《醫(yī)學微生物學》課件-分枝桿菌

分枝桿菌、其他細菌1.破傷風梭菌的致病條件是什么？2.說出破傷風梭菌所致疾病及防治原則。3.說出肉毒梭菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌所致疾病。復習回顧1.說出結(jié)核分枝桿菌的生物學性狀。2.比較肺結(jié)核的原發(fā)感染和原發(fā)后感染。3.說出結(jié)核菌素試驗的意義。教學內(nèi)容和目標分枝桿菌屬Mycobacterium分枝桿菌屬的分類

分類生長特性主要對人致病的分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌復合群生長緩慢結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌Ⅰ組生長緩慢、光產(chǎn)色堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌Ⅱ組生長緩慢、暗產(chǎn)色瘰癘分枝桿菌Ⅲ組生長緩慢、不產(chǎn)色鳥-胞內(nèi)分枝桿菌Ⅳ組生長快速、偶發(fā)分枝桿菌麻風分枝桿菌人工培養(yǎng)基上不生長分枝桿菌屬顯著特征

細長稍彎的G+桿菌，有分枝生長的趨勢。細胞壁含有大量脂質(zhì)，與染色性、抵抗力、致病密切相關(guān)。

染色困難，但一經(jīng)著色則有抗酸性。

生長緩慢，專性需要，營養(yǎng)要求高。

不產(chǎn)毒素，其致病性與菌體成分有關(guān)。所致疾病多為慢性且伴有肉芽腫。結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)

引起結(jié)核病的病原體；可侵犯全身各器官，但以肺結(jié)核最多見1882年由科霍（Koch）發(fā)現(xiàn)。RobertKoch1843-1910,NobelPrizein1905forhisworkontuberculosis,Anthrax,Cholera,Tuberculebacillus目前該病是全球尤其是發(fā)展中國家危害最為嚴重的慢性傳染病之一，每年約有800萬例新病例發(fā)生,每年死于結(jié)核病的人數(shù)達300萬人之多,其中95%發(fā)生在發(fā)展中國家。

細長微彎，分枝狀排列或聚集成團細胞壁脂質(zhì)含量較高（影響染料深入），特別是有大量分枝菌酸。

抗酸染色(acid-fastbacilli)：呈紅色，其他非抗酸性細菌及細胞呈藍色。其莢膜對菌體有一定保護作用一、生物學性狀1、形態(tài)與染色2.培養(yǎng)特性

專性需O2，營養(yǎng)要求高

生長緩慢（12-24小時繁殖一代），在含有蛋黃、馬鈴薯、甘油和天門冬酰胺等的固體培養(yǎng)基上才能生長；常用羅氏培養(yǎng)基（Lowenstein-Jensen)

液體培養(yǎng)基呈粗糙皺紋狀菌膜或索狀生長菌落乳白色或米黃色，呈顆粒狀、結(jié)節(jié)狀或花菜狀饞、懶、丑

羅氏固體培養(yǎng)基羅氏（Lowenstein-Jensen）固體培養(yǎng)基，內(nèi)含蛋黃、甘油、馬鈴薯、無機鹽和孔雀綠等。孔雀綠可抑制雜菌生長，便于分離和長期培養(yǎng)。蛋黃含脂質(zhì)生長因子，能刺激生長。根據(jù)接種菌多少，一般2～4周可見菌落生長。菌落呈顆粒、結(jié)節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色，不透明。3.生化反應不發(fā)酵糖類

合成煙酸和還原硝酸鹽（與牛分枝桿菌鑒別）熱觸酶實驗陰性（與非結(jié)核分枝桿菌鑒別）4.抵抗力四怕四不怕四怕：對濕熱敏感，可用巴氏消毒法；在70%～75%乙醇中數(shù)分鐘即被殺死；對紫外線敏感；對抗癆藥敏感。四不怕：細胞壁中含大量脂質(zhì)，因此耐干燥（干燥痰中可存活6～8月）、耐酸、耐堿、耐青霉素等抗生素。饞、懶、丑+頑二、致病性與免疫性（一）致病物質(zhì)索狀因子：引起慢性肉芽腫。2.磷脂：形成結(jié)核結(jié)節(jié)（干酪樣壞死）。3.蠟質(zhì)D：誘發(fā)遲發(fā)型超敏反應。4.硫酸腦苷酯：導致不完全吞噬（抑制吞噬體和溶酶體的結(jié)合）。5.分枝菌酸：與抗酸染色有關(guān)。脂質(zhì)是主要致病物質(zhì)：脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、莢膜蛋白質(zhì)

最重要的是結(jié)核菌素蛋白有抗原性，與蠟質(zhì)D結(jié)合能誘發(fā)超敏反應在結(jié)核結(jié)節(jié)的形成中發(fā)揮一定作用莢膜

與吞噬細胞表面的CR3結(jié)合，有助于菌體粘附與入侵降解組織中的大分子物質(zhì)，為菌體提供營養(yǎng)防止宿主的有害物質(zhì)進入菌體（二）所致疾病肺結(jié)核可分為原發(fā)感染和原發(fā)后感染兩大類結(jié)核分枝桿菌可通過呼吸道、消化道和破損的皮膚黏膜進入機體,侵犯多種組織器官,引起相應器官的結(jié)核病,以肺結(jié)核最為常見。

多見于兒童表現(xiàn)為原發(fā)感染灶、淋巴管炎和肺門淋巴結(jié)腫大為特征的原發(fā)綜合癥原發(fā)灶大多可鈣化、纖維化而自愈，免疫力低下者，結(jié)核分枝桿菌可經(jīng)淋巴、血流擴散至全身可發(fā)生全身粟粒型結(jié)核或結(jié)核性腦膜炎原發(fā)感染原發(fā)后感染

