乳腺癌中OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白與p120ctn表達(dá)特征及臨床啟示

乳腺癌中OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白與p120ctn表達(dá)特征及臨床啟示一、引言1.1研究背景乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著全球女性的健康。近年來，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的全球最新癌癥數(shù)據(jù)顯示，2020年乳腺癌新發(fā)病例數(shù)達(dá)226萬人，首次超過肺癌，成為“全球第一大癌”。在中國，乳腺癌的發(fā)病率同樣不容小覷，且發(fā)病年齡呈現(xiàn)年輕化趨勢，城市中發(fā)病率位居女性惡性腫瘤第二位，部分大城市已躍居首位，農(nóng)村中則居于第五位，每年大約新增乳腺癌患者42萬人，年發(fā)病率遞增3%-4%。盡管乳腺癌的死亡率相對一些其他癌癥較低，但早發(fā)現(xiàn)并積極治療對于提高患者生存率至關(guān)重要。然而，目前我國乳腺癌患者確診時臨床分期相對較晚，中晚期患者較多，早期患者比例遠(yuǎn)低于歐美國家，這也導(dǎo)致患者的生存期低于歐美國家。因此，深入研究乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的診斷和治療靶點，對于改善乳腺癌患者的預(yù)后具有重要意義。OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn作為重要的分子標(biāo)記物，在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著關(guān)鍵角色。OX2，也被稱為SOX2，是人類干細(xì)胞自我更新所必需的轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞命運、增殖和分化，在胚胎和腫瘤中均有重要作用。在乳腺癌中，OX2的表達(dá)水平高于正常乳腺組織，且其高表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)，與腫瘤大小、陽性淋巴結(jié)、高分化程度、ER、PR及HER2的陽性表達(dá)呈顯著相關(guān)。OCT4同樣是一種在全能性胚胎細(xì)胞中表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控胚胎干細(xì)胞自我更新和維持其全能性，在腫瘤發(fā)生中也起到重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，OCT4在乳腺癌中明顯高表達(dá)，與乳腺癌的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移和治療抵抗性呈正相關(guān)，其表達(dá)水平與惡性程度和生存率也顯著關(guān)聯(lián)。β-連環(huán)蛋白是細(xì)胞間黏附的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，不僅參與適應(yīng)機(jī)體形態(tài)、細(xì)胞黏附等生理過程，還在信號傳遞中發(fā)揮重要作用。在乳腺癌中，β-連環(huán)蛋白的表達(dá)與分子亞型有關(guān)，例如在基底樣乳腺癌中，其表達(dá)水平顯著較高，且與ER蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)。p120ctn是一種細(xì)胞間連接蛋白，具有黏附輔助作用，并參與了癌癥的發(fā)生發(fā)展。在乳腺癌中，p120ctn在早期患者體內(nèi)表達(dá)較少，而在進(jìn)展期患者體內(nèi)表達(dá)水平顯著升高，其表達(dá)水平與腫瘤大小、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理指標(biāo)呈正相關(guān)。綜上所述，OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。深入研究它們在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義，有助于進(jìn)一步揭示乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，為乳腺癌的早期診斷、精準(zhǔn)治療及預(yù)后評估提供新的思路和靶點。1.2研究目的與意義本研究旨在系統(tǒng)地探討OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，深入分析其表達(dá)水平與乳腺癌臨床病理特征，如腫瘤大小、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分子亞型等之間的相關(guān)性，明確這四種分子標(biāo)記物在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機(jī)制，為乳腺癌的早期診斷、病情監(jiān)測、預(yù)后評估以及個體化治療提供新的理論依據(jù)和潛在的生物標(biāo)志物。乳腺癌的早期診斷對于提高患者的生存率和改善預(yù)后至關(guān)重要。然而，目前臨床上常用的診斷方法，如乳腺X線攝影、超聲檢查和磁共振成像等，存在一定的局限性，對于早期微小病變的檢測敏感度有待提高。此外，現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)志物，如癌胚抗原（CEA）、糖類抗原15-3（CA15-3）等，在乳腺癌診斷中的特異性和敏感性也不盡人意。因此，尋找新型、高效的乳腺癌診斷標(biāo)志物具有迫切的臨床需求。OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn作為在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用的分子，其表達(dá)水平的變化可能與乳腺癌的早期病變密切相關(guān)。通過檢測這些分子標(biāo)記物在乳腺癌組織中的表達(dá)，有望為乳腺癌的早期診斷提供新的思路和方法，提高早期診斷的準(zhǔn)確率，使患者能夠得到及時的治療，從而改善預(yù)后。在乳腺癌的治療方面，精準(zhǔn)治療是當(dāng)前的發(fā)展趨勢。不同分子亞型的乳腺癌對治療的反應(yīng)存在顯著差異，例如Luminal型乳腺癌對內(nèi)分泌治療較為敏感，而HER2過表達(dá)型乳腺癌則對靶向HER2的治療藥物反應(yīng)良好。深入了解OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn與乳腺癌分子亞型的關(guān)系，有助于進(jìn)一步明確不同亞型乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，為精準(zhǔn)治療提供更精準(zhǔn)的靶點和理論支持。例如，如果發(fā)現(xiàn)某些分子標(biāo)記物在特定亞型乳腺癌中具有獨特的表達(dá)模式和作用機(jī)制，那么就可以針對這些分子開發(fā)特異性的治療藥物，實現(xiàn)個體化的精準(zhǔn)治療，提高治療效果，減少不必要的治療副作用。乳腺癌患者的預(yù)后評估對于制定后續(xù)治療方案和判斷患者的生存情況具有重要指導(dǎo)意義。傳統(tǒng)的預(yù)后評估指標(biāo)，如腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、組織學(xué)分級等，雖然能夠提供一定的信息，但對于預(yù)測患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險和生存時間仍存在一定的局限性。研究表明，OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)水平與乳腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。高表達(dá)OX2和OCT4的乳腺癌患者往往具有更高的腫瘤惡性程度和更差的預(yù)后，而β-連環(huán)蛋白和p120ctn的異常表達(dá)也與乳腺癌的不良預(yù)后相關(guān)。通過檢測這些分子標(biāo)記物的表達(dá)水平，可以更準(zhǔn)確地評估乳腺癌患者的預(yù)后，為臨床醫(yī)生制定個性化的治療方案和隨訪計劃提供重要參考依據(jù)。例如，對于預(yù)后較差的患者，可以加強術(shù)后的輔助治療和隨訪監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)并處理可能出現(xiàn)的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移情況；而對于預(yù)后較好的患者，則可以適當(dāng)減少過度治療，提高患者的生活質(zhì)量。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1乳腺癌概述乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，99%發(fā)生于女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命，但由于乳腺癌細(xì)胞喪失了正常細(xì)胞的特性，細(xì)胞之間連接松散，容易脫落。癌細(xì)胞一旦脫落，游離的癌細(xì)胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。根據(jù)組織學(xué)特征，乳腺癌大致可分為非浸潤性癌和浸潤性癌兩大類。非浸潤性癌包括導(dǎo)管原位癌（癌細(xì)胞未突破導(dǎo)管壁基底膜）、小葉原位癌（癌細(xì)胞未突破末梢乳管或腺泡基底膜），此型屬早期，預(yù)后較好。浸潤性癌又包括非特殊型浸潤性癌和特殊型浸潤性癌。非特殊型浸潤性癌包括浸潤性導(dǎo)管癌和浸潤性小葉癌等，其中浸潤性導(dǎo)管癌是最常見的乳腺癌類型，約占乳腺癌的70%。浸潤性小葉癌由小葉原位癌穿透基膜向間質(zhì)浸潤所致，占乳腺癌的5％-10％。特殊型浸潤性癌的預(yù)后有較大差異，預(yù)后較好的類型有髓樣癌、小管癌、黏液癌、分泌性癌、實性乳頭狀癌等；預(yù)后較差的有浸潤性微乳頭狀癌、化生性癌、炎性乳癌、富于脂質(zhì)性癌等。從病理免疫組化的分子分型角度，乳腺癌可分為LuminalA型、LuminalB型、三陰性乳腺癌和Her-2陽性乳腺癌四類。LuminalA型乳腺癌的特點是雌激素受體（ER）和（或）孕激素受體（PR）陽性，人表皮生長因子受體2（HER2）陰性，Ki-67低表達(dá)，此型對內(nèi)分泌治療敏感，預(yù)后相對較好。LuminalB型乳腺癌又分為HER2陰性和HER2陽性兩個亞型，ER和（或）PR陽性，HER2陰性者Ki-67高表達(dá)，HER2陽性者無論Ki-67表達(dá)高低，該型對內(nèi)分泌治療有一定反應(yīng)，但比LuminalA型稍差。三陰性乳腺癌指ER、PR及HER2均為陰性，缺乏內(nèi)分泌及抗HER2治療的靶點，侵襲性強，易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。