微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用（第2課時）-【堂堂清】高二生物下學(xué)期課件（2019人教版選擇性必修3）

1.2.2微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)本節(jié)聚焦：1.怎樣運(yùn)用生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)

來理解選擇培養(yǎng)的原理？2.如何通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方來有目

的地培養(yǎng)某種微生物？3.測定微生物數(shù)量的常用方法有哪些？

情境導(dǎo)入

某研究小組想在土壤樣品中分離得到能分解尿素的細(xì)菌，但是土壤中還有許多其他微生物，僅通過一般的平板劃線法或稀釋涂布平板法很難實現(xiàn)，該怎么辦呢？稀釋涂布平板法呈現(xiàn)的雜菌群選擇培養(yǎng)基1.概念：在微生物學(xué)中，將

特定種類的微生物生長，

同時

其他種類的微生物生長的培養(yǎng)基。2.原理：人為提供有利于

生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度和pH等)，

同時

其他微生物的生長。允許抑制或阻止目的菌抑制或阻止選擇培養(yǎng)基·自然界中目的菌的篩選01【資料1】聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種在體外進(jìn)行DNA復(fù)制的技術(shù)，此項技術(shù)要求使用耐高溫的DNA聚合酶。【資料2】美國黃石國家公園的熱泉中有一種水生棲熱菌，能在70～80℃的高溫條件下生存。水生棲熱菌如果讓你尋找一種耐高溫的DNA聚合酶，該如何尋找？思考提示：從熱泉中篩選出的

中提取出來。水生棲熱菌思路：耐高溫的酶←耐高溫生物體←高溫環(huán)境；選擇培養(yǎng)基·實驗室中目的菌的篩選01【資料】尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化學(xué)性質(zhì)相對穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥。尿素施入土壤后，會被土壤中的某些細(xì)菌分解成NH3，NH3再轉(zhuǎn)化為NO3-、NH4+等被植物吸收。而這些細(xì)菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成脲酶，脲酶催化尿素分解產(chǎn)生NH3，NH3可以作為細(xì)菌生長的氮源。尿素分子模型如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計？思考提示：設(shè)計一種

的選擇培養(yǎng)基，可以將分解尿素的細(xì)菌分離出來。尿素為唯一氮源選擇培養(yǎng)基·實驗室中目的菌的篩選01尿素分子模型怎么證明一個選擇培養(yǎng)基具有篩選作用呢？思考選擇培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基應(yīng)設(shè)置

培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基)作為對照，若基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長的菌落數(shù)菌

該選擇培養(yǎng)基，則該選擇培養(yǎng)基具有篩選作用。牛肉膏蛋白胨多于選擇培養(yǎng)基·隨堂小練01判斷以下條件，可以篩選出什么微生物？①不加氮源,篩選出

；②不加碳源,篩選出

；③加青霉素,篩選出

；④加高濃度食鹽,篩選出

；⑤高pH的生存環(huán)境,篩選出

；⑥70~80℃的培養(yǎng)溫度,篩選出

；⑦不提供氧氣的生存環(huán)境,篩選出

；⑧只提供石油為唯一碳源,篩選出

；⑨只提供纖維素為唯一碳源,篩選出

；水生棲熱菌石油降解菌纖維素分解菌耐高pH的細(xì)菌厭氧微生物自養(yǎng)型微生物固氮菌真菌金黃色葡萄球菌水生棲熱菌石油降解菌纖維素分解菌耐高pH的細(xì)菌厭氧微生物自養(yǎng)型微生物固氮菌真菌（注：抗生素能殺死細(xì)菌）金黃色葡萄球菌微生物的選擇培養(yǎng)021g土壤中含有多少能分解尿素的細(xì)菌？選擇培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源選擇培養(yǎng)基稀釋涂布平板法+對樣品進(jìn)行充分稀釋，然后將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上。微生物的選擇培養(yǎng)·稀釋涂布平板法02具體操作：（一）系列稀釋操作90mL無菌水①鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。②將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶，充分搖勻。鏟取土樣的鐵鏟和紙袋是否也需要滅菌？為什么？思考需要；因為也會造成雜菌污染，影響實驗結(jié)果。將10g土樣加入盛有90mL無菌水，代表稀釋多少倍？思考10倍。微生物的選擇培養(yǎng)·稀釋涂布平板法02②取1mL上清液加入盛有9mL

