顯微鏡的構(gòu)造和使用.ppt

1、實(shí)驗一 顯微鏡的構(gòu)造和使用植物細(xì)胞一、目的要求1、了解顯微鏡的構(gòu)造及其維護(hù)2、初步掌握顯微鏡的使用方法3、了解植物細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)4、認(rèn)識紋孔和胞間連絲的形狀，并理解其功能5、學(xué)習(xí)臨時裝片技術(shù)和方法,二、實(shí)驗用品和材料用品（以后各次實(shí)驗基本相同）：顯微鏡、擴(kuò)大鏡、鑷子、實(shí)驗剪、解剖針、載玻片、蓋玻片、紗布、吸水紙、單面刀片、雙面刀片、蒸餾水、番紅、碘液、70%酒精、醋酸洋紅、蘇丹等。,實(shí)驗報告紙及繪圖工具自備。三、實(shí)驗內(nèi)容和方法（一）顯微鏡的構(gòu)造一般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造包括兩大部分，即保證成象的光學(xué)系統(tǒng)和用以裝置光學(xué)系統(tǒng)的機(jī)械部分。,1、機(jī)械部分（1）鏡座：是顯微鏡的底座，支持整個鏡體，使顯微鏡放置

2、穩(wěn)固。（2）鏡柱：鏡座上面直立的短柱，支持鏡體上部的各部分。（3）鏡臂：彎曲如臂，下連鏡柱，上連鏡筒，這取放鏡體時手握的部位。鏡臂的下端與鏡柱連接處有一活動關(guān)節(jié)，可使鏡體在一定范圍內(nèi)后傾，便于觀察。,（4）鏡筒：為顯微鏡上部圓形中空的長筒，其上端放置目鏡，下端與物鏡轉(zhuǎn)換器相連，并使目鏡和物鏡的配合保持一定的距離，其作用是保護(hù)成象的光路與亮度。（5）物鏡轉(zhuǎn)換器：接于鏡筒下端的圓盤，可自由轉(zhuǎn)動，盤上有3-4個螺旋圓孔，為安裝物鏡的部位，當(dāng)旋動轉(zhuǎn)換器時，物鏡即可固定在使用的位置上，保證物鏡與目鏡的光線合軸。（6）載物臺：為放置玻片標(biāo)本的平臺，中央有一圓孔，以通過光線。兩旁裝有壓片夾或移動器，可固定玻

3、片標(biāo)本和移動玻片。,（7）調(diào)焦裝置：為了得到清晰的物像，必須調(diào)節(jié)物鏡與標(biāo)本之間的距離，使它與物鏡的工作距離相等。這種操作叫調(diào)焦。在鏡臂兩側(cè)有粗、細(xì)調(diào)焦螺旋各一對，旋轉(zhuǎn)時可使鏡筒上升或下降。大的一對是粗調(diào)焦螺旋，調(diào)動鏡筒升降距離大，旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒移動2毫米左右。小的一對是細(xì)焦螺旋，調(diào)動鏡筒的升降距離很小，旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒移動約0.1毫米。在用低倍物鏡觀察時，使用粗調(diào)焦螺旋；用高倍物鏡觀察時，用細(xì)調(diào)焦螺旋。（8）聚光器調(diào)節(jié)螺旋：在鏡柱的左側(cè)或右側(cè)，旋轉(zhuǎn)它時使聚光器上下移動，以調(diào)節(jié)光線。,2、光學(xué)部分由成像系統(tǒng)和照明系統(tǒng)組成，成像系統(tǒng)包括物鏡和目鏡，照明系統(tǒng)包括反光鏡和聚光器。（1）物鏡：這是決定

4、顯微鏡質(zhì)量的最主要部件，安裝在鏡筒下端的物鏡轉(zhuǎn)換器上，一般有三個放大倍數(shù)不同的物鏡，即低倍（10）、高倍（40）、油鏡（100）。使用油鏡時，必須在蓋玻片上和聚光器上滴加一滴香柏油（鏡油），然后才能使用。,（2）目鏡：安裝在鏡筒上端，它的作用是將物鏡所成的像進(jìn)一步放大，使之便于觀察。其上刻有5、10、16等，表示不同放大倍數(shù)，可根據(jù)當(dāng)時需要選擇使用。目鏡內(nèi)的光欄上可裝一段頭發(fā)，在視野中則為一黑線，叫指針，可以用它指示要觀察的部分。,（3）反光鏡（反射鏡）：是個圓形的兩面鏡。一面是平面鏡，能反光；另一面是凹面鏡，兼有反光和匯集光線的作用，可選擇使用，反光鏡具有能轉(zhuǎn)動的關(guān)節(jié)，可作各種方向的翻轉(zhuǎn)，面

