DB11-T 1648-2019 櫻桃砧木組培快繁技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20

B05

備案號：63653-2019DB11

北京市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB11/T1648—2019

櫻桃砧木組培快繁技術(shù)規(guī)程

Technicalregulationforcherryrootstocksmicropropagation

2019-06-18發(fā)布2019-10-01實(shí)施

北京市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB11/T1648—2019

櫻桃砧木組培快繁技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了櫻桃砧木組培快繁過程中容器、工具的清洗與滅菌、培養(yǎng)基的配制、外植體的選取及

清洗、接種、初代培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽過渡等技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于海櫻系列、藍(lán)丁系列和吉塞拉系列櫻桃砧木苗的組織培養(yǎng)快速繁殖。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

NY/T2306—2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

外植體explant

從自然生長的活體植物上獲取的用于建立植物組培快繁體系的起始材料。

[NY/T2306—2013，定義3.8]

3.2

接種inoculation

將消毒后的外植體在無菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基中的過程。

改寫NY/T2306—2013，定義3.3。

3.3

初代培養(yǎng)primaryculture

消毒后的外植體接種在無菌培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，獲得初級無菌植物材料的培養(yǎng)階段。

3.4

繼代subculture

將培養(yǎng)材料從老培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)的過程。

[NY/T2306—2013，定義3.2]

1

DB11/T1648—2019

3.5

叢生芽clusterbuds

組織培養(yǎng)過程中誘導(dǎo)植物器官或愈傷組織產(chǎn)生的簇狀芽。

3.6

瓶苗invitroplantlet

組織培養(yǎng)過程中生長在培養(yǎng)容器中的無菌苗。

4容器、工具的清洗與滅菌

培養(yǎng)容器和接種工具的清洗應(yīng)符合NY/T2306—2013中6.1、6.2的要求，滅菌應(yīng)符合NY/T2306—2013

中8.1、8.2、8.4的要求。

5培養(yǎng)基的配制

櫻桃砧木組培快繁所選用的基本培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，MS培養(yǎng)基的成分和含量參見附錄A。不同培養(yǎng)

階段添加植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基配方參見附錄B。培養(yǎng)基的配制和滅菌應(yīng)符合NY/T2306—2013第7章

的要求。

6外植體的選取及清洗

6.1外植體母株選取

選擇品種純正、來源可靠、生長旺盛、無病蟲害的優(yōu)良植株作為外植體的母株。

6.2外植體采集

6.2.1可于2～3月從母株上選取健壯的一年生枝條，放在20℃～25℃的房間內(nèi)水培，每天換水，待

枝條上葉芽萌發(fā)至2cm以上時(shí)，剪下作為外植體備用；也可于5～9月選取母株上半木質(zhì)化的新梢作為

外植體備用，宜在植物表面露水干后采集新梢。

6.2.2采集的外植體宜用塑料袋包裝并做好品種標(biāo)記，低溫儲運(yùn)。

6.3外植體清洗

去除外植體葉片，根據(jù)節(jié)間長短剪取帶1～2個(gè)芽的2cm～3cm莖段，用中性洗滌劑溶液將外植體表

面洗凈，流水沖洗10min～30min，備用。

7接種

7.1接種前準(zhǔn)備

提前30min打開超凈工作臺、操作間、緩沖間和更衣間等處的紫外燈進(jìn)行消毒，同時(shí)打開電熱滅菌

器。關(guān)掉紫外燈后，超凈工作臺宜開啟10min～20min后使用。

2

DB11/T1648—2019

接種人員穿戴好專用鞋、工作服、帽子和口罩進(jìn)入接種室。將手、臺面、接種工具用75%酒精擦拭，

將接種工具插入電熱滅菌器滅菌，滅菌后置于擱置架上冷卻、備用。

7.2接種操作

7.2.1將清洗后的外植體轉(zhuǎn)移到無菌瓶中，倒入75%酒精直至沒過外植體表面，輕搖瓶身30s～60s

后將酒精倒去，用無菌水沖洗外植體1～2遍。

7.2.2用0.1%升汞消毒液浸沒外植體材料，消毒5min～10min，浸泡過程中不斷輕搖瓶身，消毒結(jié)

束后，倒出并回收消毒液，外植體材料用無菌水清洗3～4遍。

7.2.3消毒后的外植體置于放有消毒濾紙的培養(yǎng)皿中，待吸干表面水分后，底端向下豎直插入到芽誘

導(dǎo)培養(yǎng)基上，及時(shí)蓋緊瓶蓋或封口并扎緊。培養(yǎng)基配方參見附錄B。

7.2.4將植物品種代號、培養(yǎng)基代號、接種日期及接種人等信息標(biāo)示到培養(yǎng)瓶上。

8初代培養(yǎng)

將接種好外植體的培養(yǎng)瓶放入溫度為25℃±2℃的培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，光照強(qiáng)度1500Lux～2500

Lux，光照時(shí)間10h/d～12h/d，培養(yǎng)周期為30d左右。

培養(yǎng)過程中每周要檢查1～2次，發(fā)現(xiàn)外植體褐化、污染、死亡時(shí)應(yīng)立即剔除。

9繼代增殖培養(yǎng)

