DB23-T2735-2020-水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術(shù)規(guī)程-黑龍江省

DB23ICS65.020.20B38黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)DB23/T2735-2020水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術(shù)規(guī)程2021-01-02實施發(fā)布黑龍江省市場監(jiān)督管理局DB23/T2735-2020前??言本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009的編寫規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張國民、馬軍韜、鄧凌韋、趙文生、宋顯東、張麗艷、王春榮、胡亞軍、王永力、張齊鳳、高洪儒、張君、王南博、任洋。IDB23/T2735-2020水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術(shù)的術(shù)語與定義、環(huán)境條件、技術(shù)流程、評價標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)檔案。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水稻資源、品種（系）等材料對穗頸瘟抗性的人工鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB15618土壤環(huán)境質(zhì)量農(nóng)用地土壤污染風(fēng)險管控標(biāo)準(zhǔn)（試行）GB/T15970稻瘟病測報調(diào)查規(guī)范NY/T3257-2018稻水稻稻瘟病抗性室內(nèi)離體葉片鑒定技術(shù)規(guī)程下列術(shù)語與定義適用于本文件。穗頸瘟和枝梗瘟穗頸瘟是稻瘟病的一種形式，發(fā)生在穗頸、穗軸和枝梗上，初期為暗褐色小斑點，后逐步呈環(huán)狀或上下擴展，因品種不同，病部分別呈現(xiàn)黃褐色、褐色或黑褐色。早期發(fā)病大多形成全白穗或局部白穗，谷粒瘟是稻瘟病的一種形式，發(fā)生在谷殼和護(hù)穎上，早期發(fā)病，病斑呈橢圓形，較大，中央灰白色，以后可逐漸擴展至整個谷粒，造成灰白色至暗灰色癟粒。后期發(fā)病，多形成橢圓形或近圓形斑點，褐色至紅褐色，嚴(yán)重時谷粒不飽滿，米粒變黑。能夠侵染水稻植株并引起病害的病原體。1DB23/T2735-2020用醫(yī)用注射器將一定量的接種體注射進(jìn)水稻植株體內(nèi)的接種方法。3.63.73.8對照品種在人工接種鑒定時以全感水稻品種為對照。抗病性植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。病情指數(shù)一種評價植物病害發(fā)生程度的綜合性指標(biāo)，包括植物病害的發(fā)病率與嚴(yán)重度。其中，發(fā)病率是指感病樣本數(shù)占調(diào)查總樣本數(shù)的百分率，表示發(fā)病的普遍程度；嚴(yán)重度用分級法表示，即將發(fā)病的嚴(yán)重程度由輕到重劃分出若干個級別，分別用各級的代表值或百分率表示。3.9水稻品種水稻品種包括對照品種和待測水稻材料。3.10產(chǎn)量損失率一種評價植物受逆性條件影響后產(chǎn)量損失程度的指標(biāo)，包括未發(fā)病植株產(chǎn)量和發(fā)病植株產(chǎn)量。以穗為單位，產(chǎn)量損失率計算公式為：A(BC)/B100%...........................（1）4環(huán)境條件鑒定時的環(huán)境條件，環(huán)境空氣質(zhì)量應(yīng)符合GB3095規(guī)定；土壤環(huán)境質(zhì)量應(yīng)符合GB15618規(guī)定；農(nóng)田灌溉用水質(zhì)量應(yīng)符合GB5084規(guī)定。選擇易發(fā)病環(huán)境條件的較為中間的整塊田塊，有獨立的進(jìn)水口和排水口。在鑒定圃內(nèi)種植對照和待測材料。依據(jù)水稻材料的數(shù)量，在鑒定圃內(nèi)布局若干個小區(qū)，小區(qū)內(nèi)種植待測水稻材料，小區(qū)設(shè)置為2行區(qū)，行距為30cm，株距為12cm，每行15蔸，單本插秧。根據(jù)試驗?zāi)康模O(shè)置重復(fù)。水稻種植全過程在常規(guī)管理的基礎(chǔ)上，創(chuàng)造有利于稻瘟病發(fā)病的條件。不帶藥移栽，偏重施用氮肥（一般情況下比生產(chǎn)用氮肥增加30%左右），生長過程中可防蟲、除草，但不能施用任何殺菌劑。在水稻生長的中后期，若發(fā)生倒伏，需及時地搭建竹架。2DB23/T2735-20205.3接種鑒定5.3.1接種體制備將稻瘟病菌接種在燕麥片番茄汁瓊脂培養(yǎng)基上，于25℃-27℃條件下培養(yǎng)5d-7d，用無菌水輕輕洗下菌絲（菌絲團(tuán)要?。┖头稚咦樱瑢⑵鋺腋∫壕鶆蛲坑诹硪恍碌钠桨迮囵B(yǎng)基上（培養(yǎng)基要適當(dāng)硬一些），每皿約400μl，超凈工作臺中吹干。置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約35-40h至培養(yǎng)基表面長出一層稀疏的氣生菌絲體。向菌落上加少量無菌水，用棉簽輕輕擦去表面的氣生菌絲，并用水將培養(yǎng)基表面的菌絲和分生孢子清洗干凈，待培養(yǎng)基表面晾干后罩上2層紗布，用皮筋綁好，于25℃光照條件下培養(yǎng)至有大量分生孢子產(chǎn)生。從培養(yǎng)基上洗下分生孢子，離心（3000轉(zhuǎn)/min），棄上清，沉淀下的分生孢子用0.025%吐溫20水溶液懸浮，血球計數(shù)板計數(shù)，孢子懸浮液濃度調(diào)至2×10個孢子/mL，可用混合菌株或單個5菌株，供接種使用。5.3.2接種方法在水稻始穗期（稻穗抽出1/3左右）用醫(yī)用注射器將合格的孢子懸浮液注入水稻穗苞中下部，接種量為1mL/穗，依據(jù)試驗所需，每個處理接種100穗以上。接種后，如中午日照強烈，建議應(yīng)用單層遮陰網(wǎng)進(jìn)行遮擋，以創(chuàng)造利于穗頸瘟發(fā)病的田間小氣候。5.4病情調(diào)查5.4.1調(diào)查時間水稻乳熟期進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查2次，間隔7d-10d。5.4.2調(diào)查方法0級：整穗無穗頸瘟、枝梗瘟和谷粒瘟；將水稻穗頸瘟的田間調(diào)查數(shù)據(jù)，鑒定圃中水稻農(nóng)事操作及相關(guān)情況進(jìn)行電子數(shù)據(jù)登記。計算每個水3DB23/T2735-20206.2病情指數(shù)計算公式以穗為單位，當(dāng)嚴(yán)重度用分級指標(biāo)表示時，病情指數(shù)計算公式為：R100(PiDi)/(PDM)........................（2）式中：R——病情指數(shù)；Pi——各級病穗數(shù)，個；Di——各級代表值；P——調(diào)查總穗數(shù)，個；DM——最高級代表值。6.3抗瘟性評價標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)水稻材料的病情指數(shù)評價其抗穗頸瘟性，評價標(biāo)準(zhǔn)見表A.3。7技術(shù)檔案建立水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術(shù)檔案，內(nèi)容包括環(huán)境條件、技術(shù)流程、評價標(biāo)