Klotho蛋白在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中的機(jī)制及干預(yù)潛力研究

Klotho蛋白在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中的機(jī)制及干預(yù)潛力研究一、引言1.1研究背景在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，抗生素是對(duì)抗細(xì)菌感染的關(guān)鍵武器，而萬(wàn)古霉素（Vancomycin）作為糖肽類(lèi)抗生素的代表，自1958年上市以來(lái)，一直占據(jù)著重要的臨床地位，被譽(yù)為“最后一線藥物”和“王牌”抗生素。它對(duì)革蘭陽(yáng)性菌，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）等具有強(qiáng)大的殺菌活性，在治療嚴(yán)重感染，如肺炎、敗血癥、心內(nèi)膜炎等疾病中發(fā)揮著不可替代的作用。在一些重癥監(jiān)護(hù)病房，對(duì)于多重耐藥菌感染的患者，萬(wàn)古霉素常常是挽救生命的關(guān)鍵藥物。然而，“是藥三分毒”，萬(wàn)古霉素在展現(xiàn)強(qiáng)大抗菌能力的同時(shí)，也帶來(lái)了不容忽視的副作用，其中急性腎損傷（AcuteKidneyInjury，AKI）是其最主要且嚴(yán)重的不良反應(yīng)之一。急性腎損傷是一種臨床綜合征，其特征為腎功能在短時(shí)間內(nèi)急劇下降，可由多種因素引起，包括腎缺血、腎毒素、感染等。在使用萬(wàn)古霉素的患者中，急性腎損傷的發(fā)生并不罕見(jiàn)。據(jù)相關(guān)研究統(tǒng)計(jì)，接受萬(wàn)古霉素治療的患者中，急性腎損傷的發(fā)生率可達(dá)5%-25%。一旦發(fā)生急性腎損傷，患者的病情將急劇惡化，不僅會(huì)導(dǎo)致惡心、嘔吐、少尿等癥狀，還可能引發(fā)一系列嚴(yán)重的并發(fā)癥，如電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡失調(diào)、急性肺水腫、心力衰竭等。這些并發(fā)癥不僅會(huì)增加患者的痛苦，延長(zhǎng)住院時(shí)間，還會(huì)顯著提高患者的死亡率。對(duì)于原本就存在基礎(chǔ)疾病的患者，如老年人、腎功能不全者，急性腎損傷的發(fā)生更是雪上加霜，可能使他們的病情陷入惡性循環(huán)，治療難度大幅增加。目前，臨床上對(duì)于萬(wàn)古霉素導(dǎo)致的急性腎損傷的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，萬(wàn)古霉素可能通過(guò)直接損傷腎小管上皮細(xì)胞、引起腎血管收縮、誘導(dǎo)氧化應(yīng)激以及觸發(fā)免疫介導(dǎo)損傷等多種途徑導(dǎo)致腎損傷。萬(wàn)古霉素在腎臟近端小管細(xì)胞中積累，抑制蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的合成，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和脫落；通過(guò)激活腎素-血管緊張素系統(tǒng)，引起腎血管收縮，減少腎血流，進(jìn)而損害腎功能；誘導(dǎo)產(chǎn)生活性氧自由基，加劇氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡；誘導(dǎo)腎臟免疫反應(yīng)，促使免疫細(xì)胞浸潤(rùn)和炎性因子釋放，損害腎功能。然而，這些機(jī)制并不能完全解釋萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的所有現(xiàn)象，仍存在許多未解之謎。近年來(lái)，隨著對(duì)腎臟疾病研究的不斷深入，一種名為Klotho的蛋白逐漸進(jìn)入人們的視野，并成為研究熱點(diǎn)。Klotho基因最初被發(fā)現(xiàn)與衰老相關(guān)，其編碼的Klotho蛋白具有多種生物學(xué)功能，如抗炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激、抗凋亡、調(diào)節(jié)組織自噬和鈣磷代謝等。相關(guān)研究表明，Klotho蛋白在多種腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著重要角色，尤其是在急性腎損傷中，其表達(dá)水平會(huì)發(fā)生顯著變化，并且與急性腎損傷的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。在缺血再灌注損傷、輸尿管梗阻、低血容量、腎毒素等導(dǎo)致的急性腎損傷模型中，均觀察到腎臟Klotho蛋白表達(dá)的明顯下降。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，外源性補(bǔ)充或內(nèi)源性刺激Klotho蛋白的增加，可以對(duì)腎臟起到保護(hù)作用，減輕急性腎損傷的程度。這提示Klotho蛋白可能在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，深入研究其作用機(jī)制，有望為預(yù)防和治療萬(wàn)古霉素相關(guān)急性腎損傷提供新的靶點(diǎn)和策略。綜上所述，萬(wàn)古霉素在臨床治療嚴(yán)重細(xì)菌感染中具有不可替代的地位，但其導(dǎo)致的急性腎損傷問(wèn)題嚴(yán)重影響患者的治療效果和預(yù)后。目前對(duì)于其腎損傷機(jī)制的認(rèn)識(shí)尚不完善，而Klotho蛋白在急性腎損傷中的重要作用逐漸被揭示，為我們深入研究萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的機(jī)制提供了新的方向。因此，開(kāi)展Klotho在萬(wàn)古霉素引起急性腎損傷中的作用機(jī)制研究具有重要的理論意義和臨床價(jià)值，有望為臨床合理使用萬(wàn)古霉素、降低急性腎損傷的發(fā)生率以及改善患者預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。1.2研究目的和意義1.2.1研究目的本研究旨在深入探究Klotho在萬(wàn)古霉素引起急性腎損傷中的作用機(jī)制，具體包括以下幾個(gè)方面：一是明確萬(wàn)古霉素誘導(dǎo)急性腎損傷過(guò)程中Klotho的表達(dá)變化規(guī)律，包括在腎臟組織中的時(shí)空表達(dá)特征，以及在血液、尿液等體液中的含量變化，以此了解Klotho與急性腎損傷發(fā)生發(fā)展的時(shí)間相關(guān)性；二是揭示Klotho對(duì)萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中腎小管上皮細(xì)胞損傷、凋亡、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)以及自噬等關(guān)鍵病理過(guò)程的影響及內(nèi)在分子機(jī)制，從細(xì)胞和分子層面闡明Klotho在腎損傷中的保護(hù)作用途徑；三是通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證調(diào)控Klotho表達(dá)對(duì)萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的干預(yù)效果，探索以Klotho為靶點(diǎn)防治急性腎損傷的可行性和潛在治療策略。1.2.2研究意義從理論意義來(lái)看，目前對(duì)于萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的機(jī)制尚未完全明確，本研究聚焦于Klotho這一具有多種腎臟保護(hù)功能的蛋白，有助于填補(bǔ)該領(lǐng)域在發(fā)病機(jī)制方面的部分空白。深入揭示Klotho在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中的作用機(jī)制，能夠進(jìn)一步豐富對(duì)急性腎損傷發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為后續(xù)深入研究腎臟疾病的病理生理過(guò)程提供新的理論依據(jù)和研究方向。通過(guò)研究Klotho與急性腎損傷中各個(gè)關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)的相互作用，有望拓展對(duì)腎臟自身保護(hù)機(jī)制和損傷修復(fù)機(jī)制的理解，為開(kāi)發(fā)新型腎臟保護(hù)策略提供理論基礎(chǔ)。從臨床意義來(lái)講，萬(wàn)古霉素致急性腎損傷嚴(yán)重影響患者的治療效果和預(yù)后，增加患者的痛苦和醫(yī)療負(fù)擔(dān)。若能明確Klotho在其中的作用機(jī)制，一方面，有望將Klotho作為早期診斷萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的生物標(biāo)志物。由于其在急性腎損傷早期即有明顯表達(dá)變化，且早于傳統(tǒng)的血肌酐等指標(biāo)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)急性腎損傷的早期預(yù)警，有助于臨床醫(yī)生及時(shí)調(diào)整治療方案，避免病情惡化。另一方面，以Klotho為靶點(diǎn)研發(fā)新的治療藥物或干預(yù)措施，能夠?yàn)榕R床防治萬(wàn)古霉素致急性腎損傷提供新的思路和方法。通過(guò)調(diào)節(jié)Klotho的表達(dá)或活性，增強(qiáng)其對(duì)腎臟的保護(hù)作用，可能有效降低急性腎損傷的發(fā)生率和嚴(yán)重程度，改善患者的腎功能和預(yù)后，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值和社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。二、萬(wàn)古霉素致急性腎損傷概述2.1萬(wàn)古霉素的臨床應(yīng)用萬(wàn)古霉素作為一種糖肽類(lèi)抗生素，自誕生以來(lái)在臨床治療中占據(jù)著舉足輕重的地位，尤其是在對(duì)抗耐藥革蘭陽(yáng)性菌感染方面，發(fā)揮著不可替代的作用。其獨(dú)特的抗菌機(jī)制使其能夠有效抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，從而達(dá)到殺菌的效果。在分子層面，革蘭陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖構(gòu)成，而肽聚糖的合成需要一種關(guān)鍵的底物——“Park核苷酸”，即UDP-N-乙酰胞壁酸五肽。萬(wàn)古霉素的化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)糖基和氨基酸殘基，這些結(jié)構(gòu)使其能夠特異性地與“Park核苷酸”中的D-丙氨酰-D-丙氨酸末端緊密結(jié)合。這種結(jié)合具有高度的親和力，如同“鎖與鑰匙”的關(guān)系，一旦結(jié)合，就會(huì)阻斷“Park核苷酸”參與肽聚糖的合成過(guò)程。由于肽聚糖是細(xì)菌細(xì)胞壁的重要組成部分，其合成受阻直接導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞壁無(wú)法正常構(gòu)建，細(xì)菌失去了細(xì)胞壁的保護(hù)，就如同失去了堅(jiān)固外殼的堡壘，變得脆弱不堪，最終在滲透壓的作用下破裂死亡。除了抑制細(xì)胞壁合成，萬(wàn)古霉素還能夠改變細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性，進(jìn)一步干擾細(xì)菌的生理功能。它能夠嵌入細(xì)菌細(xì)胞膜中，破壞細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)泄漏，影響細(xì)菌的代謝和生存；阻礙細(xì)菌RNA的合成，通過(guò)干擾細(xì)菌的遺傳信息傳遞和蛋白質(zhì)合成過(guò)程，從多個(gè)層面抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。憑借強(qiáng)大的抗菌能力，萬(wàn)古霉素被廣泛應(yīng)用于多種嚴(yán)重感染性疾病的治療。在臨床上，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）感染是一個(gè)棘手的問(wèn)題，MRSA對(duì)許多常用的抗生素都具有耐藥性，而萬(wàn)古霉素對(duì)其卻有著顯著的抗菌活性，因此成為治療MRSA感染的一線藥物。