DB11-T 1220-2015 西伯利亞鱘全人工繁殖技術(shù)規(guī)范

ICS65.150

B52

備案號(hào):46592-2015DB11

北京市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB11/T1220—2015

西伯利亞鱘全人工繁殖技術(shù)規(guī)范

SpecificationsofartificialpropagationtechniquesonSiberiansturgeon

（Acipenserbaerii）

2015-07-08發(fā)布2015-11-01實(shí)施

北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB11/T1220—2015

西伯利亞鱘全人工繁殖技術(shù)規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了西伯利亞鱘（Acipenserbaerii）全人工繁殖時(shí)的親魚培育及挑選、人工催產(chǎn)、精液

采集與保存、魚卵采集、人工授精、脫粘、孵化和出苗的技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于西伯利亞鱘的全人工繁殖。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

DB11/T193—2003鱘魚養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

全人工繁殖artificialpropagation

在人工養(yǎng)殖條件下從苗種培育到性腺發(fā)育成熟的親魚使用外源性激素催產(chǎn)等技術(shù)進(jìn)行人工繁殖。

3.2

極化指數(shù)polarizationindex

魚卵動(dòng)物極到卵核的距離與動(dòng)物極到植物極的距離之比。

4親魚培育

4.1人工培育

人工繁育的苗種或性腺發(fā)育在II期之前的野生魚種,在水泥池、池塘或工廠化車間等人工養(yǎng)殖條件

下，按照DB11/T193—2003的要求，培育成為性腺發(fā)育達(dá)到IV期，能夠人工催產(chǎn)的親魚。性腺分期方法

見附錄A。

4.2親魚性成熟年齡

雌魚性成熟年齡6～8齡，雄魚4～5齡。

5親魚挑選

5.1雌魚選擇

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DB11/T1220—2015

用挖卵器從雌魚體內(nèi)取出卵子，目測(cè)卵呈灰黑色，用卡尺量長(zhǎng)卵徑大于2.6mm。將卵子放入水中煮2

min～3min，晾涼后用刀片沿卵的長(zhǎng)軸切開，計(jì)算極化指數(shù)。挑選魚卵極化指數(shù)小于1/20的雌魚用于催

產(chǎn)。極化指數(shù)計(jì)算方法見公式（1）。

式中：

PI——極化指數(shù)；

l1——魚卵動(dòng)物極到卵核的最短距離；

l2——魚卵動(dòng)物極到植物極的距離。

5.2雄魚選擇

穿刺取性腺，目測(cè)性腺呈白色或乳白色，顯微鏡壓片檢測(cè)可見到精子。

6人工催產(chǎn)

6.1藥物種類

人工催產(chǎn)藥物可選用促黃體素釋放激素類似物（LHRH-A）單獨(dú)使用,或者和地歐酮（DOM）混合使用。

6.2注射劑量

雌魚：每千克魚體重LHRH-A用量為30μg～100μg；每千克魚體重混合DOM用量為1mg～2mg。

雄魚：每千克魚體重LHRH-A用量為20μg～50μg。

6.3注射次數(shù)

雌魚一般為兩次注射，第一次注射10%的劑量，10h～15h后注射90%的劑量；雄魚一次注射，在雌魚

第二次注射前2h～6h注射。

6.4注射方法

可采取背鰭基部下方肌肉注射和胸鰭基部注射兩種方法，注射操作完成后拔針頭時(shí)應(yīng)用手指輕輕按

摩注射處,使藥物盡量不外流。

7精液采集與保存

7.1采集時(shí)間

注射催產(chǎn)藥物10h左右開始檢查雄魚，輕壓雄魚腹部時(shí)發(fā)現(xiàn)乳白色精液流出，即可開始采集精液，

初次采集后每隔5h左右檢查并采集1次，一般可以采集3～4次。

7.2采集方法

導(dǎo)管吸出法：將醫(yī)用導(dǎo)管與醫(yī)用注射器前端相連，用干燥毛巾將生殖孔周圍體表擦干；輕壓腹部有

少量精液排出時(shí)，將導(dǎo)管深入雄魚生殖孔內(nèi)，用注射器抽取精液。宜使用內(nèi)徑3mm、長(zhǎng)度5cm的醫(yī)用導(dǎo)管

和100ml的醫(yī)用注射器。使用工具均需消毒。

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DB11/T1220—2015

7.3精液保存

將取出的精液移入干燥燒杯中，封口后放入冰箱0℃～4℃保存。采出后和使用前的精液均應(yīng)用顯微

鏡進(jìn)行精子活力檢測(cè)。

8魚卵采集

8.1擠壓法

用干燥毛巾擦干生殖孔周圍，擠壓腹部?jī)蓚?cè)，將魚卵擠入干燥容器內(nèi)。擠壓法采卵需間隔1h～2h

多次采集，直到擠壓腹部無(wú)魚卵排出為止。

8.2手術(shù)法

使用100mg/L的間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222）或50mg/L的丁香酚溶液麻醉雌魚，然后固

