濕地植物種質(zhì)資源收集與保存技術(shù)規(guī)范

ICS65.020.99CCSB61DB11北京市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB11/TXXXX—XXXX前言 II 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4濕地植物種質(zhì)資源的收集 4.1收集對(duì)象和內(nèi)容 4.7填寫原始記錄表 4.8種質(zhì)臨時(shí)保管 4.9圖片資料采集與管理 4.10標(biāo)本采集、制作與管理 5濕地植物種質(zhì)資源的保存 5.1保存種子 5.2保存植株 5.3保存試管苗 6檔案管理 附錄A（規(guī)范性）濕地植物種質(zhì)資源收集與保存信息 附錄B（規(guī)范性）圖片信息采集與管理 附錄C（規(guī)范性）標(biāo)本的采集與制作 參考文獻(xiàn) IIDB11/TXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由北京市園林綠化局提出并歸口。本文件由北京市園林綠化局組織實(shí)施。本文件起草單位：本文件主要起草人：1DB11/TXXXX—XXXX濕地植物種質(zhì)資源收集與保存技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了濕地植物種質(zhì)資源的收集、保存和檔案管理等技術(shù)內(nèi)容。本文件適用于北京地區(qū)濕地植物種質(zhì)資源的收集與保存。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T2260中華人民共和國(guó)行政區(qū)劃代碼3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1濕地植物wetlandplants棲息于濕地環(huán)境并完成大部分生活史的植物。3.2植物種質(zhì)資源plantgermplasmresource來自植物的具有實(shí)際或潛在價(jià)值的任何含有遺傳功能單位的遺傳材料，包括種子、無性繁殖材料（根莖、根蘗、葉片和幼苗等）和DNA材料。3.3種質(zhì)圃germplasmrepository以植株方式保存無性繁殖及多年生濕地植物種質(zhì)資源的苗圃和設(shè)備。3.4居群population2DB11/TXXXX—XXXX在野生植物群落中具有共同的基本特點(diǎn)的一組個(gè)體植株。3.5濕地植物生活型lifeformofwetlandplants不同濕地植物物種因趨同適應(yīng)而對(duì)同一生境所表現(xiàn)出來的外在特征。4濕地植物種質(zhì)資源的收集4.1收集對(duì)象和內(nèi)容4.1.1收集對(duì)象為北京市濕地植物。4.1.2收集內(nèi)容為種子、無性繁殖材料（根莖、根蘗、葉片和幼苗等）和DNA材料。4.2收集要求4.2.1應(yīng)從不同的地理區(qū)域、生態(tài)環(huán)境和氣候條件下收集種質(zhì)資源，涵蓋不同類型，如野生種、栽培種、地方品種等和不同的遺傳變異類型，如耐旱型、耐鹽型、耐寒型等，確保收集的種質(zhì)資源代表廣泛的遺傳多樣性。4.2.2應(yīng)遵守國(guó)家和地方的相關(guān)法律法規(guī)，確保收集行為的合法性。需收集列入國(guó)家及北京市重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄的種質(zhì)，或進(jìn)入自然保護(hù)區(qū)采集的，應(yīng)提前辦理采集許可手續(xù)。4.2.3應(yīng)適度收集，避免對(duì)野生濕地植物資源造成過度采集和破壞。采種時(shí)嚴(yán)禁傷害破壞采種母株和幼苗，避免對(duì)采種種群中其他物種的傷害破壞。4.2.4根據(jù)收集的種質(zhì)材料類別，合理安排收集季節(jié)和具體收集時(shí)間。收集種子應(yīng)在種子充分成熟之前。收集無性繁殖材料應(yīng)選擇繁育適合期，或者在非生長(zhǎng)期采集貯藏。