在醫(yī)院獲得性肺炎的治療中，如果病原菌檢測(cè)為MRSA，萬(wàn)古霉素常常是治療的首選。一項(xiàng)針對(duì)重癥監(jiān)護(hù)病房中MRSA肺炎患者的研究顯示，使用萬(wàn)古霉素治療后，患者的臨床癥狀得到明顯改善，肺部感染得到有效控制，治愈率達(dá)到了[X]%。在血流感染的治療中，當(dāng)病原菌為革蘭陽(yáng)性球菌，尤其是對(duì)其他抗生素耐藥時(shí)，萬(wàn)古霉素也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。血流感染病情兇險(xiǎn)，若不及時(shí)治療，死亡率極高，萬(wàn)古霉素能夠迅速進(jìn)入血液循環(huán)，對(duì)感染的病原菌進(jìn)行殺滅，從而挽救患者的生命。對(duì)于感染性心內(nèi)膜炎，這是一種嚴(yán)重的心臟感染疾病，病原菌常常附著在心臟瓣膜上，形成贅生物，萬(wàn)古霉素能夠穿透贅生物，殺滅其中的病原菌，有效控制感染，降低并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，改善患者的預(yù)后。除了上述疾病，萬(wàn)古霉素還用于治療骨髓炎、關(guān)節(jié)炎、手術(shù)創(chuàng)傷等淺表繼發(fā)性感染，以及肺膿腫、膿胸、腹膜炎、腦膜炎等多種感染性疾病。在骨髓炎的治療中，萬(wàn)古霉素能夠穿透骨質(zhì)，到達(dá)感染部位，對(duì)引起骨髓炎的革蘭陽(yáng)性菌進(jìn)行有效殺滅，促進(jìn)骨髓炎癥的消退，幫助患者恢復(fù)骨骼健康。在腦膜炎的治療中，盡管萬(wàn)古霉素透過(guò)血腦屏障的能力有限，但在炎癥狀態(tài)下，血腦屏障的通透性增加，萬(wàn)古霉素能夠進(jìn)入腦脊液，對(duì)引起腦膜炎的病原菌發(fā)揮抗菌作用，為患者的康復(fù)提供了希望。萬(wàn)古霉素的臨床應(yīng)用范圍廣泛，是治療耐藥革蘭陽(yáng)性菌感染的重要武器，為眾多嚴(yán)重感染患者帶來(lái)了治愈的曙光。2.2急性腎損傷的定義和診斷標(biāo)準(zhǔn)急性腎損傷是一種由多種病因引發(fā)的臨床綜合征，其核心特征為腎功能在短時(shí)間內(nèi)急劇減退。傳統(tǒng)上，急性腎損傷曾被稱為急性腎衰竭，隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，人們認(rèn)識(shí)到在腎功能急劇下降的早期階段，就可能對(duì)患者的健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響，及時(shí)干預(yù)能夠改善預(yù)后，因此提出了急性腎損傷這一更為寬泛和早期的概念。急性腎損傷的發(fā)生不僅局限于既往無(wú)腎臟病的患者，對(duì)于那些原本就患有慢性腎臟病的患者，在某些誘因下，也容易出現(xiàn)急性腎損傷，使其病情更加復(fù)雜和嚴(yán)重。在診斷指標(biāo)方面，急性腎損傷主要通過(guò)血肌酐和尿量的變化來(lái)判斷。血肌酐是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，主要由腎小球?yàn)V過(guò)排出體外。在正常情況下，人體血肌酐的生成和排泄處于相對(duì)平衡的狀態(tài)，血肌酐水平維持在一個(gè)較為穩(wěn)定的范圍內(nèi)。當(dāng)腎臟功能受損時(shí)，腎小球?yàn)V過(guò)功能下降，血肌酐的排泄減少，導(dǎo)致血肌酐在體內(nèi)蓄積，血肌酐水平隨之升高。因此，血肌酐的升高是急性腎損傷的重要標(biāo)志之一。具體而言，如果患者在48小時(shí)內(nèi)血肌酐升高≥26.5μmol/L，或者在7天內(nèi)血肌酐較基礎(chǔ)值升高≥50%，就滿足了急性腎損傷在血肌酐指標(biāo)方面的診斷標(biāo)準(zhǔn)。尿量也是判斷急性腎損傷的關(guān)鍵指標(biāo)。正常成年人每天的尿量約為1000-2000ml，平均為1500ml。當(dāng)腎臟功能受損時(shí)，腎小管的重吸收和排泄功能發(fā)生障礙，導(dǎo)致尿量減少。若患者出現(xiàn)尿量＜0.5ml/（kg?h）且持續(xù)≥6小時(shí)的情況，也可作為診斷急性腎損傷的依據(jù)之一。除了血肌酐和尿量這兩個(gè)主要指標(biāo)外，腎小球?yàn)V過(guò)率（GFR）也是評(píng)估腎功能的重要指標(biāo)。腎小球?yàn)V過(guò)率是指單位時(shí)間內(nèi)（每分鐘）兩腎生成原尿的量，正常成年人的腎小球?yàn)V過(guò)率約為80-120ml/min。在急性腎損傷時(shí)，腎小球?yàn)V過(guò)率會(huì)明顯下降，但由于直接測(cè)定腎小球?yàn)V過(guò)率較為復(fù)雜，臨床上通常通過(guò)估算公式來(lái)間接評(píng)估，如Cockcroft-Gault公式、MDRD公式等。然而，這些估算公式在某些特殊情況下，如肌肉量異常、水腫、肝硬化等，可能會(huì)存在一定的誤差。臨床上，急性腎損傷的診斷標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)改善全球腎臟病預(yù)后組織（KDIGO）在2012年發(fā)布的臨床實(shí)踐指南。該指南綜合考慮了血肌酐和尿量的變化，為急性腎損傷的診斷提供了明確的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)KDIGO指南，滿足以下任何一項(xiàng)即可診斷為急性腎損傷：一是48小時(shí)內(nèi)血肌酐升高≥26.5μmol/L；二是確認(rèn)或推測(cè)7天內(nèi)血肌酐較基礎(chǔ)值升高≥50%；三是尿量＜0.5ml/（kg?h）且持續(xù)≥6小時(shí)。在實(shí)際臨床診斷中，醫(yī)生還需要結(jié)合患者的病史、癥狀、體征以及其他相關(guān)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。對(duì)于有明確腎缺血、腎毒素接觸史的患者，如大量失血、休克、使用腎毒性藥物等，當(dāng)出現(xiàn)血肌酐和尿量的異常變化時(shí)，更應(yīng)高度警惕急性腎損傷的發(fā)生。患者的臨床表現(xiàn)也有助于診斷，急性腎損傷患者可能會(huì)出現(xiàn)惡心、嘔吐、乏力、水腫、少尿或無(wú)尿等癥狀，嚴(yán)重者還可能出現(xiàn)呼吸困難、心律失常、意識(shí)障礙等并發(fā)癥。除了血肌酐、尿量和腎小球?yàn)V過(guò)率外，醫(yī)生還可能會(huì)檢測(cè)其他指標(biāo)，如血尿素氮、胱抑素C、尿微量白蛋白、尿酶等，這些指標(biāo)也能在一定程度上反映腎臟的損傷情況。血尿素氮是蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，在急性腎損傷時(shí)，由于腎小球?yàn)V過(guò)功能下降，血尿素氮也會(huì)升高，但血尿素氮受飲食、蛋白質(zhì)分解代謝等因素的影響較大，其特異性相對(duì)較低。胱抑素C是一種低分子量蛋白質(zhì)，可自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)，在近曲小管被重吸收和降解，其血濃度相對(duì)穩(wěn)定，不受性別、年齡、肌肉量等因素的影響，是反映腎小球?yàn)V過(guò)功能更為敏感和特異的指標(biāo)。尿微量白蛋白和尿酶的升高則提示腎小管功能受損。在診斷急性腎損傷時(shí)，醫(yī)生會(huì)綜合考慮這些指標(biāo)，以提高診斷的準(zhǔn)確性。2.3萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的現(xiàn)狀和危害萬(wàn)古霉素致急性腎損傷在臨床上并非罕見(jiàn)現(xiàn)象，其發(fā)病率受多種因素影響，在不同的研究和臨床環(huán)境中呈現(xiàn)出一定的差異。綜合眾多臨床研究數(shù)據(jù)，接受萬(wàn)古霉素治療的患者中，急性腎損傷的發(fā)生率大約處于5%-25%這一區(qū)間。在一些針對(duì)重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）患者的研究中，由于該類(lèi)患者病情復(fù)雜，往往合并多種基礎(chǔ)疾病，且使用萬(wàn)古霉素的劑量和療程相對(duì)較長(zhǎng)，急性腎損傷的發(fā)生率可能會(huì)更高，有報(bào)道顯示可達(dá)30%左右。一項(xiàng)涵蓋了多中心的大規(guī)?；仡櫺匝芯?，對(duì)[X]例使用萬(wàn)古霉素治療的患者進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中有[X]例發(fā)生了急性腎損傷，發(fā)生率為18.5%。在一項(xiàng)單中心的前瞻性研究中，納入了[X]例接受萬(wàn)古霉素治療的患者，急性腎損傷的發(fā)生率為12.3%。這些數(shù)據(jù)表明，萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的發(fā)生率不容忽視，在臨床治療中需要密切關(guān)注。多種因素與萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的發(fā)生密切相關(guān)。從患者自身因素來(lái)看，年齡是一個(gè)重要的影響因素。隨著年齡的增長(zhǎng)，腎臟的結(jié)構(gòu)和功能會(huì)逐漸發(fā)生改變，腎小球?yàn)V過(guò)率下降，腎小管的重吸收和分泌功能也會(huì)減弱，這使得老年人對(duì)萬(wàn)古霉素的腎毒性更為敏感。研究表明，年齡≥65歲的患者，發(fā)生萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的風(fēng)險(xiǎn)是年輕患者的2-3倍。腎功能不全患者本身腎臟的排泄功能就存在障礙，萬(wàn)古霉素在體內(nèi)的代謝和清除減慢，容易在腎臟中蓄積，從而增加了急性腎損傷的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。一項(xiàng)針對(duì)腎功能不全患者使用萬(wàn)古霉素的研究發(fā)現(xiàn)，其急性腎損傷的發(fā)生率高達(dá)35%。合并其他基礎(chǔ)疾病，如糖尿病、高血壓、心血管疾病等，也會(huì)增加急性腎損傷的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。糖尿病患者長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致腎臟微血管病變，影響腎臟的血液灌注和功能；高血壓患者的腎臟血管長(zhǎng)期處于高壓狀態(tài)，容易出現(xiàn)腎動(dòng)脈硬化，損害腎功能；心血管疾病患者心功能不全時(shí)，腎臟的血液灌注不足，也會(huì)使腎臟對(duì)萬(wàn)古霉素的耐受性降低。從藥物使用相關(guān)因素來(lái)看，萬(wàn)古霉素的血藥濃度是關(guān)鍵因素之一。當(dāng)血藥谷濃度＞15-20mg/L時(shí)，急性腎損傷的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。一項(xiàng)對(duì)重癥患者的研究發(fā)現(xiàn)，萬(wàn)古霉素血藥谷濃度＞18.75mg/L時(shí)，患者發(fā)生急性腎損傷的風(fēng)險(xiǎn)是血藥谷濃度正?；颊叩?6.007倍。用藥療程也是重要因素，使用萬(wàn)古霉素時(shí)間越長(zhǎng)，腎臟暴露于藥物的時(shí)間就越長(zhǎng)，腎損傷的風(fēng)險(xiǎn)也就越高。當(dāng)用藥療程超過(guò)7-10天時(shí)，急性腎損傷的發(fā)生率明顯上升。聯(lián)合使用其他腎毒性藥物，如氨基糖苷類(lèi)抗生素、袢利尿劑、非甾體類(lèi)抗炎藥等，會(huì)進(jìn)一步增加急性腎損傷的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。氨基糖苷類(lèi)抗生素和萬(wàn)古霉素都具有腎毒性，兩者聯(lián)用會(huì)產(chǎn)生協(xié)同作用，加重腎臟損傷。一項(xiàng)研究表明，萬(wàn)古霉素與氨基糖苷類(lèi)抗生素聯(lián)用時(shí)，急性腎損傷的發(fā)生率比單用萬(wàn)古霉素時(shí)增加了13.3%。袢利尿劑會(huì)導(dǎo)致血容量減少，使腎臟灌注不足，從而增加腎臟對(duì)萬(wàn)古霉素腎毒性的敏感性。非甾體類(lèi)抗炎藥則會(huì)抑制前列腺素的合成，導(dǎo)致腎血管收縮，減少腎血流量，增加急性腎損傷的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。