T-GDPPS 010-2024 紅火蟻蟻群室內(nèi)飼養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.01GuidelineforlaboratoryculturemethodofSolenopsisinvictaBuren廣東省植物保護(hù)學(xué)會(huì)發(fā)布ⅠT/GDPPS010—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由廣東省植物保護(hù)學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、廣東省農(nóng)業(yè)有害生物預(yù)警防控中心、即撲有害生物防控技術(shù)有限公司。本文件主要起草人：王磊、陸永躍、葉欽杰、彭彬、葉欽文、許益鐫、劉晨浪。1T/GDPPS010—2024紅火蟻蟻群室內(nèi)飼養(yǎng)技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了紅火蟻野外蟻群采集和室內(nèi)飼養(yǎng)方法。本文件適用于紅火蟻野外蟻群采集和室內(nèi)飼養(yǎng)。2規(guī)范性引用文件本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1水試管watertube在玻璃試管（直徑20mm或30mm×長(zhǎng)200mm）中加水到離管口3cm處，用密實(shí)棉花球塞進(jìn)管口然后向下推移棉塞直到棉球完全被水浸濕為止。3.2人工蟻巢artificialantnest人工蟻巢由填有1/3～2/3醫(yī)用石膏或建筑用石膏的培養(yǎng)皿(φ22cm或9cm）底部和有孔洞(φ0.5cm）的皿蓋組成。可用紅色塑料紙或錫箔紙覆蓋培養(yǎng)皿蓋遮避光線使人工蟻巢更接近自然蟻巢。3.3婚飛蟻后newly-matedqueen生殖雌蟻在婚飛交配后，落地褪翅，被稱為婚飛蟻后。3.4蟻群colony由紅火蟻工蟻、幼蟻、生殖蟻等多個(gè)品級(jí)構(gòu)成的具有持續(xù)存在能力的群體。3.5水滴法waterdropmethod分離紅火蟻與巢穴土壤的方法，通過(guò)向裝有紅火蟻巢穴的容器中持續(xù)滴水使紅火蟻與土壤分離。3.6棄尸堆refusepiles由紅火蟻將剩余的食物碎片、紅火蟻本身的尸體搬到蟻巢外統(tǒng)一堆放形成。4工具及材料4.1采集工具及材料2T/GDPPS010—2024吸蟲(chóng)器、鐵鍬（鏟面長(zhǎng)30cm～35cm、鏟面寬15cm～25cm）、手套（醫(yī)用外科乳膠手套或橡膠手套）、滑石粉或爽身粉、16L～30L塑料桶或整理箱、雨靴、棉花、黃粉蟲(chóng)或蝗蟲(chóng)或火腿腸、塑料盤(pán)、石膏板、酒精。4.2飼養(yǎng)材料蟻群飼養(yǎng)盒宜選用透明的塑料保鮮冷藏盒。根據(jù)蟻群數(shù)量可選擇40cm×30cm×10cm或30cm×25cm×10cm規(guī)格的飼養(yǎng)盒。高度最好10cm～15cm。蟻群飼養(yǎng)盒最好帶有透明蓋便于觀察和操作。人工蟻巢由填有1/3～2/3醫(yī)用石膏或建筑用石膏的培養(yǎng)皿(φ22cm或9cm）底部和有孔洞(φ0.5cm）的皿蓋組成（附錄C圖C.1）?？