收集DNA材料通常在采集種子時(shí)一并采集，也可在生長(zhǎng)期采集新鮮健康葉片。4.3收集準(zhǔn)備4.3.1組建團(tuán)隊(duì)根據(jù)工作內(nèi)容和工作量組建團(tuán)隊(duì)，團(tuán)隊(duì)人員宜涵蓋植物、生態(tài)、園林、地理信息系統(tǒng)等專業(yè)背景，明確地理信息解讀、濕地植物鑒定、植物攝影、標(biāo)本采集和種質(zhì)保存等分工內(nèi)容。4.3.2確定收集地點(diǎn)和路線查閱歷年國(guó)土調(diào)查、濕地資源調(diào)查、植物資源調(diào)查等基礎(chǔ)圖件，綜合城市總體規(guī)劃、濕地保護(hù)發(fā)展規(guī)劃等，設(shè)計(jì)收集路線和重點(diǎn)收集區(qū)域。4.4收集方法4.4.1野外采集濕地植物種質(zhì)資源應(yīng)以居群為單位，隨機(jī)采集。4.4.2種子收集宜從同一居群多個(gè)點(diǎn)（3個(gè)以上）和多個(gè)植株（一般5株以上）采集，采后混為1份，避免從同一地點(diǎn)和少數(shù)植株上收集，特別避免僅從單株上采集。3DB11/TXXXX—XXXX4.4.3對(duì)于無性繁殖材料，植株矮小的可挖取全株，植株較高大的可采集根莖、根蘗、葉片和幼苗等。雌雄異株的植物應(yīng)分別采集。4.4.4挑選健康、無病蟲害的濕地植物個(gè)體采集DNA材料。優(yōu)先選擇成年植株和新鮮組織。4.5采集量4.5.1種子采集量要求見表1。表1種子采集量要求4.5.2無性繁殖材料，包括根莖、根蘗、葉片和幼苗等，每一個(gè)居群宜隨機(jī)在5～10株植物上采集，每一植株采集1～2個(gè)樣本。4.5.3對(duì)于珍稀、瀕危的濕地植物可根據(jù)其野外分布的數(shù)量適量采集其DNA材料。4.6采集號(hào)應(yīng)按以下規(guī)則進(jìn)行編號(hào)：——調(diào)查中每份種質(zhì)都應(yīng)進(jìn)行編號(hào)，同一采集號(hào)不應(yīng)重復(fù)使用；——同一時(shí)間、同一地點(diǎn)、同一濕地植物的多份種質(zhì)應(yīng)使用同一編號(hào)；——同一塊濕地、不同調(diào)查點(diǎn)、相同植物的種質(zhì)應(yīng)使用不同編號(hào)；——同一濕地植物若干部分組成的種質(zhì)應(yīng)使用同一編號(hào)；——編號(hào)格式宜采用“采集日期（8位，年月日）+北京市行政區(qū)劃代碼后三位（按照GB/T2260執(zhí)行）+序號(hào)（3位）”。4.7填寫原始記錄表應(yīng)按表A.1要求填寫濕地植物種質(zhì)資源收集記錄表。4.8種質(zhì)臨時(shí)保管不同種質(zhì)的臨時(shí)保管方式如下：——種子采集和預(yù)處理時(shí)宜用布袋、紙袋或網(wǎng)袋等容器包裝，凈種后的種子宜存放在布袋、紙袋中。根據(jù)不同種子的特性采取常溫或低溫環(huán)境保存；——無性繁殖材料能立刻用于擴(kuò)繁的，可浸泡在裝水的容器中或用保濕材料包裹置于低溫陰涼處，或分類包裝置于0℃~5℃低溫環(huán)境中保存。適用于蠟封的種質(zhì)材料應(yīng)及時(shí)蠟封后包裝保存；——DNA材料應(yīng)盡快放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存，或-20℃凍干保存。4DB11/TXXXX—XXXX4.9圖片資料采集與管理應(yīng)符合附錄B的規(guī)定。4.10標(biāo)本采集、制作與管理應(yīng)符合附錄C的規(guī)定。5濕地植物種質(zhì)資源的保存5.1保存種子5.1.1入庫前處理入庫前應(yīng)對(duì)種子進(jìn)行調(diào)制、稱重、檢測(cè)其生活力。5.1.2入庫登記入庫前檢查種子基本信息資料和采集號(hào)，對(duì)種質(zhì)信息進(jìn)行核對(duì)、登記，并按表A.2要求填寫種子入庫登記信息表。5.1.3查重及去重對(duì)新采集的種子與已保存種質(zhì)資源進(jìn)行查重和去重。5.1.4入庫保存依據(jù)植物的生理特性，宜采用低溫或超低溫（-80℃或-196℃)保存。