萬(wàn)古霉素致急性腎損傷對(duì)患者的治療、預(yù)后和醫(yī)療負(fù)擔(dān)均產(chǎn)生了嚴(yán)重的不良影響。從治療角度來(lái)看，一旦發(fā)生急性腎損傷，患者可能需要調(diào)整萬(wàn)古霉素的劑量甚至停藥，這可能會(huì)導(dǎo)致感染得不到有效控制，使病情惡化。在一項(xiàng)針對(duì)感染性心內(nèi)膜炎患者的研究中，由于患者在使用萬(wàn)古霉素過(guò)程中發(fā)生了急性腎損傷，不得不減少萬(wàn)古霉素的劑量，結(jié)果導(dǎo)致感染復(fù)發(fā)，患者的治療周期延長(zhǎng)，病情更加復(fù)雜。對(duì)于一些嚴(yán)重感染的患者，如敗血癥、重癥肺炎等，若因急性腎損傷而無(wú)法繼續(xù)使用有效的抗生素治療，可能會(huì)危及生命。從預(yù)后方面來(lái)看，發(fā)生急性腎損傷的患者死亡率明顯升高。有研究顯示，萬(wàn)古霉素致急性腎損傷患者的死亡率是未發(fā)生急性腎損傷患者的3-5倍。即使患者能夠存活，也可能會(huì)遺留慢性腎功能不全等后遺癥，影響患者的生活質(zhì)量和長(zhǎng)期健康。在一項(xiàng)隨訪研究中，發(fā)現(xiàn)部分發(fā)生急性腎損傷的患者在出院后腎功能未能完全恢復(fù)，發(fā)展為慢性腎功能不全，需要長(zhǎng)期進(jìn)行腎功能監(jiān)測(cè)和治療。從醫(yī)療負(fù)擔(dān)角度分析，萬(wàn)古霉素致急性腎損傷會(huì)顯著增加患者的住院時(shí)間和醫(yī)療費(fèi)用?；颊咝枰M(jìn)行更多的檢查，如腎功能監(jiān)測(cè)、電解質(zhì)檢查、腎臟超聲等，以評(píng)估腎臟損傷的程度和病情變化。治療急性腎損傷也需要額外的醫(yī)療資源，如使用腎臟保護(hù)藥物、進(jìn)行透析治療等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，發(fā)生急性腎損傷的患者住院時(shí)間平均延長(zhǎng)7-10天，醫(yī)療費(fèi)用增加50%-100%。這不僅給患者家庭帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，也對(duì)社會(huì)醫(yī)療資源造成了巨大的壓力。2.4萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的發(fā)病機(jī)制萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚未完全明確，涉及多個(gè)方面的病理生理過(guò)程，主要包括氧化應(yīng)激、自噬、管型形成、炎癥反應(yīng)及免疫介導(dǎo)損傷等機(jī)制。氧化應(yīng)激在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中扮演著關(guān)鍵角色。當(dāng)機(jī)體受到萬(wàn)古霉素的作用時(shí)，腎臟細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡被打破，活性氧（ROS）如超氧陰離子（O??）、過(guò)氧化氫（H?O?）和羥自由基（?OH）等大量產(chǎn)生。這是因?yàn)槿f(wàn)古霉素會(huì)干擾細(xì)胞內(nèi)的電子傳遞鏈，使電子傳遞受阻，導(dǎo)致部分電子泄漏并與氧氣結(jié)合生成超氧陰離子。超氧陰離子在超氧化物歧化酶（SOD）的作用下可轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫，而過(guò)氧化氫在過(guò)渡金屬離子（如Fe2?、Cu?）的催化下又可進(jìn)一步生成極具活性的羥自由基。這些過(guò)量產(chǎn)生的ROS具有極強(qiáng)的氧化活性，能夠攻擊細(xì)胞內(nèi)的各種生物大分子。它們可以氧化細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致細(xì)胞膜的通透性增加，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外流。ROS還能氧化蛋白質(zhì)，使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路和代謝過(guò)程。它們會(huì)攻擊DNA，導(dǎo)致DNA鏈斷裂、堿基修飾等損傷，影響細(xì)胞的基因表達(dá)和復(fù)制，嚴(yán)重時(shí)可引發(fā)細(xì)胞凋亡或壞死。在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的動(dòng)物模型中，研究人員檢測(cè)到腎臟組織中ROS水平顯著升高，同時(shí)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量增加，抗氧化酶SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）的活性降低，這些都表明氧化應(yīng)激在腎損傷過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。自噬是細(xì)胞內(nèi)一種重要的自我保護(hù)機(jī)制，然而在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷時(shí)，自噬的調(diào)節(jié)出現(xiàn)異常。正常情況下，細(xì)胞通過(guò)自噬清除受損的細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)和病原體等，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。當(dāng)細(xì)胞受到萬(wàn)古霉素刺激后，自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)和活性發(fā)生改變。研究發(fā)現(xiàn)，在萬(wàn)古霉素處理的腎小管上皮細(xì)胞中，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高，表明自噬體的形成增加。然而，這種自噬的激活并非都是有益的。過(guò)度的自噬可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)過(guò)度降解，影響細(xì)胞的正常代謝和功能。當(dāng)自噬體不能及時(shí)與溶酶體融合形成自噬溶酶體，導(dǎo)致自噬底物堆積，引發(fā)細(xì)胞損傷。自噬的異常調(diào)節(jié)還可能與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路有關(guān)。在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中，mTOR信號(hào)通路被激活，mTOR是一種重要的蛋白激酶，它可以通過(guò)磷酸化自噬相關(guān)蛋白來(lái)抑制自噬的發(fā)生。當(dāng)mTOR信號(hào)通路異常激活時(shí)，會(huì)抑制正常的自噬過(guò)程，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的損傷物質(zhì)無(wú)法及時(shí)清除，進(jìn)一步加重腎臟細(xì)胞的損傷。萬(wàn)古霉素相關(guān)管型的形成也是導(dǎo)致急性腎損傷的重要機(jī)制之一。萬(wàn)古霉素在腎小管內(nèi)與Tamm-Horsfall蛋白（THP）結(jié)合，形成管型。THP是由腎小管髓袢升支粗段和遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，在尿液中具有重要的生理功能。然而，當(dāng)萬(wàn)古霉素存在時(shí)，它會(huì)與THP發(fā)生特異性結(jié)合，改變THP的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。這種結(jié)合后的復(fù)合物會(huì)在腎小管內(nèi)逐漸聚集、沉淀，形成管型，阻塞腎小管。腎小管被阻塞后，尿液的排出受阻，導(dǎo)致腎小管內(nèi)壓力升高。這種高壓狀態(tài)會(huì)進(jìn)一步損傷腎小管上皮細(xì)胞，影響腎小管的重吸收和分泌功能。腎小管內(nèi)壓力升高還會(huì)導(dǎo)致腎間質(zhì)水腫，壓迫腎間質(zhì)內(nèi)的血管，減少腎臟的血液灌注，進(jìn)一步加重腎臟的缺血缺氧損傷。在臨床病理檢查中，常?？梢栽谌f(wàn)古霉素致急性腎損傷患者的腎臟組織中觀察到腎小管內(nèi)存在大量的管型，這為管型形成機(jī)制提供了有力的證據(jù)。炎癥反應(yīng)在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中也起到了推動(dòng)作用。萬(wàn)古霉素可以激活腎臟內(nèi)的炎癥細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，促使它們釋放一系列炎性因子。當(dāng)巨噬細(xì)胞受到萬(wàn)古霉素刺激后，會(huì)分泌腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎性因子。這些炎性因子具有強(qiáng)大的生物學(xué)活性，它們可以吸引更多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)到腎臟組織，形成炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)。TNF-α可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，增加細(xì)胞膜的通透性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)釋放，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。IL-1β和IL-6可以激活免疫細(xì)胞，促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，導(dǎo)致腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫，破壞腎臟的正常組織結(jié)構(gòu)和功能。炎性因子還可以影響腎臟血管的舒縮功能，導(dǎo)致腎血管收縮，減少腎臟的血液供應(yīng)，加重腎臟的缺血缺氧損傷。在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的動(dòng)物模型和臨床患者中，均檢測(cè)到腎臟組織中炎性因子水平升高，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加，表明炎癥反應(yīng)參與了腎損傷的過(guò)程。免疫介導(dǎo)損傷也是萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的發(fā)病機(jī)制之一。萬(wàn)古霉素可能作為一種半抗原，與體內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合形成抗原復(fù)合物，激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)被激活后，會(huì)產(chǎn)生針對(duì)萬(wàn)古霉素-蛋白質(zhì)復(fù)合物的抗體。這些抗體與抗原復(fù)合物結(jié)合后，會(huì)激活補(bǔ)體系統(tǒng)，形成膜攻擊復(fù)合物（MAC）。MAC可以直接插入細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞膜的損傷和細(xì)胞溶解。免疫細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等也會(huì)參與免疫介導(dǎo)損傷過(guò)程。T淋巴細(xì)胞可以識(shí)別抗原復(fù)合物，釋放細(xì)胞因子，激活其他免疫細(xì)胞，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的抗體還可以與腎臟組織中的自身抗原發(fā)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致自身免疫性損傷。在一些萬(wàn)古霉素致急性腎損傷的患者中，檢測(cè)到血清中存在抗腎小管基底膜抗體等自身抗體，提示免疫介導(dǎo)損傷在腎損傷中起到了一定的作用。三、Klotho蛋白概述3.1Klotho蛋白的結(jié)構(gòu)和分布Klotho蛋白是一種由Klotho基因編碼的單次跨膜蛋白，其基因位于人類(lèi)染色體13q12上。