗方法不得采用。

艾滋病篩查實驗室工作流程圖

第三章、艾滋病篩查實驗室規(guī)章制度實驗室工作制度實驗室保持清潔整齊，儀器設(shè)備要擺放整齊，說明書手冊要妥善保管，原始記錄不得擅自修改和銷毀。進入實驗室前要摘除首飾修剪指甲，以免劃破手套。嚴禁在艾滋病實驗室進食，飲水，吸煙和化妝。不要將與工作無關(guān)的物品帶入實驗室。進入實驗室要穿隔離衣，戴手套必要時戴雙層手套和防護眼鏡。認真對待樣品，嚴格遵守操作規(guī)程。確實知道洗眼裝置、安全沖洗設(shè)備，以及滅火器的位置。并懂得如何使用這些設(shè)備。采血時一定要注意安全，使用一次性注射器，謹慎操作防止刺傷皮膚以免造成污染。嚴格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血和備案年度，工作人員從事工作必須進行艾滋病抗體和乙肝，丙肝等肝炎病毒標記物的檢測，注射乙肝疫苗，每半年至一年進行一次抗體檢測，并保留血清樣品。

崗位責任制崗位責任制是保證工作質(zhì)量和醫(yī)療安全，提高工作效率的重要環(huán)節(jié)。建立崗位責任制，要有艾滋病檢測實踐經(jīng)驗的技術(shù)人員負責。做到人人分工職責明確，立足本職，團結(jié)互助，相互協(xié)調(diào)，保證各項任務的順利完成。牢固樹立把質(zhì)量放在第一位的思想，在工作中必須加強檢查和復查制度，以保證血液質(zhì)量及醫(yī)療安全。交接工作必須認真負責，須核對實物和記錄，對工作一般情況、存在問題和注意事項應進行具體交待，否則，發(fā)生問題由交班人負責。在實驗室主任領(lǐng)導下，負責實驗室儀器、器械、藥物試劑的安全管理，對本崗位的安全，負責實驗室、器材庫的安全防范工作，經(jīng)常檢查安全設(shè)施完好狀況，防火、防盜、防水、防銹、防腐蝕，保持室內(nèi)整潔衛(wèi)生，安全無事故。負責保管、使用消防器材，保持完好狀態(tài)，并會撲救初期火災；一旦發(fā)生其他意外事故，必須采取果斷措施予以搶救和處理，同時，及時向?qū)嶒炇邑撠熑思爸鞴茴I(lǐng)導報告；發(fā)生重大災害事故時，可以直接報警。實驗室人員臨時因故離開工作崗位，必須將工作委托給能勝任該項工作的人員，否則，發(fā)生問題由原擔任該項工作者負責。新參加工作的人員，在未熟悉和掌握工作前不能獨立工作不能頂崗位，在確能掌握經(jīng)考核合格后方可。建立艾滋病篩查實驗室專用的精密儀器和重要設(shè)備專責崗位制，其他人不得任意使用。嚴格按照儀器操作規(guī)程操作，不可擅自亂改設(shè)置。凡是一物多人使用的，除共同負責外，應指定一人為該崗位責任制負責人，負責指導正確操縱，定期安全檢查，經(jīng)常維護保養(yǎng)，保持正常運轉(zhuǎn)，該負責人有權(quán)制止任何違章操作和有害設(shè)備安全的行為。人員職責分工：行政班人員負責協(xié)助值班人員做好實驗室的所有日常工作，并負責對檢驗工作質(zhì)量的監(jiān)督，檢驗報告的復核、發(fā)放，結(jié)果的解釋，實驗室室內(nèi)消毒以及每日醫(yī)療廢棄物的消毒處理。每日值班人員負責樣品的采集，接收，執(zhí)行檢驗任務，做好檢驗記錄，填報檢驗數(shù)據(jù)，把檢驗資料的歸檔保管(計算機)工作。簽發(fā)報告及實驗室儀器設(shè)備的日常維護和保養(yǎng)。

實驗室工作人員職責分工隨著我院檢驗科規(guī)模的不斷壯大，傳統(tǒng)的單一管理模式已經(jīng)制約著我科室的發(fā)展，現(xiàn)根據(jù)《臨床實驗室管理辦法》和《全國臨床檢驗操作規(guī)程》標準，采用分學科管理模式，有利于培養(yǎng)各學科技術(shù)骨干，提高工作積極性，有效做好儀器的維護保養(yǎng)和檢驗質(zhì)量控制工作，從而提高整體檢驗科的技術(shù)水平。**職責制度、職責、SOP文件**儀器酶標儀，生物安全柜，溫度計項目艾滋病,RPR,HCV,HBV**儀器高壓滅菌鍋，離心機，冰箱，移液器項目艾滋病,RPR,HCV,HBV以上各組職責屬監(jiān)督管理作用，日常工作不按崗位上班。強調(diào)若儀器出現(xiàn)故障，應及時報告各組負責人和科主任。申請設(shè)立專項補貼，各組的質(zhì)量控制和儀器維護情況與獎金和評優(yōu)相掛鉤。成立質(zhì)量控制小組，各組負責人應及時反饋本組的質(zhì)量問題給科主任，盡快解決問題，確保檢驗科結(jié)果的準確性。

四、交接班制度1.目的本著為臨床服務，讓病人滿意的宗旨。確保急診檢驗工作正常、有序的進行。2.范圍適用于常規(guī)工作時間以外的急診值班人員的上下班、交接班。3.值班任務3.1值班人員必須堅守崗位，履行職責，確保臨床診療工作不間斷進行。主要醫(yī)療工作包括：生化類急診項目、凝血四項、血、尿、便常規(guī)、急診血型和交叉配血等，若遇臨床須急查而自己又不熟悉的項目，應及時向科室領(lǐng)導（指定負責人）報告。3.2值班人員要按規(guī)定檢查儀器狀況、試劑冰箱溫度、科室安全狀況等，根據(jù)值班情況準確填寫值班記錄并與接班人員交接清楚。3.3急診化驗要立即進行，結(jié)果及時回報病房，接到非急診標本要妥善處理，按要求保留標本。3.4值班時遇有特殊情況，如大批病人或疑難檢查應及時報告科室領(lǐng)導或上級人員協(xié)助解決。3.5檢查門、窗、水、電及貴重儀器安全，室內(nèi)物品不得隨便借出。3.6值班者不得帶客人或小孩到科室，以免影響工作或發(fā)生意外。4.值班要求4.1值班安排：值班人員需提前10分鐘接班。4.2主班負責接班，副班到位后根據(jù)工作需要進行分工，確保急診檢驗工作正常、有序的進行。4.3交班應按時、清楚、明確，做到交不清不接，接不清不走。主、副班應相互尊重、相互協(xié)作，在值班過程中，使用主班程序。4.4值班表由科室指定專人定期制定，休假、出差時跳過順延，產(chǎn)假按醫(yī)院規(guī)定執(zhí)行。4.5關(guān)于同事之間的換班、頂班，采取雙方自愿的原則，換班或頂班者即為值班人員。4.6夜班值班后補休半天，值班員可根據(jù)自身情況選擇值班后補休或擇日補休。5.值班獎懲5.1值班期間杜絕安全隱患，發(fā)現(xiàn)漏洞時，經(jīng)科室黨支部研究后給予重獎5.2未按時填寫交接班記錄，扣20元。5.3值班期間發(fā)生醫(yī)療差錯、事故時，按醫(yī)院規(guī)定執(zhí)行。5.4因交接班不清發(fā)生儀器、冰箱損壞和物品丟失時，責任由接班者承擔。5.5違反值班安排時，一律按故意逃班處理，扣除當事人當月超勞補貼300元，情節(jié)嚴重的經(jīng)科室黨支部研究后給予重罰。5.7因換班、頂班而發(fā)生脫班時，責任全在當天值班者，亦按故意逃班處理。