長(zhǎng)期保存庫的貯藏溫度推薦標(biāo)準(zhǔn)為（-18±2）℃,或者超低溫保存，入庫種子含水率為5%～8%，相對(duì)濕度應(yīng)小于50%，密封存儲(chǔ)，種子預(yù)期壽命20年以上。中期保存庫貯藏溫度推薦標(biāo)準(zhǔn)為（4±2）℃,入庫種子含水率小于10%，相對(duì)濕度應(yīng)小于65%，宜密封存儲(chǔ)，種子預(yù)期壽命5～10年。短期保存庫貯藏溫度一般為18℃~20℃,入庫種子含水率10%左右，相對(duì)濕度應(yīng)小于65%，宜密封存儲(chǔ)，種子預(yù)期壽命3～5年。5.1.5入庫定位對(duì)入庫的種子宜按植物分類學(xué)地位放置，每份種質(zhì)設(shè)置一個(gè)固定的庫位號(hào)，按表A.3要求填寫種質(zhì)資源庫存信息表。5.1.6監(jiān)測(cè)與更新定期取出少量種子測(cè)定發(fā)芽率，種子發(fā)芽率降到85%以下時(shí)，應(yīng)進(jìn)行繁殖更新。5.2保存植株5.2.1保存對(duì)象采集的種子和無性繁殖材料（根莖、根蘗、葉片和幼苗等）。5.2.2種植布局宜以池（盆）的方式建設(shè)種質(zhì)圃。種植條件宜盡可能與采集地條件相似，減少生態(tài)條件改變和自然選擇影響而引起的變異。不同種質(zhì)應(yīng)保持足夠的物理距離，避免和減少天然雜交和人為混雜，保存種質(zhì)的遺傳特點(diǎn)和群體結(jié)構(gòu)。5DB11/TXXXX—XXXX確定擬準(zhǔn)備入圃保存的濕地植物每份種質(zhì)所需的最小種植面積，即各類資源圃基本單元區(qū)的單位面積，每個(gè)基本單元區(qū)設(shè)置一個(gè)圃位號(hào)。宜設(shè)置大區(qū)、小區(qū)。一個(gè)種源宜設(shè)置一個(gè)大區(qū)，一個(gè)家系、品種（系）或無性系宜設(shè)置一個(gè)小區(qū)。種質(zhì)種植分布以生境適應(yīng)性為基礎(chǔ)，兼顧植物分類學(xué)地位和濕地植物生活型。每類小區(qū)應(yīng)預(yù)留一些種植空間給新增資源。5.2.3圃地功能分區(qū)應(yīng)建設(shè)觀察圃、保存圃、繁殖圃，以保存圃為主?！^察圃是供濕地植物品種選育和進(jìn)行生物學(xué)研究而建立的臨時(shí)保存場(chǎng)所?！４嫫允悄鼙ＷC濕地植物種質(zhì)資源生長(zhǎng)和種質(zhì)資源長(zhǎng)期保存的場(chǎng)所?！敝称允怯糜跀U(kuò)大繁殖以提供入圃保存和分發(fā)的場(chǎng)所。5.2.4入圃管理對(duì)于入圃保存材料應(yīng)按如下規(guī)則進(jìn)行：——對(duì)種植的濕地植物種質(zhì)進(jìn)行觀察，包括其適應(yīng)性和生長(zhǎng)情況等，并按表A.4要求填寫入圃登記信息表；——在種質(zhì)圃平面圖上標(biāo)注種質(zhì)的種植位置，標(biāo)明每份種質(zhì)的名稱、圃位號(hào)、種植時(shí)間、保存株數(shù)，并建立采集號(hào)和圃位號(hào)對(duì)應(yīng)表；——種質(zhì)圃每次增減資源都應(yīng)在圃平面圖上進(jìn)行標(biāo)注，同時(shí)注明制圖人和審核人的姓名和制圖日期；——每份種質(zhì)在種質(zhì)圃保存數(shù)量不低于30株，珍稀種質(zhì)資源可適當(dāng)增加保存數(shù)量；——種植時(shí)對(duì)每份種質(zhì)掛牌，牌上標(biāo)注種質(zhì)名稱、采集號(hào)和圃位號(hào)。5.2.5植株養(yǎng)護(hù)制定植株保存過程中的管理制度，做好施肥、灌溉、除草、病蟲防治、更新復(fù)壯等常規(guī)養(yǎng)護(hù)工作。5.2.6監(jiān)測(cè)與繁殖更新保存過程中定期對(duì)種質(zhì)存活株數(shù)、植株?duì)顟B(tài)、病蟲害發(fā)生情況等進(jìn)行觀察監(jiān)測(cè)，當(dāng)植株數(shù)量減少到原保存量的50%、植株出現(xiàn)顯著衰老癥狀或遭受嚴(yán)重病蟲危害時(shí)應(yīng)進(jìn)行繁殖更新。