T-SXSF 12-2025 沙棘葉中總黃酮含量的測(cè)定方法 分光光度比色法

ICS65.020.01CCSX04SXSF2024-12-30發(fā)布T/SXSF12－2025前言 II 12規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4儀器和設(shè)備 5材料和試劑 6標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 27試樣及待測(cè)溶液制備 28測(cè)定 29計(jì)算 210精密度 3T/SXSF12－2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由山西省林學(xué)會(huì)提出并監(jiān)督管理。本文件由山西省林學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：山西省林業(yè)和草原科學(xué)研究院。本文件主要起草人：劉英翠、馬倩、張春媛、田建華、魏璐、史鵬、梁愛(ài)軍、張娜、陳春。1T/SXSF12－2025沙棘葉中總黃酮含量的測(cè)定方法分光光度比色法本文件規(guī)定了沙棘葉總黃酮含量的測(cè)定方法的材料和試劑、儀器和設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、試樣及待測(cè)溶液制備、測(cè)定、計(jì)算和精密度等要求。本文件適用于采用分光光度比色法測(cè)定沙棘葉總黃酮含量。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4儀器和設(shè)備可見(jiàn)分光光度計(jì)、分析天平（精度0.0001g）、超聲波清洗機(jī)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、植物粉碎機(jī)。5材料和試劑5.1通用材料采用沙棘干葉或濕葉為試驗(yàn)材料，干葉不少于100g，濕葉不少于500g。5.2試劑無(wú)水乙醇（C2H5OH，分析純）、亞硝酸鈉(NaNO2，分析純)、硝酸鋁(AL(NO3)3，分析純)、氫氧化鈉(NaOH，分析純)、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(UV≥98%)、水。水質(zhì)達(dá)到GB/T6682規(guī)定的三級(jí)及以上。5.3試劑5.3.1亞硝酸鈉溶液（50g/L）：用分析天平稱(chēng)取5g亞硝酸鈉加水溶解稀釋至100mL。5.3.2硝酸鋁溶液（100g/L）：用分析天平稱(chēng)取10g硝酸鋁加水溶解稀釋至100mL。5.3.3氫氧化鈉溶液（40g/L）：用分析天平稱(chēng)取4g氫氧化鈉加水溶解稀釋至100mL。5.3.460%乙醇溶液：60mL無(wú)水乙醇用水稀釋至100mL。5.3.530%乙醇溶液：30mL無(wú)水乙醇用水稀釋至100mL。5.3.6蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.2mg/mL）配制：用分析天平稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20mg，加60%乙醇溶液適量，置水浴上微熱使溶解，冷卻后轉(zhuǎn)移置50mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，2T/SXSF12－2025搖勻。量取25mL，置50mL容量瓶中，加水定容至刻度，混勻，配置成濃度0.2mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。6標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制吸取0.3mL、0.6mL、1mL、1.5mL、2mL、3mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置25mL容量瓶中，各加30%乙醇溶液至6.0mL，分別加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6min；后加入4%氫氧化鈉試液4mL，用30%乙醇溶液定容至100mL，搖勻，放置15min，以30%乙醇溶液為空白，配制成濃度為0.0024、0.0048、0.008、0.012、0.016、0.024mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。用可見(jiàn)分光光度計(jì)在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定工作液吸光度值。以工作液濃度為橫坐標(biāo)，工作液吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并采用最小二乘法求得直線回歸方程，參數(shù)（R2≥0.999）。7試樣及待測(cè)溶液制備7.1試樣處理將沙棘葉放入60℃烘箱中干燥至恒重，粉碎，過(guò)60目篩。7.2待測(cè)溶液制備用分析天平稱(chēng)取沙棘葉粉測(cè)試樣品1.0000g(±0.01g），共3份，分別加入60%乙醇溶液20mL于三角瓶中，用超聲波清洗機(jī)處理20min,超聲溫度40℃,靜置過(guò)濾，收集濾液于100mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，得提取液。量取25mL提取液置于50mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，得3份待測(cè)溶液。8測(cè)定量取待測(cè)溶液0.5mL，置25mL容量瓶中，加30%乙醇溶液至6mL，分別加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6min；再加入10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6min；再加入4%氫氧化鈉溶液4mL，用30%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，放置15min，放入比色皿中，作為待測(cè)溶液。吸取待測(cè)溶液0.5mL，加30%乙醇溶液定容到25mL容量瓶中，放入比色皿中作為空白溶液。將待測(cè)溶液和空白溶液同時(shí)置于可見(jiàn)分光光度計(jì)中，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。9計(jì)算沙棘葉中總黃酮含量按式（1）計(jì)算。X=C×V×dW×100%…………(1)式中：X——總黃酮的含量，單位為百分率（%）；C——由直線回歸方程求出待測(cè)溶液中蘆丁濃度，單位為毫克/毫升（mg/mLV——待測(cè)溶液定容體積，單位為毫升（mL若使用7.2步驟時(shí)，即為100d——樣品定容