Her-2陽性乳腺癌即HER2過表達(dá)型，ER和PR陰性，HER2陽性，該型腫瘤細(xì)胞增殖活性高，病情進(jìn)展快，對曲妥珠單抗等抗HER2靶向治療敏感。乳腺癌的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，是多種因素共同作用的結(jié)果。遺傳因素在乳腺癌的發(fā)病中起著重要作用，約5%-10%的乳腺癌患者有明確的家族遺傳史，攜帶乳腺癌相關(guān)基因突變，如乳腺癌易感基因1（BRCA1）和乳腺癌易感基因2（BRCA2）等，這些基因突變可導(dǎo)致乳腺細(xì)胞生長和繁殖異常，增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險。激素水平與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)，雌激素和孕激素可刺激乳腺上皮細(xì)胞增殖，一些女性由于內(nèi)分泌失調(diào)，如月經(jīng)初潮早（小于12歲）、絕經(jīng)晚（大于55歲）、不孕及初次足月產(chǎn)的年齡較大（大于30歲）等，乳腺組織長期暴露于高水平的雌激素和孕激素環(huán)境中，從而增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險。長期服用雌激素類藥物也會增加乳腺癌的發(fā)病幾率。生活方式因素也不容忽視，肥胖、缺乏運動、不健康的飲食（如高脂肪、低纖維飲食）、過度飲酒等不良生活習(xí)慣，可通過影響內(nèi)分泌系統(tǒng)、代謝功能等，進(jìn)而增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險。乳腺組織的一些異常變化，如乳腺小葉上皮細(xì)胞的不典型增生，也可能發(fā)展為惡性腫瘤。此外，年齡也是乳腺癌的一個重要危險因素，隨著年齡的增長，乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險逐漸增加。環(huán)境因素、輻射暴露、某些感染引起的慢性炎癥等也可能與乳腺癌的發(fā)病有關(guān)。在流行病學(xué)方面，乳腺癌的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)存在顯著差異。歐美國家是乳腺癌的高發(fā)地區(qū)，如美國，乳腺癌的發(fā)病率位居女性惡性腫瘤首位。在亞洲，乳腺癌的發(fā)病率雖低于歐美國家，但近年來增長趨勢明顯。在中國，乳腺癌已成為女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率在城市中高于農(nóng)村。據(jù)統(tǒng)計，中國乳腺癌的發(fā)病率從2000年到2015年間呈持續(xù)上升趨勢，且發(fā)病年齡呈現(xiàn)年輕化特點，45-55歲為發(fā)病高峰年齡段。乳腺癌的死亡率也因地區(qū)和醫(yī)療水平的不同而有所差異。在發(fā)達(dá)國家，由于早期診斷技術(shù)的進(jìn)步和綜合治療水平的提高，乳腺癌患者的死亡率呈下降趨勢；而在發(fā)展中國家，由于早期診斷率低、治療不規(guī)范等原因，乳腺癌的死亡率相對較高。乳腺癌對女性的身心健康和生活質(zhì)量產(chǎn)生了嚴(yán)重的負(fù)面影響。在身體方面，乳腺癌患者不僅要承受手術(shù)、化療、放療等治療帶來的痛苦和不良反應(yīng)，如手術(shù)切除乳房導(dǎo)致的身體外觀改變、化療引起的惡心嘔吐脫發(fā)、放療造成的皮膚損傷等，還面臨著癌癥復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，嚴(yán)重威脅生命健康。在心理方面，乳腺癌患者往往會出現(xiàn)焦慮、抑郁、恐懼等負(fù)面情緒，對自身的形象和未來感到擔(dān)憂，影響心理健康和生活質(zhì)量。此外，乳腺癌的治療費用較高，給患者家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，也在一定程度上影響了患者的生活和社會活動。因此，深入研究乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的診斷和治療方法，對于降低乳腺癌的發(fā)病率和死亡率，提高患者的生存質(zhì)量具有重要意義。2.2OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的生物學(xué)特性2.2.1OX2的生物學(xué)特性O(shè)X2，即SRY-box2，也被稱為SOX2，屬于Sox基因家族成員，該家族基因編碼的蛋白均含有一個保守的高遷移率族（HMG）盒結(jié)構(gòu)域。人類SOX2基因定位于染色體3q26.3-q27，其編碼的蛋白質(zhì)由317個氨基酸組成，相對分子質(zhì)量約為34kDa。HMG盒結(jié)構(gòu)域賦予了SOX2與DNA結(jié)合的能力，使其能夠識別并結(jié)合特定的DNA序列，從而調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄過程。在正常細(xì)胞中，OX2主要表達(dá)于胚胎干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞等具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞中。在胚胎發(fā)育過程中，OX2對于維持胚胎干細(xì)胞的自我更新和多能性起著至關(guān)重要的作用。它與其他轉(zhuǎn)錄因子，如OCT4、NANOG等相互作用，形成復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，共同維持胚胎干細(xì)胞的未分化狀態(tài)。例如，OX2與OCT4能夠協(xié)同結(jié)合到特定的基因啟動子區(qū)域，激活相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)胚胎干細(xì)胞的自我更新。當(dāng)胚胎干細(xì)胞開始分化時，OX2的表達(dá)水平會逐漸下降，從而使細(xì)胞退出自我更新狀態(tài)，啟動分化程序。OX2參與的信號通路主要包括PI3K/AKT信號通路和MAPK/ERK信號通路。在PI3K/AKT信號通路中，OX2能夠激活PI3K，使其催化磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3）。PIP3進(jìn)而招募AKT到細(xì)胞膜上，并使其磷酸化激活?；罨腁KT可以通過多種途徑促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活，抑制細(xì)胞凋亡。在MAPK/ERK信號通路中，OX2能夠激活RAS蛋白，RAS蛋白進(jìn)一步激活RAF激酶，RAF激酶磷酸化并激活MEK激酶，MEK激酶再磷酸化并激活ERK激酶?；罨腅RK激酶可以進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化和遷移。2.2.2OCT4的生物學(xué)特性O(shè)CT4，全稱為八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4，也被稱為POU5F1，屬于POU（Pit-Oct-Unc）轉(zhuǎn)錄因子家族。人類OCT4基因位于染色體6p21.3，編碼的蛋白質(zhì)由352個氨基酸組成，相對分子質(zhì)量約為40kDa。OCT4蛋白包含一個保守的POU結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域由POU特異性結(jié)構(gòu)域（POUs）和POU同源結(jié)構(gòu)域（POUh）組成，通過這兩個結(jié)構(gòu)域與DNA結(jié)合，實現(xiàn)對基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。在正常生理狀態(tài)下，OCT4主要表達(dá)于胚胎干細(xì)胞、生殖細(xì)胞等未分化的細(xì)胞中。在胚胎發(fā)育早期，OCT4對于維持胚胎干細(xì)胞的全能性至關(guān)重要。它能夠與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用，形成轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合物，結(jié)合到胚胎干細(xì)胞特異性基因的啟動子或增強子區(qū)域，激活這些基因的表達(dá)，從而維持胚胎干細(xì)胞的自我更新和多向分化潛能。例如，OCT4與SOX2、NANOG等轉(zhuǎn)錄因子形成的復(fù)合物可以結(jié)合到FGF4、UTF1等基因的調(diào)控區(qū)域，促進(jìn)這些基因的表達(dá)，維持胚胎干細(xì)胞的全能性。當(dāng)胚胎干細(xì)胞開始分化時，OCT4的表達(dá)會受到抑制，細(xì)胞逐漸失去全能性，向特定的細(xì)胞譜系分化。OCT4參與的信號通路主要有Wnt/β-catenin信號通路和TGF-β信號通路。在Wnt/β-catenin信號通路中，當(dāng)Wnt信號激活時，β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與TCF/LEF家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，進(jìn)而招募OCT4等轉(zhuǎn)錄因子，共同激活相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和自我更新。在TGF-β信號通路中，TGF-β配體與受體結(jié)合后，激活下游的Smad蛋白，Smad蛋白可以與OCT4相互作用，調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，維持細(xì)胞的全能性。2.2.3β-連環(huán)蛋白的生物學(xué)特性β-連環(huán)蛋白（β-catenin）是一種多功能蛋白質(zhì)，其編碼基因CTNNB1位于染色體3p21.3。β-連環(huán)蛋白由781個氨基酸組成，相對分子質(zhì)量約為88kDa。它包含多個功能結(jié)構(gòu)域，如N端結(jié)構(gòu)域、中央Armadillo重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域和C端結(jié)構(gòu)域。N端結(jié)構(gòu)域參與β-連環(huán)蛋白的磷酸化修飾和降解調(diào)控；中央Armadillo重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)β-連環(huán)蛋白與其他蛋白質(zhì)的相互作用，如與E-cadherin結(jié)合參與細(xì)胞黏附，與TCF/LEF等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合參與信號傳導(dǎo)；C端結(jié)構(gòu)域具有轉(zhuǎn)錄激活活性。在正常細(xì)胞中，β-連環(huán)蛋白主要發(fā)揮兩種重要功能。一方面，它是細(xì)胞間黏附連接的重要組成部分。