課題2　土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù).pptx

1、課題2 土壤分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),課題背景,尿素CO(NH2)2重要的農(nóng)業(yè)氮肥。 只有被土壤中細(xì)菌分解為NH3才能被植物吸收利用,脲酶,CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3,一、研究思路,(一)篩選菌種,1 實(shí)例：尋找耐高溫的DNA聚合酶,啟示：,尋找目的菌種時(shí)要根據(jù)它對(duì)_，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。,生存環(huán)境的要求,耐高溫的酶,耐高溫生物體,耐高溫環(huán)境（熱泉、火山口）,尋找,尋找,Taq細(xì)菌,【思考】如何在實(shí)驗(yàn)室中篩選下列細(xì)菌,1、篩選耐鹽的葡萄球菌 2、分離耐酸的微生物 3、分離耐高溫的微生物,【推測(cè)】如何在實(shí)驗(yàn)室中篩選分解尿素的細(xì)菌,用含鹽量高的培養(yǎng)基,用含強(qiáng)酸的培養(yǎng)基,用

2、高溫培養(yǎng)基,（2）方法：利用 培養(yǎng)基篩選微生物，例：利用 的培養(yǎng)基篩選能分解尿素的細(xì)菌。,【課堂小結(jié)】,一、篩選菌株,1、自然界中篩選,（1）原理：,（2）實(shí)例：,2、實(shí)驗(yàn)室中篩選,（1）原理：,3、選擇培養(yǎng)基的概念：,選擇,以尿素為唯一氮源,二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法,1、 法（統(tǒng)計(jì) 數(shù)目）,（1）原理：,（2）缺點(diǎn)：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目 。這是因?yàn)?。,（3）計(jì)數(shù)原則,選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。,設(shè)置 ：同一濃度的平板涂布 個(gè)。,設(shè)置 ：排除試驗(yàn)中 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。,2、 法,（4）每克樣品中的菌株數(shù)量 =,稀釋涂布平板,活菌,1個(gè)菌落 1個(gè)活菌,少,30-300,重復(fù)實(shí)驗(yàn),對(duì)照,非測(cè)試因素,（CV）M,顯微鏡直接計(jì)數(shù),至少3,設(shè)置對(duì)照,1、要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染，設(shè)置 的培養(yǎng)基作為對(duì)照。,2、要檢測(cè)培養(yǎng)基是否具有選擇作用， 設(shè)置 的培養(yǎng)基作為對(duì)照。,不接種,接種的牛肉膏蛋白胨,三、實(shí)驗(yàn)過程,1、土壤取樣：,富含 的土壤 土。,3、樣品的稀釋：,（1）稀釋的原因？ （2）不同生物的稀釋倍數(shù)分別是？,4、接種：,接種方法： 。,5、培養(yǎng)與觀察：,6、菌種的鑒定：,（1）原理： （2）方法：,2、制備培養(yǎng)基：,有機(jī)質(zhì),表層,稀釋