pcr上崗證考試題及答案

pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.核酸雜交反應(yīng)C.基因克隆技術(shù)D.蛋白質(zhì)表達(dá)技術(shù)答案：A2.PCR反應(yīng)中，延伸溫度一般為（）A.55℃B.72℃C.94℃D.4℃答案：B3.以下哪種酶是PCR反應(yīng)必需的（）A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.TaqDNA聚合酶D.反轉(zhuǎn)錄酶答案：C4.PCR反應(yīng)體系中不包含（）A.引物B.dNTPC.模板DNAD.核糖體答案：D5.引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B6.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，打開標(biāo)本管的操作應(yīng)在（）A.普通實(shí)驗(yàn)室B.清潔區(qū)C.污染區(qū)D.緩沖區(qū)答案：C7.防止PCR產(chǎn)物污染的有效方法是（）A.戴手套B.紫外照射C.通風(fēng)D.以上都是答案：D8.PCR反應(yīng)的特異性主要取決于（）A.模板B.引物C.Taq酶D.反應(yīng)溫度答案：B9.逆轉(zhuǎn)錄PCR是先將（）逆轉(zhuǎn)錄為cDNA再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。A.tRNAB.rRNAC.mRNAD.DNA答案：C10.以下不是PCR應(yīng)用領(lǐng)域的是（）A.基因診斷B.基因克隆C.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析D.法醫(yī)鑒定答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本要素包括（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.TaqDNA聚合酶E.緩沖液答案：ABCDE2.引物設(shè)計(jì)的基本原則有（）A.長度合適B.避免引物二聚體C.GC含量適中D.特異性強(qiáng)E.3'端不能有發(fā)夾結(jié)構(gòu)答案：ABCDE3.PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)一般包括（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)E.清潔區(qū)答案：ABCD4.導(dǎo)致PCR假陽性結(jié)果的原因有（）A.標(biāo)本污染B.引物特異性差C.模板濃度過高D.試劑污染E.擴(kuò)增循環(huán)數(shù)過多答案：ABDE5.熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)有（）A.定量準(zhǔn)確B.靈敏度高C.能實(shí)時(shí)監(jiān)測D.可進(jìn)行多基因同時(shí)檢測E.操作簡單答案：ABCD6.PCR技術(shù)可應(yīng)用于（）A.病原體檢測B.遺傳病診斷C.腫瘤研究D.物種鑒定E.基因表達(dá)分析答案：ABCDE7.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.溫度B.時(shí)間C.模板量D.引物濃度E.Mg2?濃度答案：ABCDE8.逆轉(zhuǎn)錄PCR需要用到的酶有（）A.反轉(zhuǎn)錄酶B.TaqDNA聚合酶C.限制性內(nèi)切酶D.DNA連接酶E.核酸酶答案：AB9.防止PCR實(shí)驗(yàn)室交叉污染的措施有（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.定期清潔消毒C.不同區(qū)域使用專用器材D.規(guī)范人員操作E.設(shè)立緩沖區(qū)答案：ABCDE10.PCR產(chǎn)物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.熒光定量分析E.酶切分析答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中引物的濃度越高越好。（）答案：×2.TaqDNA聚合酶具有3'→5'外切酶活性。（）答案：×3.PCR實(shí)驗(yàn)室可以不進(jìn)行分區(qū)。（）答案：×4.熒光定量PCR能對核酸進(jìn)行絕對定量。（）答案：√5.引物的GC含量應(yīng)盡量與模板的GC含量接近。（）答案：√6.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，標(biāo)本可以隨意放置。（）答案：×7.逆轉(zhuǎn)錄PCR只能用于RNA病毒的檢測。（）答案：×8.PCR產(chǎn)物的大小取決于引物的位置。（）答案：√9.污染的PCR產(chǎn)物可以直接丟棄。（）答案：×10.PCR技術(shù)只能擴(kuò)增已知序列的DNA片段。（）答案：×四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本步驟。答案：PCR基本步驟為變性、退火、延伸。變性是將模板DNA加熱至94℃左右，雙鏈解開；退火是降溫至55℃左右，引物與模板結(jié)合；延伸在72℃，Taq酶催化dNTP合成DNA鏈。2.引物設(shè)計(jì)有哪些注意事項(xiàng)？答案：長度15-30bp合適，GC含量40%-60%，避免引物二聚體、發(fā)夾結(jié)構(gòu)等，3'端不能錯(cuò)配，且要保證特異性，與模板互補(bǔ)結(jié)合良好。3.說明PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的意義。答案：PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)可有效防止交叉污染。不同操作在不同區(qū)域進(jìn)行，如試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本處理、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析分開，降低試劑、標(biāo)本被污染風(fēng)險(xiǎn)，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。4.列舉常見的PCR技術(shù)衍生方法。答案：常見衍生方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR，用于以RNA為模板擴(kuò)增；熒光定量PCR，可對核酸定量；多重PCR，能同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)靶序列；巢式PCR，提高擴(kuò)增特異性等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何在實(shí)際工作中有效避免PCR假陰性結(jié)果。答案：要確保標(biāo)本采集規(guī)范，保證足夠模板量。優(yōu)化反應(yīng)體系，如合適的引物、Mg2?濃度等。嚴(yán)格控制反應(yīng)條件，溫度、時(shí)間精準(zhǔn)。定期維護(hù)儀器，保證其性能穩(wěn)定。同時(shí)要注意防止標(biāo)本和試劑污染。2.分析熒光定量PCR在疾病診斷中的優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢是能準(zhǔn)確定量核酸，靈敏度高、可實(shí)時(shí)監(jiān)測，能早期診斷疾病。局限性在于儀器和試劑昂貴，對實(shí)驗(yàn)操作要求高，易受污染影響結(jié)果，且只能針對已知序列檢測。3.當(dāng)PCR實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)異常結(jié)果時(shí)，應(yīng)從哪些方面進(jìn)行排查？答案：從標(biāo)本方面，查采集、保存和處理是否得當(dāng)；試劑方面，看是否失效、污染，反應(yīng)體系是否正確；儀器方面，檢查溫度、時(shí)間設(shè)置及儀器性能；操作方面，回顧加