5、向光源，能將光線反射在聚光器上。,（4）聚光器（或鏡）：裝在載物臺下，由聚光鏡（幾個凸透鏡）和虹彩光圈（可變光欄）等組成。它可將平行的光線匯集成束，集中在一點(diǎn)，以增強(qiáng)被檢物件。聚光器可以上下調(diào)節(jié)，如用高倍鏡時，視野范圍小，則需上升聚光器，用低倍物鏡時，視野范圍大，可下降聚光器。（5）虹彩光圈：裝在聚光器內(nèi)，位于載物臺下方，撥動操縱桿，可使光圈擴(kuò)大或縮小，借以調(diào)節(jié)通光量。,二、使用顯微鏡的主要步驟和方法1、取鏡和放置：按固定編號從柜中提取顯微鏡木箱，用鑰匙打開箱門，從中取出顯微鏡，取鏡時應(yīng)右手握住鏡臂，左手平托鏡座，保持鏡體直立，不可歪斜。放置桌面時，動作要輕。一般就放在座位左側(cè)，距桌邊緣約5-

6、6厘米的地方，以便觀察和防止掉落。特別要禁止用單手提著顯微鏡走，防止目鏡從鏡筒中滑出。,2、對光：一般情況下可用由窗口進(jìn)入室內(nèi)的散射光（應(yīng)避用直射陽光），或用日光燈作光源。對光時，先把低倍物鏡轉(zhuǎn)到中央，對準(zhǔn)載物臺上的通光孔，然后用左眼從目鏡下注視（左眼不要緊閉）同時，用手轉(zhuǎn)動反光鏡，使鏡面向著光源。一般用平面鏡即可，光弱時可用凹面鏡，當(dāng)光線從反光鏡面向上反射入鏡筒時，在鏡筒內(nèi)就可以看一個圓形的、明亮的視野，此時再利用聚光鏡或虹彩光圈調(diào)節(jié)光的強(qiáng)度，使視野內(nèi)的內(nèi)線既均勻、明亮、又不刺眼。在對光的過程中，要體會反光鏡、聚光鏡和虹彩光圈在調(diào)節(jié)光線中的不同作用。,3、低倍鏡的使用觀察任何標(biāo)本，都必須先用

7、低倍鏡，因為低倍鏡的視野范圍大，容易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)和確定觀察的部位。（1）放置切片：升高鏡筒，把玻片標(biāo)本放在載物臺中央，使材料正對通光孔的中心，然后用壓片夾壓住載玻片的兩端。,（2）調(diào)整焦點(diǎn)：兩眼從側(cè)面注視物鏡，并慢慢按順時針方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦螺旋，使鏡筒徐徐下必至物鏡玻片約5毫米處，接著用左眼注視鏡筒內(nèi)，同是按反時針方向，向右、向內(nèi)轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦螺旋使鏡筒緩慢上升，直到看見清晰的物像為止（注意不可在調(diào)焦點(diǎn)時邊觀察邊下必鏡筒，否則會使物鏡和玻片觸碰，壓碎破片，損壞物鏡）。如一次調(diào)節(jié)看不到物像，應(yīng)重新檢查材料是否在光軸線上，重新移正材料，再重復(fù)上述操作過程直至物像出現(xiàn)和清晰為止。,為了使物像更加清晰，此時可使