的試管中，依次

稀釋。90mL無菌水①②③④⑤⑥具體操作：（一）系列稀釋操作無菌水等比表述：①稀釋

倍的稀釋液；②稀釋

的稀釋液；10n10-n微生物的選擇培養(yǎng)·稀釋涂布平板法02具體操作：（二）涂布平板操作⑥用涂布器將菌液均勻地涂布在

表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿,使涂布均勻。④將涂布器放在盛有

的燒杯中。⑤將涂布器放在火焰上灼燒，待

、涂布器

后，再進(jìn)行涂布。0.1酒精酒精燃盡冷卻培養(yǎng)基③取

mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。微量移液器注：多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒?！茻郎缇曨l·稀釋涂布平板法02恒溫培養(yǎng)箱微生物的選擇培養(yǎng)·稀釋涂布平板法02【培養(yǎng)】待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板

，放入30～37℃的

中培養(yǎng)1～2d。在涂布有合適濃度菌液的培養(yǎng)基上就可以觀察到分離的單菌落。倒置恒溫培養(yǎng)箱分離純化方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法02項目平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面

操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。將菌液進(jìn)行一系列的

,稀釋度足夠高時,聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞。主要步驟接種工具連續(xù)劃線梯度稀釋平板劃線操作梯度稀釋和涂布平板操作接種環(huán)涂布器接種環(huán)滅菌時，應(yīng)將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。涂布器滅菌時，應(yīng)先將涂布器浸在酒精中，再放在火焰上灼燒，直到酒精燃盡。分離純化方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法02請結(jié)合圖片分析，平板劃線法能否達(dá)到對細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)的目的？為什么？思考不能。請結(jié)合圖片分析，稀釋涂布平板法能否達(dá)到對細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)的目的？為什么？思考原因：①最開始的劃線很可能菌類會長成一片，導(dǎo)致無法計數(shù)。

②灼燒接種環(huán)的時候也會殺死一部分菌類。原因：在合適的稀釋倍數(shù)下，均勻涂布得到的菌落互不接觸，可以確定菌落的密度，再通過計算可以得知原液中的活細(xì)菌數(shù)。能。微生物的數(shù)量測定·稀釋涂布平板法031.原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個

。注：通過統(tǒng)計平板上的

，就能推測出樣品中大約含有多少活菌?；罹鋽?shù)2.計數(shù)原則：①一般選擇菌落數(shù)為

的平板進(jìn)行計數(shù)②在同一稀釋度下，應(yīng)至少對

個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù)，然后求出

。30～3003平均值→重復(fù)實驗的目的：減小實驗誤差，增強(qiáng)實驗的說服力和準(zhǔn)確性。107108√微生物的數(shù)量測定·稀釋涂布平板法03【思考】4號試管的結(jié)果表明每克土壤中的活菌數(shù)約為

個。每克樣品中的菌株數(shù)=某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)涂布平板時所用的稀釋液的體積×稀釋倍數(shù)1.1×108101倍102倍103倍104倍105倍平均數(shù)：110個微生物的數(shù)量測定·稀釋涂布平板法03通過稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落的數(shù)目就是活菌實際數(shù)目嗎？是否存在誤差？思考提示：統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目

。原因：

.

。少兩個或多個細(xì)胞連在一起，平板上觀察到的只是一個菌落注：統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。微生物的數(shù)量測定·顯微鏡直接計數(shù)法031.原理：利用特定的

板或

板，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。注：統(tǒng)計的結(jié)果一般是

的總和。2.特點(diǎn)：

，能觀察微生物的形態(tài)特征。細(xì)菌計數(shù)血細(xì)胞計數(shù)活菌數(shù)和死菌數(shù)【相關(guān)信息】細(xì)菌計數(shù)板和血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)原理相同。①血細(xì)胞計數(shù)板比細(xì)菌計數(shù)板厚，常用于相對較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計數(shù)。②細(xì)菌計數(shù)板可對細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計數(shù)。有什么方法可以幫助我們通過顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計活菌？思考加入臺盼藍(lán)染液(活菌-無色)；快速、直觀微生物的數(shù)量測定·稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)法03項目稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數(shù)法主要用具培養(yǎng)基等顯微鏡、血細(xì)胞計數(shù)板或細(xì)菌計數(shù)板等計數(shù)依據(jù)培養(yǎng)基上的

數(shù)