標本管理制度（一）、樣品的采集和處理1.血液樣本的采集和處理1.1抗凝全血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻10-15次，備用。1.2末梢全血：消毒局部皮膚（成人和1歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無名指或食指，1歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無菌紗布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備用。血漿：根據(jù)檢測需要，選擇含適宜抗凝劑的采血管，按照采1.3血管說明采集：靜脈血，分離血漿；或?qū)⒉杉目鼓?500～3000r/min離心15分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。血清：根據(jù)檢測需要，按照采血管說明采集靜脈血，分離血清；或用不含抗凝劑的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至無抗凝劑或含促凝劑的試管中放置1～2小時，待血液凝固、血塊收縮后再用1500～3000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。淋巴細胞富集液：將采集的抗凝全血1500～3000r/min離心15分鐘，吸取血漿層下的淋巴細胞富集液，置于合適的容器中，備用。外周血單個核細胞（PBMC）：使用淋巴細胞分離液，進行密度梯度離心，吸出PBMC層，置于合適的容器中，備用。1.4抗凝劑的選擇：根據(jù)檢測要求選用適當?shù)目鼓齽?，如CD4+和CD8+T淋巴細胞數(shù)測定可選用EDTA鉀鹽或鈉鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉（如果血液不用于核酸檢測）；艾滋病-1分離、核酸定性/定量檢測可選用EDTA鉀鹽或鈉鹽或枸櫞酸鈉。2、樣本采集后處理、保存、運輸?shù)臅r限和條件，因不同的檢測項目而異，應參見相應檢測項目要求。采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于尖銳危險品容器內(nèi)，妥善處理，防止發(fā)生職業(yè)暴露。3、采集樣品注意事項（1）采集樣品原則上應按臨床采血技術(shù)規(guī)范操作。（2）采集樣品時應注意安全，建議采用真空采血管及蝶形針具，以避免直接接觸血液；直接接觸艾滋病感染者/艾滋?。ˋIDS）病人血液/體液的操作,應戴雙層手套。（3）所有的血液、血清、未固定的組織和組織液樣品，均應視為有潛在傳染性，都應以安全的方式進行操作。（4）應象操作未知傳染風險樣品一樣，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的質(zhì)量控制和參考物質(zhì)。用后的包裹應進行消毒。（5）采血時一定要注意安全，采血用一次性注射器，謹慎操作，防止發(fā)生刺傷皮膚和造成外界污染。（6）離心機要使用密閉的罐和密封頭，以防液體溢出或在超/高速離心時形成氣溶膠。（二）樣品的保存用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣本，短期（1周）內(nèi)進行檢測的可存放于2～8℃，一周以上應存放于-20℃以下。用于核酸檢測的血漿和血細胞樣本，4天內(nèi)進行檢測的可存放于2-8℃：3個月以內(nèi)應存放于-20℃以下；3個月以上應置于-70℃以下保存。用于CD4+T淋巴細胞檢測的全血樣本，室溫保存，時間不超過48小時。如果用CD45設(shè)門，樣本保存不超過72小時。篩查結(jié)果為陽性的樣本應及時進行補充試驗；篩查結(jié)果為陰性的樣本，可根據(jù)具體需要決定保存時間，建議至少保存1個月。艾滋病檢測確證實驗室收到的篩查陽性樣本，無論補充試驗結(jié)果如何，均應保存剩余樣本，保存時間根據(jù)需要確定，建議至少保存3年，特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉颖靖鶕?jù)具體要求確定保存時間。補充試驗結(jié)果為陽性的樣本按照國家生物樣本管理的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。（三）樣品的運送1、全血、血漿的運送應符合生物安全要求，參照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》(衛(wèi)生部第45號令,2006年2月1日執(zhí)行)。2、血液樣本運送時應采用三層容器對樣本進行包裝，隨樣本應附有與樣本唯一性編碼相對應的送檢單。送檢單應標明受檢者姓名、樣本種類等信息，并應放置在第二層和第三層容器之間。第一層容器：直接裝樣本，應防滲漏。樣本應置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應有明顯的標記，標明樣本的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。第二層容器：容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：容納并保護第二層容器的運輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓、禁止倒立”等字樣，還應易于消毒。3、用于抗體檢測的血清和血漿樣本應在凍存條件下運送。用于CD4+和CD8+T淋巴細胞測定的樣本應在室溫下（18～25℃）運送。用于病毒載量檢測的樣本應在-20℃以下運輸。干血斑和尿液樣本應在室溫下（18～25℃）運送，可通過郵寄方式運送。血液制品樣本的運送按照血液制品有關(guān)使用說明執(zhí)行。4、運送樣本必須有記錄。（四）樣本接收和拒收標準1、含有感染性樣品的包裹必須在具有處理感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)由經(jīng)過培訓的、穿戴防護衣的工作人員打開，用后的包裹應進行消毒。2、核對樣品與送檢單，認真核對標本上病人姓名、年齡、性別、病區(qū)、床號、住院號是否與中請單符合。檢查樣品管有無破損和溢漏，如發(fā)現(xiàn)溢漏應立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告有關(guān)領(lǐng)導和專家。3、檢查樣品的狀況，觀察標本的量、標本類型、是否抗凝或有小凝塊樣品，記錄有無嚴重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況，判斷標本是否符合檢驗要求。如果污染過重或者認為樣品不能被接受，則應將樣品安全廢棄。并要將樣品情況立即通知送樣人。4、打開標本容器時要小心，以防內(nèi)容物潑濺。樣品處理時若內(nèi)容物有可能濺出，則應在生物安全柜中戴手套進行。同時應戴口罩、防護眼鏡，以防皮膚或粘膜污染。5、因特殊臨床治療導致自發(fā)熒光的樣品不可用于熒光方法測試。6、接收樣品時應規(guī)范填寫樣品接收單。7、不符要求的標本，必須及時填寫退回理由單，及時通知送樣人，說明情況，重新留取。不符要求的標本與可疑含有感染性樣品用后的包裹同檢驗后的標本一樣進行消毒或無害化處理后廢棄。（五）標本檢測1、離心機要使用密閉的罐和密封頭，以防液體溢出或在超/高速離心時形成氣溶膠。復核標本接收過程中的每一步驟，在檢測過程中，應嚴格按照標準化操作規(guī)程。2、在標本足夠的情況下，不能浪費、隨意丟棄或損壞標本。應象操作未知傳染風險樣品一樣，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的質(zhì)量控制和參考物質(zhì)。用后的包裹應進行消毒（六）、標本處理檢驗標本先用含2-3g/L有效氯消毒劑浸泡半小時，再用高壓鍋高壓消毒。然后用雙層專用黃色醫(yī)用垃圾袋專人收集所有廢棄醫(yī)用垃圾。送專門存放醫(yī)用垃圾處統(tǒng)一焚化處理。

試劑管理制度（一）、采購與審批科主任根據(jù)需要定期擬定采購計劃，交由院領(lǐng)導審批，批核后由科主任交與器械科，有器械科與經(jīng)銷商聯(lián)系（二）、驗收與登記倉管負責人根據(jù)供應商提供的試劑及清單對數(shù)量、品種、品牌、包裝等進行驗收，并將入庫數(shù)據(jù)登記。（三）、貯存冷藏試劑統(tǒng)一存放在艾滋病實驗室專用的冰箱內(nèi)，冷箱保管及溫度控制由艾滋病實驗室負責人負責。艾滋病試劑一般應2～8℃避光保存，在有效期內(nèi)使用。（四）、出庫管理各室提出試劑申領(lǐng)，倉管人填寫出庫單據(jù)，院領(lǐng)導簽字同意后，認領(lǐng)人簽名后出庫。（五）、其它1、試劑的保存應嚴格按照要求存放，以保證有效期內(nèi)能有效地使用，杜絕浪費現(xiàn)象。2、倉管人應對試劑庫存定期檢查，不使用過期變質(zhì)的試劑。3、易燃，易爆試劑應分開存放遠離火源和電源。

4、劇毒試劑必須由科主任和負責科室保衛(wèi)的同志負責保存，放保險箱內(nèi)，使用時應有兩人在場，并做好登記。污染區(qū)工作守則做好污染區(qū)實驗室廢棄物的消毒處理，未經(jīng)實驗室管理人員許可不得進入污染區(qū)。凡是被血液、體液污染的物品要先消毒滅菌后清洗。嚴格操作程序，做好各種實驗記錄，實驗陽性標本保存至5年，（經(jīng)過免疫印記確診的陰性標本也要保存），不得擅自處理。禁止用口吸液體，必須使用移液器操作。操作中有標本等外濺時，應及時消毒，對大量濺出的高濃度污染物在清潔前先用1%次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦洗。每次實驗后，要對工作臺面消毒，用0.2%-1%次氯酸鈉溶液噴灑和浸泡。離開實驗室前要脫去手套，隔離衣等防護物品，放入指定污桶，用肥皂和流水洗手。