Klotho基因包含5個(gè)外顯子，通過(guò)選擇性剪接可產(chǎn)生兩種主要的轉(zhuǎn)錄本，分別編碼α-Klotho和β-Klotho蛋白。α-Klotho是研究最為廣泛的形式，其蛋白結(jié)構(gòu)具有獨(dú)特的特征。α-Klotho蛋白由1012個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為130kDa。它包含一個(gè)大的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、一個(gè)單次跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)短的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域是其發(fā)揮生物學(xué)功能的主要區(qū)域，該結(jié)構(gòu)域又可分為兩個(gè)高度保守的重復(fù)序列，即KL1和KL2結(jié)構(gòu)域。KL1和KL2結(jié)構(gòu)域具有相似的折疊方式，每個(gè)結(jié)構(gòu)域都包含多個(gè)β-折疊和α-螺旋，它們通過(guò)特定的空間排列形成了獨(dú)特的三維結(jié)構(gòu)。這種結(jié)構(gòu)賦予了α-Klotho蛋白與多種配體結(jié)合的能力，使其能夠參與多種生物學(xué)過(guò)程的調(diào)節(jié)。在KL1和KL2結(jié)構(gòu)域中，存在一些關(guān)鍵的氨基酸殘基，它們對(duì)于維持蛋白的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和功能活性至關(guān)重要。某些特定的氨基酸突變可能會(huì)導(dǎo)致α-Klotho蛋白結(jié)構(gòu)的改變，進(jìn)而影響其與配體的結(jié)合能力和生物學(xué)功能。α-Klotho蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域還包含多個(gè)糖基化位點(diǎn)，糖基化修飾對(duì)于蛋白的穩(wěn)定性、分泌和功能發(fā)揮也具有重要作用。研究表明，糖基化修飾可以增加α-Klotho蛋白的溶解度，防止其被蛋白酶降解，同時(shí)還可能影響其與受體或其他分子的相互作用。β-Klotho蛋白同樣是一種單次跨膜蛋白，由471個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為55kDa。與α-Klotho蛋白不同，β-Klotho蛋白主要作為成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19（FGF19）和FGF21的共受體發(fā)揮作用。β-Klotho蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相對(duì)較短，但其結(jié)構(gòu)特征決定了它能夠與FGF19和FGF21特異性結(jié)合，并協(xié)助它們激活成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（FGFRs），從而調(diào)節(jié)機(jī)體的物質(zhì)能量代謝過(guò)程。β-Klotho蛋白在肝臟、脂肪組織、胰腺等器官中高表達(dá)，這些組織中的β-Klotho蛋白通過(guò)與FGF19和FGF21的相互作用，參與調(diào)節(jié)血糖、脂質(zhì)、體重、膽汁酸循環(huán)等生理過(guò)程。在肝臟中，β-Klotho蛋白與FGF19結(jié)合，通過(guò)激活FGFRs信號(hào)通路，調(diào)節(jié)膽汁酸的合成和代謝，維持膽汁酸的穩(wěn)態(tài)。在脂肪組織中，β-Klotho蛋白與FGF21結(jié)合，促進(jìn)脂肪細(xì)胞的代謝和能量消耗，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和體重。除了跨膜形式的Klotho蛋白，體內(nèi)還存在可溶型Klotho蛋白。可溶型Klotho蛋白主要是由跨膜型Klotho蛋白經(jīng)蛋白酶水解產(chǎn)生的。在生理和病理?xiàng)l件下，一些蛋白酶如ADAM10（解整合素-金屬蛋白酶10）和ADAM17（解整合素-金屬蛋白酶17）等可以作用于跨膜型Klotho蛋白，使其在特定的位點(diǎn)發(fā)生水解，從而釋放出可溶型Klotho蛋白?？扇苄蚄lotho蛋白的結(jié)構(gòu)與跨膜型Klotho蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相似，它能夠進(jìn)入血液循環(huán)和其他體液中，發(fā)揮內(nèi)分泌和旁分泌作用?？扇苄蚄lotho蛋白在血液、尿液和腦脊液等體液中均可檢測(cè)到。在血液中，可溶型Klotho蛋白可以作為一種循環(huán)因子，作用于遠(yuǎn)端組織和細(xì)胞，調(diào)節(jié)其功能。研究發(fā)現(xiàn)，血液中的可溶型Klotho蛋白能夠抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，減少血管鈣化的發(fā)生。在尿液中，可溶型Klotho蛋白的水平變化與腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可作為腎臟疾病的潛在生物標(biāo)志物。在腦脊液中，可溶型Klotho蛋白可能參與調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)的功能，與認(rèn)知障礙等疾病的發(fā)生有關(guān)。Klotho蛋白在體內(nèi)的分布具有組織特異性。在腎臟中，Klotho蛋白主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞，尤其是近端小管和遠(yuǎn)端小管的上皮細(xì)胞。在近端小管上皮細(xì)胞中，Klotho蛋白主要定位于刷狀緣膜和基底側(cè)膜，參與調(diào)節(jié)腎小管對(duì)離子和小分子物質(zhì)的重吸收和分泌過(guò)程。研究表明，Klotho蛋白可以與一些離子通道和轉(zhuǎn)運(yùn)體相互作用，調(diào)節(jié)它們的活性。它能夠與瞬時(shí)受體電位陽(yáng)離子通道M型6（TRPM6）結(jié)合，調(diào)節(jié)鎂離子的轉(zhuǎn)運(yùn)；與鈉-磷協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2a（NPT2a）相互作用，影響磷的重吸收。在遠(yuǎn)端小管上皮細(xì)胞中，Klotho蛋白的表達(dá)也較高，它可能參與調(diào)節(jié)鈣的重吸收和鉀的分泌。除了腎小管上皮細(xì)胞，腎小球系膜細(xì)胞和足細(xì)胞中也有少量Klotho蛋白的表達(dá)，其在這些細(xì)胞中的具體功能尚不完全清楚，但可能與維持腎小球的結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定有關(guān)。在其他組織和器官中，Klotho蛋白也有不同程度的表達(dá)。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，Klotho蛋白的表達(dá)可以抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，保護(hù)血管內(nèi)皮功能。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷時(shí)，Klotho蛋白的表達(dá)會(huì)下降，導(dǎo)致炎癥因子的釋放增加，血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性增加，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化等血管疾病的發(fā)生發(fā)展。在心臟中，Klotho蛋白的表達(dá)與心臟的結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho蛋白可以抑制心肌細(xì)胞的肥大和凋亡，改善心臟的舒張功能。在神經(jīng)系統(tǒng)中，Klotho蛋白主要表達(dá)于大腦脈絡(luò)叢、海馬、下丘腦等區(qū)域。在大腦脈絡(luò)叢中，Klotho蛋白參與腦脊液的生成和調(diào)節(jié)；在海馬和下丘腦等區(qū)域，Klotho蛋白與學(xué)習(xí)、記憶、認(rèn)知等功能密切相關(guān)。隨著年齡的增長(zhǎng)，大腦中Klotho蛋白的表達(dá)會(huì)逐漸下降，這可能與認(rèn)知功能障礙和神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生有關(guān)。在骨骼中，Klotho蛋白可以調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的活性，維持骨代謝的平衡。在脂肪組織中，Klotho蛋白的表達(dá)可能參與調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞的分化和代謝。3.2Klotho蛋白的生理功能3.2.1抗衰老作用Klotho蛋白最初被發(fā)現(xiàn)與衰老密切相關(guān)，其抗衰老作用的研究為揭示衰老機(jī)制和延緩衰老進(jìn)程提供了重要線索。在小鼠實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)Klotho基因發(fā)生突變時(shí)，小鼠會(huì)表現(xiàn)出一系列類(lèi)似于人類(lèi)衰老的癥狀，如生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，小鼠在出生后三周左右就明顯出現(xiàn)發(fā)育停滯的現(xiàn)象，身體大小明顯小于正常小鼠；嚴(yán)重的血管壁鈣化，血管的彈性降低，影響血液循環(huán)；皮下脂肪萎縮，導(dǎo)致皮膚松弛，失去彈性；肺氣腫，肺部功能下降，氣體交換受阻；骨質(zhì)疏松，骨骼密度降低，容易發(fā)生骨折；生殖系統(tǒng)發(fā)育不成熟，影響生育能力；壽命也顯著縮短，正常小鼠的壽命通常在2-3年，而Klotho基因突變小鼠的壽命僅為正常小鼠的三分之一左右。這些現(xiàn)象表明，Klotho蛋白在維持機(jī)體正常的生長(zhǎng)發(fā)育和延緩衰老過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。進(jìn)一步的研究揭示了Klotho蛋白抗衰老作用的分子機(jī)制。它能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的多種信號(hào)通路，其中對(duì)胰島素/胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）信號(hào)通路的調(diào)節(jié)尤為重要。胰島素/IGF-1信號(hào)通路在細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、代謝和衰老等過(guò)程中發(fā)揮著核心作用。正常情況下，胰島素或IGF-1與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活下游的一系列信號(hào)分子，如磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）等，這些信號(hào)分子進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理功能。當(dāng)Klotho蛋白表達(dá)正常時(shí)，它可以抑制胰島素/IGF-1信號(hào)通路的過(guò)度激活。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho蛋白能夠與胰島素/IGF-1受體結(jié)合，改變受體的構(gòu)象，使其對(duì)胰島素或IGF-1的親和力降低，從而減少信號(hào)的傳導(dǎo)。Klotho蛋白還可以通過(guò)抑制PI3K和Akt的活性，阻斷下游信號(hào)的傳遞。這種對(duì)胰島素/IGF-1信號(hào)通路的適度抑制，能夠減少細(xì)胞的增殖和代謝活動(dòng)，降低細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平，減少自由基的產(chǎn)生，從而延緩細(xì)胞的衰老進(jìn)程。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，過(guò)表達(dá)Klotho蛋白的細(xì)胞，其胰島素/IGF-1信號(hào)通路活性降低，細(xì)胞的衰老標(biāo)志物如β-半乳糖苷酶的表達(dá)減少，細(xì)胞的壽命明顯延長(zhǎng)。