.優(yōu)點(diǎn)計數(shù)方便、操作簡單缺點(diǎn)操作復(fù)雜、有一定誤差結(jié)果比實際值偏

.比實際值偏

.菌落計數(shù)的都是活菌菌株本身死菌、活菌都計數(shù)在內(nèi)小大微生物的選擇培養(yǎng)與計數(shù)·判斷正誤P12(1)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基()(2)脲酶能催化尿素分解產(chǎn)生N2，N2可作為細(xì)菌生長的氮源()(3)利用顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的細(xì)菌數(shù)量就是活菌的數(shù)量()√×NH3,NH3可作為細(xì)菌生長的氮源?！了谰突罹目倲?shù)。微生物的選擇培養(yǎng)與計數(shù)·落實思維方法P121.研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(如圖)和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是()A．a(chǎn)點(diǎn)時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點(diǎn)時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點(diǎn)時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點(diǎn)時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基D2．如圖是純化微生物時采用的兩種

接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，

下列相關(guān)敘述正確的是()A．圖甲三個平板中所用培養(yǎng)液的稀釋倍數(shù)相同B．圖甲、乙均適合分離微生物，但乙不適合對微生物進(jìn)行計數(shù)C．圖甲、圖乙所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器D．圖乙每次劃線應(yīng)從同一起點(diǎn)開始，以便使聚集的菌種逐步稀釋獲得單菌落微生物的選擇培養(yǎng)與計數(shù)·落實思維方法P12B菌落密度不同，稀釋倍數(shù)應(yīng)該不同，×；稀釋涂布平板法平板劃線法圖甲-涂布器，圖乙-接種環(huán)，×；圖乙每次劃線應(yīng)從上一次劃線的末端開始，×；實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)04提出問題土壤中含有能分解尿素的細(xì)菌，我們?nèi)绾畏蛛x它們？每克土壤樣品究竟含有多少這樣的細(xì)菌？①絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成

的微生物才能分解尿素。②利用

的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mL實驗原理脲酶尿素作為唯一氮源實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)04實驗設(shè)計(1)土壤取樣：①土壤要求：酸堿度接近

且潮濕。②取樣部位：距地表約

的土壤層。中性3～8cm取樣時一般要鏟去表層土實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)04實驗設(shè)計(2)樣品的稀釋：測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用

倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。1×104、1×105、1×106測定土壤中細(xì)菌的總量和能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？為什么？思考提示：

；因為土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量比細(xì)菌的總量要

。不相同少注：第一次做這個實驗時可以將稀釋的范圍放寬一點(diǎn)。如：將1×103～1×107倍稀釋的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)，以保證能從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)04實驗設(shè)計(3)微生物的培養(yǎng)與觀察：①培養(yǎng)：根據(jù)不同微生物的需要，控制適宜的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細(xì)菌一般在

℃的溫度下培養(yǎng)

d。②觀察：每隔

h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取

時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止

。另外，還需要記錄菌落的特征：包括菌落的

、

和

等。30～371～224菌落數(shù)目穩(wěn)定因培養(yǎng)時間不足而遺漏部分菌落形狀大小顏色實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)04實驗結(jié)果未接種以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1×1041×1051×106牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基中的菌落數(shù)，說明

.

；該選擇培養(yǎng)基有篩選作用未接種的培養(yǎng)基上無菌落的生長，說明：

；

；培養(yǎng)基沒有被雜菌污染實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)04數(shù)據(jù)分析甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。(1)甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計結(jié)果

(填“可靠”或“不可靠”)。若不可靠，應(yīng)如何改進(jìn)？

。(2)乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對實驗結(jié)果的處理

(填“合理”或“不合理”)。微生物計數(shù)時，如果實驗中出現(xiàn)重復(fù)實驗的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng).

