新教材高中生物選擇性必修3課件1：3 1 2 DNA的粗提取與鑒定(人教版)

第3章基因工程

DNA的粗提取與鑒定DNADNA如何將DNA提取出來，并進行鑒定呢?DNA的粗提取與鑒定探究和實踐提取生物大分子的基本思路選用一定的物理或化學(xué)方法，分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。（一）基礎(chǔ)知識基本思路提取DNA的方法1、DNA不溶于酒精溶液DNA不溶于酒精溶液，但細胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可初步分離DNA與蛋白質(zhì)。2、DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同---DNA的溶解性和耐受性（二）DNA粗提取的原理3、DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性①蛋白酶——水解蛋白質(zhì)，對DNA沒有影響。②高溫——大多數(shù)

在60～80℃時變性沉淀，而

在

80℃以上才會變性。③洗滌劑——溶解細胞膜，去除

;但對DNA沒有影響。蛋白質(zhì)DNA脂質(zhì)、蛋白質(zhì)（二）DNA粗提取的原理4、DNA的鑒定在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色，因此用二苯胺試劑鑒定DNA分子。DNA+二苯胺沸水浴藍色（二）DNA粗提取的原理1、了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)；理解DNA粗提取和鑒定的原理2、學(xué)會DNA粗提取的方法以及利用二苯胺試劑對DNA進行鑒定（三）目的要求不同生物的組織中DNA含量不同。在選取材料時，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。你認為如下提供的材料中哪些不適合提取DNA？為什么？供選材料：（括號內(nèi)為染色體條數(shù)）新鮮洋蔥（16）、香蕉、菠菜（12）、菜花、、獼猴桃（58）；豬肝（38）、魚卵、雞血（78）、哺乳動物的成熟紅細胞；在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌（1）原則上，凡是含有DNA的生物材料都可以考慮選用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大。1、實驗材料的選取（四）材料用具2、實驗用具燒杯、量筒、玻璃棒、研缽、紗布、漏斗、試管、試管架、試管夾、酒精燈、石棉網(wǎng)、三腳架、火柴、刀片和天平等。（四）材料用具（五）方法步驟：1.研磨洋蔥2.過濾獲取含DNA的上清液3.冷卻酒精析出DNA4.DNA的鑒定稱取約30g洋蔥切碎，放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨。在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。也可直接將研磨液倒入塑料離心管中，1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，再取上清液放入燒杯中。研磨洋蔥（五）方法步驟：1.研磨洋蔥2.過濾獲取含DNA的上清液或?qū)⑷芤旱谷胨芰想x心管中，在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，棄上清液，將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液(體積分數(shù)為95%)，靜置2~3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分；（五）方法步驟：3.冷卻酒精析出DNA向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。取兩支20mL的試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCI溶液中。（五）方法步驟：4.DNA的鑒定1號試管2號試管加入2mol/LNaCl溶液5mL5mL絲狀物(DNA)不加加入用玻璃棒攪拌無絲狀物溶解加入二苯胺試劑4mL4mL沸水浴5min5min觀察現(xiàn)象不變藍變藍鑒定結(jié)果（五）方法步驟：4.DNA的鑒定①獲取材料時，選取DNA含量多的，不同實驗材料提取DNA的方法可能稍有不同。②粗提取DNA時，用玻璃棒攪拌含有懸浮物的溶液時，不要直插燒杯底部，攪拌要輕緩、并沿一個方向，以便獲得較完整的DNA分子。③二苯胺試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定結(jié)果。④查閱資料了解實驗室提取純度高的DNA的方法。操作提示1.下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，錯誤的是()A.DNA析出過程中，攪拌操作要輕柔以防DNA斷裂B.預(yù)冷的乙醇溶液可用來粗提取DNAC.用二苯胺試劑鑒定DNA需要進行水浴加熱D.鑒定DNA時，應(yīng)將絲狀物直接加入到二苯胺試劑中進行沸水浴D課堂檢測2.如圖為“DNA的粗提取與鑒定”實驗的相關(guān)操作。(1)圖中實驗材料A可以是_______________________________等，研磨前加入的B應(yīng)該是___________________。(2)通過上述所示步驟得到濾液C后，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取________，向其中加入等體積、預(yù)冷的酒精溶液，析出的白色絲狀物為______________。洋蔥（花菜、香蕉、豬肝）配置好的研磨液上清液粗提取的DNA課堂檢測2.如圖為“DNA的粗提取與鑒定”實驗的相關(guān)操作。課堂檢測G1B液中攪拌研磨后過濾濾液

E22mol/L的NaCl溶液攪拌后過濾濾液

F3冷卻的95%的酒精溶液中攪拌后過