實(shí)時(shí)熒光pcr技術(shù)試題及答案VIP

實(shí)時(shí)熒光pcr技術(shù)試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)中，熒光信號(hào)主要來(lái)自（）A.模板DNAB.引物C.熒光探針D.緩沖液2.實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)錄3.用于實(shí)時(shí)熒光PCR定量分析的方法是（）A.終點(diǎn)法B.熒光強(qiáng)度法C.Ct值法D.吸光度法4.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)中，常用的熒光基團(tuán)是（）A.溴酚藍(lán)B.熒光素C.二甲苯青D.考馬斯亮藍(lán)5.以下哪種物質(zhì)不是實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系的成分（）A.dNTPB.Taq酶C.限制性內(nèi)切酶D.引物6.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)的是（）A.反應(yīng)開(kāi)始時(shí)模板量B.反應(yīng)結(jié)束時(shí)產(chǎn)物量C.反應(yīng)過(guò)程中熒光信號(hào)變化D.引物結(jié)合情況7.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)可用于（）A.基因克隆B.蛋白質(zhì)測(cè)序C.病毒核酸定量D.細(xì)胞培養(yǎng)8.一般實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)的退火溫度范圍是（）A.30-40℃B.50-65℃C.70-80℃D.85-95℃9.實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)中，陰性對(duì)照的作用是（）A.檢測(cè)試劑是否污染B.確定最佳反應(yīng)條件C.比較不同樣本差異D.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)10.熒光閾值一般設(shè)定在（）A.基線期B.指數(shù)增長(zhǎng)期C.平臺(tái)期D.任何時(shí)期二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)有（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.可定量分析D.操作簡(jiǎn)單2.實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系包含（）A.模板DNAB.引物C.熒光探針D.緩沖液3.熒光定量PCR常用的探針類型有（）A.TaqMan探針B.SYBRGreenIC.分子信標(biāo)D.引物二聚體4.影響實(shí)時(shí)熒光PCR結(jié)果準(zhǔn)確性的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物設(shè)計(jì)C.反應(yīng)條件D.儀器性能5.實(shí)時(shí)熒光PCR可應(yīng)用于（）A.疾病診斷B.藥物研發(fā)C.基因表達(dá)分析D.親子鑒定6.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)中的熒光信號(hào)來(lái)源可能是（）A.結(jié)合雙鏈DNA的熒光染料B.標(biāo)記在探針上的熒光基團(tuán)C.引物自身發(fā)出的熒光D.反應(yīng)緩沖液的熒光7.關(guān)于Ct值，以下說(shuō)法正確的是（）A.與起始模板量成反比B.是熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的循環(huán)數(shù)C.可以用于定量分析D.不同儀器測(cè)得的Ct值不同8.實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)中，陽(yáng)性對(duì)照的作用是（）A.驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系有效性B.檢測(cè)儀器是否正常C.比較不同樣本結(jié)果D.優(yōu)化引物濃度9.在實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)中，可能出現(xiàn)的問(wèn)題有（）A.引物二聚體形成B.非特異性擴(kuò)增C.熒光信號(hào)弱D.反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)10.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)與傳統(tǒng)PCR技術(shù)相比，其特點(diǎn)在于（）A.能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程B.可進(jìn)行定量分析C.無(wú)需進(jìn)行電泳檢測(cè)D.對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求低三、判斷題（每題2分，共10題）1.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)只能用于DNA檢測(cè)，不能檢測(cè)RNA。（）2.熒光閾值設(shè)定越高，Ct值越小。（）3.實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系中引物濃度越高越好。（）4.