無菌檢查用培養(yǎng)基滅菌后的保存有效期的驗證方法

第第頁無菌檢查用培養(yǎng)基滅菌后的保存時限驗證方法1項目描述質(zhì)量控制部無菌檢查用培養(yǎng)基為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基，此兩種培養(yǎng)基均為商品化的脫水培養(yǎng)基。根據(jù)《中國藥典》2023版規(guī)定，無菌檢查用的硫乙醉酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求，制備好的培養(yǎng)基若不即時使用，應(yīng)置于無菌密閉容器中，在2~25℃、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗證的保存期內(nèi)使用。因此，擬對胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基及硫乙醛酸鹽流體培養(yǎng)基在滅菌后的保存期進行驗證，驗證方法為：培養(yǎng)基滅菌后冷處保存（冰柜保存2~10°C）,確認(rèn)在保存期內(nèi)兩種培養(yǎng)基的PH值、無菌性及靈敏度是否符合要求；每種培養(yǎng)基應(yīng)進行三個配制批次驗證；分別確認(rèn)培養(yǎng)基在滅菌后保存0天、1天、2天、3天、4天、5天的PH值、無菌性檢查及靈敏度檢查是否符合要求；根據(jù)驗證結(jié)果，確認(rèn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆腺液體培養(yǎng)基在滅菌后的保存時限。.目的對無菌檢查用培養(yǎng)基滅菌后的保存時限進行驗證，確認(rèn)無菌檢查用培養(yǎng)基滅菌后在保存有效期內(nèi)的PH值、無菌性檢查及靈敏度檢查是否符合要求。.范圍本驗證文件的范圍僅適用于質(zhì)量控制部無菌檢查用培養(yǎng)基制備好后的保存時限的驗證，驗證項目包括：先決條件確認(rèn)、實驗設(shè)備及器材確認(rèn)、培養(yǎng)基確認(rèn)、滅菌效果確認(rèn)、包裝儲藏確認(rèn)、培養(yǎng)基PH值確認(rèn)、培養(yǎng)基無菌性檢查確認(rèn)及培養(yǎng)基靈敏度檢查確認(rèn)。.職責(zé)質(zhì)量控制部職責(zé)：負(fù)責(zé)驗證方案、報告的起草；負(fù)責(zé)按照批準(zhǔn)的方案進行驗證操作；負(fù)責(zé)對驗證數(shù)據(jù)進行收集、整理、分析；負(fù)責(zé)記錄在確認(rèn)過程中所有發(fā)生的偏差及變更；負(fù)責(zé)針對偏差及變更，并提出解決方案，以采取糾正行動；負(fù)責(zé)驗證過程中的相關(guān)檢驗工作；負(fù)責(zé)驗證結(jié)果的總結(jié)、分析評價工作；負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)審核文件。質(zhì)量保證部職責(zé)：負(fù)責(zé)監(jiān)督整個驗證活動，確保驗證按計劃進度進行；負(fù)責(zé)過驗證項目的驗證；負(fù)責(zé)對驗證數(shù)據(jù)進行收集、整理、分析；負(fù)責(zé)變差、變更的調(diào)查和處理，偏差調(diào)查報告及變更情況上報審批；負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)審核文件。質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人職責(zé)：負(fù)責(zé)最終批準(zhǔn)文件。.3質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人職責(zé)：負(fù)責(zé)最終批準(zhǔn)驗證文件。.參考標(biāo)準(zhǔn)《中國藥典》2023版.驗證實施先決條件確認(rèn)目的：確認(rèn)所有進行驗證的先決條件已經(jīng)得到滿足。6.1.2程序：6.1.2.1確認(rèn)本驗證方案是否已得到批準(zhǔn)；6.1.2.2執(zhí)行本方案的人員是否經(jīng)過培訓(xùn)；1.2.3檢查確認(rèn)后填寫附件表1中的相關(guān)內(nèi)容，并簽字確認(rèn)。3可接受標(biāo)準(zhǔn)：本驗證方案得到批準(zhǔn)，執(zhí)行本方案的人員已得到培訓(xùn)I。1.4先決條件確認(rèn)報告：見附件表1；如發(fā)現(xiàn)偏差應(yīng)記錄在偏差報告中。6.2實驗設(shè)備及器材確認(rèn)2.1目的:確認(rèn)實施過程中所需的所有設(shè)備、器材是否正常、完整。2.2程序：2.2.1查閱實施過程中所用設(shè)備、器材是否正常、完整。2.2.2檢查確認(rèn)后并填寫附件表2中相關(guān)內(nèi)容，并簽字確認(rèn)。2.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：所有實施過程中所用設(shè)備、器材正常、完整。2.4驗證用實驗設(shè)備、器材確認(rèn)報告：見附件表2。6.3培養(yǎng)基確認(rèn)6.3.1目的：確認(rèn)培養(yǎng)基質(zhì)量及配制是否符合要要求。6.3.2程序：6.3.2.1培養(yǎng)基質(zhì)量確認(rèn)檢查確認(rèn)驗證用培養(yǎng)基的品名、批號、數(shù)量、生產(chǎn)單位、外觀形狀（瓶蓋密封度、內(nèi)容物有無結(jié)塊霉變等），處方和使用說明、有效期、儲存條件，及生產(chǎn)商提供的質(zhì)控報告。檢查確認(rèn)后將確認(rèn)結(jié)果填入附件表3中。