CNAS-CL03-A001-2019 能力驗(yàn)證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明

2019年9月1日發(fā)布2019年9月1日實(shí)施能力驗(yàn)證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明 2 3 3 3 4 8附錄A均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn) 附錄B統(tǒng)計(jì)分析和能力評(píng)定 附錄C微生物能力驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)分析示例 CNAS-CL03-A001:2019CNAS-CL03:2010中章、節(jié)條款號(hào)和名稱，解釋和說(shuō)明內(nèi)容在CNAS-CL03-A001:2019能力驗(yàn)證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明GB/T28043利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)進(jìn)行能力驗(yàn)證的統(tǒng)計(jì)方法（ISO13528,ISO/TS22117食品和動(dòng)物飼料微生物能力驗(yàn)證特定要求和指南(Microbiologyoffoodandanimaguidanceforproficiencytestingbyinterlaboratoryc3.3標(biāo)準(zhǔn)菌株referencestrainCNAS-CL03-A001:2019進(jìn)行定性微生物檢測(cè)時(shí)，能檢測(cè)到但無(wú)法給出精確數(shù)值的微生物的最小量），開(kāi)展新能力驗(yàn)證計(jì)劃前通常應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，預(yù)試驗(yàn)應(yīng)考慮微生物CNAS-CL03-A001:2019e）明確目標(biāo)微生物是定性檢測(cè)和/或定——在使用前應(yīng)確認(rèn)目標(biāo)微生物的特性,應(yīng)根據(jù)能力驗(yàn)證的目標(biāo)采用適當(dāng)?shù)摹芰︱?yàn)證樣品中存在背景菌群尤其是疑似目標(biāo)微生物時(shí)，提供者應(yīng)考慮背菌群對(duì)目標(biāo)微生物檢測(cè)的影響，應(yīng)通過(guò)確認(rèn)試驗(yàn)保證樣品指定值的準(zhǔn)確可j）有防止串通或偽造結(jié)果的措施，如多水平、多樣本設(shè)計(jì)，參加者返回應(yīng)建立微生物能力驗(yàn)證樣品的制備、貯存、處置的程序，包括檢畢CNAS-CL03-A001:2019）；——樣品的數(shù)量（要考慮完成結(jié)果評(píng)價(jià)之后，參加者對(duì)能力驗(yàn)證樣品穩(wěn)定）；篩選、選擇分離和鑒定階段的能力。對(duì)定量和定性能力驗(yàn)證樣品，應(yīng)建立均勻性和穩(wěn)定性判定原則（附錄A）。微生物能力驗(yàn)證樣品應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)定。必要時(shí)，應(yīng)將穩(wěn)定性量化考慮作為能力驗(yàn)證樣品指定值測(cè)量不確定度的補(bǔ)充分量，在能力評(píng)定中予以考檢測(cè)時(shí)間間隔及頻次取決于已知的穩(wěn)定性信CNAS-CL03-A001:2019注1：開(kāi)展過(guò)多輪次定量微生物能力驗(yàn)證計(jì)劃的提供者，可使用經(jīng)驗(yàn)值作注2:通常最大可能數(shù)（mostprobablenumber,MPN）計(jì)數(shù)方法和平板菌落注3:定性微生物能力驗(yàn)證計(jì)劃通常直接將參加者結(jié)果與指定值進(jìn)行比較提供者應(yīng)將確定微生物定性和定量計(jì)劃指定值（平均值、中位值b）給參加者的指導(dǎo)書應(yīng)包括以CNAS-CL03-A001:2019提供者應(yīng)控制微生物樣品的包裝，確保符合國(guó)家、地區(qū)或國(guó)適用時(shí)，文件控制程序應(yīng)包括基于病原微生物安——使用前應(yīng)確認(rèn)目標(biāo)微生物的特性,應(yīng)根據(jù)能力驗(yàn)證的目標(biāo)采用適當(dāng)?shù)臉?biāo)CNAS-CL03-A001:2019適用時(shí)，記錄控制程序應(yīng)包括基于病原微生物安全考慮的質(zhì)量/技術(shù)記微生物水平較高時(shí)，可使用單因子方差分析和Ss0.3準(zhǔn)則（Ss為樣品間比如根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值或先期同類能力驗(yàn)證計(jì)劃獲得的值，可利用Ss0.3進(jìn)行評(píng)當(dāng)微生物水平較低時(shí)，樣品間微生物計(jì)數(shù)差異可能會(huì)比較大，可能不滿足Ss0.3的要求，在后續(xù)評(píng)價(jià)參加者能力時(shí)可考慮在能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差中加入樣 nj1j1 mxxi/m2019年9月1日發(fā)布2019年9月1日實(shí)施均方自由度n=m-1n?