。不可靠沒有重復(fù)實驗（至少涂布3個平板，統(tǒng)計結(jié)果后計算平均值）不合理分析實驗過程中可能的影響因素，從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因?qū)嶒灒和寥乐蟹纸饽蛩氐募?xì)菌的分離與計數(shù)04利用尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基分離出的微生物都是能分解尿素的微生物嗎？并說明理由。思考不一定；因為有些微生物可以利用能分解尿素的細(xì)菌的代謝物進(jìn)行生長繁殖。擴(kuò)展應(yīng)用04依據(jù)以上資料，思考如何對分離得到的微生物是否是分解尿素的細(xì)菌作進(jìn)一步鑒定？思考【資料1】細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高?！举Y料2】酸堿指示劑酚酞變色反應(yīng)區(qū)段：8.2-10.0，無色→紅色；酚紅變色反應(yīng)區(qū)段：6.8-8.0，黃色→紅色；提示：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入

，

若菌落周圍出現(xiàn)

，則可說明該菌種能夠分解尿素。酚紅指示劑(更靈敏)紅色環(huán)帶補(bǔ)充：紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越

。強(qiáng)擴(kuò)展應(yīng)用04

培養(yǎng)基

在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，使微生物的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品發(fā)生反應(yīng)，從而達(dá)到鑒定的作用。鑒別剛果紅培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌【資料】在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。原理①：剛果紅是一種染料,它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物,但并不與水解后的纖維二糖、葡萄糖等發(fā)生這種反應(yīng)。原理②：地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸,其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用,這是因為它們能夠產(chǎn)生纖維素酶，分解纖維素。擴(kuò)展應(yīng)用04

培養(yǎng)基

在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，使微生物的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品發(fā)生反應(yīng)，從而達(dá)到鑒定的作用。鑒別伊紅亞甲藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌【資料】可用伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌。若有，菌落呈深紫色，并有金屬光澤。原理①：伊紅是一種酸性染料，亞甲藍(lán)是一種堿性染料。在酸性環(huán)境下，伊紅和亞甲藍(lán)會結(jié)合形成復(fù)合物。原理②：大腸桿菌能分解伊紅亞甲藍(lán)培養(yǎng)基中的乳糖產(chǎn)生有機(jī)酸，使培養(yǎng)基的pH值降低。根據(jù)用途劃分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基04【舊知識回顧】培養(yǎng)基的作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。項目

培養(yǎng)基

培養(yǎng)基特殊成分加入某種化學(xué)物質(zhì)加入某種指示劑或化學(xué)藥品目的抑制或阻止其他微生物生長，促進(jìn)目的微生物生長與微生物的代謝物或培養(yǎng)基中的成分發(fā)生特定反應(yīng)用途

、

出特定微生物

不同的微生物舉例①培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細(xì)菌生長；②用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)尿素分解菌；①可用伊紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基鑒定大腸桿菌。②可用剛果紅培養(yǎng)基鑒定纖維素分解菌。選擇培養(yǎng)分離鑒別鑒定實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)·判斷正誤P1304(1)測定不同微生物數(shù)量時，接種的土壤稀釋液的稀釋度相同()(2)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，統(tǒng)計的菌落數(shù)就是活菌的實際數(shù)

()(3)菌落特征是鑒別菌種的重要依據(jù)()××√土壤中各種微生物的數(shù)量不同，因此分離不同的微生物要采用不同的稀釋度；當(dāng)兩個或多個菌落連在一起時，只能觀察計為一個菌落，因此利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目少。實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)·落實思維方法P14043．下列關(guān)于“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)”實驗操作的敘述，

不正確的是()A．利用稀釋涂布平板法準(zhǔn)確估計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是有恰當(dāng)?shù)南♂尪菳．若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需要設(shè)置未接種的

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照C．該實驗應(yīng)采用稀釋涂布平板法D．用以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養(yǎng)基來培養(yǎng)該細(xì)菌

后不會使酚紅指示劑變紅B接種，×；實驗：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)·落實思維方法P14044．在做“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)”的實驗時，甲同學(xué)從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只篩選出大約50個菌落。下列有關(guān)敘述錯誤的是()A．甲同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同，也可能是操作過程出了問題B．將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對照，

可以證明培養(yǎng)基是否受到污染C．讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實驗，如果結(jié)果與甲同學(xué)一致，

則可以證明甲同學(xué)無誤D．B、C選項的實驗思路都遵循了實驗的對照原則D遵循了實驗的對照原則，√；遵循了實驗的重復(fù)原則，D×；練習(xí)與應(yīng)用·書本P201.研究人員用無機(jī)鹽、瓊脂和石油配制的培養(yǎng)基從被石油污染的土壤中篩選出了一種石油降解菌。判斷下列相關(guān)表述是否正確。(1)這種培養(yǎng)基是一種選擇培養(yǎng)基。(2)利用這種石油降解菌可以降解石油,修復(fù)土壤。(3)相對于未被污染的土壤，從被石油