6.3.2.2培養(yǎng)基配制確認(rèn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制：按照硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基-水（29.25g:I1）比例稱取硫乙醵酸鹽流體培養(yǎng)基，加熱煮沸使完全溶解，搖勻分裝于無菌檢驗用專用瓶內(nèi)（500m1∕瓶）,121℃高壓滅菌15min,即可。胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基的配制：按照胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基-水（29.8g:ID比例稱取胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基，微溫溶解，分裝于無菌檢驗用專用瓶內(nèi)（500m"瓶），經(jīng)121℃高壓滅菌15min,滅菌后，即可。配制結(jié)束后將配制口期、配制編號、配制量及分裝數(shù)量記錄在附件表3中。6.3.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：培養(yǎng)基質(zhì)量應(yīng)符合要求，培養(yǎng)基的配制應(yīng)按說明上的要求操作。6.3.4培養(yǎng)基配制確認(rèn)報告：見附件表3；如發(fā)現(xiàn)偏差應(yīng)記錄在偏差報告中。6.4滅菌效果確認(rèn)6.4.1目的：確認(rèn)培養(yǎng)基滅菌效果是否符合要要求；6.4.2程序：6.4.2.1將壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡放入滅菌鍋最冷點處，與培養(yǎng)基同時滅菌。6.4.2.2滅菌完畢后將指示卡抽出，觀察顏色變化。6.4.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：指示卡達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)黑色以上，表示符合滅菌條件。6.4.4滅菌效果確認(rèn)報告：見附件表4；如發(fā)現(xiàn)偏差應(yīng)記錄在偏差報告中。6.5包裝、儲存條件確認(rèn)6.5.1目的：確認(rèn)滅菌后培養(yǎng)及的包裝及儲存條件是否符合要要求。6.5.2程序：6.5.2.1包裝確認(rèn)滅菌后查看無菌檢驗專用瓶是否完好，膠塞及螺紋蓋是否完好正常，確保其密閉性符合要求。6.5.2.2儲存條件確認(rèn)檢查確認(rèn)儲藏培養(yǎng)基的冰柜是否正常，溫度是否可以控制在2~10℃。6.5.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：滅菌后的無菌檢驗專用瓶完好，膠塞及螺紋蓋完好正常；冰柜溫度控制范圍2~10℃。6.5.4包裝、儲存條件確認(rèn)報告：見附件表5；如發(fā)現(xiàn)偏差應(yīng)記錄在偏差報告中。6.6PH值確認(rèn)6.6.1目的：確認(rèn)培養(yǎng)基在滅菌后各保存期內(nèi)的PH值是否符合要要求；6.6.2程序：6.6.2.1分別在培養(yǎng)基配制滅菌后的第。天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天，取培養(yǎng)基適量置燒杯中，測定其在25C的PH值。6.6.2.2將測定結(jié)果填入附件表6中，并簽字確認(rèn)。6.6.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基滅菌后在25C的PH值為7.1±0.2；胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基滅菌后在25℃的PH值為7.3±O.2o6.6.4PH值確認(rèn)報告：見附件表6;如發(fā)現(xiàn)偏差應(yīng)記錄在偏差報告中。6.7無菌性檢查確認(rèn)6.7.1目的：確認(rèn)培養(yǎng)基滅菌后在不同保存期的無菌性檢查是否符合要求。6.7.2程序:對0天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天各取裝量為500m1∕瓶的兩種培養(yǎng)基各1瓶，經(jīng)隔離系統(tǒng)表面滅菌后，分別抽取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基各IOOm1至于培養(yǎng)器內(nèi)，兩種培養(yǎng)基各1管，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在30~35C培養(yǎng)14天，胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基在20~25C培養(yǎng)14天，逐日觀察。將實驗結(jié)果填入附件表7中，并簽字確認(rèn)。6.7.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：滅菌后的每批培養(yǎng)基經(jīng)14天培養(yǎng)，應(yīng)無菌生長。6.7.4無菌性檢查確認(rèn)報告：見附件表7；如發(fā)現(xiàn)偏差應(yīng)記錄在偏差報告中。6.8靈敏度檢查確認(rèn)6.8.1目的：確認(rèn)培養(yǎng)基滅菌后在不同保存期的靈敏度檢查是否符合要求。6.8.2程序：6.8.2.1菌種確認(rèn)培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代)，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進行保存,以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。