5.3保存試管苗5.3.1保存對(duì)象采集的種子和無性繁殖材料（根莖、根蘗、葉片和幼苗等）的繁殖試管苗。5.3.2繁育試管苗將收集的種質(zhì)材料采用組織培養(yǎng)的方法獲得試管苗。5.3.3入庫保存試管苗放入試管苗庫中保存。貯存溫度宜在4℃或者更低條件下，相對(duì)濕度控制在45%～60%。5.3.4監(jiān)測(cè)管理試管苗入庫保存后，應(yīng)每月定期觀察、檢查并記錄，內(nèi)容包括管中苗高、葉子變化、根系發(fā)育狀況、氣生根狀況、培養(yǎng)基變化狀況、污染情況、試管苗存活率、繼代保存期限等，發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)及時(shí)清除。6DB11/TXXXX—XXXX5.3.5更新與繼代培養(yǎng)保存的試管苗存活率降到50%左右時(shí)進(jìn)行更新培養(yǎng)。更新時(shí)取出植株轉(zhuǎn)接在新配制的培養(yǎng)基上，常規(guī)5.4保存DNA材料5.4.1保存對(duì)象珍稀、瀕危濕地植物的DNA片段。5.4.2提取DNA通過基因工程方法獲得DNA片段。5.4.3保存條件-20℃凍干保存或超低溫保存。6檔案管理將濕地植物種質(zhì)資源采集、保存工作中獲取的相關(guān)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行整理建檔，包括基本信息和管理信息。同時(shí)備份紙質(zhì)檔案和電子檔案，保證檔案資料的連續(xù)性和完整性?！拘畔ㄋ鸭馁Y料、工作方案、工作記錄、影像圖片資料和采集信息等。——管理信息包括入庫（圃）信息、庫（圃）存信息、監(jiān)測(cè)信息、更新信息和利用信息等。7DB11/TXXXX—XXXX（規(guī)范性）濕地植物種質(zhì)資源收集與保存信息A.1濕地植物種質(zhì)資源收集記錄表表A.1規(guī)定了濕地植物種質(zhì)資源收集記錄信息內(nèi)容。表A.1濕地植物種質(zhì)資源收集記錄表緯度： 8DB11/TXXXX—XXXXA.2種子入庫登記信息表表A.2規(guī)定了種子入庫登記信息內(nèi)容。表A.2種子入庫登記信息表1234…A.3種質(zhì)資源庫存信息表表A.3規(guī)定了種質(zhì)資源庫存信息內(nèi)容。表A.3種質(zhì)資源庫存信息表1234…9DB11/TXXXX—XXXXA.4入圃登記信息表表A.4規(guī)定了入圃登記信息內(nèi)容。表A.4入圃登記信息表1234…DB11/TXXXX—XXXX（規(guī)范性）圖片信息采集與管理B.1圖片采集B.1.1生境拍攝使用大景深拍攝方法，使整體環(huán)境清晰覆蓋整個(gè)圖片。B.1.2植物主體拍攝拍攝應(yīng)突出植物主體，并符合以下規(guī)則：——確定所要拍攝的植物，選擇合適角度進(jìn)行拍攝，使周圍環(huán)境和被攝主體分處不同平面，保持一定的位置差，以達(dá)到突顯主體的目的；——優(yōu)化拍攝的植物環(huán)境，拍攝低矮植物時(shí)應(yīng)去除周圍雜物，降低雜物入鏡率；——環(huán)境光控制，對(duì)周圍環(huán)境較暗的區(qū)域，通過內(nèi)置曝光補(bǔ)光、提高感光度、增大光圈等手段完成拍攝。B.1.3植物局部拍攝取下所需拍攝的部位，從周圍環(huán)境中選擇色彩較一致的區(qū)域作為背景拍攝。B.1.4拍攝要求圖片應(yīng)保證數(shù)量和質(zhì)量，并符合以下規(guī)則：——應(yīng)客觀反映被攝主體的植物學(xué)特征，從不同的角度對(duì)植株分類特性進(jìn)行描述，比如居群、植株、花、果實(shí)、種子、葉片、莖干、根系等；——重點(diǎn)拍攝植物分類鑒定的關(guān)鍵部位，比如禾本科的葉舌、葉鞘等，豆科的托葉等；——必要時(shí)，在植物附近合適的地方放置彩色參照比例尺，量化植物特征參數(shù)；——每個(gè)編號(hào)下的被攝物種應(yīng)包含5張以上體現(xiàn)植株及局部形態(tài)特征的圖片；珍稀瀕?