捎眉t色塑料紙或錫箔紙覆蓋培養(yǎng)皿蓋遮避光線使人工蟻巢更接近自然蟻巢。石膏板（長(zhǎng)寬≥25cm、厚度≥10cm）。水、10w/w%糖水、蝗蟲(chóng)或黃粉蟲(chóng)或其他昆蟲(chóng)。5紅火蟻野外采集技術(shù)5.1采集前準(zhǔn)備工作在裝蟻巢的容器（桶或整理箱，40L-60L）內(nèi)壁距頂部邊緣30cm處及以上區(qū)域涂上滑石粉或爽身粉，同樣將涂抹滑石粉或爽身粉涂于鐵鍬手柄處。采集時(shí)需穿密閉性較好的雨靴或運(yùn)動(dòng)鞋配長(zhǎng)筒襪，避免腳部皮膚裸露。在雨靴或運(yùn)動(dòng)鞋的鞋幫處涂抹滑石粉或爽身粉。作業(yè)人員雙手戴好橡膠手套。5.2采集天氣情況宜選擇晴天、多云或陰天開(kāi)展采集活動(dòng)，采集時(shí)降雨或采集前1天～2天采集區(qū)域內(nèi)有強(qiáng)降水、地面有積水，不宜采集。氣溫在20℃~32°C之間。5.3采集過(guò)程選擇螞蟻活躍且蟻丘直徑在20cm以上的紅火蟻蟻巢進(jìn)行采集。采集前，作業(yè)人員雙手應(yīng)戴好橡膠手套并涂抹滑石粉，以防止紅火蟻直接爬至手臂。先將蟻巢周?chē)牟?、石塊等有礙挖掘的東西作適當(dāng)清理，以方便后續(xù)操作，清理過(guò)程應(yīng)避免驚擾蟻巢。使用鐵鍬將整個(gè)蟻巢的地上部分及地下部分分多鏟挖出來(lái)，迅速放到放到16L～30L桶或整理箱內(nèi)。挖取的巢土頂部距離桶或整理箱的上緣距離不低于20cm，導(dǎo)致螞蟻逃逸。采集時(shí)盡可能采集到有翅蟻和蟻后。挖好后，將巢坑處進(jìn)行簡(jiǎn)單回土處理。5.4采集后運(yùn)輸采集后，裝蟻巢的容器應(yīng)在封口處留出些縫隙或不封口，以免容器內(nèi)壁的滑石粉失效，造成紅火蟻逃逸。在將采集到的蟻巢運(yùn)輸回室內(nèi)過(guò)程中，應(yīng)每隔1小時(shí)～2小時(shí)觀察容器內(nèi)壁是否需要補(bǔ)充涂抹滑石粉，防止紅火蟻逃逸。同時(shí)降低運(yùn)輸車(chē)輛內(nèi)部溫度至24°C及以下。觀察注意是否會(huì)出現(xiàn)婚飛行為。5.5室內(nèi)靜置3T/GDPPS010—2024將采集回來(lái)的蟻群放在室內(nèi)靜置2天～3天，裝有紅火蟻蟻群的容器不要覆蓋容器蓋。期間每隔1天淋100mL～200mL清水，以保持蟻巢土壤部分濕潤(rùn)，放入水試管為蟻群提供水分來(lái)源，并提供黃粉蟲(chóng)或蝗蟲(chóng)或火腿腸為蟻群提供蛋白質(zhì)來(lái)源。5.6蟻群分離使用水滴法將蟻群從土中分離出來(lái)，操作流程如下：（1）準(zhǔn)備1個(gè)飼養(yǎng)盒，并在其內(nèi)壁均勻涂抹滑石粉，作為容納蟻群的容器。（2）在飼養(yǎng)盒內(nèi)部?jī)啥朔謩e置入1個(gè)人工蟻巢和1塊石膏板。（3）取出盛有蟻巢的容器，并以約100mL/min的流速將水滴入容器中央，待水面沒(méi)過(guò)土壤表面后，蟻群會(huì)漂浮在水面。（4）使用漏勺將漂浮的蟻群撈出并轉(zhuǎn)移至步驟1準(zhǔn)備的飼養(yǎng)盒中的石膏板表面。