1,3-β-D-葡聚糖檢驗(yàn)簡介-推薦課件

1、1,真菌（1-3）-D-葡聚糖與革蘭氏陰性菌脂多糖檢測,器械部廣東金羽醫(yī)藥發(fā)展有限公司,2,鱟,20世紀(jì)六十年代，人們發(fā)現(xiàn)一種古老的海洋生物，被稱為“海洋活化石”的鱟，它的血液與內(nèi)毒素接觸后會(huì)發(fā)生特異性的凝集反應(yīng)，人們經(jīng)過大量研究和實(shí)驗(yàn)從它的血液中提取出了用來檢測內(nèi)毒素的“鱟試劑”。,3,鱟試劑的發(fā)明,1981年1月Jack Levin和 Frederik B.Bang教授在美國馬塞諸塞州Wools Hole海洋生物實(shí)驗(yàn)室成功分離提取鱟血細(xì)胞并研制成能夠檢測細(xì)菌內(nèi)毒素的鱟試劑，開辟了人類認(rèn)識(shí)和檢測內(nèi)毒素的新紀(jì)元！,4,侵襲性真菌感染率上升,5,嚴(yán)重真菌感染迅速上升勢頭,危重病人的存活期延長,延

2、長了真菌感染的 高 危 期,使此類患者業(yè)已增加的人數(shù)進(jìn)一步擴(kuò)大,醫(yī)學(xué)和相關(guān)科學(xué)的進(jìn)步,是日益嚴(yán)重的威脅！,6,真菌感染的危險(xiǎn)因素：,中心靜脈插管 尿道插管 廣譜抗生素 氣管插管 腹部外科 腸胃外營養(yǎng) 營養(yǎng)不良 住院時(shí)間,感染之前定殖,7,侵襲性真菌感染,條件致病性真菌 念珠菌病 曲霉病 隱球菌病 其他,8,診斷方法,影像學(xué) 組織病理學(xué)/細(xì)胞學(xué) 培養(yǎng) 血清學(xué) 分子生物學(xué)方法： Platelia Aspergillus ELISA Fungitell assay PCR（unavailable）,傳統(tǒng)的方法,9,真菌病實(shí)驗(yàn)室診斷主要內(nèi)容,準(zhǔn)確、快速檢出真菌病原體 真菌鏡檢 真菌培養(yǎng) 組織病理 生理

3、生化 血清學(xué)方法 分子生物學(xué),10,鏡檢和培養(yǎng)方法,敏感性低 血培養(yǎng)：在腫瘤和血液病病人中，50%尸檢證實(shí)深部念珠菌感染的病例血培養(yǎng)陰性。 培養(yǎng)結(jié)果陽性僅表示存在某種真菌，區(qū)分定植和感染困難 培養(yǎng)時(shí)間長 有些標(biāo)本采集困難,11,非培養(yǎng)方法優(yōu)點(diǎn),快速報(bào)告結(jié)果 敏感性提高 取材簡便 多以真菌在致病狀態(tài)產(chǎn)生的物質(zhì)為檢測標(biāo)志物，結(jié)果陽性提示有致病性 定量檢測可判斷感染嚴(yán)重程度及療效評估,12,非培養(yǎng)診斷的方法簡介,真菌細(xì)胞壁成分 （1-3） - - D-葡聚糖檢測（G試驗(yàn)） 真菌抗原檢查 半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原（GM) 甘露聚糖(mannan)抗原 隱球菌莢膜多糖抗原（乳膠凝

4、集試驗(yàn)） 真菌特異的代謝產(chǎn)物 D-阿拉伯糖醇 真菌 DNA 的檢測,13,臨床診斷、擬診的微生物學(xué),1 合格痰標(biāo)本直接鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲，且連續(xù)培養(yǎng)2次分離到同種真菌 2 BALF經(jīng)直接鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲真菌培養(yǎng)陽性 3 痰液或BALF直接鏡檢發(fā)現(xiàn)新生隱球菌 4 乳膠凝集法檢測隱球菌莢膜多糖抗原陽性 5 G實(shí)驗(yàn)連續(xù)兩次陽性 6 GM實(shí)驗(yàn)連續(xù)兩次陽性,14,侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)EORTC/MSG2008修訂版,宿主因素 臨床特征 病原學(xué) 真菌鏡檢 真菌培養(yǎng) 組織病理學(xué)檢查 血清學(xué)檢查方法（間接證據(jù)） CSF隱球菌抗原陽性確診 GM-test, G-test臨床診斷,Clinical Infectious

