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紫外-可見分光光度法UV-visibleSpectrophotometerIodometry廣州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院PART02紫外可見-分光光度法Iodometry紫外可見-分光光度法基于物質(zhì)吸收紫外或可見光引起分子中價電子躍遷、產(chǎn)生分子吸收光譜與物質(zhì)組分之間的關(guān)系建立起來的分析方法,稱為紫外可見分光光度法(UV-vis)。01選擇性高020304測量可以精確到10-7g/ml??焖俸啽隳苓M行微量組分測定。準確度好多種組分共存,無需分離直接測定某物質(zhì)。選擇性好特點儀器設(shè)備便宜,應(yīng)用廣泛,無機、有機物均可測定。Iodometry紫外可見-分光光度法一、基本原理1.透光率T光源I0透過光It吸收光Ia反射光IrI0=It+Ia+Ir計算公式:T=ItI0×100%T取值為0.0%~100.0%T=0.0%:光全吸收T=100.0%:光全透過Iodometry紫外可見-分光光度法一、基本原理2.吸光度AT與A關(guān)系:A∝1/T,T=0,A=∞,T=100%,A=0計算公式:A=lg1T=-lgT=lgI0ItA=-lgT,T=10-A二、光的吸收定律朗伯定律(1760年)Iodometry紫外可見-分光光度法A=k×L(液層厚度)比爾定律(1852年)A=k×c(溶液濃度)朗伯比爾定律:A=kcL一束平行單色光通過一均勻、非散射的吸光物質(zhì)溶液時,在入射光的波長、強度以及溶液溫度等保持不變時,該溶液的吸光度A與其濃度C及液層厚度L的乘積成正比。吸光系數(shù)k吸光系數(shù):k=A/cL摩爾吸光系數(shù)
在一定λ下,c=1mol/L,L=1cm時的吸光度。百分吸光系數(shù)/比吸光系數(shù)E1cm1%一定λ下,c=1%(W/V)即1g/100ml,L=1cm時的吸光度。兩者關(guān)系Iodometry紫外可見-分光光度法吸光系數(shù)的特別說明摩爾吸光系數(shù)
A=kcL就轉(zhuǎn)變?yōu)锳=
cL注意:濃度C的單位必須是mol/l百分吸光系數(shù)EA=kcL就可以轉(zhuǎn)變?yōu)锳=EcL注意:濃度的單位必須是g/100mlIodometry紫外可見-分光光度法吸光系數(shù)的意義
一定條件下是一個特征常數(shù)。溫度和波長一定時。ε僅與物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān),與待測物濃度c和液層厚度L無關(guān);Iodometry紫外可見-分光光度法
可作為定性和定量分析依據(jù):同一物質(zhì)在不同波長時ε值不同。不同物質(zhì)在同一波長時ε值不同。12練一練Iodometry紫外可見-分光光度法1.某物質(zhì)的摩爾濃度為C,在一定條件下用1cm的吸收池測得吸光度為A,則摩爾吸光系數(shù)為:(
)CaB.A/cC.c/A
D.cM2.某物質(zhì)的吸光系數(shù)與()有關(guān)。A該物質(zhì)溶液的濃度B.物質(zhì)溶液的密度C.液層厚度D.該物質(zhì)本身的性質(zhì)BD練一練Iodometry紫外可見-分光光度法安絡(luò)血的摩爾質(zhì)量為236g/mol,將其配成100ml含0.4962mg的溶液,盛于1cm的吸收池中,在λmax處測定得A值為0.557,試求安絡(luò)血的
和。Iodometry紫外可見-分光光度法吸收光譜(吸收曲線)定義以A為縱坐標,λ為橫坐標,繪制的λ~A曲線。術(shù)語①吸收峰:λmax②吸收谷:λmin③肩峰:λsh④末端吸收Iodometry紫外可見-分光光度法吸收曲線的移動λmax向長波方向移動稱為紅移,或長移。λmax向短波方向移動稱為藍移(或紫移)或短移。吸收強度即摩爾吸光系數(shù)ε增大或減小的現(xiàn)象分別稱為增色效應(yīng)或減色效應(yīng)Iodometry紫外可見-分光光度法吸收曲線的應(yīng)用用作定性定量分析。不同物質(zhì)相同濃度,其吸收曲線形狀,λmax不同同一物質(zhì)的吸收光譜特征值相同;同一物質(zhì)相同濃度的吸收曲線重合;同一物質(zhì)不同濃度,吸收曲線形狀相似,λmax相同Iodometry紫外可見-分光光度法偏離光的吸收定律的原因依據(jù)光的吸收定律,A
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