（5）待蟻群自主轉(zhuǎn)移至人工暗室后，取出石膏板及其它雜物，完成分離工作。6紅火蟻婚飛新蟻后的野外采集及飼養(yǎng)6.1蟻后的采集使用吸蟲(chóng)器采集新蟻后。采集過(guò)程中盡量避免對(duì)蟻后造成傷害，降低其存活。采集時(shí)間：紅火蟻婚飛高峰期，即春夏季，大雨過(guò)后，天氣悶熱，氣溫26℃左右時(shí)的午后。采集地點(diǎn)：紅火蟻發(fā)生密度較高（一般三級(jí)以上區(qū)域）、向陽(yáng)背風(fēng)的位置，較容易獲得剛剛婚飛交配完落地脫翅準(zhǔn)備建巢的新蟻后。6.2采后室內(nèi)飼養(yǎng)將采集到的新蟻后帶回室內(nèi)后，放置于新蟻后飼養(yǎng)裝置中進(jìn)行飼養(yǎng)直至首批工蟻羽化。裝置由一個(gè)15mL玻璃管組成，在玻璃管內(nèi)倒入1/2～2/3的純水，使用棉花塞塞緊，以棉花塞濕潤(rùn)但沒(méi)有水滲出為宜（附錄圖C.2）。蟻后放入后，使用棉花塞將試管口封閉，使得空氣可以進(jìn)入但是新蟻后無(wú)法出去。待第一批工蟻羽化后，在棉花塞中加一經(jīng)裁剪的移液槍頭，這樣可以保證空氣流通，保證工蟻進(jìn)出覓食，但是新蟻后無(wú)法出去。7紅火蟻蟻群的室內(nèi)飼養(yǎng)7.1飼養(yǎng)室條件紅火蟻飼養(yǎng)室溫度需要保持在26±2oC，相對(duì)濕度60%-80%。可使用空調(diào)和加濕器或培養(yǎng)箱控制飼養(yǎng)環(huán)境的溫濕度。7.2飼養(yǎng)食物及水紅火蟻蟻群的存活需要水、糖類(lèi)和蛋白質(zhì)類(lèi)。水源：將“水試管”用透明膠或鐵絲支架固定平放在飼養(yǎng)盒中，為紅火蟻持續(xù)供水，5天～7天更換新的水試管。4T/GDPPS010—2024蜂蜜水。每天供給蟻群5mL蜂蜜水。將蜂蜜水盛放在一個(gè)小容器（培養(yǎng)皿或瓶蓋）中，然后平放在飼養(yǎng)盒中；也可用浸蜂蜜水的脫脂棉飼喂螞蟻以免粘住螞蟻。（2）10w/w%蔗糖溶液。用1份蔗糖和9份水配制10w/w%蔗糖水，然后制作成蔗糖溶液試管放入紅火蟻飼養(yǎng)盒內(nèi)。根據(jù)蟻群消耗情況及時(shí)更換水試管和10%w/w蔗糖溶液試管，至少保證1周更換1次。蛋白質(zhì)：黃粉蟲(chóng)幼蟲(chóng)、蛹或成蟲(chóng)、冷凍東亞飛蝗及豬肝粉等。及時(shí)添加蛋白質(zhì)類(lèi)食物，每天30g左7.3蟻群日常管理紅火蟻?zhàn)鳛樯鐣?huì)性生物，具有將工蟻尸體、食物殘?jiān)劝岬较伋餐庑纬蓷壥训牧?xí)性，故飼養(yǎng)過(guò)程中每隔5天～7天清理飼養(yǎng)盒內(nèi)的棄尸堆，防止棄尸堆中的病原菌對(duì)蟻群產(chǎn)生不利影響。及時(shí)更換水源和糖類(lèi)食物。及時(shí)提供黃粉蟲(chóng)幼蟲(chóng)、蛹或成蟲(chóng)、冷凍東亞飛蝗及豬肝粉等蛋白質(zhì)食物。使用水滴法分離獲得并在室內(nèi)養(yǎng)殖7天后的蟻群，才能挑取其中的螞蟻開(kāi)展試驗(yàn)研究。8人員防護(hù)帶上厚橡膠手套并涂上滑石粉保持手臂垂直防止螞蟻攀爬。當(dāng)觀察和試驗(yàn)操作時(shí)注意衣服、頭發(fā)和裝飾不要掉入蟻群盤(pán)中。