清潔區(qū)工作守則實驗室是檢驗工作的場所，要保持清潔、安靜、物品擺放要整齊。清潔的防護服置于實驗室清潔區(qū)內(nèi)存放處。檢驗人員工作時應按要求穿工作服、工作衣、帽、專用鞋等。禁止將與檢驗工作無關(guān)的物品帶入檢驗室，禁止在檢驗室內(nèi)會客、抽煙、吃東西。注意安全，下班后、節(jié)假日必須切斷水源、氣源、電源，關(guān)好門窗。嚴禁將污染區(qū)的物品帶入清潔區(qū)。妥善保管儀器、設(shè)備的說明書、操作規(guī)程、原始記錄表、零（部）件、常用工具、電源線、連接線要排列整齊。檢驗室須配置消防設(shè)備，并經(jīng)常檢查待用狀態(tài)，任何人不得擅自挪用或挪動。

環(huán)境消毒隔離制度1、實驗室應分為清潔區(qū)和操作區(qū)，清潔區(qū)要注意保護不受污染。操作有氣溶膠可能的標本應配置生物安全柜及其它防護設(shè)置，如紫外線燈，排氣扇等操作區(qū)的工作臺及地面每日用消毒液擦拭一次，有污染時隨時消毒，每周大掃除一次。2、采血室每日操作前用清水擦拭操作臺一次，采血結(jié)束用消毒液擦拭操作臺、桌子和地面一次，紫外線每日照射消毒二次，每月空氣細菌培養(yǎng)一次，紫外線強度定期測定。3、各種檢驗標本的收集，送檢必須用相應指定的容器留取，不得外溢污染。4、靜脈及末稍采血，應嚴格執(zhí)行消毒隔離措施，靜脈抽血做到一人一針一筒一巾一帶一消毒，所用止血帶及紙墊每日消毒，末稍采血一人一片一管，杜絕交叉污染。5、一次性醫(yī)用器具包括采血針，注射器、尿杯、血紅蛋白微量吸血吸管，應嚴格做好領(lǐng)發(fā)登記，注射器先浸泡消毒后由供應室一對一調(diào)換，統(tǒng)一處理，其余一次性器具浸泡消毒后裝入污物袋送焚燒爐焚燒。6、檢驗人員在進行靜脈抽血時應嚴格遵守無菌操作技術(shù)，操作前必須洗手必須戴好帽子與口罩，操作臺和手被污染時應用肥皂和流水認真洗手，必要時用消毒液浸泡雙手，酒精、碘酒瓶每周更換消毒兩次。7、溢出試管外的血液，應立即用碘酒棉簽擦拭干凈，注意防止玻璃碎片刺傷手，并注意試管有無破裂。8、當針頭和碎玻璃刺傷手時,用流水沖洗,擠出血水,應立即用碘酒消毒局部。9、實驗室操作時應戴上手套。吸取標本，離心振蕩等應嚴格按操作規(guī)程，防止自身和實驗室受污染。10、已檢查標本與容器分別浸泡于次氯酸鈉(2000mg/L)中兩小時后，標本傾棄，一次性容器送焚燒，重復使用的經(jīng)清洗消毒和滅菌后再使用，均要有記錄。有毒化學試劑和放射性試劑使用后要經(jīng)無害化處理，防止污染環(huán)境。11、非科室工作人員不準進入實驗室，外來人員參觀需經(jīng)科主任同意方可進入。

實驗臺消毒措施實驗臺消毒措施必須符合艾滋病實驗室的通用生物安全要求。由專人按特定程序和方法進行清潔和消毒。儀器等表面消毒：工作結(jié)束后，用含有效氯1000mg/L的消毒液或75%乙醇溶液擦拭消毒，作用20分鐘以上。實驗器材的分類消毒：將使用后的銳器方入防刺破、防滲漏的密閉專用銳器處置盒內(nèi)，121℃高壓消毒30分鐘。其他器材方入有效氯為2000mg/L的含氯消毒液內(nèi)浸泡1小時以上。處理時應避免皮膚損傷。工作臺等物體表面消毒：工作完畢，用含有效氯2000mg/L的消毒液或75％乙醇溶液擦拭消毒，作用20分鐘以上。個人防護用品消毒：實驗結(jié)束，將隔離衣、口罩、帽子、手套、鞋套等121℃高壓消毒30分鐘。防護鏡浸泡在75％乙醇或有效氯為1000mg/L的含氯消毒劑中，作用30-60分鐘。手的消毒：用典伏或75％的乙醇擦拭，作用1-3分鐘?？諝庀荆好看螌嶒炃昂笥米贤鉄粽丈湎荆看尾簧儆?小時，每立方米空間安裝紫外燈瓦數(shù)≥1.5W，距紫外燈1米處照射強度≥70W/㎡。地面消毒：工作結(jié)束，應用含有有效2000mg/L的消毒液噴灑拖地。各類在實驗室實驗臺上操作后的廢棄物品均應視作物染物分類處理，所有廢棄物應視為艾滋病污染物品，按照醫(yī)院規(guī)定嚴格執(zhí)行處理。

廢棄物處置和實驗室消毒1、廢棄物處置從艾滋病實驗室出來的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應視為感染性廢棄物，應置于專用的密封防漏容器中，安全運至消毒室，并在高壓消毒后再進行處理或廢棄。2、艾滋病常用的物理消毒方法壓力蒸汽消毒，121℃，保持15～20min;干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持2～3h。3、艾滋病常用的化學消毒方法艾滋病最常用的化學消毒劑是含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000～5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10～30min。4、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉。5、生物安全柜工作臺面和儀器表面：75%乙醇。6、溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。7、污染的臺面和器具：2000mg/L次氯酸鈉,也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛浸泡消毒。

消毒液的配制及使用措施1、艾滋病實驗室最常用的化學消毒劑是含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000-5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10～30min。2、含氯消毒劑的配制：次氯酸鈉原液使用前進行1：20～1：50稀釋（2000-5000mg/L）或聯(lián)昌84使用前進行1：10～1：25（2000-5000mg/L）稀釋后，用于實驗室內(nèi)的消毒。3、乙醇，俗稱“酒精”，能夠殺滅多種細菌，對艾滋病病毒有一定的殺滅作用，70～75%的效果最好。因此，使用前新鮮配置足量70～75%的乙醇，用于生物安全柜、工作臺面和儀器表面的消毒，可以達到最佳的消毒效果。4、過氧乙酸也是目前使用比較廣泛的一種高效消毒劑，新鮮配置1～3%的過氧乙酸熏蒸，用于地面、墻壁、實驗器材及實驗室內(nèi)資料、文件、書本等物品的消毒。0.04%的過氧乙酸用于實驗室工作人員手浸泡1～20分鐘，再用肥皂洗手。5、2%戊二醛用于可浸泡物品的消毒，醫(yī)療器械等。6、艾滋病實驗室常用化學消毒劑的配置，本著多用多配，少用少配，現(xiàn)用現(xiàn)配的原則，保證消毒劑使用時的濃度，保證消毒效果。

