pcr培訓(xùn)考試題及答案

pcr培訓(xùn)考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應(yīng)B.基因克隆技術(shù)C.核酸雜交技術(shù)D.基因測(cè)序技術(shù)答案：A2.PCR反應(yīng)體系中，起模板作用的是（）A.dNTPB.引物C.模板DNAD.Taq酶答案：C3.Taq酶的作用是（）A.合成引物B.提供能量C.催化DNA合成D.解開DNA雙鏈答案：C4.PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.起始DNA合成B.終止DNA合成C.穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu)D.提供反應(yīng)底物答案：A5.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)的基本成分（）A.Mg2?B.蛋白酶C.模板D.引物答案：B6.PCR反應(yīng)的變性溫度一般是（）A.90-95℃B.50-60℃C.70-75℃D.30-40℃答案：A7.PCR反應(yīng)的退火溫度主要取決于（）A.模板長(zhǎng)度B.引物的Tm值C.Taq酶活性D.dNTP濃度答案：B8.PCR反應(yīng)中延伸溫度一般為（）A.72℃B.94℃C.55℃D.37℃答案：A9.進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，循環(huán)次數(shù)一般為（）A.1-5次B.10-15次C.20-30次D.50-60次答案：C10.在PCR反應(yīng)中，引物濃度過高可能導(dǎo)致（）A.產(chǎn)量增加B.非特異性擴(kuò)增C.反應(yīng)速度加快D.提高特異性答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用包括（）A.基因克隆B.遺傳病診斷C.法醫(yī)鑒定D.腫瘤研究答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物設(shè)計(jì)C.Taq酶活性D.dNTP濃度答案：ABCD3.以下關(guān)于引物設(shè)計(jì)的原則正確的是（）A.長(zhǎng)度合適B.避免二級(jí)結(jié)構(gòu)C.特異性強(qiáng)D.GC含量適中答案：ABCD4.PCR反應(yīng)的污染來源可能有（）A.標(biāo)本間交叉污染B.試劑污染C.擴(kuò)增產(chǎn)物污染D.實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染答案：ABCD5.在PCR反應(yīng)中，Mg2?的作用包括（）A.影響Taq酶活性B.影響引物退火C.影響產(chǎn)物特異性D.參與dNTP磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移答案：ABC6.以下屬于PCR衍生技術(shù)的是（）A.反轉(zhuǎn)錄PCRB.實(shí)時(shí)熒光定量PCRC.巢式PCRD.多重PCR答案：ABCD7.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)包括（）A.定量準(zhǔn)確B.靈敏度高C.可檢測(cè)低拷貝數(shù)基因D.可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程答案：ABCD8.巢式PCR的特點(diǎn)有（）A.提高特異性B.增加靈敏度C.需要兩對(duì)引物D.反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)答案：ABC9.多重PCR可以（）A.同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)基因片段B.節(jié)省時(shí)間和樣品C.提高檢測(cè)效率D.降低成本答案：ABC10.PCR反應(yīng)中，防止污染的措施有（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.反應(yīng)后產(chǎn)物及時(shí)處理D.規(guī)范操作流程答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以無限循環(huán)，以獲得更多產(chǎn)物。（）答案：錯(cuò)誤2.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤3.引物的3'端可以隨意設(shè)計(jì)。（）答案：錯(cuò)誤4.提高退火溫度一定能提高PCR特異性。（）答案：錯(cuò)誤5.PCR反應(yīng)中，dNTP濃度越高越好。（）答案：錯(cuò)誤6.只要有模板和引物，PCR反應(yīng)就能成功。（）答案：錯(cuò)誤7.實(shí)時(shí)熒光定量PCR只能用于定量檢測(cè)。（）答案：錯(cuò)誤8.巢式PCR的第一對(duì)引物和第二對(duì)引物可以隨意設(shè)計(jì)。（）答案：錯(cuò)誤9.多重PCR對(duì)引物設(shè)計(jì)要求不高。（）答案：錯(cuò)誤10.PCR反應(yīng)中，Taq酶不需要鎂離子激活。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR反應(yīng)是一種體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程的技術(shù)。以DNA為模板，在Taq酶的作用下，以dNTP為原料，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，在引物的引導(dǎo)下，經(jīng)過變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板結(jié)合）、延伸（合成新的DNA鏈）三個(gè)步驟的循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴(kuò)增。2.簡(jiǎn)述引物設(shè)計(jì)的主要注意事項(xiàng)。答案：引物長(zhǎng)度一般為18-30bp；避免引物自身形成二級(jí)結(jié)構(gòu)；引物間不能互補(bǔ)；引物3'端要嚴(yán)格配對(duì)；GC含量在40%-60%；特異性要強(qiáng)，與非目的序列不能有較多互補(bǔ)。3.說明PCR反應(yīng)中污染的主要類型及防止污染的關(guān)鍵措施。答案：污染類型主要有標(biāo)本間交叉污染、試劑污染、擴(kuò)增產(chǎn)物污染、實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染。關(guān)鍵措施包括嚴(yán)格分區(qū)操作、使用一次性耗材、反應(yīng)后產(chǎn)物及時(shí)處理、規(guī)范操作流程等。4.簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光定量PCR相對(duì)普通PCR的優(yōu)勢(shì)。答案：實(shí)時(shí)熒光定量PCR可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程；定量準(zhǔn)確；靈敏度高；能檢測(cè)低拷貝數(shù)基因，而普通PCR主要是定性檢測(cè)，在定量和靈敏度方面相對(duì)較差。五、討論題（每題5分，共4題）1.如何優(yōu)化PCR反應(yīng)條件以提高特異性？答案：可提高退火溫度，使其接近引物的Tm值；優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，保證引物特異性；降低引物濃度；調(diào)整Mg2?濃度；減少循環(huán)次數(shù)等。2.在PCR實(shí)驗(yàn)中，如何保證模板的質(zhì)量？答案：選擇合適的樣本采集方法；及時(shí)處理樣本防止降解；正確提取和純化模板DNA，去除雜質(zhì)和抑制物。3.討論巢式PCR在實(shí)際應(yīng)用中的意義。答案：巢式PCR提高了特異性和靈敏度，可用于檢測(cè)低拷貝數(shù)的目的基因，在病原體檢測(cè)、