檢查確認(rèn)菌種名稱、菌種標(biāo)準(zhǔn)號、工作菌種編號、來源、傳代次數(shù)，檢查確認(rèn)后將結(jié)果填入附件表8中，并簽字確認(rèn)。金黃色葡萄球菌(StaPhyIoeOCCUSaureus)[CMCC(B)26003]銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[CMCC(B)10104]枯草芽抱桿菌(Baci11ussubti1is)[CMCC(B)63501]第4頁共24頁生抱梭菌(C1OStridiUnIsporogenes)[CMCC(B)64941]白色念珠菌(Candidaa1bicans)[CMCC(F)98001]黑曲霉(Aspergi11usniger)[CMCC(F)98003]6.8.2.2菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽胞桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆腺液體培養(yǎng)基或胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基上，接種生抱梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30~35°C培養(yǎng)18-24小時；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20~25C培養(yǎng)24~48小時，上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每Im含菌數(shù)小于IOOCfU(菌落形成單位)的菌懸液。用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每ImI含胞子數(shù)小于IOOcfu的黑曲霉泡子懸液。菌懸液若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2~8℃可在24小時內(nèi)使用。將活菌計數(shù)結(jié)果填入附件表9中。6.8.2.3培養(yǎng)基接種分別在培養(yǎng)基滅菌后的。天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天進行如下實驗：取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基2瓶,經(jīng)隔離系統(tǒng)表面滅菌后，抽取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基于培養(yǎng)器中，每管100m1,共7管，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生袍梭菌各2管，另1管不接種作為空白對照，培養(yǎng)不超過3天；取胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基2瓶，經(jīng)隔離系統(tǒng)表面滅菌后，抽取胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基于培養(yǎng)器中，每管IOOm1,共7管，分別接種小于100cfu的枯草芽袍桿菌、白色念珠菌、黑曲毒各2管，另1管不接種作為空白對照，加枯草芽泡桿菌的培養(yǎng)基培養(yǎng)不超過3天，加白色念珠菌及黑曲霉的培養(yǎng)基培養(yǎng)不超過5天。逐日觀察結(jié)果。將實驗數(shù)據(jù)填入附件表9中，并簽字確認(rèn)。.8.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：空白對照管應(yīng)無菌生長，所有加菌的培養(yǎng)基管應(yīng)生長良好。.8.4培養(yǎng)基靈敏度檢查確認(rèn)報告：見附件表9；如發(fā)現(xiàn)偏差應(yīng)記錄在偏差報告中。.偏差清單將所有驗證方案執(zhí)行過程中所發(fā)現(xiàn)的偏差整理成清單，并將偏差內(nèi)容列在附件表10中。.變更控制如果驗證過程中發(fā)生變更，應(yīng)對變更部分的內(nèi)容進行確認(rèn)，并經(jīng)過質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)，并將變更清單列在附件表II中。總結(jié)及評價由質(zhì)量控制部硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基滅菌后的保存時限驗證方案執(zhí)行人員負(fù)責(zé)收集執(zhí)行過程中的相關(guān)資料和數(shù)據(jù)，并做最終的總結(jié)及評價，并填寫最終結(jié)論。由質(zhì)量控制部及QA部門對驗證和最終結(jié)論進行審核，審核應(yīng)包括：行過程中是否有遺漏？施過程中對驗證方案有無修改?修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準(zhǔn)？程中的記錄是否完整？.4結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求?偏差及對偏差的說明是否合理?是否需要進一步補充確認(rèn)？9.6由質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)對和最終結(jié)論進行批準(zhǔn)。

