食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗

GB/T4789.4

食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗

沙門自首整膾

主要內(nèi)袞

修訂背景

國內(nèi)外方法

修訂內(nèi)容

-前增菌

-選擇性增菌

-分離平板

-生化鑒定

-血清學(xué)鑒定

-報告

修訂背最

必要性

由于食品生產(chǎn)及流通的全球化、新的食品加工技

術(shù)的應(yīng)用、東西方飲食習(xí)慣的交融、自然環(huán)境的改

變等因素的影響，目前沙門氏菌污染的食物種類、

季節(jié)及場所發(fā)生了重大變化。同時，隨著檢測技術(shù)

的發(fā)展，對于沙門菌的快速檢測方法層出不窮，有

些方法已通過國際權(quán)威機構(gòu)認(rèn)證（如AOAC）成為

了國際標(biāo)準(zhǔn)方法。

任務(wù)來源

1.修訂任務(wù)由衛(wèi)生部全國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)委員會

下達(dá)，由微生物標(biāo)準(zhǔn)協(xié)作組具體實施。

2.兄弟單位、企業(yè)、公司為參與單位。

共采集到數(shù)據(jù)800多個，專家反饋意見50余

條（采納90%以上）條，形成標(biāo)準(zhǔn)的草案

稿、送審稿。

4.時間跨度2004年—2006年

修定朦則

結(jié)合目前的國際標(biāo)準(zhǔn)和原標(biāo)準(zhǔn)的實際使用情況,

針對原標(biāo)準(zhǔn)的修訂，我們遵循以下的修訂原則：

1.以原國標(biāo)為基礎(chǔ)，保持與原標(biāo)準(zhǔn)的連續(xù)性；

2.參照國際分析協(xié)會(AOAC)、國際標(biāo)準(zhǔn)組織

(ISO)及美國食品藥品管理局(FDA)的有關(guān)標(biāo)

準(zhǔn)；

3.結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)的比對實驗和驗證實驗，積極吸取新方

修定依據(jù)

1.GB/T4789.4

2.AOACOfficialMethod：967.26,

967.27,967.28

3.ISO：6579

4.USFDA：BacteriologicalAnalytical

Manual,Chapter5:Salmonellao

修改內(nèi)袞

1前增菌；

2選擇性增菌;

3分離；

4生化鑒定；

5.血清學(xué)鑒定;

6.報,告。

內(nèi)外方法比較

國內(nèi)外沙門處,檢測方法f傳統(tǒng)方法）

國家標(biāo)準(zhǔn)

USFDA

FSIS

AOAC

ISO

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T4789.4-2003

微生物學(xué)檢驗沙門天菌檢驗

AC'CfWTW*細(xì)菌學(xué)分析手冊（FDA/BAM）

第五章沙門菌屬

USDA/FSISMLG4.02

內(nèi)、禽和蛋品中沙門菌的分肉和鑒定

AOAC沙門菌檢測方法

AOACOfficialMethod967.25

SalmonellainFoods

PreparationofCultureMediaand

Reagents

AOACOfficialMethod967.26

SalmonellainProcessedFoods

Detection

AOACOfficialMethod967.27

SalmonellainFoods

Identification

AOACOfficialMethod967.28

SalmonellainFoods

SerologicalTests

AOAC967.25-967.28

今曲中的沙門前檢測方法

處理樣品

24+2h

ImL+lOmLS||ImL+lOmLTT

r135C24±2h

XLD&HE&BS

35℃24±2h(BS24h&48h)

TSI&LIA

35r24+2h

純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物

MAC"XLDorHE非

尿素酶十尿素酶一純培養(yǎng)物沙

門

H抗原，LIA,酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯菌

非沙門菌

（KCN,丙二酸鹽，口引珠），O抗原非

補充生化試驗沙

門

沙門菌

菌

ISO6579:1993(E)

微生物一沙門菌檢測的通用方法

修訂內(nèi)春

沙門處前檢除

1前增菌

2選擇性增菌

3分離

4鑒定

5報告

沙門氏菌檢驗程序

檢樣

25g（mL）樣品+225mLBPW

36t±1G8h?18h___________

1mL+TTB10mL1mL+SC10mL

42匕±lt,18h?24h961c±1G18h-~24h

BSXLD（或HE、科瑪嘉顯色培養(yǎng)基）

36lC±ir,40h~48h36七±1燈，18h?24h

挑取可疑菌落

TSI,賴氨酸，NA,靛基質(zhì)，尿素（pH7.2）,KCN

商品化生化H,S+靛基質(zhì)-尿素-&S+靛基質(zhì)+尿H3酸基質(zhì)-尿素反應(yīng)結(jié)果與左

鑒定系統(tǒng)KCN-賴氨酸+素-KCN-賴氨酸+-KCN-賴氨酸+/-側(cè)描述不符

甘露醇卜、山梨醇+ONPG-

沙門氏菌,血清學(xué)試驗非沙門氏菌

報告

前增菌

1取消樣品分類，前增菌液統(tǒng)一為“緩沖蛋白陳

水”