只要實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，實(shí)時(shí)熒光PCR結(jié)果就一定準(zhǔn)確可靠。（）5.SYBRGreenI可以特異性結(jié)合雙鏈DNA和單鏈DNA。（）6.實(shí)時(shí)熒光PCR可用于檢測(cè)基因的突變情況。（）7.Ct值相同的樣本，其起始模板量一定相同。（）8.實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性可能是由于模板污染。（）9.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)不需要引物就可以進(jìn)行反應(yīng)。（）10.不同廠家生產(chǎn)的實(shí)時(shí)熒光PCR儀器，其工作原理完全不同。（）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)定量的基本原理。答：基于Ct值與起始模板量的對(duì)數(shù)成反比關(guān)系。在熒光信號(hào)指數(shù)增長(zhǎng)期，熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的循環(huán)數(shù)Ct可反映起始模板量，通過(guò)已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而對(duì)未知樣本定量。2.實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系中各成分的作用是什么？答：模板DNA是擴(kuò)增的對(duì)象；引物引導(dǎo)DNA合成；熒光探針（或熒光染料）用于產(chǎn)生熒光信號(hào)；dNTP提供合成原料；Taq酶催化DNA合成；緩沖液維持反應(yīng)的適宜環(huán)境。3.列舉兩種實(shí)時(shí)熒光PCR常用的熒光標(biāo)記方法并簡(jiǎn)要說(shuō)明。答：①TaqMan探針?lè)ǎ禾结槂啥朔謩e標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)，PCR延伸時(shí)Taq酶將探針降解，使熒光信號(hào)釋放。②SYBRGreenI法：該染料能特異性結(jié)合雙鏈DNA，隨著雙鏈DNA合成，熒光信號(hào)增強(qiáng)。4.實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)中，如何避免非特異性擴(kuò)增？答：優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，提高特異性；合理調(diào)整反應(yīng)條件，如退火溫度、時(shí)間等；確保模板純度，避免雜質(zhì)干擾；設(shè)置合適的陰性對(duì)照，監(jiān)控反應(yīng)體系是否存在污染。五、討論題（每題5分，共4題）1.實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在疾病診斷領(lǐng)域有哪些應(yīng)用及優(yōu)勢(shì)？答：應(yīng)用于病原體檢測(cè)，如新冠病毒核酸檢測(cè)；基因異常檢測(cè)用于腫瘤診斷等。優(yōu)勢(shì)在于靈敏度高，能早期發(fā)現(xiàn)病原體；特異性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確；可定量，利于病情監(jiān)測(cè)和治療評(píng)估，且檢測(cè)快速，能及時(shí)診斷。2.在進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，若出現(xiàn)熒光信號(hào)異常，可能有哪些原因及解決方法？答：原因可能是模板質(zhì)量差、引物或探針設(shè)計(jì)不合理、反應(yīng)條件不當(dāng)、儀器故障、試劑污染等。解決方法：重新制備高質(zhì)量模板，優(yōu)化引物探針設(shè)計(jì)，調(diào)整反應(yīng)條件，檢查儀器，更換無(wú)污染試劑，必要時(shí)重新實(shí)驗(yàn)。3.討論實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在基因表達(dá)分析中的作用及應(yīng)用實(shí)例。答：作用是精確測(cè)量基因轉(zhuǎn)錄水平，分析基因表達(dá)差異。實(shí)例：研究腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞中某些基因表達(dá)差異，探索腫瘤發(fā)生機(jī)制；分析植物在不同環(huán)境脅迫下相關(guān)基因表達(dá)變化，了解植物應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制。4.隨著技術(shù)發(fā)展，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)面臨哪些挑戰(zhàn)和機(jī)遇？答：挑戰(zhàn)：對(duì)實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)要求高，易出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)誤差；成本較高；存在交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。機(jī)遇：不斷改進(jìn)優(yōu)化，提高靈敏度和特異性；在更多領(lǐng)域如精準(zhǔn)醫(yī)療、食品安全檢測(cè)等有廣闊應(yīng)用前景，與其他技術(shù)聯(lián)用可拓展功能。答案一、單項(xiàng)選擇題1.C2.D3.C4.B5.C6.C7.C8.B9.A10.B二、多項(xiàng)選