9.1繼代前準(zhǔn)備

將要繼代的培養(yǎng)瓶表面用75%的酒精擦拭消毒。其它準(zhǔn)備見7.1。

9.2繼代操作

9.2.1在超凈工作臺臺面上距外側(cè)邊緣10cm～20cm處打開培養(yǎng)瓶瓶蓋，從母瓶中取出要繼代的瓶苗，

去除基部褐化的組織和部分葉片。

9.2.2把大的叢生芽團(tuán)切割成單芽或含2～4個(gè)芽的芽叢，轉(zhuǎn)接到新配制的增殖培養(yǎng)基上。單芽高度為

1cm左右；芽叢每個(gè)芽高可小于1cm。

9.2.3每個(gè)培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)接芽的數(shù)量因培養(yǎng)容器大小而異，直徑7.5cm～8cm、容積350mL～370mL

的培養(yǎng)瓶中可轉(zhuǎn)接8株/瓶或5叢/瓶左右。轉(zhuǎn)接芽基部插入培養(yǎng)基0.5cm左右，分布均勻，及時(shí)蓋緊瓶

蓋或封口并扎緊。

9.2.4將植物品種代號、培養(yǎng)基代號、繼代日期及人員信息標(biāo)示到培養(yǎng)瓶上。

9.3增殖培養(yǎng)

將繼代轉(zhuǎn)接好的瓶苗放入溫度22℃±2℃的培養(yǎng)室培養(yǎng)，光照強(qiáng)度1500Lux～2500Lux，光照時(shí)間

10h/d～12h/d左右，培養(yǎng)周期為30d左右。

培養(yǎng)過程中每周至少檢查1次，發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)立即剔除；在下次繼代前記錄增殖倍數(shù)。

10壯苗培養(yǎng)

對生根培養(yǎng)前高度小于2cm的瓶苗，可進(jìn)行一次壯苗培養(yǎng)。其它操作見本標(biāo)準(zhǔn)第9章。

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DB11/T1648—2019

11生根培養(yǎng)

將高度為2.0cm～3.0cm的單芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，直徑7.5cm～8cm、容積350mL～370mL的培

養(yǎng)瓶中可轉(zhuǎn)接10株/瓶左右。其它操作見本標(biāo)準(zhǔn)第9章。

12移栽過渡

12.1移栽前準(zhǔn)備

宜選擇溫度、光照、濕度可調(diào)控的溫室作為移栽過渡的場所。移栽前應(yīng)對環(huán)境進(jìn)行消毒，消毒方法

參見附錄C。

宜選擇草炭和蛭石作為基質(zhì)。在容器中先裝入1/2草炭，上面再鋪一層蛭石，用0.5g/L的多菌靈溶

液將基質(zhì)澆透后備用。

12.2移栽

12.2.1將長出3～5條不定根的瓶苗從培養(yǎng)容器中取出，放入清水中洗去培養(yǎng)基，瀝水后進(jìn)行移栽。

12.2.2移栽時(shí)在基質(zhì)上打孔，孔距2cm左右，孔大小以可容納組培苗根系為宜。將根系植入孔內(nèi)，覆

土至組培苗根頸處，稍壓實(shí)，保持苗不傾斜。

12.2.3栽好后插上牌子，寫明品種和移栽日期。

12.3管理

12.3.1溫室內(nèi)溫度宜控制在20℃～28℃。

12.3.2移栽后2周內(nèi)相對濕度宜控制在90%左右，移栽后3～4周可逐漸降低相對濕度，4～6周后相

對濕度可保持在60%左右。

12.3.3移栽后4周內(nèi)光照強(qiáng)度宜為4000Lux～7000Lux，之后可逐漸增大光照強(qiáng)度至自然光。

12.3.4每周噴施80%多菌靈可濕性粉劑1500倍液1次，于苗上方15cm處均勻懸掛誘蟲板。

4

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附錄A

（資料性附錄）

MS培養(yǎng)基成分和含量

MS培養(yǎng)基成分和含量見表A.1。

表A.1MS培養(yǎng)基成分和含量

含量

名稱MS培養(yǎng)基成分

（mg/L）

硝酸鉀KNO31900

大

硝酸銨NH4NO31650

量

氯化鈣CaCl2·2H2O440

元

硫酸鎂MgSO4·7H2O370

素

磷酸二氫鉀KH2PO4170

鐵乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA37.3

鹽硫酸亞鐵FeSO4·7H2O27.8

硫酸錳MnSO4·4H2O22.3

硫酸鋅ZnSO4·7H2O8.6

微

硼酸H3BO36.2

量

碘化鉀KI0.83

元

鉬酸鈉NaMoO4·2H2O0.25

素

硫酸銅CuSO4·5H2O0.025

氯化鈷CoCl2·6H2O0.025

肌醇C6H12O6100

有甘氨酸C2H5NO22.0

機(jī)煙酸C6H5NO20.5

物鹽酸吡哆辛（VB6）C8H11NO3-HCl0.5

鹽酸硫胺素（VB1）C12H17ClN4OS-HCl0.1

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附錄B

（資料性附錄）

組培各階段的培養(yǎng)基配方

組培各階段的培養(yǎng)基配方見表B.1.

表B.1組培各階段的培養(yǎng)基配方

6-BANAA糖瓊脂

用途基本培養(yǎng)基注意事項(xiàng)

（mg/L）（mg/L）（g）（g）

宜用不透

芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS0.50306.0

氣膜封瓶

增殖培養(yǎng)基MS0.5～1.00～0.1306.0口

宜用透氣

壯苗培養(yǎng)基MS0～0.50.1～0.2306.0

膜封瓶口

生根培養(yǎng)基1/2MS00.5～1.0206.0

瓊脂的強(qiáng)度為