原國標(biāo)：BPW

FDA、AOAC：多種前增菌液

ISO：BPW

前增苗（康）

2對所有樣品均進行848h前增菌

原國標(biāo)只對凍肉、乳品、蛋品等加工食品進

行前增菌，F(xiàn)DA、AOAC、ISO、Canada

MFHPB、CCFRA等組織或國家對所有樣品都

進行前增菌。

ProceduresofIsolationSamonellafromfoods

分離食物中沙門菌的過程

Weight25goffoodputitinto225mlofpre

enrichmentmedium(BPW)

稱取25g食品樣品于225ml前增菌培養(yǎng)基中(BPW)

ProceduresofIsolationSalmonellafromfood

食物中沙門菌分離過程

VortexinStomacherIncubatedin37℃

at250RPM

放入均質(zhì)器

250RPM混勻

前增黃(^)

3修改了樣品處理方式

增加拍擊式均質(zhì)器，均質(zhì)袋可直接培養(yǎng)。

4增加調(diào)整pH值

選擇性增首

1使用“TTB、SC55,取消“MM”

原國標(biāo)："MM或TTB、SC

AOAC：TT、SC

FDA：RV、TT

ISO：RV、SC

少門母前，,

?一種ZE1

隔牌姬I生也概犍般門氏樣轆

分富矮恭基

使用BS、XLD、HE、科瑪嘉顯色培養(yǎng)基

原國標(biāo)：BS、DHL（或HE、WS、SS）

FDA：BS、XLD、HE

AOAC：BS、XLD、HE

ISO：phenolredbrilliantgreen瓊脂、BS或HE

為了最大可能的檢出沙門氏菌，原則上必

須使用兩種以上選擇性分離培養(yǎng)基。

分毒培養(yǎng)基回收率測定(%)

IBS106.6

Shigellaf/exner/Salmonellatyphlmurlum

ATCC?12022ATCC-14028

■

典型菌落一BS

C-BSl-BS

典型菌落一HE

典型菌落一XLD

l-XLDOXLD（變形菌落-錯誤）

典型,落一XLD

典型菌落一CHRO

Salmonellatyphimurfum

ATCC?14028

樣品+BPW+SC+BS

樣品+BPW+TTB+BS

S9+WW+Md9+^^

樣品+BPW+SC+HE

C-HE

I-HE

樣品+BPW+TTB+HE

樣品+BPW+SC+XLD

梓晶

+BPW

+MM

+XLD

樣品+BPW+SC+CHRO

+BPW

+TTB

+CHRO

+BPW

+MM

+CHRO

生化餐定

1)采納A7720ET或VitekGNIT為傳統(tǒng)

生化鑒定方法的選擇性替代方法”。

生化案定（統(tǒng)）

2）生化鑒定項目進行調(diào)整

原國標(biāo)中生化鑒定是將可疑菌落同時接種于

三糖鐵（TSI）瓊脂、蛋白陳水（供做靛基質(zhì)試驗）、尿素瓊

脂（pH7.2）、氧化鉀（KCN）培養(yǎng)基和賴氨酸脫竣酶試驗培

養(yǎng)基；

現(xiàn)修改為：在接種TSI瓊脂和賴氨酸脫竣酶試驗培養(yǎng)

基的同時增加一項營養(yǎng)瓊脂（NA）,經(jīng)TSI瓊脂和賴氨酸

脫竣酶試驗培養(yǎng)基的選擇后，可篩掉大部分非沙門氏菌

株，大大減少了工作量，同時也滿足了AP/20E7或V"或

GN/7鑒定的需要。

生化餐定（俵）

2）生化鑒定項目進行調(diào)整（續(xù)）

為保持與原標(biāo)準(zhǔn)的一致性，本標(biāo)準(zhǔn)也保

留了可以同時直接接種蛋白月東水（供做靛基

質(zhì)試驗）、尿素瓊脂（pH7.2）、KCN培養(yǎng)基

的內(nèi)容。本部分還增加了對疑似菌落進行

留樣確認(rèn)的部分，以備必要時復(fù)查，這對

生化鑒定不確定的菌落進行進一步驗證是

非常必要的。

在TSI,LIA,SIM培養(yǎng)基上的初步生化實驗

Pickthreeormorecolonies

fromeachagarplatedepending

onyourexperienceintoTSI,LIA,SIM

從培養(yǎng)基平板上分別挑取三個或

三個以上菌落至TSI,LIA,SIM

LIASIMIncubateat37℃r

18-24hr.

37℃,18-24hr培養(yǎng)

BiochemicalreactionofSalmonellasp.