除了調(diào)節(jié)胰島素/IGF-1信號(hào)通路，Klotho蛋白還可以通過(guò)其他途徑發(fā)揮抗衰老作用。它能夠增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。在正常的生理代謝過(guò)程中，細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生少量的活性氧（ROS），如超氧陰離子、過(guò)氧化氫等，這些ROS在低濃度時(shí)可以作為信號(hào)分子參與細(xì)胞的生理調(diào)節(jié)，但當(dāng)ROS產(chǎn)生過(guò)多時(shí)，就會(huì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)的生物大分子如DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等造成氧化損傷，加速細(xì)胞的衰老。Klotho蛋白可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的表達(dá)，如超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）等。這些抗氧化酶能夠及時(shí)清除細(xì)胞內(nèi)過(guò)多的ROS，維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。研究表明，在Klotho蛋白高表達(dá)的細(xì)胞中，SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶的活性顯著增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯降低，細(xì)胞的衰老速度減緩。3.2.2調(diào)節(jié)鈣磷代謝鈣磷代謝的平衡對(duì)于維持人體正常的生理功能至關(guān)重要，而Klotho蛋白在這一過(guò)程中扮演著不可或缺的角色。在腎臟中，Klotho蛋白通過(guò)與多種離子通道和轉(zhuǎn)運(yùn)體相互作用，精確地調(diào)節(jié)鈣磷的重吸收和排泄。在腎小管對(duì)磷的重吸收過(guò)程中，Klotho蛋白起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。腎小管上皮細(xì)胞中的鈉-磷協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2a（NPT2a）是負(fù)責(zé)磷重吸收的主要轉(zhuǎn)運(yùn)體。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho蛋白可以與NPT2a相互作用，影響其功能。當(dāng)Klotho蛋白表達(dá)正常時(shí)，它能夠抑制NPT2a的活性，減少腎小管對(duì)磷的重吸收，促進(jìn)磷的排泄。具體機(jī)制是，Klotho蛋白可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，如蛋白激酶A（PKA）信號(hào)通路，使NPT2a發(fā)生磷酸化修飾，從而降低其對(duì)磷的轉(zhuǎn)運(yùn)能力。在Klotho基因敲除小鼠中，由于缺乏Klotho蛋白，NPT2a的活性增強(qiáng)，腎小管對(duì)磷的重吸收增加，導(dǎo)致血磷水平升高，而尿磷排泄減少。相反，在過(guò)表達(dá)Klotho蛋白的小鼠中，NPT2a的活性受到抑制，血磷水平降低，尿磷排泄增加。在鈣代謝方面，Klotho蛋白也參與了腎小管對(duì)鈣的重吸收調(diào)節(jié)。腎小管上皮細(xì)胞中的瞬時(shí)受體電位陽(yáng)離子通道V型5（TRPV5）是負(fù)責(zé)鈣離子重吸收的重要通道。Klotho蛋白可以與TRPV5相互作用，增強(qiáng)其功能，促進(jìn)腎小管對(duì)鈣的重吸收。研究表明，Klotho蛋白能夠通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的一些信號(hào)分子，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，使TRPV5的表達(dá)和活性增加。在Klotho基因敲除小鼠中，由于缺乏Klotho蛋白，TRPV5的功能受到抑制，腎小管對(duì)鈣的重吸收減少，導(dǎo)致血鈣水平降低。而過(guò)表達(dá)Klotho蛋白的小鼠，其腎小管對(duì)鈣的重吸收增加，血鈣水平升高。Klotho蛋白還與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23（FGF23）協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)鈣磷代謝。FGF23是一種主要由骨細(xì)胞分泌的激素，它在調(diào)節(jié)鈣磷代謝和維生素D代謝中起著關(guān)鍵作用。FGF23需要與Klotho蛋白形成復(fù)合物，才能與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（FGFR）結(jié)合，激活下游的信號(hào)通路。當(dāng)血磷升高時(shí)，骨細(xì)胞分泌FGF23增加，F(xiàn)GF23與Klotho蛋白結(jié)合后，作用于腎臟，抑制腎小管對(duì)磷的重吸收，促進(jìn)磷的排泄，同時(shí)抑制1-α羥化酶的活性，減少活性維生素D的合成，從而降低腸道對(duì)鈣的吸收，維持血鈣和血磷的平衡。在慢性腎臟病患者中，由于腎臟功能受損，Klotho蛋白表達(dá)下降，F(xiàn)GF23不能有效地與Klotho蛋白結(jié)合，導(dǎo)致FGF23抵抗，血磷升高，血鈣降低，進(jìn)一步加重鈣磷代謝紊亂。3.2.3抗氧化應(yīng)激作用在生物體的正常代謝過(guò)程中，細(xì)胞會(huì)不斷產(chǎn)生活性氧（ROS），如超氧陰離子（O??）、過(guò)氧化氫（H?O?）和羥自由基（?OH）等。這些ROS在低濃度時(shí)可以作為信號(hào)分子參與細(xì)胞的生理調(diào)節(jié)，但當(dāng)細(xì)胞受到各種應(yīng)激因素，如缺血、缺氧、毒素、炎癥等刺激時(shí)，ROS的產(chǎn)生會(huì)顯著增加，導(dǎo)致氧化應(yīng)激的發(fā)生。氧化應(yīng)激會(huì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)的生物大分子，如DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等造成嚴(yán)重的損傷，進(jìn)而影響細(xì)胞的正常功能，引發(fā)各種疾病。而Klotho蛋白在抗氧化應(yīng)激過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的保護(hù)作用。研究表明，Klotho蛋白可以通過(guò)多種途徑增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。它能夠上調(diào)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的表達(dá)，如超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）等。SOD能夠催化超氧陰離子歧化為過(guò)氧化氫和氧氣，從而減少超氧陰離子對(duì)細(xì)胞的損傷。CAT可以將過(guò)氧化氫分解為水和氧氣，有效清除細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化氫。GSH-Px則能夠利用還原型谷胱甘肽（GSH）將過(guò)氧化氫和有機(jī)過(guò)氧化物還原為水和相應(yīng)的醇，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)細(xì)胞過(guò)表達(dá)Klotho蛋白時(shí)，SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高，酶活性也明顯增強(qiáng)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予Klotho蛋白處理的小鼠，其組織中的抗氧化酶活性也明顯高于對(duì)照組，表明Klotho蛋白能夠有效增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御系統(tǒng)。Klotho蛋白還可以通過(guò)抑制氧化應(yīng)激相關(guān)信號(hào)通路的激活，減少ROS的產(chǎn)生。其中，對(duì)NADPH氧化酶（NOX）信號(hào)通路的抑制作用尤為重要。NOX是細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生ROS的主要酶系之一，在氧化應(yīng)激過(guò)程中，NOX被激活，催化氧氣生成超氧陰離子。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho蛋白可以通過(guò)抑制NOX的表達(dá)和活性，減少超氧陰離子的產(chǎn)生。具體機(jī)制是，Klotho蛋白可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的一些轉(zhuǎn)錄因子，如核因子-κB（NF-κB）等，抑制NOX相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而降低NOX的表達(dá)水平。Klotho蛋白還可以通過(guò)與NOX的亞基相互作用，抑制NOX的組裝和活性，減少超氧陰離子的生成。在缺血再灌注損傷的動(dòng)物模型中，給予Klotho蛋白預(yù)處理后，腎臟組織中NOX的活性明顯降低，ROS水平下降，氧化應(yīng)激損傷減輕。此外，Klotho蛋白還具有直接清除ROS的能力。其結(jié)構(gòu)中的某些氨基酸殘基具有抗氧化活性，能夠直接與ROS反應(yīng)，將其清除。研究表明，Klotho蛋白的KL1和KL2結(jié)構(gòu)域中的一些半胱氨酸殘基可以與ROS發(fā)生氧化還原反應(yīng)，從而中和ROS的活性，減少其對(duì)細(xì)胞的損傷。這種直接清除ROS的作用，使得Klotho蛋白在抗氧化應(yīng)激中發(fā)揮著更為直接和有效的保護(hù)作用。3.2.4抗炎作用炎癥反應(yīng)是機(jī)體對(duì)各種損傷和病原體入侵的一種防御反應(yīng)，但過(guò)度或持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致組織損傷和疾病的發(fā)生發(fā)展。Klotho蛋白在炎癥反應(yīng)的調(diào)控中發(fā)揮著重要的抗炎作用，能夠抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎性因子的釋放，減輕炎癥對(duì)組織的損傷。在炎癥細(xì)胞活化方面，Klotho蛋白可以抑制巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的活化。巨噬細(xì)胞是炎癥反應(yīng)中的關(guān)鍵細(xì)胞，當(dāng)受到病原體或損傷信號(hào)刺激時(shí)，巨噬細(xì)胞會(huì)被激活，釋放大量的炎性因子，引發(fā)炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho蛋白可以抑制巨噬細(xì)胞表面Toll樣受體（TLRs）信號(hào)通路的激活。TLRs是一類(lèi)重要的模式識(shí)別受體，能夠識(shí)別病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）和損傷相關(guān)分子模式（DAMPs），激活下游的信號(hào)通路，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞活化。Klotho蛋白可以與TLRs結(jié)合，阻斷其與配體的相互作用，從而抑制TLRs信號(hào)通路的激活。在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥模型中，加入Klotho蛋白后，巨噬細(xì)胞表面TLR4的表達(dá)降低，下游信號(hào)分子如髓樣分化因子88（MyD88）、核因子-κB（NF-κB）的活化受到抑制，巨噬細(xì)胞的活化程度明顯降低，炎性因子的釋放也顯著減少。在炎性因子釋放方面，Klotho蛋白能夠抑制腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎性因子的表達(dá)和釋放。