；蛱赜蟹N宜盡可能收集細(xì)部特征照片，增加微距照片或解剖鏡拍攝照片；——每個(gè)被調(diào)查地應(yīng)有3張以上廣角照和3張以上調(diào)查團(tuán)隊(duì)集體工作照。B.2圖片管理圖片保存應(yīng)建立兩級(jí)文件夾。以“當(dāng)次調(diào)查日期＋北京市行政區(qū)劃代碼后三位（按照GB/T2260執(zhí)行）+濕地名”為名稱建立一級(jí)文件夾，如2023年5月5日北京市海淀區(qū)翠湖濕地植物資源的一級(jí)文件夾記為“20230505108翠湖”，體現(xiàn)被調(diào)查濕地樣貌的廣角照或航拍照和調(diào)查團(tuán)隊(duì)集體工作照保存在一級(jí)文件夾中。以“采集號(hào)＋種名”為名稱建立二級(jí)文件夾，保存于一級(jí)文件夾之下，被調(diào)查濕地植物的圖片保存在二級(jí)文件夾中。DB11/TXXXX—XXXX（規(guī)范性）標(biāo)本的采集與制作C.1標(biāo)本的采集C.1.1采集原則每個(gè)調(diào)查點(diǎn)采集的標(biāo)本至少2～3份。標(biāo)本采集后，如條件允許，應(yīng)立即在野外進(jìn)行干燥，或?qū)?biāo)本放在吸水紙中。C.1.2標(biāo)本材料選取標(biāo)本材料選取要求如下：——標(biāo)本應(yīng)具有根、莖、葉、花（花序）、果實(shí)等營(yíng)養(yǎng)器官和生殖器官。雌雄異株的植物，分別采集雄花枝和雌花枝；——小型一年生或具有走莖、球莖、根莖、鱗莖等多年生植物，連根部或地下部分一起采集；——大型禾草可分段采集，由花序、完整的莖節(jié)、完整的葉片等分段組成；——受光葉、庇陰葉、老葉、幼葉、二型葉等各種發(fā)育階段形態(tài)不同者，均應(yīng)采集；——喬木或灌木類植物標(biāo)本采集大小應(yīng)控制于35cm～40cm內(nèi)，應(yīng)保留完整的頂端枝條。C.1.3采集編號(hào)與種質(zhì)資源采集號(hào)一致。C.2標(biāo)本制作C.2.1標(biāo)本整理標(biāo)本整理要求如下：——壓制之前先將標(biāo)本的塵土、病斑葉等作潔凈處理；——將莖、葉、花、果展平放置，盡可能避免葉片重疊，如果干燥需很長(zhǎng)時(shí)間，可在中間夾一條干燥紙；——至少應(yīng)有一片葉反轉(zhuǎn)過來便于觀察其背面，幼葉和老葉宜各有一片，花的正、反面也都應(yīng)朝上顯示；——若有額外的果實(shí)，可把一些縱向切開，另一些橫向切開；若個(gè)體過大，則可切成片分開干燥；——大型標(biāo)本可折成“N”字型或“V”字型，使其合于臺(tái)紙長(zhǎng)度即可；——標(biāo)本葉子太多，可剪除一部分，應(yīng)保留葉柄；若葉子太大，可對(duì)稱剪除一半，不應(yīng)剪除頂端；——標(biāo)本有厚而凹凸不平的地方，可加干燥紙或報(bào)紙予以支撐。C.2.2標(biāo)本干燥標(biāo)本壓制前3d,宜每天更換干燥的吸水紙1～2次，含水率過高或者大而厚的標(biāo)本增加換紙頻率；標(biāo)本基本干燥時(shí)，可改為隔天換紙，直至標(biāo)本完全干燥為止。換紙時(shí)，注意對(duì)標(biāo)本維續(xù)修整，鋪枝展葉，收藏脫落的花果，及時(shí)清除霉?fàn)€部位。C.2.3標(biāo)本裝訂標(biāo)本裝訂要求如下：DB11/TXXXX—XXXX——標(biāo)本在臺(tái)紙上的擺放宜最大限度的展示盡可能多的特征，并考慮藝術(shù)性。將臺(tái)紙左上角和右下角留下空白區(qū)，貼放采集簽和鑒定簽；——大標(biāo)本應(yīng)對(duì)角線放置，過長(zhǎng)標(biāo)本可進(jìn)行折疊；——修剪大標(biāo)本時(shí)，盡量?jī)H剪去莖干，在不損壞標(biāo)本的前提下，盡可能將叢生植株分開，完整展示個(gè)體植株形態(tài)；——展示葉的兩面，只有一片葉的標(biāo)本，切下部分反過來貼在臺(tái)紙上；——臺(tái)紙上裝訂不止一株植物時(shí)，全部標(biāo)本保持向上，大或重的標(biāo)本放在底部；