口腔培養(yǎng)細(xì)胞的取材與分離

培養(yǎng)細(xì)胞的取材與別離取材部位準(zhǔn)確嚴(yán)格無菌操作，防止微生物和化學(xué)污染盡快培養(yǎng)，24h以內(nèi)減小損傷，使用銳器，防止撕扯制備標(biāo)本，以便鑒定第一頁，共三十頁。體外細(xì)胞的純化人工純化：酶消化法、機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、克隆法、培養(yǎng)基限定法、流式細(xì)胞儀別離法等自然純化第二頁，共三十頁。細(xì)胞凍存要點(diǎn)：冷凍過程要緩慢凍存細(xì)胞必須處在對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞復(fù)蘇要點(diǎn)：快速解凍解凍后的細(xì)胞應(yīng)離心去除冷凍保護(hù)劑后再接種到培養(yǎng)基中第三頁，共三十頁。細(xì)胞培養(yǎng)的污染、檢測(cè)與控制微生物污染：細(xì)菌，真菌，支原體等污染污染的途徑：空氣、器材、操作、試劑、組織標(biāo)本微生物污染的檢測(cè)微生物污染的控制：抗生素除菌法；加溫處理第四頁，共三十頁。細(xì)胞培養(yǎng)常用方法：組織塊培養(yǎng)法酶消化法第五頁，共三十頁。第二節(jié)口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)第六頁，共三十頁。一、牙齒相關(guān)細(xì)胞第七頁，共三十頁。牙髓細(xì)胞〔Dentalpulpcells〕培養(yǎng)方法：組織塊法；酶消化法細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)免疫組織化學(xué)染色體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點(diǎn)功能特點(diǎn)第八頁，共三十頁。牙髓細(xì)胞波形絲蛋白染色(+)未分化間充質(zhì)細(xì)胞成纖維細(xì)胞第九頁，共三十頁。牙髓細(xì)胞體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖〔Cellproliferationinvitro〕

生長增殖較快

傳代期較短，15-20代(2-4M)

可復(fù)層生長第十頁，共三十頁。牙髓細(xì)胞功能特點(diǎn)

堿性磷酸酶〔alkalinephosphatase,ALP)活性礦化現(xiàn)象(VonKossa)對(duì)細(xì)胞因子的反響對(duì)蓋髓劑的反響第十一頁，共三十頁。牙髓細(xì)胞培養(yǎng)方法：組織塊培養(yǎng)法；酶消化法細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)：成纖維細(xì)胞型〔與牙周膜細(xì)胞類似〕免疫組織化學(xué)染色：波形絲蛋白〔+〕；角蛋白〔-〕體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點(diǎn)功能特點(diǎn)第十二頁，共三十頁。牙周膜細(xì)胞〔periodontalligamentcells〕培養(yǎng)方法：組織塊法；酶消化法細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)免疫組織化學(xué)染色體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長增殖特點(diǎn)功能特點(diǎn)牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響因素原代人牙周膜成纖維細(xì)胞傳代人牙周膜成纖維細(xì)胞第十三頁，共三十頁。

免疫組織化學(xué)染色波形絲蛋白染色陽性角蛋白染色陰性第十四頁，共三十頁。牙周膜細(xì)胞

成纖維樣細(xì)胞，培養(yǎng)成功率高

細(xì)胞增殖快

體外存活時(shí)間長(4-12M)第十五頁，共三十頁。功能特點(diǎn)分泌功能：膠原、非膠原蛋白、堿性磷酸酶。礦化功能收縮功能再生功能根面吸附等第十六頁，共三十頁。二、唾液腺細(xì)胞第十七頁，共三十頁。細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)腺泡上皮細(xì)胞：體外培養(yǎng)的腺泡細(xì)胞多呈“鋪路石〞樣排列導(dǎo)管上皮細(xì)胞：導(dǎo)管上皮細(xì)胞呈多邊形肌上皮細(xì)胞：肌上皮細(xì)胞呈梭形或星形唾液腺細(xì)胞第十八頁，共三十頁。導(dǎo)管上皮細(xì)胞HSG細(xì)胞系HSG細(xì)胞系第十九頁，共三十頁。A小型豬腮腺上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)〔×10〕B小型豬腮腺上皮細(xì)胞alpha淀粉酶免疫組化染色〔×10〕腺泡細(xì)胞上皮細(xì)胞第二十頁，共三十頁。免疫組織化學(xué)染色腺泡上皮細(xì)胞：角蛋白、淀粉酶、對(duì)氨基水楊酸、導(dǎo)管上皮膜、前角蛋白、單克隆角蛋白、分泌成分陽性反響導(dǎo)管上皮細(xì)胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗體染色陽性反響肌上皮細(xì)胞：肌動(dòng)蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗體染色陽性反響第二十一頁，共三十頁。三、口腔黏膜細(xì)胞第二十二頁，共三十頁。口腔黏膜細(xì)胞培養(yǎng)方法：組織塊法和酶消化法形態(tài)特點(diǎn)：卵圓形、多邊形，呈“鋪路石〞樣單層排列免疫組織化學(xué)染色：波形絲蛋白陰性，角蛋白陽性功能：分泌大量的膠原蛋白與非膠原蛋白第二十三頁，共三十頁。兔口腔黏膜上皮細(xì)胞ABA無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下〔×10〕B滋養(yǎng)細(xì)胞層培養(yǎng)條件下〔×4〕第二十四頁，共三十頁。四、頜骨相關(guān)的硬組織細(xì)胞第二十五頁，共三十頁。破骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：多核巨細(xì)胞，體積大組織化學(xué)染色：破骨細(xì)胞單克隆抗體呈陽性反響；降鈣素反響呈藍(lán)紫色；抗酒石酸磷酸酶反響呈棕褐色功能：骨吸收功能影響因素：促進(jìn)：破骨細(xì)胞激活因子、甲狀旁腺素抑制：γ-干擾素、降鈣素第二十六頁，共三十頁。成骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：不同培養(yǎng)方法所獲得的成骨細(xì)胞形態(tài)各有差異免疫組織化學(xué)染色特點(diǎn)：BGP、Ⅰ型膠原、堿性磷酸酶活性功能：成骨作用

調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞骨吸收作用第二十七頁，共三十頁。五、口腔腫瘤細(xì)胞第二十八頁，共三十頁。口腔鱗癌細(xì)胞細(xì)胞系來源：鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本原代及傳代培養(yǎng)生物學(xué)特性：

多角形上皮樣細(xì)胞

核/漿比例