=N-n若F<自由度(n,n2)及給定顯著性水平α(通常α=0.05)的臨界值Fa(n,n)(查表1F分布表),則表明樣品內(nèi)樣品間無(wú)顯著差異，樣品是均勻的。899(摘自GB4086.4-1983統(tǒng)計(jì)分布數(shù)值表F分布)A.1.1.2Ss≤0.3σ準(zhǔn)則性條件下測(cè)試j次（j=1、2、……n）。按A.1.1.1計(jì)偏差Ss：SsSs(MS1MS2)/n若Ss0.3，則使用的樣品可以認(rèn)為是均勻的。通常從微生物能力驗(yàn)證樣品總體中隨機(jī)抽取足夠具有代表性的品進(jìn)行穩(wěn)定x2x1 CNAS-CLO3-A001:2019第13頁(yè)共22頁(yè)n?—第一次測(cè)試次數(shù)；n?—第二次測(cè)試次數(shù)若t<顯著性水平α(通常α=0.05)自由度為n?+n?-2的臨界值tg(+2-2)(查表2t分布表),則兩個(gè)平均值之間無(wú)顯著差異，表明樣品是穩(wěn)定的。P{t(n)>t(n)}=α表2t分布表自由度臨界值自由度臨界值自由度臨界值A(chǔ).1.2.2x-y≤0.3o準(zhǔn)則若x-y≤0.3o成立，則認(rèn)為樣品是穩(wěn)定的。式中：x—均勻性檢驗(yàn)的總平均值y穩(wěn)定性檢驗(yàn)的測(cè)試平均值。對(duì)于定性計(jì)劃樣品的均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)，其取樣和測(cè)試程序基本上和定量計(jì)劃相同，通常核查測(cè)試結(jié)果是否和樣品制備時(shí)指定值一致，如一致可判定樣品滿足要求，如不一致可判定為不滿足要求，需核查原因或重新制樣。另外，也可利用以上定量計(jì)劃的評(píng)定準(zhǔn)則，采用目標(biāo)微生物和背景菌群計(jì)數(shù)來(lái)進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性評(píng)定。B.2.1利用Z值評(píng)定zxX其中x為參加的結(jié)果，X為指定值,能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差。當(dāng)參加者使用的測(cè)試方法有可靠的重復(fù)性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R時(shí),可根據(jù)GB/T11 2R2r2(n1)n參加者在重復(fù)條件下n次測(cè)試的平均值x與指定值X之差|xX|小于臨界為測(cè)試方法的再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差。根據(jù)ISO4833，常規(guī)30℃需氧培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基上的菌落計(jì)數(shù)，其方法重復(fù)性限r(nóng)為0.25，再現(xiàn)性限R為0.45，計(jì)算CD值約為0.29?！谥付ㄖ怠?（含邊界）范圍內(nèi)：——在指定值±5（含邊界）范圍外：之間的變異會(huì)逐漸減小，趨近于方法本身的變異，評(píng)價(jià)參加者結(jié)果的MPN對(duì)數(shù)值接受限可根據(jù)實(shí)際情況縮小。如英格蘭衛(wèi)生局經(jīng)過(guò)兩年多輪次能力驗(yàn)證計(jì)劃運(yùn)作之后，將參加者M(jìn)PN對(duì)以某次乳粉中菌落總數(shù)測(cè)定能力驗(yàn)證為例。參加者使用的測(cè)試方法為ISO表4菌落總數(shù)測(cè)試結(jié)果（CFU/g）測(cè)試結(jié)果x1測(cè)試結(jié)果x2x14.6994.62324.7244.70834.7784.73244.6724.60254.6994.74864.6334.70874.6534.68184.6634.71694.6814.6724.6994.6234.685F9F臨界值F0.05(9,10)=3.02。計(jì)算的F值為1.67，該值＜臨界值，這初步表明也可利用A.1.1.2Ss0.3表6模擬運(yùn)輸條件放置30天后測(cè)試結(jié)果（CFU/g）12345x1x2s2txyxy0.3值的差值x1x2為0.002。以經(jīng)驗(yàn)值0.25為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)xxy0.3CFU/g值利用CD值|xX|＜0.291710004.8512550004.7403420004.62341800005.25556280004.4477410004.6138500004.6999310004.491520004.716541004.733175004.243475004.677495004.695450004.6530390004.591330004.519220004.342650004.813200004.301500004.699340004.531450004.6530350004.544700004.845將參加者結(jié)果進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，以中位值為指定值X，以標(biāo)準(zhǔn)化四分位距為CNAS-CL03-A001:2019能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算指定值X為4.653，能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差為0.137。CNAS-CL03-A001:2019