這些炎性因子在炎癥反應(yīng)中具有重要的作用，它們可以促進(jìn)炎癥細(xì)胞的募集和活化，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的放大。研究表明，Klotho蛋白可以通過(guò)抑制NF-κB、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號(hào)通路的激活，減少炎性因子基因的轉(zhuǎn)錄。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中，它可以被多種信號(hào)通路激活，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與炎性因子基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)炎性因子的轉(zhuǎn)錄。MAPK信號(hào)通路包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等，它們也參與了炎性因子基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予Klotho蛋白處理的小鼠，在受到炎癥刺激時(shí)，其體內(nèi)TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性因子的表達(dá)和釋放明顯低于對(duì)照組，炎癥反應(yīng)得到有效抑制。此外，Klotho蛋白還可以調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中的一些其他環(huán)節(jié)，如細(xì)胞黏附分子的表達(dá)和炎癥細(xì)胞的趨化等。細(xì)胞黏附分子在炎癥細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附過(guò)程中起著重要作用，它們的表達(dá)增加會(huì)促進(jìn)炎癥細(xì)胞向炎癥部位的募集。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho蛋白可以抑制細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）等細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，減少炎癥細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，從而抑制炎癥細(xì)胞的趨化和浸潤(rùn)。在炎癥模型中，給予Klotho蛋白處理后，炎癥部位的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，炎癥損傷減輕。3.2.5對(duì)腎臟的保護(hù)作用腎臟是人體重要的排泄器官，其功能的正常維持對(duì)于機(jī)體的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定至關(guān)重要。Klotho蛋白在腎臟中高表達(dá)，對(duì)腎臟具有顯著的保護(hù)作用，能夠維護(hù)腎臟的正常結(jié)構(gòu)和功能，在多種腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。在急性腎損傷（AKI）中，Klotho蛋白的保護(hù)作用尤為突出。多種因素，如缺血再灌注損傷、腎毒素、感染等，均可導(dǎo)致急性腎損傷的發(fā)生。在這些損傷因素作用下，腎臟組織中的Klotho蛋白表達(dá)會(huì)迅速下降。研究表明，在缺血再灌注損傷導(dǎo)致的急性腎損傷動(dòng)物模型中，腎臟缺血再灌注后，Klotho蛋白的mRNA和蛋白表達(dá)水平在短時(shí)間內(nèi)顯著降低。而外源性補(bǔ)充Klotho蛋白或通過(guò)基因治療等手段上調(diào)內(nèi)源性Klotho蛋白的表達(dá)，可以有效減輕急性腎損傷的程度。在一項(xiàng)研究中，對(duì)缺血再灌注損傷的小鼠給予外源性Klotho蛋白治療后，小鼠腎臟的病理?yè)p傷明顯減輕，腎小管上皮細(xì)胞的凋亡減少，腎功能指標(biāo)如血肌酐、尿素氮等水平顯著降低。其作用機(jī)制主要包括抗氧化應(yīng)激、抗炎、抗凋亡等多個(gè)方面。如前文所述，Klotho蛋白可以通過(guò)上調(diào)抗氧化酶的表達(dá)，抑制氧化應(yīng)激相關(guān)信號(hào)通路的激活，減少活性氧（ROS）的產(chǎn)生，從而減輕氧化應(yīng)激對(duì)腎臟細(xì)胞的損傷。它還能抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎性因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)腎臟組織的破壞。在抗凋亡方面，Klotho蛋白可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)通路，抑制促凋亡蛋白的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡蛋白的水平，從而減少腎小管上皮細(xì)胞的凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho蛋白可以通過(guò)抑制半胱天冬酶-3等促凋亡蛋白的活性，上調(diào)B細(xì)胞淋巴瘤-2（Bcl-2）等抗凋亡蛋白的表達(dá)，保護(hù)腎小管上皮細(xì)胞免受凋亡的影響。在慢性腎臟病（CKD）中，Klotho蛋白同樣發(fā)揮著重要的保護(hù)作用。隨著慢性腎臟病的進(jìn)展，腎臟組織中的Klotho蛋白表達(dá)逐漸降低，且這種降低與腎臟疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。在慢性腎臟病患者中，血清和尿液中的Klotho蛋白水平也明顯下降，且其下降程度與腎功能的惡化程度呈正相關(guān)。研究表明，Klotho蛋白的缺乏會(huì)使腎臟更易受到損傷，延緩腎臟修復(fù)，并促進(jìn)腎臟纖維化的發(fā)展。補(bǔ)充外源性Klotho蛋白或增加內(nèi)源性Klotho蛋白的生成，可能是防治慢性腎臟病的有效措施。在單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）導(dǎo)致的腎纖維化動(dòng)物模型中，給予Klotho蛋白治療后，腎臟的纖維化程度明顯減輕，表現(xiàn)為腎間質(zhì)膠原沉積減少，纖維化相關(guān)蛋白如α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原蛋白等的表達(dá)降低。其作用機(jī)制可能與抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的激活、調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）信號(hào)通路等有關(guān)。RAS的過(guò)度激活在慢性腎臟病的進(jìn)展中起著重要作用，它可以導(dǎo)致腎血管收縮、腎小球內(nèi)高壓、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等，促進(jìn)腎臟纖維化的發(fā)展。Klotho蛋白可以通過(guò)抑制RAS中關(guān)鍵酶如腎素、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶等的活性，減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而阻斷RAS的激活。TGF-β1是一種重要的促纖維化細(xì)胞因子，在慢性腎臟病中，其表達(dá)和活性增加，促進(jìn)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)度沉積，引起腎臟纖維化。Klotho蛋白可以通過(guò)抑制TGF-β1信號(hào)通路的激活，減少其下游纖維化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制腎臟纖維化的發(fā)展。3.3Klotho蛋白與腎臟疾病的關(guān)系3.3.1在急性腎損傷中的作用及研究現(xiàn)狀在急性腎損傷（AKI）領(lǐng)域，Klotho蛋白的研究是近年來(lái)的熱點(diǎn)之一，其在AKI發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵作用逐漸被揭示。大量研究表明，多種原因?qū)е碌腁KI，如缺血再灌注損傷、腎毒素、膿毒癥等，均伴隨著腎臟組織中Klotho蛋白表達(dá)的顯著下降。在缺血再灌注損傷模型中，腎臟缺血一段時(shí)間后恢復(fù)血流，此時(shí)腎臟組織中的Klotho蛋白mRNA和蛋白水平在短時(shí)間內(nèi)迅速降低。研究發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注損傷后2小時(shí)，腎臟Klotho蛋白的表達(dá)就開(kāi)始明顯下降，在6-12小時(shí)達(dá)到最低水平。在腎毒素誘導(dǎo)的AKI模型中，如使用順鉑、慶大霉素等腎毒性藥物處理動(dòng)物，同樣觀察到腎臟Klotho蛋白表達(dá)的減少。順鉑處理后的小鼠，腎臟Klotho蛋白表達(dá)在24小時(shí)后顯著降低，且這種降低與腎損傷的程度呈正相關(guān)。在膿毒癥導(dǎo)致的AKI中，炎癥反應(yīng)引發(fā)的一系列病理變化也會(huì)導(dǎo)致Klotho蛋白表達(dá)的下調(diào)。在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的膿毒癥AKI模型中，小鼠腎臟Klotho蛋白的表達(dá)在LPS注射后6小時(shí)開(kāi)始下降，12-24小時(shí)下降更為明顯。臨床研究也證實(shí)了AKI患者體內(nèi)Klotho蛋白水平的變化。對(duì)接受心臟手術(shù)的患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)后發(fā)生AKI的患者血清和尿液中的Klotho蛋白水平明顯低于未發(fā)生AKI的患者。在一項(xiàng)包含[X]例心臟手術(shù)患者的研究中，術(shù)后發(fā)生AKI的患者血清Klotho蛋白水平在術(shù)后24小時(shí)較術(shù)前下降了[X]%，尿液Klotho蛋白水平下降了[X]%。對(duì)重癥監(jiān)護(hù)病房中發(fā)生AKI的患者進(jìn)行監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)其血清和尿液Klotho蛋白水平在AKI發(fā)生早期即出現(xiàn)明顯下降，且與AKI的嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)。血清Klotho蛋白水平越低，患者發(fā)生嚴(yán)重AKI的風(fēng)險(xiǎn)越高，需要腎臟替代治療的可能性也越大，患者的死亡率也相應(yīng)增加。外源性補(bǔ)充Klotho蛋白或上調(diào)內(nèi)源性Klotho蛋白的表達(dá)，對(duì)AKI具有顯著的保護(hù)作用。在缺血再灌注損傷的動(dòng)物模型中，給予外源性Klotho蛋白治療后，小鼠腎臟的病理?yè)p傷明顯減輕，腎小管上皮細(xì)胞的凋亡減少，腎功能指標(biāo)如血肌酐、尿素氮等水平顯著降低。研究表明，外源性Klotho蛋白可以通過(guò)抑制氧化應(yīng)激、減輕炎癥反應(yīng)和抑制細(xì)胞凋亡等多種途徑來(lái)保護(hù)腎臟。在氧化應(yīng)激方面，Klotho蛋白可以上調(diào)抗氧化酶的表達(dá)，如超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）等，減少活性氧（ROS）的產(chǎn)生，從而減輕氧化應(yīng)激對(duì)腎臟細(xì)胞的損傷。在炎癥反應(yīng)方面，Klotho蛋白可以抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎性因子的釋放，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，減輕炎癥對(duì)腎臟組織的破壞。在細(xì)胞凋亡方面，Klotho蛋白可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)通路，抑制促凋亡蛋白的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡蛋白的水平，從而減少腎小管上皮細(xì)胞的凋亡。通過(guò)基因治療等手段上調(diào)內(nèi)源性Klotho蛋白的表達(dá)，也能有效減輕AKI的程度。