檢驗科人員準入制度目的禁止與實驗室工作無關(guān)人員進入實驗室，保證進入實驗室的各類人員的安全，防止出現(xiàn)實驗室感染和病原微生物擴散。適用范圍檢驗科各實驗室職責檢驗科主任負責授權(quán)本科室人員進入實驗室工作、監(jiān)督檢查本制度的執(zhí)行情況及制度的修訂；實驗室組長負責本制度的執(zhí)行和對本制度提出修訂意見；實驗室工作人員執(zhí)行本制度和填寫相關(guān)記錄。具體要求實驗室門要保持關(guān)閉狀態(tài)，二級實驗室門口要有國際生物危險警告標志。禁止16歲以下人員和禁止保潔工作人員進入實驗室（室內(nèi)清潔工作由本室工作人員完成）。禁止在實驗室接待各種來訪人員。進入病原微生物室從事實驗活動人員要符合下列要求：經(jīng)過健康體檢，建立健康檔案。不得戴隱型眼鏡：手、臉部不能有較明顯外傷。具有臨床檢驗技術(shù)職稱和兩年以上臨床檢驗工作經(jīng)驗。經(jīng)過實驗室生物安全培訓和微生物實驗室操作技術(shù)培訓與考核。了解微生物室的生物安全防護和所有項目與儀器的操作的SOP文件及《實驗室突發(fā)事件處理預案和程序》。進入微生物室但不從事實驗活動的人員要符合下列要求：實驗室內(nèi)設(shè)施維修人員，要在實驗工作結(jié)束，并進行物體表面、地面和維修儀器消毒后，在實驗室工作人員陪同下進入，同時采取必要的實驗室生物安全防護措施并告知所從實驗室生物安全工作的注意事項。外來合作者、進修和學習人員并經(jīng)醫(yī)院科教科批準和備案。在進入實驗室之前，要了解實驗室工作的潛在風險、學習生物安全防護和所要進行所有工作的SOP文件，其所有操作要有實驗室正式工作人員在場陪同。檢查、參觀人員要有實驗室工作人員在場陪同，采取必要的實驗室生物安全防護措施。所有進入實驗室的人員，必須經(jīng)科主任授權(quán)批準。經(jīng)過批準進入實驗室從事實驗活動人員必須承諾遵守本實驗室各項規(guī)章制度和操作規(guī)程。

消防安全制度1、根據(jù)“誰主管、誰負責”的原則，實行科室負責制。2、主管領(lǐng)導和保衛(wèi)科對全體職工經(jīng)常進行消防安全教育，提高思想認識，掌握消防知識和消防器材的使用。3、嚴格禁止各種火種與易燃易爆物品，必須嚴格分區(qū)，保持一定的安全距離。實驗室實施單向流向制度，通道不得亂堆放易燃爆物品和雜物。4、嚴禁在實驗室內(nèi)吸煙。5、電器的安裝與拆除，必須由電工進行，嚴禁亂接電源，亂拉電線。6、各種機電設(shè)備、高溫電器設(shè)備、耐高壓容器和設(shè)施，使用時必須有專人負責，隨時檢查，消除隱患，嚴防事故發(fā)生。7、各防火區(qū)域設(shè)置的消防器材和設(shè)備，應定期進行檢查，維修和更換，隨時處于完好狀態(tài)，并不得隨便挪動。8、任何人發(fā)現(xiàn)火、水災等隱患者，必須及時向科領(lǐng)導報告。科主任及時向院領(lǐng)導報告，及時做好善事處理工作。

生物安全防護制度1、上崗工作人員應是經(jīng)過崗前安全與技術(shù)培訓，取得合格證，具有獨立工作能力的人員。2、進入實驗室應穿隔離衣、戴手套，必要時（如對篩查陽性標本進行復測或檢測高危標本）要戴防護眼鏡，防止污染暴露的皮膚和衣物。3、嚴格按照操作規(guī)程操作。操作過程中，不得用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。4、操作時可能發(fā)生的觸電、失火、針頭刺傷、燒傷、傳染性標本的污染，有應急處理的方法，有關(guān)工作人員均應熟悉。5、操作中手套破損，應立即丟棄，洗手后戴上新手套繼續(xù)操作，不慎發(fā)生瀉漏，應立即按照發(fā)生職業(yè)暴露后的處理措施，進行處理。6、防止腐蝕、灼傷、中毒、火災和爆炸等事件發(fā)生。7、實驗操作完畢后，應按照實驗室清理與消毒程序，進行善后處理。同時記錄相關(guān)資料與數(shù)據(jù)并存檔。8、工作結(jié)束后，應先洗戴手套的手，然后脫去手套丟棄，再脫去工作衣，用肥皂和流動水洗手后離開實驗室。9、注意安全，隨手關(guān)門，做好水，電，門的安全保衛(wèi)工作，防火防盜防水。

職業(yè)暴露的防護及處理措施

艾滋病檢測實驗室職業(yè)暴露是指檢驗工作人員在從事檢測工作過程中意外被艾滋病病毒感染者或者艾滋病病人的血液、體液污染了皮膚或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其他利器刺破皮膚,有可能被艾滋病病毒感染的情況。防護措施：醫(yī)務人員對所有病人的血液、體液及被血液、體液污染的物品均視為具有傳染性的病源物質(zhì)，醫(yī)務人員接觸這些物質(zhì)時，必須采取防護措施

1.醫(yī)務人員進行有可能接觸病人血液、體液的診療和護理操作時必須戴手套，操作完畢，脫去手套后立即洗手，必要時進行手消毒。

2.在診療、護理操作過程中，有可能發(fā)生血液、體液飛濺到醫(yī)務人員的面部時，醫(yī)務人員應當戴手套、具有防滲透性能的口罩、防護眼鏡；有可能發(fā)生血液、體液大面積飛濺或者有可能污染醫(yī)務人員的身體時，還應當穿戴具有防滲透性能的隔離衣或者圍裙。

3.醫(yī)務人員手部皮膚發(fā)生破損，在進行有可能接觸病人血液、體液的診療和護理操作時必須戴雙層手套。

4.醫(yī)務人員在進行侵襲性診療，護理操作過程中，要保證充足的光線，并特別注意防止被針頭、縫合針、刀片等銳器刺傷或者劃傷。

5.使用后的銳器應當直接放入耐刺、防滲漏的利器盒，也可使用具有安全性能的注射器、輸液器等醫(yī)用銳器，以防刺傷。6.禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。處理措施：1.脫離污染環(huán)境，用肥皂液和流動水清洗污染的皮膚，用生理鹽水沖洗粘膜。2.如有傷口，應當在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，再用肥皂液和流動水進行沖洗，禁止進行傷口的局部擠壓。3.受傷部位的傷口沖洗后，應當用消毒液，如75%的酒精或者0.5%的碘伏等進行消毒，并包扎傷口；被暴露的粘膜，應當反復用生理鹽水沖洗干凈。4.在暴露后的0周、第四周、第八周、第十二周及六個月時抽血進行檢測艾滋病病毒抗體。5.預防性用藥應當在發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后盡早開始，最好在四小時內(nèi)實施，最遲不得超過二十四小時；即使超過24小時，也應當實施預防性用藥，連續(xù)使用28天。6.發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后立即通知院感科備案、評估。接受相關(guān)指導，必要時給予藥物預防干預。在感染管理科的指導下，進行自我監(jiān)測，并保持信息溝通，以便及時、積極處理可能出現(xiàn)的問題。

保密程序制度艾滋病檢測實驗室的所有工作人員要具有高度的保密意識。不得對無關(guān)人員透漏任何實驗室內(nèi)部的信息。艾滋病檢測實驗室要有專人負責妥善保存與艾滋病/AIDS相關(guān)檢測項目的所有資料（包括送檢單、各種實驗記錄、感染者檔案、報告單的發(fā)放），不得擅自修改和銷毀。未經(jīng)省級衛(wèi)生行政部門許可，不得向無關(guān)人員或單位提供任何情況。嚴格遵守保密制度，杜絕泄密事件的發(fā)生。我院艾滋病實驗室屬于篩查實驗室，檢測的結(jié)果也不是最終結(jié)果，檢測到陽性結(jié)果應及時啟動應急預案，根據(jù)WHO提出的三級包裝系統(tǒng)送到上級實驗室作進一步確認。此時，不能出具艾滋病抗體陽性的結(jié)果報告，更不能告知受檢者本人。確認實驗室確認陽性結(jié)果，以機密級向送檢單位出具陽性報告；送檢單位接到報告后，由專人負責接收，并應及時會同醫(yī)院感染科上報縣衛(wèi)生防疫站和衛(wèi)生局。在對陽性者告知檢測結(jié)果時要先做好法律、醫(yī)學、生活等方面的咨詢。經(jīng)確認的陽性標本，包括在實驗室留存的標本，應送省級艾滋病抗體確認中心或省級衛(wèi)生行政部門指定的單位保存，不得擅自處理。標本保存時間至少5年。當發(fā)生職業(yè)暴露事故后，無論職業(yè)暴露事故級別的大小，對涉及的職業(yè)暴露者，均應注意做好保密工作。任何一個得到信息的人都要做好保密工作。保密守則：不該說的機密絕對不說；不該問的機密絕對不問；不該看的機密絕對不看；不該記錄的機密絕對不記錄；不在非保密本上記錄機密；不在私人通信中涉及機密；不在公共場所和家屬、子女、親友面前談論機密；不在不利于保密的地方存放機密文件資料；不在普通電話、明碼電話、普通郵件傳達機密事項；不攜帶機密材料游覽、參觀、探親、訪友和出入公共場所。