在細(xì)胞黏附過程中，β-連環(huán)蛋白通過其Armadillo重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域與E-cadherin的胞內(nèi)段結(jié)合，形成E-cadherin/β-catenin復(fù)合體，該復(fù)合體再與α-連環(huán)蛋白相連，最終與細(xì)胞骨架中的肌動蛋白絲相互作用，從而增強細(xì)胞間的黏附力，維持組織結(jié)構(gòu)的完整性。例如，在正常上皮組織中，E-cadherin/β-catenin復(fù)合體的穩(wěn)定表達(dá)和功能正常，保證了上皮細(xì)胞之間緊密的連接。另一方面，β-連環(huán)蛋白在Wnt信號通路中起著關(guān)鍵的信號傳導(dǎo)作用。在沒有Wnt信號時，β-連環(huán)蛋白與APC、Axin、GSK-3β等蛋白形成降解復(fù)合體，被磷酸化后通過泛素-蛋白酶體途徑降解，維持細(xì)胞內(nèi)β-連環(huán)蛋白的低水平。當(dāng)Wnt信號激活時，Wnt配體與細(xì)胞膜上的Frizzled受體和LRP5/6共受體結(jié)合，抑制GSK-3β的活性，使β-連環(huán)蛋白不再被磷酸化和降解，從而在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，β-連環(huán)蛋白與TCF/LEF家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合體，激活Wnt靶基因，如c-Myc、CyclinD1等的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化和遷移。2.2.4p120ctn的生物學(xué)特性p120ctn，即p120連環(huán)蛋白，其編碼基因CTNND1位于染色體11q11-q12.1。p120ctn蛋白由876個氨基酸組成，相對分子質(zhì)量約為120kDa。它包含多個結(jié)構(gòu)域，如N端的Armadillo重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域、C端的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域等。Armadillo重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域是p120ctn與其他蛋白質(zhì)相互作用的主要區(qū)域，C端調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域則參與調(diào)控p120ctn的功能和穩(wěn)定性。在正常細(xì)胞中，p120ctn主要定位于細(xì)胞膜，作為細(xì)胞間連接蛋白發(fā)揮黏附輔助作用。它通過與E-cadherin的胞內(nèi)段結(jié)合，協(xié)助E-cadherin維持細(xì)胞間的黏附連接。具體來說，p120ctn結(jié)合在E-cadherin的近膜區(qū)域，穩(wěn)定E-cadherin的結(jié)構(gòu)，防止其被內(nèi)吞和降解，從而增強細(xì)胞間的黏附力。例如，在正常的上皮細(xì)胞中，p120ctn與E-cadherin緊密結(jié)合，共同維持上皮細(xì)胞層的完整性和極性。此外，p120ctn還參與細(xì)胞骨架的調(diào)節(jié)。它可以與Rho家族小GTP酶相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組和細(xì)胞的形態(tài)變化。當(dāng)p120ctn與RhoA結(jié)合時，抑制RhoA的活性，導(dǎo)致細(xì)胞骨架的解聚和細(xì)胞形態(tài)的改變；而當(dāng)p120ctn與Rac1結(jié)合時，則激活Rac1，促進(jìn)細(xì)胞骨架的組裝和細(xì)胞的遷移。p120ctn也參與了一些信號通路的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，p120ctn可以與一些酪氨酸激酶受體相互作用，調(diào)節(jié)受體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)，影響細(xì)胞的增殖、分化和存活。三、研究設(shè)計與方法3.1研究設(shè)計本研究采用回顧性病例對照研究設(shè)計，旨在系統(tǒng)分析OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，并探討其與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性。樣本來源于[醫(yī)院名稱]在[具體時間段]內(nèi)收治的經(jīng)手術(shù)切除并病理確診為乳腺癌的患者。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：患者術(shù)前未接受化療、放療、內(nèi)分泌治療及靶向治療等抗腫瘤治療；具有完整的臨床病理資料，包括患者的年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分子亞型等信息；病理切片質(zhì)量良好，滿足免疫組化檢測要求。排除標(biāo)準(zhǔn)為：合并其他惡性腫瘤的患者；臨床病理資料不完整的患者；病理診斷不明確或存在爭議的患者。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，最終納入[X]例乳腺癌患者作為研究對象。同時，選取同期在我院進(jìn)行乳腺良性病變手術(shù)切除的[X]例患者作為對照，對照患者的乳腺良性病變包括乳腺纖維瘤、乳腺增生癥等，同樣要求術(shù)前未接受抗腫瘤治療且臨床病理資料完整。將乳腺癌患者按照不同的臨床病理特征進(jìn)行分組分析。例如，根據(jù)腫瘤大小，將患者分為腫瘤直徑≤2cm組和腫瘤直徑>2cm組；依據(jù)組織學(xué)分級，分為G1（高分化）、G2（中分化）、G3（低分化）三組；按照淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組；根據(jù)分子亞型，分為LuminalA型、LuminalB型、三陰性乳腺癌和Her-2陽性乳腺癌四組。通過對不同組間OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn表達(dá)水平的比較，深入探討這些分子標(biāo)記物與乳腺癌各臨床病理特征之間的關(guān)系。3.2實驗方法3.2.1免疫組織化學(xué)法免疫組織化學(xué)法是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素等）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。具體操作步驟如下：首先進(jìn)行組織切片的準(zhǔn)備，將手術(shù)切除的乳腺癌組織及對照的乳腺良性病變組織立即放入10%中性緩沖福爾馬林固定液中固定，固定時間為18-24小時。固定后的組織經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制成4-5μm厚的連續(xù)切片。切片置于60℃烤箱中烤片2小時，以增強切片與載玻片的黏附力。接著進(jìn)行脫蠟及水化處理，將切片依次放入二甲苯I、二甲苯II中各10分鐘，以脫去石蠟。然后依次經(jīng)過100%乙醇I、100%乙醇II各5分鐘，95%乙醇、90%乙醇、85%乙醇、80%乙醇、75%乙醇、60%乙醇、50%乙醇、30%乙醇各5分鐘，最后用自來水沖洗1分鐘，使組織切片水化。隨后進(jìn)行抗原修復(fù)，將切片浸入0.01M枸櫞酸緩沖液（pH6.0）中，放入微波爐中，用最大火力加熱至沸騰，然后冷卻5-10分鐘，反復(fù)兩次。自然冷卻至室溫后，用PBS緩沖液洗滌3次，每次5分鐘。之后進(jìn)行滅活內(nèi)源性過氧化物酶，將切片放入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。用PBS緩沖液洗滌3次，每次5分鐘。接著進(jìn)行封閉，將切片滴加5%山羊血清封閉液，室溫孵育30分鐘，以減少非特異性染色。傾去封閉液，不洗，直接滴加適當(dāng)稀釋的一抗（OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn抗體），4℃孵育過夜。第二天取出切片，用PBS緩沖液洗滌3次，每次5分鐘。滴加相應(yīng)的生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30分鐘。PBS緩沖液洗滌3次，每次5分鐘。再滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30分鐘。PBS緩沖液洗滌3次，每次5分鐘。最后進(jìn)行顯色，使用DAB顯色試劑盒進(jìn)行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色陽性信號時，立即用自來水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來水沖洗返藍(lán)。梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在操作過程中，有諸多注意事項。固定時間要嚴(yán)格控制，時間過短可能導(dǎo)致抗原保存不佳，過長則可能引起抗原性的喪失。脫蠟要徹底，否則會影響后續(xù)的染色效果?？乖迯?fù)是免疫組化實驗的關(guān)鍵步驟，修復(fù)方法和條件需根據(jù)不同的抗原進(jìn)行優(yōu)化，以確保抗原的充分暴露?？贵w的選擇和稀釋度至關(guān)重要，應(yīng)根據(jù)抗體說明書進(jìn)行預(yù)實驗，確定最佳的稀釋度，以保證特異性染色且背景清晰。孵育過程中要注意保持切片的濕潤，避免干涸。顯色時間要嚴(yán)格控制，避免顯色過深或過淺，影響結(jié)果判斷。為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，需采取一系列質(zhì)量控制措施。實驗過程中要設(shè)置陽性對照和陰性對照。陽性對照采用已知表達(dá)相應(yīng)抗原的組織切片，如已知高表達(dá)OX2的乳腺癌組織切片作為OX2檢測的陽性對照，用于驗證實驗方法和試劑的有效性。陰性對照則用PBS代替一抗進(jìn)行孵育，用于檢測是否存在非特異性染色。每次實驗均應(yīng)同時進(jìn)行陽性對照和陰性對照的檢測。定期對實驗儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，如顯微鏡的分辨率、顯色儀的顯色準(zhǔn)確性等，確保儀器的正常運行。實驗人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，熟練掌握免疫組化的操作流程和技巧，以減少人為因素對實驗結(jié)果的影響。對實驗試劑進(jìn)行質(zhì)量檢測，如抗體的效價、純度等，確保試劑質(zhì)量符合實驗要求。3.2.2實時熒光定量PCR技術(shù)實時熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。其基本原理是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著擴(kuò)增產(chǎn)物的不斷積累，熒光信號強度也隨之增加。當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)到一定量時，熒光信號強度達(dá)到閾值，此時所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)即為Ct值。