沙門菌屬生化反應(yīng)

.沙門菌在TSI,LIM上的生化實驗結(jié)果

Salmonellaspp.沙門菌

沙門菌在TSILIA,SIM上的特征

API20E

結(jié)

第位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)

1果

判

、

0AL0OFIUTIVGGMIiRSMAA0定

NDDDI2RDNPELAN0GAEMRX

PHCCTSI二ADLUN0RACLYA

124124124124124124124

沙

反應(yīng)-+++++-----4-++++-+-+-

結(jié)果門

菌

應(yīng)得024124000004124104020

樹枝

組合6704752

編碼

API20E

沙門氏菌20E鑒定結(jié)果

API20E

布氏檸檬酸桿菌20E鑒定結(jié)果

API20E

河生腸桿菌20E鑒定結(jié)果

VITEKGEN+

應(yīng)用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片進行測試，

卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質(zhì)。先制備一定

濃度的欲鑒定菌株的菌懸液，然后將菌懸液接種到

各種細(xì)菌的小卡上，將其放入具有讀數(shù)功能的孵箱

內(nèi)，每隔一定時間，儀器會自動檢測培養(yǎng)基的發(fā)酵

情況，并換算成能被計算機所接受的生物編碼。最

后由計算機判定，打印出鑒定結(jié)果。

VITEK

血清學(xué)鑒定

1血清學(xué)鑒定中的菌體分群為選擇性試驗

項目

原國標(biāo)進行0抗原、H抗原鑒定及菌體分群；

FDA、AOAC進行O抗原、H抗原鑒定，菌體分

群為選擇性；

ISO進行0抗原、H抗原鑒定。

0:140:150:190:200:220:230:270:340:46

0:10:40:50電O:620:70:80:90:100:12

Vi

OGr.A0Gr.B0Gr.COGr.DOGr.EOGr.FOGr.GOGr.HOGr.l

。群AO群Bo群c。群Do群E0群F0群Go群H。跑

OMAOMBOMCOMDOMEOMFOMG

Seroiest

SalmonellaHAntisera^7/1^Box.\

|沙門菌屬H抗血清■1

第2盒

zZZ

H：z6H:ioH:ZisH:23H:24H:z28

H:n,xH:pH:qH:rH:sH:tH:vH:wH:xH:y

H:aH:bH:cH:dH:fH:gH:hH:iH:kH:m

H：LH：EH：GH：Z4H：1

complexcomplexcomplexcomplexcomplexH:2H:5H:6H:7

海合因子混合因子混合因子很合因子混合因子

H

Poly

valentHMAHMBHMCHMDHMF

多價

沙門菌屬H抗血清

用于相位逆轉(zhuǎn)(SvenGard)

H:kH:rH:y

H:zH；z6H:Z]10

用r相位逆用于用于用于用于用尸

轉(zhuǎn)相位逆轉(zhuǎn)相位逆轉(zhuǎn)檔位逆轉(zhuǎn)相位逆轉(zhuǎn)相位逆轉(zhuǎn)

H:aH;1)H:<H:(1H:eJiH:I

用于用于用于用于用于用于

相應(yīng)逆?zhèn)飨嗖飞仙?/p>

相位逆轉(zhuǎn)相位逆轉(zhuǎn)

H:H：H?H'H:

混合質(zhì)于混個鬲f

1程合因子EJB畬因子GLZ,混介閃十

用于用于用于用于用于

相位逆禮相位逆轉(zhuǎn)相位逆轉(zhuǎn)相位逆轉(zhuǎn)相位逆轉(zhuǎn)

Day#4血清學(xué)實驗：

用沙門菌抗血清做初步的玻片凝集試驗

傷寒沙門菌非傷寒沙門菌

沙門菌抗血清;

沙門菌多價A』

沙門菌多價

沙門菌多價。MA,ViAI,OMA,OMB,OMC,

沙門菌群A,B,D,E,LOMD,OME,OMF,OMG

沙門菌群A,B,C,D,E,F,G,..............

Salmonellaantigens沙門菌抗原

H-antigensontheflagella

H-抗原位于鞭毛上

Vian顯ensonthecapsuleof星

TyphJS.Paratyphi,(￡Dublin)

Vi武原位于飭寒、副傷寒

，(都柏林)沙門菌的莢膜

ompC，F(xiàn)

parinO-antigensonthesurfaceaspoly-

ompA尸

Osidechains.

Poiy-

ide。就原形成聚合的支鏈位于表面.

Lip!d

merrcrane

P'hosproi?plaLPS=lipid+core+poly-Oside

Ddripiasmic|Lipvpvtcin

sgcechain

Deplido-jPerlpJasmlc

glycanIpfoteinLPS=脂質(zhì)?核心+。聚合支鏈

Salmonellaspp.

OantigenorSomaticantigenistheone

ofcellwallconiponeiit.

-antigensThereactionofO-antigenwithantisera

抗原willbethegranularform.

0抗原或菌體抗原是細(xì)胞壁的一種成分，0抗原

與相應(yīng)抗血清反應(yīng)會出現(xiàn)凝集顆粒.

Vi-antigeiiisaspecialsomaticantigenand

VI-antigens

belongstothegroupofKantigens.

VI抗原

SuchasSalmonellaTyphi,ParatyphiCandDublin.

Vi抗原是一種特殊的朗體抗原，其屬于K抗原組.如傷寒沙

門菌，丙型副傷寒沙門菌和都柏林沙門菌有Vi抗原.

J

H-antigenof

FlagellaantigenH抗原（鞭毛抗原）

The?eactionofH-antigenwithantiserawillbethefloccularfotm.

AlmostSa