.附件清單表1：先決條件確認(rèn)表相關(guān)人員培訓(xùn)記錄培訓(xùn)內(nèi)容：培訓(xùn)教師： 培訓(xùn)日期：被培訓(xùn)人：培訓(xùn)情況確認(rèn)序號項目接受標(biāo)準(zhǔn)檢杳￡旨果是否1人員培訓(xùn)執(zhí)行本方案的人員已得到培訓(xùn)2驗證方案驗證方案已得到批準(zhǔn)結(jié)論：璐U人RIU1 atu QJffi 序號設(shè)備、器材名稱型號生產(chǎn)廠家是否正常、完整是否結(jié)論：確認(rèn)人日期復(fù)核人日期

1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基生產(chǎn)單位： 批號：質(zhì)量確認(rèn)是否在有效期內(nèi)貯藏條件外觀形狀是否正常處方和說明書生產(chǎn)商提供的質(zhì)控報告是否是否有無有無配制確認(rèn)配制日期配制編號配制量分裝數(shù)量2.胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基生產(chǎn)單位： 批號：質(zhì)量確認(rèn)是否在有效期內(nèi)貯藏條件外觀形狀是否正常處方和說明書生產(chǎn)商提供的質(zhì)控報告是否是否有無有無配制確認(rèn)配制日期配制編號配制量分裝數(shù)量結(jié)論：確讓人口期

滅菌時間培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基配制編號接受標(biāo)準(zhǔn)指示卡實驗結(jié)果是否符合要求是否硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基指示卡達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)黑色以上胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基指示卡粘貼處指示卡粘貼處指示卡粘貼處結(jié)論：確n人日期用核人表5：包裝、儲藏條件確認(rèn)確認(rèn)項標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)結(jié)果是否符合要求是否包裝滅菌后的無菌檢查用專用瓶完好無裂紋，膠塞密閉完好，螺紋蓋完好無裂紋。儲藏條件2?IOC,避光結(jié)論：確認(rèn)人日期復(fù)核人日期培養(yǎng)基名稱配制編號PH值(25βC)。天1天2天3天4天5天硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基接受標(biāo)準(zhǔn)：硫乙醇酸款流體培養(yǎng)基滅菌后在25C的PH值為7.1±0.2；胰酪大豆腺液體培養(yǎng)基滅菌后在25C的PH值為7.3±0.2,結(jié)論：確UλH期后核人H1ff1

菌種名稱菌種標(biāo)準(zhǔn)號工作菌種編號來源傳代次數(shù)結(jié)論：確認(rèn)人日期復(fù)核人口期培養(yǎng)基名稱配制編號結(jié)果保存時間O1020304050607080硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基第O天第1天第2天第3天第4天第5天第O天第1天第2天第3天第4天第5天第O天第1天第2天第3天第4天第5天確認(rèn)人日期復(fù)核人日期

培養(yǎng)基名稱配制編號結(jié)果保存時間01020304050607080胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基第。天第1天第2天第3天第4天第5天第0天第1天第2天第3天第4天第5天第0天第1天第2天第3天第4天第5天檢查標(biāo)準(zhǔn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在30?35℃培養(yǎng)，胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基在20?25°C培養(yǎng)，培養(yǎng)14菌牛K用“-”表示.接受標(biāo)準(zhǔn)在14天內(nèi)應(yīng)牙菌牛長C結(jié)論：確認(rèn)人日期用核人日期

培養(yǎng)基配制編號保存時間靈敏度檢查結(jié)果菌種金黃色葡萄球菌生抱梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基O大計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果1天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果2天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果3天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果4天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果5天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）131231結(jié)果確認(rèn)人日期復(fù)核人日期

培養(yǎng)基配制編號保存時間靈敏度檢查結(jié)果菌種金黃色葡萄球菌生抱梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基O大計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果1天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果2天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果3天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果4天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果5天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）131231結(jié)果確認(rèn)人日期復(fù)核人日期

培養(yǎng)基配制編號保存時間靈敏度檢查結(jié)果菌種金黃色葡萄球菌生抱梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基O大計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果1天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果2天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果3天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果4天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）1231231結(jié)果5天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）131231結(jié)果確認(rèn)人日期復(fù)核人日期

培養(yǎng)基配制編號保存時間靈敏度檢查結(jié)果菌種枯草芽泡桿菌白色念珠菌胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基O大計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）123123451結(jié)果1天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）123123451結(jié)果2天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）123123451結(jié)果3大計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）123123451結(jié)果4天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）123123451結(jié)果5天計數(shù)接種培養(yǎng)時間（天）123123451結(jié)果確認(rèn)人Ed期復(fù)核人日期

培養(yǎng)基配制編號