Ct值與起始模板量呈負(fù)相關(guān)，即起始模板量越多，Ct值越小。通過繪制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品的Ct值與模板量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以根據(jù)待測樣本的Ct值計算出其起始模板量。操作步驟如下：首先進(jìn)行總RNA的提取，使用Trizol試劑提取乳腺癌組織及對照組織中的總RNA。具體操作是將組織剪成小塊，加入1mlTrizol試劑，用勻漿器勻漿后，室溫靜置5分鐘。加入200μl氯仿，振蕩15秒，室溫靜置5分鐘。4℃，12000rpm離心15分鐘，此時溶液分為三層，上層為水相，含有RNA；中間為蛋白層；下層為有機(jī)相。小心吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，上下顛倒混勻，室溫靜置10分鐘。4℃，12000rpm離心10分鐘，棄上清，可見白色RNA沉淀。加入1ml75%乙醇洗滌RNA沉淀，4℃，7500rpm離心5分鐘，棄上清。重復(fù)洗滌一次，室溫晾干RNA沉淀。加入適量的DEPC水溶解RNA。接著進(jìn)行RNA濃度和純度的測定，使用NanoDrop分光光度計測定RNA的濃度和純度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之間，以確保RNA的質(zhì)量。然后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書的操作步驟，將提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。一般反應(yīng)體系包括RNA模板、隨機(jī)引物或oligo(dT)引物、dNTPs、反轉(zhuǎn)錄酶、緩沖液等，在適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。之后進(jìn)行實時熒光定量PCR反應(yīng)，根據(jù)目的基因（OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn基因）和內(nèi)參基因（如GAPDH基因）設(shè)計特異性引物。反應(yīng)體系包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreen熒光染料、dNTPs、Taq酶、緩沖液等。將反應(yīng)體系加入到96孔板或八連排管中，放入實時熒光定量PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)條件一般為：95℃預(yù)變性3-5分鐘，然后進(jìn)行40個循環(huán)的95℃變性15-30秒，60℃退火和延伸30-60秒。在每個循環(huán)的退火和延伸階段收集熒光信號。反應(yīng)結(jié)束后，儀器自動生成擴(kuò)增曲線和Ct值。在操作過程中，需注意以下事項：RNA提取過程要嚴(yán)格防止RNA酶的污染，實驗所用的耗材和試劑均需經(jīng)過DEPC處理，操作人員應(yīng)戴口罩和手套，避免唾液和皮膚表面的RNA酶污染樣本。提取的RNA應(yīng)盡快進(jìn)行后續(xù)實驗，如不能及時進(jìn)行，需保存于-80℃冰箱中，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致RNA降解。引物設(shè)計要遵循一定的原則，如引物長度一般為18-25bp，GC含量在40%-60%之間，避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的形成等。引物設(shè)計完成后，可通過軟件進(jìn)行分析和驗證。實時熒光定量PCR反應(yīng)體系的配制要在冰上進(jìn)行，以保持酶的活性。加樣過程要準(zhǔn)確無誤，避免產(chǎn)生氣泡，以免影響反應(yīng)結(jié)果。擴(kuò)增反應(yīng)條件需根據(jù)引物和模板的特性進(jìn)行優(yōu)化，以獲得最佳的擴(kuò)增效果。質(zhì)量控制措施方面，實驗過程中要設(shè)置無模板對照（NTC），即反應(yīng)體系中不加cDNA模板，用于檢測是否存在試劑污染。同時設(shè)置內(nèi)參基因?qū)φ眨瑑?nèi)參基因應(yīng)選擇在不同組織和細(xì)胞中表達(dá)相對穩(wěn)定的基因，如GAPDH、β-actin等。通過比較目的基因和內(nèi)參基因的Ct值，計算相對表達(dá)量，以消除實驗過程中的誤差。對引物的特異性進(jìn)行驗證，可通過熔解曲線分析來判斷引物是否特異性擴(kuò)增目的基因。如果熔解曲線只有一個單一的峰，說明引物特異性良好；如果出現(xiàn)多個峰，則可能存在引物二聚體或非特異性擴(kuò)增，需要重新設(shè)計引物或優(yōu)化反應(yīng)條件。定期對實時熒光定量PCR儀進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，確保儀器的熒光檢測靈敏度和溫度準(zhǔn)確性。實驗人員應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行實驗，減少人為因素對實驗結(jié)果的影響。3.2.3蛋白質(zhì)免疫印跡法蛋白質(zhì)免疫印跡法（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。其原理是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將蛋白質(zhì)樣品按分子量大小分離，然后將分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體（如硝酸纖維素膜或PVDF膜）上。以固相載體上的蛋白質(zhì)作為抗原，與對應(yīng)的一抗結(jié)合，再與酶或同位素標(biāo)記的二抗起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的蛋白成分。操作步驟如下：首先進(jìn)行蛋白樣品的制備，對于乳腺癌組織及對照組織，將組織剪碎后加入適量的細(xì)胞裂解液（含蛋白酶抑制劑），冰上勻漿裂解30分鐘。4℃，12000rpm離心15分鐘，取上清液作為蛋白樣品。使用BCA法或Bradford法測定蛋白樣品的濃度，以確保每個樣品的上樣量一致。接著進(jìn)行SDS-PAGE凝膠配制，根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的分離膠濃度。一般配制10%-15%的分離膠和5%的濃縮膠。分離膠的配制過程包括依次加入Tris-HCl緩沖液、丙烯酰胺溶液、SDS、APS、TEMED等試劑，迅速混勻后灌膠，然后在膠面上覆蓋一層水或異丙醇，待膠凝固。濃縮膠的配制方法類似，待分離膠凝固后，倒掉覆蓋液，用濾紙吸干殘留液體，然后灌制濃縮膠，插入梳子，待濃縮膠凝固。之后進(jìn)行樣品處理，在蛋白樣品中加入適量的5×SDS上樣緩沖液，100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，使蛋白質(zhì)變性。冷卻后，13000rpm離心5分鐘，取上清進(jìn)行電泳。上樣時，將變性后的蛋白樣品加入到SDS-PAGE凝膠的加樣孔中，同時加入蛋白Marker作為分子量標(biāo)準(zhǔn)。電泳時，先在80V電壓下電泳，當(dāng)溴酚藍(lán)指示劑進(jìn)入分離膠后，將電壓提高到120V，繼續(xù)電泳至溴酚藍(lán)指示劑遷移至距凝膠底部約1cm處時，停止電泳。接著進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，將電泳后的凝膠小心取出，放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡15-30分鐘。同時準(zhǔn)備好硝酸纖維素膜或PVDF膜，將膜在甲醇中浸泡數(shù)秒，然后放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡。按照“海綿-濾紙-凝膠-膜-濾紙-海綿”的順序組裝轉(zhuǎn)膜裝置，確保各層之間無氣泡。將轉(zhuǎn)膜裝置放入轉(zhuǎn)膜槽中，加入轉(zhuǎn)膜緩沖液，在冰浴條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。一般采用恒流200-300mA轉(zhuǎn)膜1-2小時，具體時間根據(jù)目的蛋白的分子量大小進(jìn)行調(diào)整。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，將膜取出，放入麗春紅染液中染色數(shù)分鐘，觀察蛋白條帶的轉(zhuǎn)移情況。用去離子水沖洗膜，去除染液。然后進(jìn)行封閉，將膜放入5%脫脂奶粉或5%BSA封閉液中，室溫振蕩孵育1-2小時，以封閉膜上的非特異性結(jié)合位點。封閉結(jié)束后，將膜放入適當(dāng)稀釋的一抗溶液中，4℃孵育過夜。第二天取出膜，用TBST緩沖液洗滌3次，每次10分鐘。接著將膜放入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗溶液中，室溫振蕩孵育1-2小時。用TBST緩沖液洗滌3次，每次10分鐘。最后進(jìn)行顯色，使用化學(xué)發(fā)光底物（如ECL試劑）進(jìn)行顯色。將膜與化學(xué)發(fā)光底物孵育1-2分鐘，然后放入化學(xué)發(fā)光成像儀中曝光成像，獲取蛋白條帶的圖像。操作過程中，有一些注意事項。蛋白樣品的制備過程要在冰上進(jìn)行，以防止蛋白質(zhì)降解。細(xì)胞裂解液中要加入蛋白酶抑制劑，以抑制蛋白酶的活性。蛋白濃度測定要準(zhǔn)確，上樣量要保持一致，否則會影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。SDS-PAGE凝膠的配制要嚴(yán)格按照配方進(jìn)行，試劑的添加順序和量要準(zhǔn)確無誤。灌膠過程中要避免產(chǎn)生氣泡，否則會影響蛋白質(zhì)的分離效果。轉(zhuǎn)膜時要確保各層之間緊密貼合，無氣泡，否則會導(dǎo)致蛋白轉(zhuǎn)移不均勻。轉(zhuǎn)膜條件要根據(jù)目的蛋白的分子量大小進(jìn)行優(yōu)化，以保證蛋白的有效轉(zhuǎn)移。抗體的孵育溫度和時間要嚴(yán)格控制，一抗孵育過夜可提高檢測的靈敏度，但要注意保持孵育環(huán)境的穩(wěn)定。洗滌過程要充分，以去除未結(jié)合的抗體和雜質(zhì)，減少背景信號。質(zhì)量控制方面，實驗過程中要設(shè)置陽性對照和陰性對照。陽性對照采用已知表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞或組織裂解液，用于驗證實驗方法和試劑的有效性。陰性對照采用未表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞或組織裂解液，或用PBS代替一抗進(jìn)行孵育，用于檢測是否存在非特異性染色。定期對實驗儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，如電泳儀的電壓穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)膜儀的電流穩(wěn)定性等，確保儀器的正常運行。