8、用細(xì)調(diào)焦螺旋，輕微轉(zhuǎn)動到使物像最清楚時為止，但切忌連續(xù)轉(zhuǎn)動多圈，以免損傷儀器的精確度。當(dāng)細(xì)調(diào)焦螺旋向上或向下轉(zhuǎn)不動時，就是轉(zhuǎn)到了極限，千萬不能再硬擰，而應(yīng)重新調(diào)粗調(diào)焦螺旋，把物鏡與標(biāo)本的距離稍稍拉開后，再反擰細(xì)焦螺旋，約10圈左右（因一般可動范圍為20圈）。,（3）低倍物鏡的觀察：焦點(diǎn)調(diào)好后，可根據(jù)需要，移動玻片，把要觀察的部分移到最有利的位置上。找到物像后還可根據(jù)材料的厚薄、顏色、成像的反差強(qiáng)弱等是否合適再進(jìn)行調(diào)節(jié)，如果太亮，可降低聚光器或縮小虹彩光圈，反之則升高聚光器或開大光圈。,4、高倍物鏡的使用在觀察較小的物體或細(xì)微結(jié)構(gòu)時使用。（1）選好目標(biāo)：由于高倍鏡只能把低倍鏡視野中心的一小部分加

9、以放大。因此，使用高倍鏡前，應(yīng)先在低倍鏡中選好之合軸，即使其與鏡筒成一直線（因高倍鏡的工作距離很短，操作時要十分仔細(xì)，以防鏡頭碰擊玻片）。,（2）調(diào)下焦點(diǎn)，在正常情況下，當(dāng)高倍物鏡轉(zhuǎn)正之后，在視野中即可見到模糊的物像，只要略微調(diào)動焦螺旋，就可獲得最清晰的物像。初用一臺顯微鏡時，必須注意它的高、低倍物鏡是否能如上述情況那樣很好的配合？如果高倍物鏡離蓋玻片較遠(yuǎn)看不到物像時，則需重新調(diào)整焦點(diǎn)；此時眼睛應(yīng)從側(cè)面注視物鏡，并小心地轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦螺旋使鏡筒慢慢地下必到高倍鏡頭幾乎要與切片接觸時為止（注意切勿使鏡頭緊壓玻片，以錫損壞鏡頭和壓碎玻片標(biāo)本）。然后再由目鏡向下觀察，同時向內(nèi)，向右轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦螺旋，稍微升

10、高鏡筒至看見物像后，換細(xì)調(diào)焦螺旋，使物像看得更加清晰為止。,（3）在換用高倍鏡觀察時，視野變小變暗，所以要重新調(diào)節(jié)視野的亮度，此時或升高聚光器或放大虹彩光圈。,5、顯微鏡使用后的整理觀察完畢，應(yīng)將鏡頭轉(zhuǎn)為低倍鏡，再水平取下切片，取下時要注意勿使切片觸及鏡頭，切片取下后，再轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡頭與通光孔錯開，再下降鏡筒，使兩個物鏡位于載物臺上通光孔的兩側(cè)，并將反光鏡還原成與桌面垂直，擦凈鏡體，仍用右手握住鏡臂，左手平托顯微鏡，送回鏡箱中。,三、使用顯微鏡時的注意事項1、顯微鏡是精密儀器，使用時一定要嚴(yán)格地按規(guī)程進(jìn)行操作。同時，顯微鏡的幾個主要部件都是配套的，并已編號，不能互換，特別注意不要斢

11、錯鏡頭。2、要注意保持顯微鏡清潔，特別是光學(xué)部分，如有灰塵，要用擦鏡紙輕輕擦去。若使用過油鏡頭，需用二甲苯擦拭干凈鏡頭與聚光器上的油。,3、用顯微鏡觀察時，切忌睜一眼閉一眼，要左眼窺鏡，右眼作圖。4、標(biāo)本必須加蓋玻片，制作帶水或藥液的玻片標(biāo)本時，必須兩邊擦凈再觀察，千萬不可將藥水沾到鏡頭上。5、注意防潮，在觀察時，顯微鏡上凝結(jié)的水珠（尤其在冬天觀察，呼吸中的水分常在顯微鏡上凝結(jié)成水珠），要及時擦掉，顯微鏡要放干燥處保存，鏡箱內(nèi)應(yīng)放一袋蘭色硅膠干燥劑。6、如遇機(jī)件不靈，使用困難時，千萬不可用力轉(zhuǎn)動，更不要任意拆修，應(yīng)立即報告指導(dǎo)教師，要求協(xié)助排除故障，以免造成損壞。,（二）植物細(xì)胞的觀察1、質(zhì)體