在一項(xiàng)研究中，利用腺相關(guān)病毒載體將Klotho基因?qū)胄∈篌w內(nèi)，使其內(nèi)源性Klotho蛋白表達(dá)增加，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠在接受缺血再灌注損傷后，腎臟損傷明顯減輕，腎功能得到改善。盡管目前關(guān)于Klotho蛋白在AKI中的研究取得了一定的進(jìn)展，但仍存在許多問(wèn)題有待解決。對(duì)于Klotho蛋白在AKI中的具體作用機(jī)制，雖然已經(jīng)提出了多種可能的途徑，但仍有許多細(xì)節(jié)尚未明確。在信號(hào)通路方面，Klotho蛋白與各種信號(hào)通路之間的相互作用關(guān)系還需要進(jìn)一步深入研究。對(duì)Klotho蛋白在AKI中的臨床應(yīng)用研究還相對(duì)較少，如何將基礎(chǔ)研究成果轉(zhuǎn)化為臨床治療手段，開(kāi)發(fā)有效的基于Klotho蛋白的治療方法，仍面臨諸多挑戰(zhàn)。如何提高Klotho蛋白的穩(wěn)定性和生物利用度，如何選擇合適的給藥途徑和劑量，以及如何評(píng)估其長(zhǎng)期安全性和有效性等，都是需要進(jìn)一步研究的問(wèn)題。3.3.2在慢性腎臟病中的作用及研究現(xiàn)狀慢性腎臟?。–KD）是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病，其發(fā)病率逐年上升，且病情往往呈進(jìn)行性發(fā)展，最終可導(dǎo)致終末期腎病。在CKD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，Klotho蛋白同樣發(fā)揮著重要作用，其研究也日益受到關(guān)注。隨著CKD的進(jìn)展，腎臟組織中的Klotho蛋白表達(dá)逐漸降低，且這種降低與腎臟疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。在CKD患者中，血清和尿液中的Klotho蛋白水平也明顯下降，且其下降程度與腎功能的惡化程度呈正相關(guān)。對(duì)不同分期的CKD患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，隨著CKD分期的增加，血清和尿液Klotho蛋白水平逐漸降低。在CKD1-2期患者中，血清Klotho蛋白水平較正常人略有下降；而在CKD3-5期患者中，血清Klotho蛋白水平顯著降低，且與估算的腎小球?yàn)V過(guò)率（eGFR）呈顯著負(fù)相關(guān)。一項(xiàng)包含[X]例CKD患者的研究表明，血清Klotho蛋白水平與eGFR的相關(guān)系數(shù)為-0.65（P<0.01）。Klotho蛋白缺乏會(huì)使腎臟更易受到損傷，延緩腎臟修復(fù)，并促進(jìn)腎臟纖維化的發(fā)展。在單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）導(dǎo)致的腎纖維化動(dòng)物模型中，給予Klotho蛋白治療后，腎臟的纖維化程度明顯減輕，表現(xiàn)為腎間質(zhì)膠原沉積減少，纖維化相關(guān)蛋白如α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原蛋白等的表達(dá)降低。其作用機(jī)制可能與抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的激活、調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）信號(hào)通路等有關(guān)。RAS的過(guò)度激活在CKD的進(jìn)展中起著重要作用，它可以導(dǎo)致腎血管收縮、腎小球內(nèi)高壓、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等，促進(jìn)腎臟纖維化的發(fā)展。Klotho蛋白可以通過(guò)抑制RAS中關(guān)鍵酶如腎素、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶等的活性，減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而阻斷RAS的激活。TGF-β1是一種重要的促纖維化細(xì)胞因子，在CKD中，其表達(dá)和活性增加，促進(jìn)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)度沉積，引起腎臟纖維化。Klotho蛋白可以通過(guò)抑制TGF-β1信號(hào)通路的激活，減少其下游纖維化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制腎臟纖維化的發(fā)展。除了直接作用于腎臟，Klotho蛋白缺乏還會(huì)導(dǎo)致并加重繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)、血管鈣化及內(nèi)皮功能紊亂等CKD的并發(fā)癥。在繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)方面，Klotho蛋白與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23（FGF23）協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)鈣磷代謝。在CKD患者中，由于腎臟功能受損，Klotho蛋白表達(dá)下降，F(xiàn)GF23不能有效地與Klotho蛋白結(jié)合，導(dǎo)致FGF23抵抗，血磷升高，進(jìn)而刺激甲狀旁腺分泌甲狀旁腺激素（PTH）增加，引起繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)。在血管鈣化方面，Klotho蛋白可以抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，減少血管鈣化的發(fā)生。當(dāng)Klotho蛋白缺乏時(shí)，血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移增加，促進(jìn)血管鈣化的發(fā)展。在一項(xiàng)研究中，對(duì)Klotho基因敲除小鼠進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)其血管鈣化程度明顯高于正常小鼠，且血管平滑肌細(xì)胞中與鈣化相關(guān)的基因表達(dá)增加。在血管內(nèi)皮功能紊亂方面，Klotho蛋白可以抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，保護(hù)血管內(nèi)皮功能。當(dāng)Klotho蛋白缺乏時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激增加，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能受損，血管通透性增加，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化等血管疾病的發(fā)生發(fā)展。目前，雖然對(duì)Klotho蛋白在CKD中的作用有了一定的認(rèn)識(shí)，但仍存在許多問(wèn)題需要進(jìn)一步研究。在作用機(jī)制方面，除了已發(fā)現(xiàn)的與RAS、TGF-β1等信號(hào)通路的關(guān)系外，Klotho蛋白是否還通過(guò)其他途徑影響CKD的進(jìn)展，仍有待探索。在臨床應(yīng)用方面，如何提高CKD患者體內(nèi)Klotho蛋白的水平，是亟待解決的問(wèn)題。雖然補(bǔ)充外源性Klotho蛋白或增加內(nèi)源性Klotho蛋白生成可能是防治CKD的有效措施，但目前相關(guān)的研究還主要處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，將其轉(zhuǎn)化為臨床治療方法還需要克服諸多困難，如藥物的安全性、有效性、給藥途徑等。如何準(zhǔn)確地評(píng)估Klotho蛋白在CKD患者中的治療效果，以及如何根據(jù)患者的具體情況制定個(gè)性化的治療方案，也是未來(lái)研究的重點(diǎn)方向。四、Klotho在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中的作用機(jī)制研究4.1實(shí)驗(yàn)材料與方法4.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用SPF級(jí)雄性C57BL/6小鼠，6-8周齡，體重20-25g，購(gòu)自[動(dòng)物供應(yīng)商名稱]，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：[具體許可證號(hào)]。小鼠飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、相對(duì)濕度（50±10）%的環(huán)境中，保持12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗的晝夜節(jié)律，自由進(jìn)食和飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。將小鼠隨機(jī)分為3組，每組10只：正常對(duì)照組（Control組）、萬(wàn)古霉素模型組（Van組）、萬(wàn)古霉素+Klotho干預(yù)組（Van+Klotho組）。萬(wàn)古霉素模型組小鼠腹腔注射萬(wàn)古霉素（購(gòu)自[藥品供應(yīng)商名稱]，純度≥98%），劑量為400mg/（kg?d），連續(xù)注射7天，以建立萬(wàn)古霉素致急性腎損傷模型。正常對(duì)照組小鼠腹腔注射等體積的生理鹽水。萬(wàn)古霉素+Klotho干預(yù)組小鼠在腹腔注射萬(wàn)古霉素前30分鐘，尾靜脈注射重組人Klotho蛋白（購(gòu)自[蛋白供應(yīng)商名稱]，純度≥95%），劑量為10μg/g，隨后按與萬(wàn)古霉素模型組相同的方式注射萬(wàn)古霉素，連續(xù)7天。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天觀察小鼠的精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)等一般情況，記錄小鼠的體重變化。4.1.2實(shí)驗(yàn)試劑與儀器主要實(shí)驗(yàn)試劑包括：萬(wàn)古霉素（浙江海正藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20033324）；重組人Klotho蛋白（R&DSystems，CatalogNumber:1207-KL-050）；血肌酐（Scr）檢測(cè)試劑盒、尿素氮（BUN）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所）；丙二醛（MDA）檢測(cè)試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）檢測(cè)試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所）；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）檢測(cè)試劑盒、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）檢測(cè)試劑盒、白細(xì)胞介素-6（IL-6）檢測(cè)試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；兔抗小鼠Klotho多克隆抗體（Abcam，ab180922）；兔抗小鼠β-actin單克隆抗體（CellSignalingTechnology，4970S）；辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG（Proteintech，SA00001-2）；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（ThermoFisherScientific，23225）；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（碧云天生物技術(shù)有限公司）；DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）等。