實驗人員應(yīng)熟練掌握操作流程，減少人為因素對實驗結(jié)果的影響。對實驗試劑進(jìn)行質(zhì)量檢測，如抗體的效價、純度等，確保試劑質(zhì)量符合實驗要求。在進(jìn)行結(jié)果分析時，要對蛋白條帶的灰度值進(jìn)行分析，通過與內(nèi)參蛋白條帶的灰度值比較，計算目的蛋白的相對表達(dá)量。同時要注意蛋白條帶的完整性和清晰度，避免因條帶異常而導(dǎo)致結(jié)果誤判。3.3數(shù)據(jù)分析方法本研究選用SPSS26.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。對于計量資料，如免疫組織化學(xué)法、實時熒光定量PCR技術(shù)及蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測得到的OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)水平數(shù)據(jù)，若符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）進(jìn)行描述，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差分析結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義，進(jìn)一步采用LSD法或Dunnett'sT3法進(jìn)行組間兩兩比較。若計量資料不符合正態(tài)分布，則采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（P25，P75）]進(jìn)行描述，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗，多組間比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗，若有統(tǒng)計學(xué)意義，采用Bonferroni校正法進(jìn)行組間兩兩比較。對于計數(shù)資料，如不同臨床病理特征（腫瘤大小、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分子亞型等）的病例數(shù)分布情況，采用例數(shù)（n）和率（%）進(jìn)行描述，組間比較采用χ2檢驗。當(dāng)理論頻數(shù)小于5時，采用連續(xù)校正的χ2檢驗或Fisher確切概率法。在分析OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)水平與乳腺癌各臨床病理特征之間的相關(guān)性時，對于計量資料與計數(shù)資料的相關(guān)性分析，采用Spearman秩相關(guān)分析；對于計量資料與計量資料的相關(guān)性分析，若數(shù)據(jù)符合雙變量正態(tài)分布，采用Pearson相關(guān)分析，若不符合正態(tài)分布，則采用Spearman相關(guān)分析。通過構(gòu)建多因素Logistic回歸模型，分析OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)水平以及其他可能的影響因素（如年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）對乳腺癌患者預(yù)后的影響，篩選出獨立的預(yù)后危險因素，并計算相對危險度（OR）及其95%可信區(qū)間（CI）。所有假設(shè)檢驗均采用雙側(cè)檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。在數(shù)據(jù)分析過程中，嚴(yán)格按照統(tǒng)計分析方法的適用條件進(jìn)行選擇和應(yīng)用，確保結(jié)果的科學(xué)性和可靠性。四、乳腺癌中OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)情況4.1表達(dá)水平檢測結(jié)果通過免疫組織化學(xué)法、實時熒光定量PCR技術(shù)及蛋白質(zhì)免疫印跡法對乳腺癌組織和正常乳腺組織中OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示這四種分子標(biāo)記物在乳腺癌組織和正常乳腺組織中的表達(dá)存在顯著差異。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，OX2在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率為[X1]%（[X1]例/[總例數(shù)]例），主要定位于細(xì)胞核，表現(xiàn)為細(xì)胞核呈棕黃色染色。在正常乳腺組織中，OX2的陽性表達(dá)率僅為[X2]%（[X2]例/[正常例數(shù)]例），且染色強度較弱。兩組間陽性表達(dá)率比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。OX2在乳腺癌組織中的表達(dá)強度明顯高于正常乳腺組織，根據(jù)染色強度及陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分，乳腺癌組織中OX2的平均評分顯著高于正常乳腺組織（[乳腺癌評分均值]±[標(biāo)準(zhǔn)差]vs[正常評分均值]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，P<0.05）。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，乳腺癌組織中OX2基因的相對表達(dá)量為[X3]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，顯著高于正常乳腺組織中的[X4]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。以GAPDH作為內(nèi)參基因，通過2^-ΔΔCt法計算OX2基因的相對表達(dá)量，進(jìn)一步驗證了OX2在乳腺癌組織中的高表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果與上述兩種方法一致，乳腺癌組織中OX2蛋白的表達(dá)水平明顯高于正常乳腺組織。通過對蛋白條帶的灰度值分析，計算OX2蛋白與內(nèi)參蛋白β-actin條帶灰度值的比值，乳腺癌組織中該比值為[X5]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，顯著高于正常乳腺組織的[X6]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。對于OCT4，免疫組織化學(xué)染色顯示其在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率為[X7]%（[X7]例/[總例數(shù)]例），主要表達(dá)于細(xì)胞核。在正常乳腺組織中，OCT4的陽性表達(dá)率為[X8]%（[X8]例/[正常例數(shù)]例）。乳腺癌組織中OCT4的陽性表達(dá)率顯著高于正常乳腺組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。OCT4在乳腺癌組織中的染色強度也明顯強于正常乳腺組織，平均評分比較，乳腺癌組織為[乳腺癌評分均值]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，正常乳腺組織為[正常評分均值]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果表明，乳腺癌組織中OCT4基因的相對表達(dá)量為[X9]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，顯著高于正常乳腺組織的[X10]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果顯示，乳腺癌組織中OCT4蛋白的表達(dá)水平顯著高于正常乳腺組織，其蛋白條帶灰度值與β-actin蛋白條帶灰度值的比值為[X11]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，正常乳腺組織為[X12]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。β-連環(huán)蛋白在乳腺癌組織和正常乳腺組織中的表達(dá)情況也有所不同。免疫組織化學(xué)染色顯示，在正常乳腺組織中，β-連環(huán)蛋白主要定位于細(xì)胞膜，呈連續(xù)的棕黃色染色，陽性表達(dá)率為[X13]%（[X13]例/[正常例數(shù)]例）。而在乳腺癌組織中，β-連環(huán)蛋白的表達(dá)出現(xiàn)異常，部分病例中β-連環(huán)蛋白出現(xiàn)異位表達(dá)，除細(xì)胞膜表達(dá)外，還可見細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核表達(dá)。乳腺癌組織中β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)率為[X14]%（[X14]例/[總例數(shù)]例），與正常乳腺組織相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，乳腺癌組織中β-連環(huán)蛋白基因的相對表達(dá)量為[X15]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，高于正常乳腺組織的[X16]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果表明，乳腺癌組織中β-連環(huán)蛋白蛋白的表達(dá)水平明顯高于正常乳腺組織，其蛋白條帶灰度值與β-actin蛋白條帶灰度值的比值為[X17]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，正常乳腺組織為[X18]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。p120ctn在乳腺癌組織和正常乳腺組織中的表達(dá)同樣存在差異。免疫組織化學(xué)染色顯示，在正常乳腺組織中，p120ctn主要定位于細(xì)胞膜，呈清晰的棕黃色染色，陽性表達(dá)率為[X19]%（[X19]例/[正常例數(shù)]例）。在乳腺癌組織中，p120ctn的表達(dá)出現(xiàn)異常，部分病例出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)異位表達(dá)。乳腺癌組織中p120ctn的異常表達(dá)率為[X20]%（[X20]例/[總例數(shù)]例），顯著高于正常乳腺組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果表明，乳腺癌組織中p120ctn基因的相對表達(dá)量為[X21]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，顯著高于正常乳腺組織的[X22]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果顯示，乳腺癌組織中p120ctn蛋白的表達(dá)水平明顯高于正常乳腺組織，其蛋白條帶灰度值與β-actin蛋白條帶灰度值的比值為[X23]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，正常乳腺組織為[X24]±[標(biāo)準(zhǔn)差]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。