9飼養(yǎng)后蟻群處理對(duì)于還存活或者不再需要的蟻群，可將其連同飼養(yǎng)盒一起放置于-20oC環(huán)境下連續(xù)處理24小時(shí)進(jìn)行滅殺。10生物安全管理紅火蟻是一種植物檢疫性有害生物，不能在非疫區(qū)飼養(yǎng)。因科研等需要在非疫區(qū)飼養(yǎng)的，需要向當(dāng)?shù)刂参餀z疫部門(mén)提出申請(qǐng)并得到批準(zhǔn)后方能飼養(yǎng)。在紅火蟻疫區(qū)開(kāi)展紅火蟻飼養(yǎng)時(shí)是主要對(duì)于還存活或者不再需要的蟻群，可將其連同飼養(yǎng)盒一起放置于-20oC環(huán)境下連續(xù)處理24小時(shí)進(jìn)行滅殺。5T/GDPPS010—2024附錄A紅火蟻生物學(xué)信息A.1生物學(xué)特性婚飛蟻后一般獨(dú)立建巢，在建巢后1天～2天內(nèi)產(chǎn)卵，26oC±2oC條件下，卵期6天-7天，幼蟲(chóng)期10天左右，蛹期10天。從卵到工蟻羽化歷期在26天左右。A.2紅火蟻工蟻特征工蟻形態(tài)特征（圖A.1），各部位特征可參考以下信息進(jìn)行識(shí)別：a）工蟻體長(zhǎng)2.5mm～7.0mm。體色紅褐色，腹部呈黑褐色體表略光滑；b）復(fù)眼黑色。觸角10節(jié)，鞭節(jié)端部?jī)晒?jié)膨大呈棒狀；a）額下方連接唇基明顯，兩側(cè)各有齒1個(gè)，唇基內(nèi)緣中央具三角形小齒1個(gè)，齒基部上方著生1根剛毛；b）前胸背板前端隆起，前、中胸背板的節(jié)間縫不明顯，中、后胸背板的節(jié)間縫則明顯；胸腹連接處有2個(gè)腹柄結(jié)；腹部卵圓形，可見(jiàn)4個(gè)體節(jié)，腹部末端有螯刺伸出。圖A.1紅火蟻工蟻（RyanWhitehouse和JoeA.MacGown拍攝）A.3雄性生殖蟻6T/GDPPS010—2024雄性生殖蟻體長(zhǎng)7mm～8mm，體黑色，著生翅2對(duì)，頭部細(xì)小，觸角呈絲狀，胸部發(fā)達(dá)，前胸背板顯著隆起。A.4雌性生殖蟻有翅型雌蟻體長(zhǎng)8mm～10mm，頭及胸部棕褐色，腹部黑褐色，著生翅2對(duì)。頭部細(xì)小，觸角呈膝狀，胸部發(fā)達(dá)，前胸背板顯著隆起。圖A.2紅火蟻生殖蟻（從右至左分別為雌性生殖蟻、雄性生殖蟻）A.5蟻后蟻后（圖A.3）無(wú)翅，其他特征與生殖雌蟻相同。其體型，特別是腹部可隨壽命的增長(zhǎng)不斷增大。圖A.3紅火蟻蟻后與紅火蟻幼蟻7T/GDPPS010—2024A.6紅火蟻蟻巢特征紅火蟻為完全地棲性蟻巢的螞蟻種類(lèi)，成熟蟻巢（圖A.4）是以土壤堆成高10cm～30cm，直徑30cm～50cm的蟻丘；蟻丘表面土壤疏松，內(nèi)部結(jié)構(gòu)呈蜂窩狀。圖A.4成熟的紅火蟻蟻巢8T/GDPPS010—2024附錄B被采集蟻巢信息記錄文件被采集蟻巢信息記錄文件表見(jiàn)表B.1。表B.1被采集蟻巢信息記錄表9T/GDPPS010—2024紅火蟻室內(nèi)飼養(yǎng)裝置圖C.1蟻群飼養(yǎng)人工蟻巢圖C.2紅火蟻新蟻后飼養(yǎng)裝置T/GDPPS01