任務(wù)六血涂片染色宋曉光講解

任務(wù)六

血涂片染色主講教師：宋曉光01教學(xué)目標(biāo)02教學(xué)重點(diǎn)難點(diǎn)03教學(xué)內(nèi)容04課后拓展目

錄01教學(xué)目標(biāo)知識目標(biāo)能力目標(biāo)素質(zhì)目標(biāo)思政目標(biāo)教學(xué)目標(biāo)熟練掌握瑞氏染色法原理；了解吉姆薩染色法原理血液細(xì)胞染色結(jié)果熟悉染色注意事項(xiàng)熟練掌握瑞氏染色法操作流程；了解吉姆薩染色法操作流程能使用顯微鏡觀察染色后細(xì)胞形態(tài)獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)的能力無菌操作意識培養(yǎng)學(xué)生細(xì)致、耐心、精益求精的工作作風(fēng)02教學(xué)重難點(diǎn)教

學(xué)

重

點(diǎn)瑞氏染色法操作流程和結(jié)果觀察教

學(xué)

難

點(diǎn)瑞氏染色法注意事項(xiàng)教學(xué)重難點(diǎn)03教學(xué)內(nèi)容血涂片染色瑞氏染色法吉姆薩染色瑞吉氏染色法1.瑞氏染料的組成

由酸性染料伊紅（E-）和堿性染料美蘭(M+)組成的復(fù)合染料溶于甲醇制備而成。堿性染料

陽離子染料，能接受質(zhì)子。

如亞甲藍(lán)、天青。能結(jié)合酸性物質(zhì)并染色，如淋巴細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞染成藍(lán)色。酸性染料

陰離子染料，能釋放質(zhì)子。

如伊紅。能結(jié)合細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等染成紅色。固定著色合并進(jìn)行，簡便，染色時(shí)間短，WBC特異性顆粒著色較好，細(xì)胞核著色較差。一、瑞氏染色法教學(xué)內(nèi)容細(xì)胞質(zhì)著色較好教學(xué)內(nèi)容2.染色原理物理作用

毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學(xué)作用：堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同數(shù)量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同時(shí)還有其它活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時(shí)，-NH2獲得一個(gè)H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個(gè)H+變成帶負(fù)電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。周圍環(huán)境的酸堿度：如環(huán)境pH＜pI，則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之，pH＞pI，則結(jié)合堿性染料。細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣教學(xué)內(nèi)容血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性蛋白質(zhì)，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。M+Cl+Na+E→ME+NaCl美藍(lán)伊紅

伊紅化美藍(lán)（瑞氏染料）3.染色流程用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10分鐘。用清水沖洗，待干后鏡檢。教學(xué)內(nèi)容顯微鏡下觀察染色效果4.注意事項(xiàng)血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)易脫落.染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時(shí)間長些效果好。染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀。沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防止染料沉著，沖洗時(shí)間也不能長。染色過淡，可復(fù)染。染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色。二、吉姆薩染色法

吉姆薩染液由天青，伊紅溶于甲醇組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。但本法對細(xì)胞核和寄生蟲著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更不清晰，而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長，可用復(fù)合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞氏染色法染10min?；蛳扔萌鹗先旧ㄈ旧?，再用稀釋吉姆薩復(fù)染。1.染色原理

甲醇固定干燥血膜3-5min。

將血膜在染液中浸染10-30min。

流水沖洗,待干后鏡檢。2.染色流程三、瑞氏-吉姆薩染色法

將瑞特染料和吉姆薩染料按一定比例混合后對細(xì)胞進(jìn)行染色，其染色原理同瑞特和吉姆薩染色法，但染色效果更佳，因?yàn)槠渚C合了瑞氏和吉姆薩染色法的優(yōu)點(diǎn)。1.染色原理

血片滴加染液5滴，并立即將染液蓋滿血膜，2min后加入pH6.4-6.8磷酸鹽緩沖液（同瑞氏染液）10滴，10min后用流水沖洗干凈，待干后鏡檢。2.染色流程

瑞氏染液和吉姆薩染液對細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)有各自的顯色特征，前者對細(xì)胞質(zhì)和顆粒著色較好，后者對細(xì)胞核結(jié)構(gòu)顯示清晰。因此將二者結(jié)合，能取長補(bǔ)短、集中優(yōu)勢，用該混合染液對血細(xì)胞進(jìn)行染色，其細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)顆粒均著色鮮艷，對比鮮明。瑞氏-吉姆薩混合染色法是臨床上廣泛使用的方法。四、方法學(xué)評價(jià)

五、課堂小結(jié)六、布置作業(yè)序號內(nèi)容平臺1瑞氏染色原理及注意事項(xiàng)學(xué)習(xí)通2染色方法學(xué)評價(jià)智慧職教