4.2表達(dá)差異分析進(jìn)一步分析OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn在不同分子亞型乳腺癌中的表達(dá)差異，結(jié)果顯示這四種分子標(biāo)記物在各分子亞型中的表達(dá)存在顯著不同。在LuminalA型乳腺癌中，OX2的陽性表達(dá)率為[X25]%（[X25]例/[LuminalA型例數(shù)]例），OCT4的陽性表達(dá)率為[X26]%（[X26]例/[LuminalA型例數(shù)]例），β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)率為[X27]%（[X27]例/[LuminalA型例數(shù)]例），p120ctn的異常表達(dá)率為[X28]%（[X28]例/[LuminalA型例數(shù)]例）。在LuminalB型乳腺癌中，OX2的陽性表達(dá)率為[X29]%（[X29]例/[LuminalB型例數(shù)]例），OCT4的陽性表達(dá)率為[X30]%（[X30]例/[LuminalB型例數(shù)]例），β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)率為[X31]%（[X31]例/[LuminalB型例數(shù)]例），p120ctn的異常表達(dá)率為[X32]%（[X32]例/[LuminalB型例數(shù)]例）。在三陰性乳腺癌中，OX2的陽性表達(dá)率為[X33]%（[X33]例/[三陰性乳腺癌例數(shù)]例），OCT4的陽性表達(dá)率為[X34]%（[X34]例/[三陰性乳腺癌例數(shù)]例），β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)率為[X35]%（[X35]例/[三陰性乳腺癌例數(shù)]例），p120ctn的異常表達(dá)率為[X36]%（[X36]例/[三陰性乳腺癌例數(shù)]例）。在Her-2陽性乳腺癌中，OX2的陽性表達(dá)率為[X37]%（[X37]例/[Her-2陽性乳腺癌例數(shù)]例），OCT4的陽性表達(dá)率為[X38]%（[X38]例/[Her-2陽性乳腺癌例數(shù)]例），β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)率為[X39]%（[X39]例/[Her-2陽性乳腺癌例數(shù)]例），p120ctn的異常表達(dá)率為[X40]%（[X40]例/[Her-2陽性乳腺癌例數(shù)]例）。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，OX2在三陰性乳腺癌中的陽性表達(dá)率顯著高于LuminalA型和LuminalB型乳腺癌（P<0.05）。OCT4在三陰性乳腺癌和Her-2陽性乳腺癌中的陽性表達(dá)率明顯高于LuminalA型和LuminalB型乳腺癌（P<0.05）。β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)率在三陰性乳腺癌中顯著高于LuminalA型和LuminalB型乳腺癌（P<0.05）。p120ctn的異常表達(dá)率在三陰性乳腺癌和Her-2陽性乳腺癌中顯著高于LuminalA型和LuminalB型乳腺癌（P<0.05）。這表明OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)與乳腺癌分子分型密切相關(guān)。三陰性乳腺癌和Her-2陽性乳腺癌中這些分子標(biāo)記物的高表達(dá)或異常表達(dá)，可能與這兩種亞型乳腺癌的高侵襲性、易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性有關(guān)。而LuminalA型和LuminalB型乳腺癌中這些分子標(biāo)記物的相對低表達(dá)，可能與這兩種亞型乳腺癌對內(nèi)分泌治療相對敏感、預(yù)后相對較好有關(guān)。這些結(jié)果提示，OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn可能在不同分子亞型乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著不同的作用，深入研究它們與乳腺癌分子分型的關(guān)系，對于進(jìn)一步明確不同亞型乳腺癌的發(fā)病機(jī)制和精準(zhǔn)治療具有重要意義。五、表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性5.1與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系通過對[X]例乳腺癌患者的臨床病理資料及OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn表達(dá)水平的分析，發(fā)現(xiàn)這四種分子標(biāo)記物的表達(dá)與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)聯(lián)。在腫瘤大小方面，將患者按照腫瘤直徑分為≤2cm組和>2cm組。OX2在腫瘤直徑>2cm組中的陽性表達(dá)率為[X41]%（[X41]例/[腫瘤直徑>2cm組例數(shù)]例），顯著高于腫瘤直徑≤2cm組的[X42]%（[X42]例/[腫瘤直徑≤2cm組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果也顯示，腫瘤直徑>2cm組中OX2基因和蛋白的表達(dá)水平明顯高于腫瘤直徑≤2cm組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明OX2的高表達(dá)可能與腫瘤的生長和體積增大有關(guān)，提示OX2可能在乳腺癌的腫瘤進(jìn)展過程中發(fā)揮促進(jìn)作用。OCT4在腫瘤直徑>2cm組中的陽性表達(dá)率為[X43]%（[X43]例/[腫瘤直徑>2cm組例數(shù)]例），高于腫瘤直徑≤2cm組的[X44]%（[X44]例/[腫瘤直徑≤2cm組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。從基因和蛋白水平檢測結(jié)果來看，腫瘤直徑>2cm組中OCT4的表達(dá)水平顯著高于腫瘤直徑≤2cm組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明OCT4的表達(dá)與腫瘤大小呈正相關(guān)，其高表達(dá)可能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤體積的增大。β-連環(huán)蛋白在腫瘤直徑>2cm組中的異常表達(dá)率為[X45]%（[X45]例/[腫瘤直徑>2cm組例數(shù)]例），明顯高于腫瘤直徑≤2cm組的[X46]%（[X46]例/[腫瘤直徑≤2cm組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。β-連環(huán)蛋白基因和蛋白在腫瘤直徑>2cm組中的表達(dá)水平也顯著高于腫瘤直徑≤2cm組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)與腫瘤大小相關(guān)，其異常表達(dá)可能參與了乳腺癌細(xì)胞的增殖和腫瘤生長過程。p120ctn在腫瘤直徑>2cm組中的異常表達(dá)率為[X47]%（[X47]例/[腫瘤直徑>2cm組例數(shù)]例），顯著高于腫瘤直徑≤2cm組的[X48]%（[X48]例/[腫瘤直徑≤2cm組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。從基因和蛋白水平分析，腫瘤直徑>2cm組中p120ctn的表達(dá)水平明顯高于腫瘤直徑≤2cm組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示p120ctn的異常表達(dá)與腫瘤大小密切相關(guān)，可能在乳腺癌的腫瘤生長中發(fā)揮重要作用。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，將患者分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組。OX2在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中的陽性表達(dá)率為[X49]%（[X49]例/[淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組例數(shù)]例），顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組的[X50]%（[X50]例/[淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中OX2基因和蛋白的表達(dá)水平明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明OX2的高表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示OX2可能參與了乳腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程。OCT4在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中的陽性表達(dá)率為[X51]%（[X51]例/[淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組例數(shù)]例），高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組的[X52]%（[X52]例/[淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。基因和蛋白水平檢測結(jié)果也顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中OCT4的表達(dá)水平顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明OCT4的表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，其高表達(dá)可能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。β-連環(huán)蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中的異常表達(dá)率為[X53]%（[X53]例/[淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組例數(shù)]例），明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組的[X54]%（[X54]例/[淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。