第二章+玻片標本制作技術.ppt

1、第二章 生物玻片標本制作技術,第一節(jié) 生物玻片標本制作方法 第二節(jié) 植物材料玻片標本制作技術 第三節(jié) 動物材料玻片標本制作技術,第一節(jié) 生物玻片標本制作方法,從保存時間長短分，有臨時玻片標本和永久玻片標本。從制作的方法 來分，有涂片、壓片、裝片(也叫整裝法)、磨片和切片等 。,一、切片法,簡單、省時、容易掌握，有一定局限性，但至今在生物學教學中仍然是觀察形態(tài)構造的一種基本切片方法 。 （1）材料和夾持物 （2）材料的持法 （3）持刀方法 （4）切片 （5）取片 （6）選片、裝片,1.徒手切片法,切片法即用刀片將材料切成薄片的方法。,切取的標本,材料和夾持物,滴水,放置標本,加蓋蓋玻片,葉的橫切

2、,所使用的支持劑是石蠟，優(yōu)點是切下的片子薄而勻，還能作連續(xù)切片，但制作手續(xù)較復雜 。 幾個重要環(huán)節(jié)步驟如下： (1)固定 其目的在于保存組織中各細胞的形態(tài)結(jié)構和生活時相似；必須對固定液的選擇、固定材料的性質(zhì)、大小和固定的時間以及研究的目的等加以注意。 (2)沖洗 (3)脫水 酒精是最常用的脫水劑，把酒精配成不同梯度的濃度緩慢進行。 (4)染色 (5)浸蠟 將已透明的材料投入熔化的石蠟中，取代透明劑，使組織中空隙為石蠟透入而填滿；,2.石蠟切片法,(6)切片 用石蠟包埋塊包埋的石蠟塊，經(jīng)修整后一般使用旋轉(zhuǎn)式切片機進行切片； (7)透明 透明在兩種情況下進行。 第一，透明是在組織脫水后浸蠟前進行，

3、其目的不在于為了顯微鏡觀察，而是作為從脫水劑進入包埋劑的橋梁。因此，透明劑必須既能與酒精混合，又能與石蠟融合無間，二甲苯即具此性質(zhì)，故被選為常用的透明劑。 第二，透明是在片子脫水與封藏之間進行。其目的除了作為從脫水劑進入封藏劑的橋梁外，尚有使標本透明而便于觀察的作用。 (8)封藏 常用的封藏劑有樹膠和甘油等。封藏的目的在于使切片能永久保存便于鏡檢。,火棉膠切片法所使用的支持劑是火棉膠。這種方法的優(yōu)點是包埋過程不經(jīng)高溫，可以避免組織收縮及變脆，適用精細材料(如腦)的切片，也因火棉膠有韌性，切片不致有折卷或破裂，適于大塊組織及多空洞的組織(如腦、眼球)的切片 。,3.火棉膠切片法,4.冰凍切片法,

4、冰凍切片法是將已固定或新鮮組織塊不經(jīng)脫水和包埋先進行冰凍，然后在切片機上切片的一種方法。這種方法的優(yōu)點是：1.制片速度快，因此常用于臨床上的病理手術診斷；2.能保存組織內(nèi)某些易被有機溶劑所溶解的物質(zhì)，例如脂肪和酶等。 同時還可以防止組織塊的收縮保持原形。缺點：所切片子較厚，又不能作連續(xù)切片還有易碎的毛病。,是一種將游離的細胞，動、植物中比較疏松的組織均勻地涂布在載玻片上的一種制片方法。涂片材料有單細胞生物、小形藻類、血液，含有細菌的培養(yǎng)液以及精巢、花藥等,二、非切片法,1.涂片法,將植物或動物比較疏松的材料，如花藥、根尖、水螅，蠕蟲的精巢、果蠅(或其他雙翅目)幼蟲的唾液腺等，用較小的壓力壓碎在

5、載玻片上使成一薄層的一種制片法。,2.壓片法,微小的生物如衣藻、水綿、青霉、變形蟲和水螅等可以直接作為裝片的材料植物的葉表皮、鱗莖表皮等；動物中如昆蟲的翅、腿、口器等；人的口腔上皮細胞等都是從整個器官上取其一部分作為裝片材料，可制作成臨時或永久裝片，進行觀察。,3.裝片法,懸滴玻片是將培養(yǎng)在蓋玻片上溶液里的活材料(如變形蟲的運動、細菌的活動、花粉的萌發(fā)等)封閉在載玻片的小室里，供觀察它們活動的一種玻片標本。,4.懸滴法,一些含有礦物質(zhì)的比較堅硬的動物組織要作成玻片標本時，常把材料直接放在砂石上磨成薄片，此法即為磨片法。如珊瑚的骨骼、軟體動物的貝殼，脊椎動物的硬骨、角以及牙齒等都可以用此法制成玻片標本。,5.磨片法,第二節(jié) 植物材料玻片標本制作技術,一、常用實驗種子植物的制片方法 (一)洋蔥表皮裝片 (二)洋蔥根尖縱切片(示細胞有絲分裂),洋蔥表皮細胞,洋蔥根尖細胞,南瓜莖縱切片,蠶豆幼根橫切,(三)蠶豆根橫切片 (四)南瓜莖縱切片及橫切片,二、常用實驗孢子植物的制片方法 (一) 衣藻裝片 (二) 團藻裝片,衣藻裝片,團藻裝片,蘚原絲體裝片,（三）細菌三型涂片 （四）地錢生殖托縱切片 （五）蘚原絲體裝片,細 菌 三 型 涂 片,第三節(jié) 動物材料玻片標本制作技術,一、草履蟲裝片 二、水螅的整體裝片和橫切片