多見于成年人，以內(nèi)源性感染為主

病灶局限，常在肺尖，不易累及周圍淋巴結(jié)主要表現(xiàn)為慢性肉芽腫性炎癥，形成結(jié)核結(jié)節(jié)，發(fā)生纖維化或和干酪樣壞死肺外感染

部分患者，菌可經(jīng)血液、淋巴液擴散，引起臟器結(jié)核，如腦、腎、骨、關(guān)節(jié)等痰菌被咽入消化道或食用消毒不嚴的牛奶，引起腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎等1.骨與關(guān)節(jié)結(jié)核是一種繼發(fā)性病變,約90%繼發(fā)于肺結(jié)核.2.絕大多數(shù)是通過血液傳播的.3.全身抵抗力降低時-發(fā)病.4.好發(fā)于兒童和青少年,30歲以下者占80%以上.5.好發(fā)于脊柱,占1/2,其次是膝、髖、肘關(guān)節(jié)。6.好發(fā)部位胸腰椎椎體及長骨骨端等.指結(jié)核性關(guān)節(jié)炎潰瘍型腸結(jié)核皮膚結(jié)核（三）免疫力

細胞免疫為主，遲發(fā)性超敏反應同時存在。兩種免疫反應的強弱，決定感染結(jié)果及預后。誘導免疫和超敏反應的物質(zhì)不同。結(jié)核菌素蛋白+蠟質(zhì)D變態(tài)反應結(jié)核菌核蛋白體RNA免疫性三、微生物學檢查1.標本的采集

根據(jù)感染部位選擇濃縮集菌以提高檢出率2.直接涂片鏡檢

直接或集菌后涂片，抗酸染色陽性即可初步診斷3.分離培養(yǎng)：培養(yǎng)基、時間（2~4周后見結(jié)果）4.快速診斷：PCR檢測、用ELISA法等檢測可疑患者血清特異性抗體進行結(jié)核病的輔助診斷等四、防治原則

發(fā)現(xiàn)并治療痰菌陽性者新生兒接種卡介苗（BCG），OT試驗轉(zhuǎn)陽率可達96%-99%，維持5年但BCG的劑型及活菌數(shù)會影響免疫效果，且成年人保護率不高新型疫苗在研發(fā)中堅持早期、聯(lián)用、適量、規(guī)律、全程的原則，一線抗結(jié)核藥包括利福平、異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素等治療過程中應以藥敏結(jié)果指導用藥結(jié)核菌素試驗通過檢測機體對結(jié)核菌素的超敏反應來了解機體對結(jié)核分枝桿菌的細胞免疫水平。結(jié)核菌素注入皮內(nèi)后如受試者已感染結(jié)核桿菌，則結(jié)核菌素與致敏淋巴細胞特異性結(jié)合，形成遲發(fā)型超敏反應性炎癥；若受試者未感染過結(jié)核桿菌則無反應。結(jié)核菌素純蛋白衍生物和卡介苗純蛋白衍生物各5U分別注射于兩側(cè)前臂屈側(cè)皮內(nèi)，48-72h后觀察

目的

原理

方法結(jié)核菌素試驗注射部位結(jié)核菌素試驗注射方法結(jié)核菌素皮膚試驗

紅腫、硬結(jié)直徑<5mm為陰性

未感染過結(jié)核桿菌，機體沒有免疫力，但應考慮：①原發(fā)感染初期；②老年人；③嚴重結(jié)核病人或有其它傳染病，使機體免疫功能低下者；④器官抑制等使用免疫抑制劑者，艾滋病患者。

5mm<紅腫、硬結(jié)直徑<15mm為陽性（+），機體曾經(jīng)感染過或接種過疫苗，有一定免疫力;紅腫、硬結(jié)直徑>15mm為強陽性（+++），可能有活動性感染需進一步檢查;

結(jié)果判斷

選擇卡介苗的接種對象及測定接種效果在未接種卡介苗的人群中做流行病學調(diào)查診斷嬰幼兒結(jié)核病測定腫瘤患者的細胞免疫功能

應用麻風分枝桿菌（M.laprae)

該菌是引起慢性傳染病-麻風病的病原體。麻風是潛伏期很長的慢性傳染病，主要侵犯皮膚、黏膜和外周神經(jīng)組織，晚期可侵入深部組織和臟器。麻風病流行廣泛，主要分布于亞洲、非洲和拉丁美洲。組織內(nèi)的麻風分枝桿菌與結(jié)核分枝桿菌相似，抗酸陽性。為典型的胞內(nèi)寄生菌。是至今唯一不能體外培養(yǎng)的細菌。致病性與免疫性

自然狀態(tài)下只感染人主要傳播途徑方式包括呼吸道、破損的皮膚黏膜和密切接觸等該病潛伏期長、發(fā)病緩慢、病程長、遷延不愈大部分患者為瘤型和結(jié)核樣型麻風，少數(shù)介于二者之間的稱為界限類和未定類麻風的免疫主要依靠細胞免疫斑疹、皮膚喪失感覺外周神經(jīng)變粗微生物學檢測

涂片染色鏡檢：瘤型和界線類患者標本中找到抗酸陽性桿菌有診斷意義；結(jié)核樣型患者很難找到菌；金胺染色可提高陽性率麻風菌素試驗診斷意義不大，主要用于評價患者的免