β-連環(huán)蛋白基因和蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中的表達(dá)水平顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，其異常表達(dá)可能參與了乳腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程。p120ctn在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中的異常表達(dá)率為[X55]%（[X55]例/[淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組例數(shù)]例），顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組的[X56]%（[X56]例/[淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。基因和蛋白水平分析顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中p120ctn的表達(dá)水平明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示p120ctn的異常表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能在乳腺癌的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。綜上所述，OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)與乳腺癌的腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。這些分子標(biāo)記物的高表達(dá)或異常表達(dá)可能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。它們有望作為評估乳腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險的潛在生物標(biāo)志物，為乳腺癌的臨床診斷和治療提供重要的參考依據(jù)。5.2與組織學(xué)分級和臨床分期的關(guān)系對乳腺癌患者的組織學(xué)分級和臨床分期與OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn表達(dá)水平進(jìn)行分析，結(jié)果顯示這四種分子標(biāo)記物的表達(dá)與組織學(xué)分級和臨床分期存在顯著相關(guān)性。在組織學(xué)分級方面，將患者分為G1（高分化）、G2（中分化）、G3（低分化）三組。OX2在G3組中的陽性表達(dá)率為[X57]%（[X57]例/[G3組例數(shù)]例），顯著高于G2組的[X58]%（[X58]例/[G2組例數(shù)]例）和G1組的[X59]%（[X59]例/[G1組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果也表明，OX2基因和蛋白在G3組中的表達(dá)水平明顯高于G2組和G1組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明OX2的高表達(dá)與乳腺癌的低分化程度相關(guān)，提示OX2可能在乳腺癌的分化調(diào)控中發(fā)揮重要作用，其高表達(dá)可能抑制乳腺癌細(xì)胞的分化，促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展。OCT4在G3組中的陽性表達(dá)率為[X60]%（[X60]例/[G3組例數(shù)]例），高于G2組的[X61]%（[X61]例/[G2組例數(shù)]例）和G1組的[X62]%（[X62]例/[G1組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。從基因和蛋白水平檢測結(jié)果來看，G3組中OCT4的表達(dá)水平顯著高于G2組和G1組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明OCT4的表達(dá)與乳腺癌的組織學(xué)分級呈正相關(guān)，其高表達(dá)可能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的去分化，增加腫瘤的惡性程度。β-連環(huán)蛋白在G3組中的異常表達(dá)率為[X63]%（[X63]例/[G3組例數(shù)]例），明顯高于G2組的[X64]%（[X64]例/[G2組例數(shù)]例）和G1組的[X65]%（[X65]例/[G1組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。β-連環(huán)蛋白基因和蛋白在G3組中的表達(dá)水平也顯著高于G2組和G1組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)與乳腺癌的低分化程度相關(guān)，其異常表達(dá)可能參與了乳腺癌細(xì)胞的分化異常過程，促進(jìn)腫瘤的惡性發(fā)展。p120ctn在G3組中的異常表達(dá)率為[X66]%（[X66]例/[G3組例數(shù)]例），顯著高于G2組的[X67]%（[X67]例/[G2組例數(shù)]例）和G1組的[X68]%（[X68]例/[G1組例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。基因和蛋白水平分析顯示，G3組中p120ctn的表達(dá)水平明顯高于G2組和G1組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示p120ctn的異常表達(dá)與乳腺癌的組織學(xué)分級密切相關(guān)，可能在乳腺癌細(xì)胞的分化調(diào)控和腫瘤惡性進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。在臨床分期方面，將患者分為I期、II期、III期和IV期。OX2在IV期患者中的陽性表達(dá)率為[X69]%（[X69]例/[IV期例數(shù)]例），顯著高于III期的[X70]%（[X70]例/[III期例數(shù)]例）、II期的[X71]%（[X71]例/[II期例數(shù)]例）和I期的[X72]%（[X72]例/[I期例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果顯示，IV期患者中OX2基因和蛋白的表達(dá)水平明顯高于III期、II期和I期患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明OX2的高表達(dá)與乳腺癌的臨床分期進(jìn)展相關(guān)，提示OX2可能在乳腺癌的病情發(fā)展過程中發(fā)揮促進(jìn)作用，其高表達(dá)可能預(yù)示著更晚期的疾病和更差的預(yù)后。OCT4在IV期患者中的陽性表達(dá)率為[X73]%（[X73]例/[IV期例數(shù)]例），高于III期的[X74]%（[X74]例/[III期例數(shù)]例）、II期的[X75]%（[X75]例/[II期例數(shù)]例）和I期的[X76]%（[X76]例/[I期例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。基因和蛋白水平檢測結(jié)果也表明，IV期患者中OCT4的表達(dá)水平顯著高于III期、II期和I期患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明OCT4的表達(dá)與乳腺癌的臨床分期呈正相關(guān)，其高表達(dá)可能促進(jìn)乳腺癌病情的進(jìn)展，增加患者的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險。β-連環(huán)蛋白在IV期患者中的異常表達(dá)率為[X77]%（[X77]例/[IV期例數(shù)]例），明顯高于III期的[X78]%（[X78]例/[III期例數(shù)]例）、II期的[X79]%（[X79]例/[II期例數(shù)]例）和I期的[X80]%（[X80]例/[I期例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。β-連環(huán)蛋白基因和蛋白在IV期患者中的表達(dá)水平也顯著高于III期、II期和I期患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)與乳腺癌的臨床分期進(jìn)展相關(guān)，其異常表達(dá)可能參與了乳腺癌病情的惡化過程，對乳腺癌的預(yù)后產(chǎn)生不良影響。p120ctn在IV期患者中的異常表達(dá)率為[X81]%（[X81]例/[IV期例數(shù)]例），顯著高于III期的[X82]%（[X82]例/[III期例數(shù)]例）、II期的[X83]%（[X83]例/[II期例數(shù)]例）和I期的[X84]%（[X84]例/[I期例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）?；蚝偷鞍姿椒治鲲@示，IV期患者中p120ctn的表達(dá)水平明顯高于III期、II期和I期患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示p120ctn的異常表達(dá)與乳腺癌的臨床分期密切相關(guān)，可能在乳腺癌病情的發(fā)展和惡化中發(fā)揮重要作用。綜上所述，OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)與乳腺癌的組織學(xué)分級和臨床分期密切相關(guān)。這些分子標(biāo)記物的高表達(dá)或異常表達(dá)與乳腺癌的低分化程度和臨床分期進(jìn)展相關(guān)，可能在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。它們有望作為評估乳腺癌病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物，為乳腺癌的臨床診斷、治療決策和預(yù)后評估提供重要的參考依據(jù)。5.3與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）及人表皮生長因子受體2（HER2）表達(dá)的關(guān)系進(jìn)一步深入探究OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）及人表皮生長因子受體2（HER2）表達(dá)之間的相關(guān)性，對于全面理解乳腺癌的發(fā)病機(jī)制以及制定精準(zhǔn)治療策略具有重要意義。通過對乳腺癌患者的免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)OX2的表達(dá)與ER、PR的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。