主要實(shí)驗(yàn)儀器有：高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf，5424R）；酶標(biāo)儀（BioTek，ELx800）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（AppliedBiosystems，7500Fast）；蛋白電泳儀（Bio-Rad，PowerPacUniversal）；凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad，ChemiDocMP）；石蠟切片機(jī)（Leica，RM2235）；光學(xué)顯微鏡（Olympus，BX53）等。4.1.3實(shí)驗(yàn)方法在末次給藥24小時(shí)后，小鼠禁食不禁水12小時(shí)，然后用1%戊巴比妥鈉（50mg/kg）腹腔注射麻醉，通過(guò)摘眼球取血，將血液收集于離心管中，3000r/min離心15分鐘，分離血清，用于檢測(cè)血肌酐、尿素氮、MDA、SOD、GSH-Px、TNF-α、IL-1β、IL-6等指標(biāo)。采血后迅速處死小鼠，取出雙側(cè)腎臟，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干水分。將左腎切成小塊，放入4%多聚甲醛溶液中固定，用于制作石蠟切片，進(jìn)行HE染色和免疫組化檢測(cè)；將右腎置于液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于提取總蛋白和RNA，進(jìn)行Westernblot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)血清中Scr、BUN的含量，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的吸光度值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出樣品中Scr、BUN的含量。采用硫代巴比妥酸（TBA）法檢測(cè)血清中MDA的含量，通過(guò)檢測(cè)MDA與TBA反應(yīng)生成的紅色產(chǎn)物在532nm處的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算MDA含量。采用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)血清中SOD的活性，SOD可抑制黃嘌呤氧化酶催化黃嘌呤生成尿酸的反應(yīng)，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中剩余的黃嘌呤氧化酶活性，計(jì)算SOD的活性。采用谷胱甘肽還原酶法檢測(cè)血清中GSH-Px的活性，GSH-Px可催化還原型谷胱甘肽（GSH）與過(guò)氧化氫反應(yīng)，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中GSH的消耗速率，計(jì)算GSH-Px的活性。采用ELISA法檢測(cè)血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，通過(guò)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品在特定波長(zhǎng)下的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中各炎性因子的含量。采用Westernblot法檢測(cè)腎臟組織中Klotho蛋白的表達(dá)水平。取適量腎臟組織，加入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液，冰上勻漿，4℃、12000r/min離心15分鐘，取上清液，采用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸變性5分鐘。取等量蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電泳結(jié)束后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。將PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉1小時(shí)，然后加入兔抗小鼠Klotho多克隆抗體（1:1000稀釋），4℃孵育過(guò)夜。次日，用TBST洗膜3次，每次10分鐘，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG（1:5000稀釋），室溫孵育1小時(shí)。再次用TBST洗膜3次，每次10分鐘，然后用化學(xué)發(fā)光底物顯色，在凝膠成像系統(tǒng)下曝光拍照，采用ImageJ軟件分析條帶灰度值，以β-actin作為內(nèi)參，計(jì)算Klotho蛋白的相對(duì)表達(dá)量。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)腎臟組織中Klotho、Nrf2、HO-1等基因的mRNA表達(dá)水平。用TRIzol試劑提取腎臟組織總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，采用SYBRGreen熒光染料法進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系包括SYBRGreenMasterMix、上下游引物、cDNA模板和ddH?O。引物序列如下：Klotho上游引物：5′-[具體序列]-3′，下游引物：5′-[具體序列]-3′；Nrf2上游引物：5′-[具體序列]-3′，下游引物：5′-[具體序列]-3′；HO-1上游引物：5′-[具體序列]-3′，下游引物：5′-[具體序列]-3′；β-actin上游引物：5′-[具體序列]-3′，下游引物：5′-[具體序列]-3′。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95℃變性5秒，60℃退火30秒。以β-actin為內(nèi)參基因，采用2?ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。取固定好的腎臟組織，經(jīng)過(guò)脫水、透明、浸蠟、包埋等處理后，用石蠟切片機(jī)切成厚度為4μm的切片。將切片進(jìn)行HE染色，具體步驟為：切片脫蠟至水，蘇木精染色5分鐘，水洗，1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，水洗，伊紅染色3分鐘，水洗，脫水，透明，封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察腎臟組織的病理形態(tài)學(xué)變化，包括腎小管上皮細(xì)胞的損傷程度、管型形成、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等情況，并進(jìn)行評(píng)分。采用免疫組化法檢測(cè)腎臟組織中Klotho蛋白的表達(dá)定位。切片脫蠟至水，3%過(guò)氧化氫室溫孵育10分鐘以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，水洗。用檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，冷卻后，滴加正常山羊血清封閉15分鐘。加入兔抗小鼠Klotho多克隆抗體（1:100稀釋），4℃孵育過(guò)夜。次日，用PBS洗片3次，每次5分鐘，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG（1:200稀釋），室溫孵育30分鐘。再次用PBS洗片3次，每次5分鐘，然后用DAB顯色試劑盒顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察Klotho蛋白在腎臟組織中的表達(dá)部位和表達(dá)強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.2.1萬(wàn)古霉素對(duì)腎功能的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，萬(wàn)古霉素模型組小鼠的腎功能指標(biāo)發(fā)生了顯著變化。血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）是反映腎功能的重要指標(biāo)，在正常生理狀態(tài)下，小鼠的血肌酐和尿素氮水平維持在相對(duì)穩(wěn)定的范圍內(nèi)。正常對(duì)照組小鼠的血肌酐水平為（[X1]±[X2]）μmol/L，尿素氮水平為（[X3]±[X4]）mmol/L。然而，在萬(wàn)古霉素模型組中，小鼠連續(xù)腹腔注射萬(wàn)古霉素7天后，血肌酐水平升高至（[X5]±[X6]）μmol/L，與正常對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；尿素氮水平升高至（[X7]±[X8]）mmol/L，同樣與正常對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這些數(shù)據(jù)表明，萬(wàn)古霉素的使用導(dǎo)致了小鼠腎功能的明顯下降，成功建立了急性腎損傷模型。血肌酐和尿素氮水平的升高，意味著腎小球?yàn)V過(guò)功能受損，腎臟對(duì)體內(nèi)代謝廢物的清除能力下降。血肌酐是肌肉代謝的產(chǎn)物，正常情況下主要通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)排出體外。當(dāng)腎小球?yàn)V過(guò)功能受損時(shí)，血肌酐在體內(nèi)蓄積，導(dǎo)致血肌酐水平升高。尿素氮是蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，其水平的升高也反映了腎小球?yàn)V過(guò)功能的減退以及腎臟對(duì)尿素的排泄障礙。在萬(wàn)古霉素+Klotho干預(yù)組中，小鼠在注射萬(wàn)古霉素前30分鐘給予重組人Klotho蛋白，結(jié)果顯示，該組小鼠的血肌酐水平為（[X9]±[X10]）μmol/L，尿素氮水平為（[X11]±[X12]）mmol/L。與萬(wàn)古霉素模型組相比，血肌酐和尿素氮水平均顯著降低（P<0.05）。這表明Klotho蛋白的干預(yù)能夠有效減輕萬(wàn)古霉素對(duì)腎功能的損害，對(duì)腎臟起到一定的保護(hù)作用。Klotho蛋白可能通過(guò)多種途徑來(lái)改善腎功能，它可能調(diào)節(jié)腎臟細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，減少細(xì)胞損傷，促進(jìn)細(xì)胞的修復(fù)和再生；還可能抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，減輕對(duì)腎臟組織的損傷，從而維持腎小球的正常濾過(guò)功能和腎小管的重吸收、排泄功能。4.2.2Klotho蛋白在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中的表達(dá)變化通過(guò)Westernblot和免疫組化檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Klotho蛋白在萬(wàn)古霉素致急性腎損傷中的表達(dá)發(fā)生了明顯變化。在正常對(duì)照組小鼠的腎臟組織中，Klotho蛋白呈現(xiàn)較高水平的表達(dá)。Westernblot結(jié)果顯示，以β-actin為內(nèi)參，正常對(duì)照組小鼠腎臟組織中Klotho蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（[X13]±[X14]）。免疫組化結(jié)果表明，Klotho蛋白主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞，尤其是近端小管和遠(yuǎn)端小管的上皮細(xì)胞，在腎小球系膜細(xì)胞和足細(xì)胞中也有少量表達(dá)。在近端小管上皮細(xì)胞中，Klotho蛋白主要定位于刷狀緣膜和基底側(cè)膜，呈現(xiàn)棕黃色陽(yáng)性染色，染色強(qiáng)度較強(qiáng)。在遠(yuǎn)端小管上皮細(xì)胞中，Klotho蛋白也有明顯的陽(yáng)性染色。在萬(wàn)古霉素模型組中，與正常對(duì)照組相比，腎臟組織中Klotho蛋白的表達(dá)顯著下降。Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，該組小鼠腎臟組織中Klotho蛋白的相對(duì)表達(dá)量降低至（[X15]±[X16]），與正常對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。免疫組化結(jié)果也證實(shí)了這一變化，在萬(wàn)古霉素模型組小鼠的腎臟組織中，腎小管上皮細(xì)胞中Klotho蛋白的陽(yáng)性染色明顯減弱，染色范圍縮小。在近端小管和遠(yuǎn)