儀器的使用維護（一）、設(shè)立常用儀器的維護及校準制度，以保證正常運轉(zhuǎn)。1、酶標讀數(shù)儀、洗板機每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護光學零件不沾灰塵。每月：檢查洗滌時各孔是否與相應的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規(guī)定要求。每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準并保留記錄。實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應隨時進行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。2、移液器1年至少應該標定1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應隨時進行校準。標定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準盒等。校準多道移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)、準確地加樣。移液器的精密度應在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。（二）、儀器使用環(huán)境良好的工作環(huán)境不僅能確保艾滋病篩查實驗室的酶標儀、洗板機等儀器的準確性和穩(wěn)定性，還能夠延長其使用壽命。1、儀器應放置在無強磁場和干擾電壓的位置。2、儀器應放置在噪音低于40分貝的環(huán)境下。3、為延緩光學部件的老化，應避免陽光直射。4、操作環(huán)境溫度應在15°C-40°C之間，環(huán)境濕度在15%-85%之間。5、操作時電壓應保持穩(wěn)定。6、操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽、煙塵。7、保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及足夠的操作空間。（三）、儀器操作注意事項1、使用移液器加液，移液槍頭不能混用2、洗板要干凈，避免交叉污染。3、嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應時間準確。4、請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成注意做好清潔工作。5、不要在測量過程中關(guān)閉電源。6、對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差，應根據(jù)實際情況及時修改參數(shù)，以達到最佳效果。7、使用后蓋好防塵罩。出現(xiàn)技術(shù)故障時應及時與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標儀、洗板機等儀器。

儀器的標準操作程序酶標儀的標準操作程序開機將酶標儀電源打開，儀器自檢，隨后顯示當前的測量方法和方法及準備就緒測量方法在儀器所顯示的測量方法中選擇測量所需采用的測量方法，一般采用計算機控制在計算機上打開酶標儀控制軟件在樣本信息欄輸入樣本信息設(shè)置好檢驗項目后，進行排版布局點擊控制頁面的讀板按鈕，接受數(shù)據(jù)后經(jīng)行計算和保存。酶標儀的維護保養(yǎng)平常不用時，拔掉電源插頭，蓋好防塵罩。使用完畢，一定要拿下測試完的反應板，千萬不要將控制板留在載物臺上。若有液體濺到載物臺或酶標儀外壁，應用濕抹布及時擦去。每次使用完畢用濕抹布擦拭酶標儀，以保持其潔凈。

生物安全柜的標準操作程序目的生物安全柜在制藥、醫(yī)療生物以及工業(yè)實驗室等領(lǐng)域起到非常重要的作用。使用生物安全柜的目的是使工作人員及其工作環(huán)境免受生物細菌的危害，因為在各種致病性微生物的環(huán)境下工作將會直接威脅到人的生命安全。適用范圍Ⅱ級生物安全柜主要用于臨床、診斷、教學和群體中出現(xiàn)的與人類嚴重疾病有關(guān)的廣譜內(nèi)源性中度風險生物因子進行實驗診斷時的操作的。操作人員本實驗室所有實驗人員。操作步驟打開風機5～10分鐘，待柜內(nèi)空氣凈化并氣流穩(wěn)定后再進行實驗操作。將雙臂緩緩伸入安全柜內(nèi)，至少靜止1分鐘，使柜內(nèi)氣流穩(wěn)定后再進行操作。安全柜內(nèi)不放與本次實驗無關(guān)的物品。柜內(nèi)物品擺放應做到清潔區(qū)、半污染區(qū)與污染區(qū)基本分開，操作過程中物品取用方便，且三區(qū)之間無交叉。物品應盡量靠后放置，但不得擋住氣道口，以免干擾氣流正常流動。操作時應按照從清潔區(qū)到污染區(qū)進行，以避免交叉污染。為防可能激出的液滴，可在臺面上鋪一用消毒劑浸泡過的毛巾或紗布，但不能覆蓋住安全柜格柵。柜內(nèi)操作期間，嚴禁使用酒精燈等明火，以避免產(chǎn)生的熱量產(chǎn)生氣流，干擾柜內(nèi)氣流穩(wěn)定；且明火可能損壞HEPA濾器。工作時盡量減少背后人員走動以及快速開關(guān)房門，以防止安全柜內(nèi)氣流不穩(wěn)定。在實驗操作時，不可打開玻璃視窗，應保證操作者臉部在工作窗口之上。在柜內(nèi)操作時動作應輕柔、舒緩，防止影響柜內(nèi)氣流。安全柜應定期進行檢測與保養(yǎng)，以保證其正常工作。工作中一旦發(fā)現(xiàn)安全柜工作異常，應立即停止工作，采取相應處理措施，并通知相關(guān)人員。工作完全后，關(guān)閉玻璃窗，保持風機繼續(xù)運轉(zhuǎn)10～15分鐘，同時打開紫外燈，照射30分鐘。安全柜應定期進行清潔消毒，柜內(nèi)臺面污染物可在工作完成且紫外燈消毒后用2%的84消毒液擦拭。柜體外表面則應每天用1%的84消毒液擦拭。10、柜內(nèi)使用的物品應在消毒后再取出，以防止將病原微生物帶出而污染環(huán)境。生物安全柜的維護保養(yǎng)程序妥善進行生物安全柜的維護，可以為實驗室提供有效的安全保障。具體方法如下：日常維護可用70%的乙醇，或其他中性洗滌劑將生物安全柜的內(nèi)、外部進行徹底的擦拭。清洗時先斷電，防止消毒劑引起電器導電。定期檢查生物安全柜的硬件設(shè)備是否有損壞故障產(chǎn)生。在生物安全柜工作時，通常打開前視窗檢查其報警系統(tǒng)是否正常。正常情況下，這樣做會引起報警系統(tǒng)報警。不要用過強的清潔劑清潔柜體外部，強溶解性或強磨損性清潔劑可能會損壞生物安全柜外表面的粉體膜層。不銹鋼上頑固的污漬清除時，可以用MEK（甲基-乙基-酮）。但是，必須在清除污漬后立即用清水和中性清潔劑進行清洗。不銹鋼的定期清洗，可以保持和維護生物安全柜的優(yōu)質(zhì)表面。6、檢查日光燈和紫外線燈管，確定他們的正常工作。日光燈和紫外線燈管在長時間使用后，可以用酒精擦洗燈管表面的污潰，注意先斷電，以防觸電。紫外線燈應每年更換一次，以保持最佳的消毒滅菌效果。7、定期檢查生物安全柜的外殼是否有縫隙，發(fā)現(xiàn)縫隙可以用密封膠密封好。

離心機操作維護規(guī)程儀器分析原理和適用范圍原理：主要利用其高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生的高離心力場的作用，可將不同大小或不同密度的顆粒分開。顆粒是指細胞、細胞器或病毒、大分子等。適用范圍：血清、血漿或體液標本的離心處理。操作規(guī)程樣品準備：未抗凝標本垂直放置30-60分鐘后離心。標本配平。標本放入離心機。蓋上離心機蓋，鎖上安全鎖。打開離心機電源，設(shè)定離心轉(zhuǎn)速及離心時間。一般檢測項目的未抗凝血離心3000轉(zhuǎn)（rpm）7分鐘或2400轉(zhuǎn)（rpm）15分鐘。抗凝血或特殊檢測項目的樣本離心按作業(yè)指導書設(shè)定。待離心機轉(zhuǎn)速停止后或離心轉(zhuǎn)速降至0時，輕輕取出標本，關(guān)閉離心機電源。離心后立即將標本轉(zhuǎn)移至干凈不含抗凝劑或防腐劑的試管，同時此管應具有可識別標簽。維護保養(yǎng)項目：每日用軟布和中性洗滌劑清潔儀器內(nèi)外表面，離心轉(zhuǎn)筒每周及需要時消毒。校準：廠家校準。相關(guān)記錄：儀器使用記錄、定期維護記錄、期間核查記錄、校準記錄