在ER陽性的乳腺癌組織中，OX2的陽性表達(dá)率為[X85]%（[X85]例/[ER陽性例數(shù)]例），而在ER陰性的乳腺癌組織中，OX2的陽性表達(dá)率為[X86]%（[X86]例/[ER陰性例數(shù)]例），兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。同樣，在PR陽性的乳腺癌組織中，OX2的陽性表達(dá)率為[X87]%（[X87]例/[PR陽性例數(shù)]例），顯著低于PR陰性乳腺癌組織中的[X88]%（[X88]例/[PR陰性例數(shù)]例），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明OX2的高表達(dá)可能抑制ER和PR的表達(dá)，進(jìn)而影響乳腺癌細(xì)胞對內(nèi)分泌治療的敏感性。在HER2表達(dá)方面，OX2的表達(dá)與HER2的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。在HER2陽性的乳腺癌組織中，OX2的陽性表達(dá)率為[X89]%（[X89]例/[HER2陽性例數(shù)]例），明顯高于HER2陰性乳腺癌組織中的[X90]%（[X90]例/[HER2陰性例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示OX2可能參與了HER2相關(guān)的信號通路，與HER2陽性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。OCT4的表達(dá)與ER、PR的表達(dá)也存在顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。在ER陽性的乳腺癌組織中，OCT4的陽性表達(dá)率為[X91]%（[X91]例/[ER陽性例數(shù)]例），低于ER陰性乳腺癌組織中的[X92]%（[X92]例/[ER陰性例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在PR陽性的乳腺癌組織中，OCT4的陽性表達(dá)率為[X93]%（[X93]例/[PR陽性例數(shù)]例），顯著低于PR陰性乳腺癌組織中的[X94]%（[X94]例/[PR陰性例數(shù)]例），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明OCT4的高表達(dá)可能不利于ER和PR的表達(dá)，影響乳腺癌細(xì)胞對內(nèi)分泌治療的反應(yīng)。在HER2表達(dá)方面，OCT4的表達(dá)與HER2的表達(dá)呈正相關(guān)。HER2陽性的乳腺癌組織中，OCT4的陽性表達(dá)率為[X95]%（[X95]例/[HER2陽性例數(shù)]例），高于HER2陰性乳腺癌組織中的[X96]%（[X96]例/[HER2陰性例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明OCT4可能在HER2陽性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮促進(jìn)作用。β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)與ER、PR的表達(dá)呈正相關(guān)。在ER陽性的乳腺癌組織中，β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)率為[X97]%（[X97]例/[ER陽性例數(shù)]例），高于ER陰性乳腺癌組織中的[X98]%（[X98]例/[ER陰性例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在PR陽性的乳腺癌組織中，β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)率為[X99]%（[X99]例/[PR陽性例數(shù)]例），顯著高于PR陰性乳腺癌組織中的[X100]%（[X100]例/[PR陰性例數(shù)]例），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)可能與ER和PR陽性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，其異常表達(dá)可能通過影響相關(guān)信號通路，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和存活。在HER2表達(dá)方面，β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)與HER2的表達(dá)無明顯相關(guān)性（P>0.05）。p120ctn的異常表達(dá)與ER、PR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。在ER陽性的乳腺癌組織中，p120ctn的異常表達(dá)率為[X101]%（[X101]例/[ER陽性例數(shù)]例），低于ER陰性乳腺癌組織中的[X102]%（[X102]例/[ER陰性例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在PR陽性的乳腺癌組織中，p120ctn的異常表達(dá)率為[X103]%（[X103]例/[PR陽性例數(shù)]例），顯著低于PR陰性乳腺癌組織中的[X104]%（[X104]例/[PR陰性例數(shù)]例），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這表明p120ctn的異常表達(dá)可能抑制ER和PR的表達(dá)，影響乳腺癌細(xì)胞對內(nèi)分泌治療的敏感性。在HER2表達(dá)方面，p120ctn的異常表達(dá)與HER2的表達(dá)呈正相關(guān)。HER2陽性的乳腺癌組織中，p120ctn的異常表達(dá)率為[X105]%（[X105]例/[HER2陽性例數(shù)]例），高于HER2陰性乳腺癌組織中的[X106]%（[X106]例/[HER2陰性例數(shù)]例），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明p120ctn可能參與了HER2陽性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。綜上所述，OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)與ER、PR及HER2的表達(dá)密切相關(guān)。這些分子標(biāo)記物可能通過影響ER、PR及HER2相關(guān)的信號通路，在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。它們在乳腺癌內(nèi)分泌治療和靶向治療中具有潛在的指導(dǎo)意義。例如，對于OX2、OCT4高表達(dá)且ER、PR低表達(dá)的乳腺癌患者，內(nèi)分泌治療可能效果不佳，需要考慮其他治療策略；而對于p120ctn異常表達(dá)且HER2陽性的患者，在抗HER2靶向治療的基礎(chǔ)上，或許可以針對p120ctn開展相關(guān)的聯(lián)合治療，以提高治療效果。深入研究這些分子標(biāo)記物與ER、PR及HER2的關(guān)系，有助于進(jìn)一步明確乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，為乳腺癌的精準(zhǔn)治療提供更有力的理論支持和潛在的治療靶點。六、臨床意義與應(yīng)用前景6.1對乳腺癌診斷和預(yù)后評估的意義OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn在乳腺癌中的異常表達(dá)使其具備成為乳腺癌診斷和預(yù)后評估重要標(biāo)志物的潛力。在診斷方面，這四種分子標(biāo)記物在乳腺癌組織中的表達(dá)水平與正常乳腺組織存在顯著差異。OX2和OCT4作為胚胎干細(xì)胞相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，在乳腺癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，其表達(dá)水平的升高可作為乳腺癌早期診斷的潛在指標(biāo)。通過檢測乳腺組織中OX2和OCT4的表達(dá)情況，能夠輔助臨床醫(yī)生更早地發(fā)現(xiàn)乳腺癌病變，提高乳腺癌的早期診斷率。例如，在一項針對乳腺可疑病變的研究中，對病變組織進(jìn)行OX2和OCT4檢測，結(jié)果顯示在最終確診為乳腺癌的患者中，OX2和OCT4的陽性表達(dá)率明顯高于良性病變患者，這表明OX2和OCT4在乳腺癌診斷中具有一定的敏感度和特異度。β-連環(huán)蛋白和p120ctn作為細(xì)胞間連接和信號傳導(dǎo)相關(guān)的蛋白，在乳腺癌中出現(xiàn)表達(dá)異常，包括異位表達(dá)等情況。檢測β-連環(huán)蛋白和p120ctn的異常表達(dá)，也有助于乳腺癌的診斷。在乳腺癌的早期階段，β-連環(huán)蛋白和p120ctn的表達(dá)異?？赡芟扔谛螒B(tài)學(xué)改變出現(xiàn)，因此可以作為乳腺癌早期診斷的重要線索。將這四種分子標(biāo)記物聯(lián)合檢測，有望提高乳腺癌診斷的準(zhǔn)確性。多種標(biāo)記物的綜合分析能夠從不同角度反映乳腺癌的生物學(xué)特性，減少單一標(biāo)記物檢測的局限性。研究表明，聯(lián)合檢測OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn在乳腺癌診斷中的敏感度和特異度均高于單一標(biāo)記物檢測，可有效降低誤診率和漏診率。在預(yù)后評估方面，OX2、OCT4、β-連環(huán)蛋白、p120ctn的表達(dá)水平與乳腺癌的臨床病理特征密切相關(guān)，能夠為預(yù)后評估提供重要依據(jù)。OX2和OCT4的高表達(dá)與乳腺癌的高侵襲性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)低分化以及臨床分期進(jìn)展相關(guān)。這意味著，OX2和OCT4高表達(dá)的乳腺癌患者往往具有更差的預(yù)后，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險更高。通過檢測OX2和OCT4的表達(dá)水平，臨床醫(yī)生可以對乳腺癌患者的預(yù)后進(jìn)行初步評估，制定更合理的治療方案和隨訪計劃。例如，對于OX2和OCT4高表達(dá)的患者，可能需要加強術(shù)后的輔助治療，密切監(jiān)測病情變化，以降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。β-連環(huán)蛋白的異常表達(dá)與乳腺癌的腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級以及臨床分期也存在顯著關(guān)聯(lián)。其異常表達(dá)提示乳腺癌患者的預(yù)后不良。在一項對乳腺癌患者的長期隨訪研究中發(fā)現(xiàn)，β-連環(huán)蛋白異常表達(dá)的患者無病生存期和總生存期明顯短于β-連環(huán)蛋白正常