定在操作臺(tái)上，用75%酒精消毒腹部，用手術(shù)刀在距生殖孔前方10cm左右的腹部切一個(gè)3cm～5cm切口，

從魚體腹部?jī)蓚?cè)由頭部向尾部反復(fù)擠壓，將魚卵從切口處擠出；或用不銹鋼匙從切口伸入腹腔取出魚卵，

放在干燥容器內(nèi)。魚卵全部取出后，用聚丙烯絲線縫合切口，并對(duì)縫合部位用碘酒消毒。

所有使用工具均應(yīng)消毒。

9人工授精

9.1精液用量

根據(jù)精液濃度及精子活力確定使用精液體積，每公斤魚卵使用10ml～20ml精液。

9.2人工授精方法

根據(jù)魚卵總量，計(jì)算需要的精液量。用養(yǎng)殖池水快速稀釋精液50～100倍后倒在魚卵上，用羽毛攪

動(dòng)3min～5min進(jìn)行人工授精。授精時(shí)宜選擇活力強(qiáng)的精液混合使用。

10脫粘

使用醫(yī)用滑石粉配成20%～30%的水溶液，將受精卵倒入含有該溶液的容器內(nèi)，用手工或脫粘裝置攪

動(dòng)40min～60min。每公斤受精卵使用10L～15L滑石粉溶液。為防止缺氧，宜攪動(dòng)20min～30min后，更換

一次滑石粉溶液。

11孵化

11.1孵化裝置

可選用尤先科篩網(wǎng)式孵化器或麥克唐納瓶式孵化器。

11.2孵化條件

11.2.1溫度

保持水溫13℃～16℃。

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11.2.2溶氧

不小于6mg/L。

11.2.3光照

避免陽(yáng)光直射。

11.2.4孵化用水

經(jīng)過(guò)不大于150目的篩絹過(guò)濾，避免將敵害生物帶入。

11.3孵化期日常管理

11.3.1水霉控制

應(yīng)及時(shí)揀出死卵。

在孵化初期，每日用5mg/L的亞甲基蘭浸泡魚卵15min；在接近魚卵破膜時(shí)停止浸泡。

11.3.2受精率統(tǒng)計(jì)

在魚卵發(fā)育到原腸中后期時(shí)開始統(tǒng)計(jì)受精率。

12出苗

水溫13℃～16℃，受精卵孵化6d±1d開始出苗；溫度越低，出苗時(shí)間越長(zhǎng)。

尤先科篩網(wǎng)式孵化器魚苗孵出后留在方槽內(nèi)，及時(shí)撈出孵出仔魚，放入魚苗培育池；麥克唐納瓶式

孵化器在開始出苗時(shí)架設(shè)水槽，使孵出魚苗直接流入集魚箱或魚苗培育池。

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附錄A

（資料性附錄）

西伯利亞鱘雌性性腺發(fā)育分期方法

A.1性腺I期

性腺外觀呈透明帶狀，肉眼看不見卵粒，辨認(rèn)不出卵巢與精巢。切片可見到正在分裂的卵原細(xì)胞簇

及直徑40μm～100μm的卵母細(xì)胞，卵母細(xì)胞具有較大的細(xì)胞核，占整個(gè)細(xì)胞大小的一半以上，細(xì)胞核

內(nèi)只見核質(zhì)還沒(méi)有核仁出現(xiàn)。

A.2性腺II期

Ⅱ期卵巢呈淡黃色被脂肪覆蓋，在切片中觀察初級(jí)卵母細(xì)胞在數(shù)量上和面積上占優(yōu)勢(shì)。此期卵母細(xì)

胞體積較卵原細(xì)胞大，直徑約100μm～500μm，細(xì)胞質(zhì)增多，細(xì)胞核明顯，核膜內(nèi)壁有1圈核仁分布。

Ⅱ期后期卵母細(xì)胞的核仁數(shù)顯著增加，大小不等，排列在核膜內(nèi)緣。

A.3性腺III期

卵巢中卵粒呈灰色，切片可觀察到卵細(xì)胞近似橢圓形，外包濾泡細(xì)胞，核仁變小數(shù)目增多，并且密

集排列在核膜內(nèi)側(cè)。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有較多的卵黃顆粒，分布于細(xì)胞質(zhì)的大部分區(qū)域。在濾泡細(xì)胞膜和核膜

之間出現(xiàn)一環(huán)狀的脂肪滴，此期細(xì)胞核在中央沒(méi)有發(fā)生極化。

A.4性腺IV期

IV期卵巢中卵呈深褐色，橢圓形，脂肪極少，體積增大，細(xì)胞長(zhǎng)軸直徑1500μm～2500μm，核徑與

胞徑比值減小。根據(jù)細(xì)胞核偏移情況將該期卵母細(xì)胞分為早、中、晚3個(gè)發(fā)育階段。當(dāng)卵細(xì)胞發(fā)育到中

期階段時(shí)，細(xì)胞核向動(dòng)物極移動(dòng)，開始極化。到IV期末,核極化到PI值小于0.1左右,可以進(jìn)行人工催

產(chǎn)繁殖。

A.5性腺V期

發(fā)育到V期的卵巢，卵呈黑褐色，充滿腹腔，卵開始從濾泡膜內(nèi)釋出，在動(dòng)物極用肉眼可觀察到灰

白色的圓斑，即極斑，在動(dòng)植物極相交處色素沉積，形成明顯的深色圓環(huán)，即極環(huán)。卵核膜消失，極化

核切面形狀不規(guī)則，接近動(dòng)物極。卵黃至卵膜外側(cè)有黑色顆粒層、絨毛膜層和殘存的部分濾泡膜。

A.6性腺VI期

VI期卵巢的卵已經(jīng)產(chǎn)出，未產(chǎn)出的卵會(huì)退化凋亡被魚體吸收，卵巢中剩下少量Ⅱ期卵母細(xì)胞。

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DB11/T1220—2015

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