標準操作規(guī)程人類免疫缺陷病毒抗體檢測（酶聯(lián)免疫法）科華生物操作方法：將試劑盒平衡至室溫，取出所需的條板，剩余的即時封存。用去離子水和蒸餾水25倍稀釋濃縮洗滌液。將所需數(shù)量的條板固定于支架按順序編號設(shè)置樣品孔、外部對照孔、陽性對照孔和陰性對照孔每次實驗需設(shè)外部對照陽性對照2孔、陰性對照1孔。在樣品孔中加入100ul待測樣品，陰性、陽性對照及外部對照每孔加入100ul，輕拍混勻。置37℃溫育60分鐘。置洗板機用洗滌液充分洗滌5遍，扣干。每孔加入100ul酶標記物，輕拍混勻，置37℃溫育30分鐘。重復步驟⑥。在所有孔內(nèi)加顯色A、顯色B劑各50ul，輕拍混勻，置37℃避光溫育30分鐘。每孔加入50ul終止液終止顯色反應，用酶標儀（雙波長450nm/630nm）測定各孔A值。結(jié)果判定：臨界值Cutoff＝0.1﹢陰性對照的平均A值（陰性對照的平均A值小于0.08按0.08計算，大于0.08按實際值計算），樣品的A值≥Cutoff值為艾滋病抗體陽性；樣品的A值<Cutoff值為艾滋病抗體陰性。同時滿足一下條件的實驗是有效的。NC<0.080PCx>0.8，抗-艾滋病-2陽性對照OD值>0.3雙波長讀數(shù)，顯色劑空白≦0.040，單波長讀數(shù)，顯色劑空白≦0.080.計算COV：COV=PCxX10%(若PCx>2.5按2.5計算)初篩陽性者應重新取樣進行雙孔復試，復試陽性者應按照“全國艾滋病檢測管理規(guī)范”送艾滋病確認實驗室進行相關(guān)確認試驗。

萬泰生物操作方法：配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。編號：將樣品對應微孔板按序號編號，每板應設(shè)陰性對照3孔，陽性對照1型，2型各1孔，空白對照1孔。（用雙波長檢測，可不設(shè)空白對照孔）。加樣：分別在相應孔中加入待測樣品或陰性，陽性對照100ul.溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育60±2分鐘。洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。加酶：每孔加入酶標試劑100ul,空白孔除外。溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育30±1分鐘。洗板：操作同步驟5.顯色：每孔加入顯色劑A，B液各50ul,輕輕振蕩混勻，37±1℃避光顯色30±1分鐘。測定：每孔加終止液50ul,輕輕振蕩混勻，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。設(shè)定酶標儀波長于450nm處（建議用雙波長450nm/600-650nm）,用空白孔調(diào)零后測定各孔A值。結(jié)果判讀:陰性對照孔A值≤0.10，陽性對照孔A值≥0.80，否則實驗無效。若有1孔陰性對照A值大于0.1應舍棄；若兩孔或兩孔以上陰性對照A值大于0.1，實驗無效。陰性判定：樣品A值＜臨界值（CUTOFF）者為艾滋病抗體陰性。陽性判定：樣品A值≥臨界值（CUTFF）者為艾滋病抗體陽性（注意：初試陽性應重新取樣雙孔復試。復試陽性者按《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》送艾滋病確證實驗室進行確證實驗。）

丙型肝炎病毒抗體檢測（酶聯(lián)免疫法）操作步驟：配液：濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰性對照3孔，陽性對照2孔和空白對照1孔（空白對照孔只加稀釋液不加樣品及酶標試劑）其余各孔加入100UL樣本稀釋液。加樣：分別在相應孔中加入待測樣品，陰，陽對照10微升，輕輕振蕩混勻。溫育：用封版膜封版后，置37oc溫育60分鐘。洗滌：揭掉封版膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶標記抗體100微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：揭掉封版膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色30分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），輕輕振蕩混勻。測定：10分鐘內(nèi)測定結(jié)果，設(shè)定酶標儀單波長450nm或雙波長450nm/600-650nm測定。用空白孔調(diào)零點后測定各孔A值。結(jié)果判斷臨界值（CUT/OFF）計算：CUT/OFF=陰性對照孔A均值+0.12。（不足0.02按0.02計算）陽性判定：樣品A值≥臨界值（CUTOFF）者判為抗HCV陽性。(注意初試陽性應重新取樣雙孔復試)陰性判定：樣品A值<臨界值（CUTOFF）者判為抗HCV陰性。

梅毒螺旋體抗體（酶聯(lián)免疫法）操作步驟：配液：濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰性對照3孔，陽性對照2孔和空白對照1孔（用雙波長檢測，可不設(shè)空白對照孔）加樣：分別在相應孔中加入待測樣品，陰，陽對照100微升，輕輕振蕩混勻。溫育：用封版膜封版后，置37oc溫育60分鐘。洗滌：揭掉封版膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶標記抗體100微升，輕輕振蕩混勻。溫育：用封版膜封板后，置37oc溫育30分鐘。洗滌：揭掉封版膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色30分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），輕輕振蕩混勻。測定：10分鐘內(nèi)測定結(jié)果，設(shè)定酶標儀波長于450nm（建議雙波長450nm/600-650nm測定）用空白孔調(diào)零點后測定各孔A值。結(jié)果判斷臨界值（CUT/OFF）計算：臨界值=陰性對照孔A均值+0.18。陽性判定：樣品A值≥臨界值（CUTOFF）者判為TP陽性。(注意:初試陽性應重新取樣雙孔復試)陰性判定：樣品A值<臨界值（CUTOFF）者判為TP陰性。

乙肝五項操作規(guī)程乙型肝炎表面抗原（HBsAg）操作步驟：配液：配制工作濃度洗滌液（以純化水做25倍稀釋）編號：將樣品對應微孔按序編號（共預留陰性對照孔3孔、陽性對照1孔、建議預留空白對照1孔）加樣：加入75微升待測樣本和陰、陽性對照與反應孔中。溫育：用封片紙覆蓋反應板后，置37oc溫育60分鐘。加酶標抗體：取出反應板，撕去封片，在已加入待測樣本和陰性、陽性對照孔中加入50微升酶結(jié)合物。微孔振蕩器或手工輕輕振蕩10秒鐘。溫育：用封片紙覆蓋反應板后，置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內(nèi)液體甩干。選擇5次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，用封板紙覆蓋反應板后，將反應板放置37oc孵育30分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用酶標儀讀數(shù)，波長450nm。（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm或630相近的波長）若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對照孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性。酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：COV:Cut-offValue參考值PC：陽性對照OD值NCx:陰性對照平均OD值。NCx=(NC1+NC2+NC3)÷3檢測有效性：NCx≤0.1、PC≥1.0,則檢測結(jié)果有效。COV=NCx+0.100S:待測樣品的OD值，S/COV：待測樣本和COV的比值。陽性判定：樣品OD值S/COV≥1.0者判為HBsAg陽性。陰性判定：樣品OD值S/COV<1.0者判為HBsAg陰性。

乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）、操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（20*）用蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質(zhì)控血清。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結(jié)合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內(nèi)液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體（抗－HBs）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗體（抗－HBs）陰性。酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：COV=陰性對照平均OD值×2.1。（陰性對照孔OD值低于0.05者按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。陽性判定：樣品的OD值大于或等于COV值時，說明HBsAg陽性。陰性判定：樣品OD值小于COV值時，說明為HBsAg陰性。

乙型肝炎核心抗體（抗-HBc）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）加樣：將待測樣本用生理鹽水1:30稀釋。（稀釋樣本檢測結(jié)果為臨床意義；樣本原液加樣，檢測結(jié)果為流行病學意義。用戶可根據(jù)實際情況選擇。）分別在相應孔中加入稀釋樣本50微升和陰，陽對照50微升及質(zhì)控血清。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結(jié)合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內(nèi)液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體（HBcAb）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗體（HBcAb）陰性。酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：未稀釋樣品CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N×0.3。1:30稀釋樣品CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N×0.5。陽性判定：樣品OD值小于COV，說明該樣品HBcAb陽性。陰性判定：樣品OD值大于或等于COV,說明該樣品HBcAb陰性。