12、的觀察 葉綠體及細(xì)胞質(zhì)運(yùn)動現(xiàn)象：取一片黑藻莖尖嫩葉，放入載玻片的水滴中，蓋上蓋玻片，先在低倍鏡下找到清楚的細(xì)胞圖像，再轉(zhuǎn)高倍鏡下觀察。在高倍鏡下看更清楚，葉綠體是浸沒在細(xì)胞質(zhì)中的，緊貼細(xì)胞之內(nèi)，有時以其寬面正對視野，即緊貼細(xì)胞的上壁或下壁，常呈扁圓形；有時則緊貼側(cè)壁，使我們看到的是其窄面。同時，在黑藻葉片細(xì)胞里還可看到葉綠體隨胞質(zhì)運(yùn)動而作一個或幾個方面的流動。溫度在25度左右最適宜。注意：觀察時，靠順脈部位細(xì)胞質(zhì)流動看得更清楚些。, 白色體：白色體是不含色素的質(zhì)體，所以無色。多存在于植物的幼嫩細(xì)胞或不見光的細(xì)胞中，取大白菜的葉柄作徒手切片或撕取一小塊表皮裝片觀察：在細(xì)胞質(zhì)中無色的顆粒就是白色體

13、。 有色體：取新鮮紅辣椒，切一小塊表皮并帶有少量果肉細(xì)胞薄片，裝片觀察，細(xì)胞質(zhì)里許多橙紅色顆粒就是有色體。,2、單紋孔的觀察取新鮮紅辣椒，用刀片沿辣椒表面切取薄片，然后以表皮外切向壁朝上裝片，先用低倍鏡觀察，選擇邊緣薄而清晰的區(qū)域，換用高倍鏡尋找呈念珠狀的相鄰兩細(xì)胞之間的細(xì)胞壁上多處發(fā)生相對的凹陷，這就是單紋孔對。,3、胞間連絲的觀察取柿胚乳細(xì)胞永久制片，置低倍鏡下觀察，可以看到很多多邊形的細(xì)胞壁明顯增厚，而細(xì)胞腔小，其內(nèi)的原生質(zhì)體被染上顏色或在制片過程中丟失，使細(xì)胞成為空腔。在相鄰兩細(xì)胞加厚的細(xì)胞壁上，選擇胞間連絲清晰而比較集中的地方，換高倍鏡觀察。那些微細(xì)的暗色細(xì)絲即胞間連絲，它們把相鄰兩

14、細(xì)胞原生質(zhì)體聯(lián)系起來。,柿胚乳細(xì)胞是具有生活原生質(zhì)體的“厚壁細(xì)胞”。實(shí)際上這種組織是一種特殊的薄壁，即貯藏組織，是貯藏的營養(yǎng)物質(zhì)半纖維素（一種多糖）沉積在細(xì)胞壁上，使其初生壁相當(dāng)增厚。,4、細(xì)胞貯藏物質(zhì)的觀察淀粉粒：用鑷子或解剖針從馬鈴薯塊莖上刮取少量薄壁細(xì)胞放入載玻片的水滴中，然后加入稀碘液染色。先在低倍鏡下找淀粉，再換高倍鏡仔細(xì)觀察，可以清楚地看到許多從細(xì)胞中擠出來的淀粉粒，其上具有輪紋，各層次輪紋以臍為中心環(huán)繞著。根據(jù)臍點(diǎn)和輪紋環(huán)繞方式不同，而分為單粒、復(fù)粒和半復(fù)粒。,油滴：用花生種子作徒手切生，挑選薄片放在凹玻片中用蘇丹溶液染色數(shù)分鐘，再夾到載玻片觀察，看到在細(xì)胞內(nèi)有染成紅色的油滴。蛋白質(zhì)：用蓖麻種子胚乳作徒手切片，選擇薄片放入100%酒精中洗滌數(shù)分鐘，使切片中的脂肪溶解在酒精中，然后，取出切片用蒸餾水裝片觀察?？梢钥吹脚呷榧?xì)胞內(nèi)的糊粉粒存在，它是由貯藏在液泡中一種