乙型肝炎e抗原（HBeAg）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質(zhì)控血清。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結(jié)合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置浸泡30-60秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內(nèi)液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎e抗原（HBeAg）陽性；無色者為乙型肝炎e抗原（HBeAg）陰性。酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N×2.1。（陰性對照孔OD值低于0.05者按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算）陽性判定：樣品OD值大于或等于COV值時，說明該樣品HBeAg陽性。陰性判定：樣品OD值小于COV值時，說明該樣品HBeAg陰性。

乙型肝炎e抗體（抗-HBe）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質(zhì)控血清。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結(jié)合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內(nèi)液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，無色者為乙型肝炎e抗體（HBeAb）陽性；黃色者為乙型肝炎e抗體（HBeAb）陰性。（2）酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：COV=(陰性對照平均OD值+陽性對照平均OD值)×0.5陽性判定：樣品OD值S/CO≤1者判為HBeAb陽性。 陰性判定：樣品OD值S/CO＞1者判為HBeAb陰性。

實驗室質(zhì)量管理制度及結(jié)果判讀質(zhì)量管理制度1、根據(jù)省臨檢中心的有關(guān)規(guī)定，開展實驗室室內(nèi)的質(zhì)量控制，繪制艾滋病實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制圖，包括20次OD值、S、靶值、CV%值。對室內(nèi)質(zhì)控應每日有記錄，有每月的S、靶值、CV%值。對失控情況有糾正方法，有預防性措施。2、積極參加省臨檢中心組織的室間質(zhì)控活動，對每次質(zhì)控評價應有記錄。3、計量儀器應定期校正，每年一次。4、精密分析儀器由專人負責，有使用記錄和維修記錄。5、商品化的試劑盒的申購由專業(yè)組長負責申報，每月一次報科主任審批，不得使用過期，無批準文號的劣質(zhì)試劑，進貨統(tǒng)一由科室管理，自配試劑須嚴格校正后方可使用。6、建立完整的艾滋病篩查實驗室標準化操作程序，并應嚴格按程序執(zhí)行。7、當日發(fā)出的全部檢驗報告單須經(jīng)當日科室總值班人員嚴格審核后方可發(fā)出。8、科室在完成嚴格的室內(nèi)、室間質(zhì)量控制體系的同時，應逐步建立全面質(zhì)量控制體系，對標本的采集，運送，保存等納入嚴格的管理之中。

室內(nèi)質(zhì)控失控分析管理制度室內(nèi)質(zhì)控出現(xiàn)失控時，應填寫失控報告單，并上交專業(yè)主管，由專業(yè)主管做出是否發(fā)出與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批患者標本檢驗報告并分析及登記失控原因。失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響，這些因素包括操作上的失誤、試劑、校準物、質(zhì)控品的失效，儀器維護不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、質(zhì)控限范圍、一次測定的質(zhì)控標本數(shù)等等。失控信號一旦出現(xiàn)就意味著與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批患者標本報告可能作廢。此時，首先要盡量查明導致的原因，然后再隨機挑選出一定比例(例如5-10％)的患者標本進行重新測定，最后根據(jù)既定標準判斷先前測定結(jié)果是否可接受，對失控做出恰當?shù)呐袛唷ε袛酁檎媸Э氐那闆r，應該在重做質(zhì)控結(jié)果在控以后，對相應的所有失控患者標本進行重新測定。如失控信號被判斷為假失控時，常規(guī)測定報告可以按原先測定結(jié)果發(fā)出，不必重做。當?shù)玫绞Э匦盘枙r，可以采用如下步驟去尋找原因：立即重測定同一質(zhì)控品。此步是主要是用以查明人為誤差，每一步都認真仔細操作，以查明質(zhì)控的原因；另外，這一步還可以查出偶然誤差，如是偶然誤差，則重測的結(jié)果應控。如果重測結(jié)果仍不在允許范圍，則可以進行下一步操作。新開一瓶質(zhì)控品，重測失控項目。如果質(zhì)控品結(jié)果正常，那么原來那瓶質(zhì)控血清可能過期或在室溫放置時間過長而變質(zhì)或者被污染。如果結(jié)果仍不在允許范圍，則進行下一步。進行儀器維護，重測失控項目。檢查儀器狀態(tài)，查明光源是否需要更換，比色杯是否需要清洗或更換，對儀器進行清洗等維護。另外還要檢查試劑，此時可更換試劑以查明原因。如果結(jié)果仍不在允許范圍，則進行下一步。重新校準，重測失控項目。用新的校準液校準儀器，排除校準液的原因。請實際工作經(jīng)驗豐富的工作人員或?qū)＜业膸椭?。如果前五步都未能得到在控結(jié)果，那可能是儀器或試劑的原因，只有向儀器或試劑廠家聯(lián)系請求技術(shù)支援。

外部質(zhì)控血清的制備和保存1、質(zhì)控血清的制備和保存（以ELISA試驗檢測艾滋病抗體為例）在每次實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。（1）、內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。（2）、外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設(shè)置的一套對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。2、外部對照質(zhì)控血清的制備艾滋病抗體陽性和陰性血清，56℃30min滅活，3000r/min，離心15min。弱陽性對照可以用艾滋病抗體陰性血清梯度稀釋艾滋病抗體強陽性血清并標定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測結(jié)果的防腐劑）用0.2μm濾膜過濾除菌。3、外部對照質(zhì)控血清的保存（1）、按一周實驗用量分裝、分類、標記、封口、-20℃凍存于非自動除霜冰箱中。（2）、外部對照血清不可反復凍融，一旦融化后應該存放28℃，供一周內(nèi)使用。4、外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。5、外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預期的變異（CV＜20%），并且質(zhì)控物的成分應在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應無菌，并不含有影響ELISA反應的防腐劑。

室內(nèi)質(zhì)量控制程序目的：保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠,充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。該SOP變動程序：本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。方法1、分析前質(zhì)控人員培訓實驗是人操作的，因此檢驗人員需經(jīng)過培訓，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識：檢驗項目的基本原理（ELISA原理）；臨床意義；熟悉檢測技巧，了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點；熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）；熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識。某些特殊項目檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓班，考試合格后持證上崗。室內(nèi)質(zhì)控血清的制備：質(zhì)控血清每年列出計劃報質(zhì)控組采購，一般采用CutOff值附近的陽性質(zhì)控血清-20℃凍存?zhèn)溆?；使用前室溫復融。試劑盒選擇衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標簽的產(chǎn)品。試劑盒評價：根據(jù)該試劑生物制品鑒定所的批批檢定報告，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量計劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；通過詢問試劑包被物的組成，如原料來源（基因工程或合成多肽），片段的組合（按比例混合或化學合成），片段的長短等判斷試劑的優(yōu)劣；參考室間質(zhì)評報告中對試劑的評價結(jié)果，了解不同試劑的質(zhì)控成績。臨床實驗室根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的試劑評價結(jié)果，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣。儀器質(zhì)控為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應建立維護和校正儀器的標準操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱）和酶標儀。移液器：ELISA加樣量?。?-100ｕl），其準確性直接影響實驗結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確，一般應在±10%以內(nèi)；水浴箱：經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實測溫度是否一致，允許有±1℃的誤差；酶標儀：經(jīng)常維護其光學部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，準確性為±1%，重復性達0.5%。酶標儀校正程序：a)濾光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標儀上卸下，用UV-2201型紫外-可見分光光度計（波長精度±0.3nm）于可見光區(qū)對每個濾光片進行掃描，其檢測值與標定值之差為濾光片波長精度。一般酶標儀無585nm濾光片，可選用550nm或630nm濾光片。450nm濾光片的檢定選用普魯蘭溶液（校正波長為630nm）。b)通道差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標板小孔杯（杯底須光滑，透明，無污染以酶標板架作載體，將其（內(nèi)含200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A左右）置于8個通道的相應位置，蒸溜水調(diào)零，于490nm處連續(xù)測三次,觀察其不同通道的檢測器測量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示。孔間差的測量是選擇同一廠家，同一批號酶標2板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.100A左右）先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。c)零點飄移（穩(wěn)定性觀察）：取8只小孔杯分別置于8個通道的相應位置，均加入200ul蒸餾水并調(diào)零，于490nm處每隔30分鐘測一次，觀察各個通道4小時內(nèi)吸光度的變化。d)精密度評價：每個通道3只小杯分別加入200ul高中低3種不同濃度的甲基橙溶解，蒸餾水調(diào)零，于490nm作雙份平行測定，每日測二次（上下午各一次），連續(xù)測定20天。分別計算其批內(nèi)精密度，日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應的CV值。e)線性測定：用電子天平精確稱取甲基橙配制5個系列的溶液，于490nm平行測8次，取其均值。計算其回歸方程，相關(guān)系數(shù)及標準估計誤差s，并用±1.96s表示樣品測量的誤差范圍.雙波長測定評價：取一分甲基橙溶液，分別加入3種不同濃度的溶血液（測定波長為490nm，校正波長為585nm），先后于8個通道檢測，每個通道測3次，比較各組之間是否具有統(tǒng)計學差異，以考察雙波長消除干擾組分的效果。標本的采集和保存標本采集時應盡量避免溶血，因紅細胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì)干擾立可讀方法的結(jié)果，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本會增加非特異性顯色造成假陽性。臨床實驗室長菌的標本同樣的道理也易產(chǎn)生假陽性，因菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會產(chǎn)生假陽性反應。臨床實驗室抗凝不完全的標本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是不使用用肝素抗凝劑。標本在冰箱中保存時間過長易導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深，一般血清置4℃冰箱5天內(nèi)完成測試。如需保存一周以上則要-20℃冰凍保存，凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，融解時應上下顛倒充分混勻，同時避免氣泡。可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。反復凍融會使抗體效價跌落，如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。ELISA的靈敏度>1ng/ml水平上,標本間的污染要盡量避免，尤其不應與生化試驗用同一管標本。2、分析中質(zhì)控臨床實驗室ELISA實驗的結(jié)果受操作影響很大，每個步驟包括加樣，溫育，洗滌，顯色，酶標儀讀數(shù)均應認真負責才能充分發(fā)揮ELISA的高靈敏，強特異的優(yōu)點。因此,應建立實驗項目的標準操作程序(SOP)加樣應用微量移液器（加樣槍）按規(guī)定的量加入微孔板底部，避免加在孔壁上部，不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。每次加樣應更換吸嘴，做到一人一吸頭，以免發(fā)生交叉污染；干吸頭預先在血清中抽吸三次。樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應，所以一定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30秒鐘，同時注意防止液體溢出。如后面操作步驟中加二種以上試劑時均需振蕩混勻。如用滴瓶滴加試劑應先將滴瓶搖勻并擠去第一滴有氣泡的試劑后加樣。溫育抗原抗體反應需要在一定溫度下（37°C），經(jīng)過一定的時間才能達到反應的平衡點，ELISA邊緣效應是由溫育形成的。所以溫育一般采用能使反應液溫度迅速達到平衡的水浴法。水要浸至板條的1/3處。反應板不宜疊放，注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定控制，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定。洗滌⑴手工洗滌一般采用浸泡方法：1）甩去孔內(nèi)反應液；2）用洗滌液過洗一遍（即注滿孔后即甩去）；3）微孔重新注滿洗液后浸泡2-3分鐘，間歇搖動；4）甩去孔內(nèi)液體，拍板，用紙吸干。重復以上操作至少5次。注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。⑵洗板機洗板一定要預先把板架放平，使洗板機上的每個放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底，將孔內(nèi)液體全部吸干，同時要設(shè)置一定的浸泡時間。如出現(xiàn)機洗后拍板有較多殘留液時應再用手工洗2次以上。關(guān)機前要用蒸溜水沖洗管道，避免堵孔。臨床實驗室顯色⑴HRP催化底物的一步呈色反應，同樣需要一定的時間和溫度，一定要按照說明書規(guī)定的時間溫度（一般為37°C，10-15分鐘）恒定反應后終止；⑵或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達0.2左右使的時間而恒定反應時間。3、酶標儀判讀結(jié)果a)顯色反應終止后應立刻比色（30分鐘內(nèi)）。b)常見的顯色系統(tǒng)有OPD和TMB二種，以后者最為常見，而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。OPD終止后顯棕色，測定波長為490nm；TMB終止后顯黃色，測定波長為450nm，二種底物的校正波長均用630nm。c)使用雙波長的優(yōu)點可以消除反應板條上的劃痕手印的干擾。同時要注意反應板應用紙吸干后才能置酶標儀中比色，否則吸光度易出現(xiàn)負值或損壞濾光片。3.3分析后質(zhì)控4、報告方式定性試驗：國內(nèi)外為便于統(tǒng)一計算，一律按S/COV方式報告，S為標本A值，COV即CutOff值（或COV）⑴夾心法和間接法以S/COV≥1為陽性；競爭法與中和法以S/COV﹤1為陽性⑵COV的計算公式以試劑盒說明書的為準常見的有：a)COV=2.1×N（當N不足0.05時按0.05計），此公式由P/N>2.1換算而來，常用于夾心法。b)COV=0.5×N，從抑止率公式換算而來，常用于競爭，中和法。c)COV=N+C（C為常數(shù)），用于間接法。d)COV=C×P+N（C為常數(shù)），用于間接法。此公式最客觀，但對廠家要求很高，陰陽性對照測定值要基本恒定。定量分析：嚴禁用定性試劑盒做定量分析。⑴用已知量的系列標準品，繪制標準曲線，結(jié)果以絕對量或單位表示。ELISA的標準曲線每次都要和待測標本做在同一塊板上。⑵現(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標準曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線，要得到精確的結(jié)果實屬不易。⑴所有實驗的原始資料均應存檔；所有的記錄均應規(guī)范登記在冊；原始登記表應記錄試劑來源、批號；質(zhì)控血清的來源及測定值并注明是否在控；簽上實驗者姓名及審核者姓名。⑵如試驗結(jié)果對臨床診斷有決定意義，其樣本應保留，至少與病歷保存期一致。a)定性試驗ELISA定性試驗的臨床意義在于是否檢出病原體，與檢出量無關(guān)，因此QC要保證試驗的靈敏度和特異性。生化的質(zhì)控圖方法僅能觀察靈敏度而無法監(jiān)控特異性。建議使用臨界值血清界定法：將試劑盒所設(shè)的陰陽性對照作為內(nèi)對照指示反應；另設(shè)臨界值、高值質(zhì)控血清，正常人血清作為外對照，與標本同時檢測，臨界值S/C.O≥1，高值質(zhì)控血清S/C.O≥10，正常人血清A值在0.05-0.07之間。陽性質(zhì)控血清失控（臨界值為靈敏度，高值為“HOOK”效應監(jiān)控）應重做陰性標本；陰性對照失控應重做陽性標本。以表格式記錄每塊板的外對照實驗結(jié)果，作為QC資料存檔。b)定量試驗ELISA定量試驗常見于腫瘤因子（如AFP，CEA，CA系列），激素類，免疫球蛋白類，這些物質(zhì)在體內(nèi)有一定的量（正常范圍），超出這個量才呈病理情況，故需定量測定。定量試驗的質(zhì)控方法可參考生化方式。c)“即刻性”質(zhì)控在開始進行質(zhì)控時，只需要有3個質(zhì)控血清測定值即可進行質(zhì)控。當這組數(shù)據(jù)擴大到20次有效值時就可以計算RCV的X，s。方法：⑴先將測定值從小到大排列，X1最小，Xn最大；⑵計算X和s；⑶計算SI上限值和下限值。SI上=（X最小-X）/S，SI下=（X最大-X）/S⑷對照SI表，檢查是否出控，SI上、下限≤規(guī)定值，在控；SI上或下限>規(guī)定值，失控。

室間質(zhì)量控制程序目的采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評價各實驗室的試驗結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準確性，了解各實驗室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性。。基本概念質(zhì)量控制是監(jiān)視ELISA操作全過程，排除誤差，維持標準化操作的一個管理過程。這一過程是通過一個反饋環(huán)路進行的：確定控制的對象；規(guī)定控制對象的標準（預期值）；制定或選擇控制方法和手段；測量實際數(shù)據(jù)；