5、 Diseases 2008; 46,15,注：原發(fā)性者可無宿主因素，肺組織、胸液、血液真菌培養(yǎng)陽性（除外肺孢子菌）,診斷IPFI的三個(gè)級(jí)別,16,（1,3） - - D-葡聚糖檢測,17,1,3,真菌細(xì)胞膜、壁結(jié)構(gòu),羊毛固醇C14去甲基化酶 14位還原和78位異構(gòu)酶 角鯊烯環(huán)氧化酶,18,1,3-D-葡聚糖結(jié)構(gòu),葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中 1,3-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌細(xì)胞壁上的特有成分 以1,3-糖苷鍵連接的葡萄糖殘基骨架作為主鏈 以分支狀1-6-D葡萄糖殘基作為側(cè)鏈,19,1,3-D-葡聚糖特性,對熱極為穩(wěn)定，高壓121并不能使其滅活。在念珠菌和曲霉菌細(xì)胞壁中含量較多

6、，對G實(shí)驗(yàn)靈敏。 當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬、消化等處理后，(1-3)-D-葡聚糖可從胞壁中釋放出來，從而使血液及其它體液中含量增高。當(dāng)真菌在體內(nèi)含量減少時(shí)，機(jī)體免疫系統(tǒng)可將其清除。 在淺部真菌感染中，(1-3)-D-葡聚糖未被釋放出來，故其在體液中的量不增高。 可用于檢測念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、鐮刀菌、卡氏肺孢子菌 不可檢測隱球菌、接合菌（根霉/毛霉等）,20,“G”試驗(yàn)緣何而來？,21,405nm測光度值,pNA（對硝基苯胺，黃色）,AC-Ile-Glu-Ala-Arg-OH,AC-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA（酶作用物）,凝固酶,凝固酶原,活化B因子,B

7、因子,活化C因子,C因子,內(nèi)毒素,凝固蛋白原,凝固蛋白（凝膠）,G因子,活化G因子,葡聚糖或LAL-RM,凝膠法、比濁法,顯色法,旁路反應(yīng),檢測原理（比色法）,22,分析前注意事項(xiàng),采用無熱原采血管 抽血后2h內(nèi)送檢 血標(biāo)本4-8最多存放48h 檢測環(huán)境應(yīng)保持清潔,23,1,3-D-葡聚糖相關(guān)影響因素,以下情況可出現(xiàn)假陽性： 使用纖維素膜進(jìn)行血透，標(biāo)本或患者暴露于紗布或其他含有葡聚糖的材料； 靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品； 鏈球菌血癥； 操作者處理標(biāo)本時(shí)存在污染； 使用多糖類抗癌藥物、放化療造成的粘膜損傷導(dǎo)致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌經(jīng)胃腸道進(jìn)入血液等也可能造成假陽性。,2

8、4,1,3-D-葡聚糖檢測臨床價(jià)值,早期診斷：侵襲性真菌感染增多且復(fù)雜，早期癥狀無特異性，往往被原發(fā)病掩蓋，病程長，發(fā)現(xiàn)較晚，死亡率高。因此對深部真菌感染治療成敗的關(guān)鍵在于早期診斷。 指導(dǎo)用藥：快速確定真菌感染后，選擇好治療方案,有針對性使用抗真菌類藥物。為臨床選用副作用小，療效高，價(jià)格適宜的藥物提供準(zhǔn)確的依據(jù)。 評價(jià)效果：應(yīng)用抗真菌藥物后，定期檢測血漿中葡聚糖濃度變化，評價(jià)選用藥物的有效性。 監(jiān)護(hù)病程：監(jiān)護(hù)深部真菌感染易感人群的病發(fā)狀態(tài)。 動(dòng)態(tài)觀察：易感人群，監(jiān)測臨床療效。,25,曲霉菌半乳甘露聚糖（GM）,Figure 1-10 Noncompetitive sandwich method

9、 of immunoassay,26,中性粒細(xì)胞減少癥患者40例 （發(fā)展為曲霉菌病的高危人群） 該研究選擇1,3-D-葡聚糖（BG）和半乳甘露聚糖（GM）兩個(gè)指標(biāo) 用于監(jiān)測中性粒細(xì)胞減少性成人曲霉菌病患者 BG和GM兩項(xiàng)指標(biāo)均可用于指導(dǎo)臨床診斷和治療真菌性疾病, 但BG可早于GM升高. BG和GM聯(lián)合檢測用于曲霉菌病的診療, 其特異性和陽性率均為100% .,例 1,Carmen Pazos, Jose Ponton, etc. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY,Jan.2005,結(jié)論： BG和GM聯(lián)合檢測有助于臨床鑒定血液病患者是否合并真菌感染, 并將單一試驗(yàn)

10、假陽性給診療帶來的影響降低到最小 .,1,3-D-葡聚糖與循環(huán)半乳甘露聚糖的檢測比較： 用于治療和監(jiān)測中性粒細(xì)胞減少性成人曲霉菌病,27,120名兒童 7月8歲 1,3-D-葡聚糖定量檢測結(jié)果： 中位數(shù) 32 pg/ml 平均值 68128 pg/ml 高值 5例 12歲 348 pg/ml 2歲 374 pg/ml 14歲 491 pg/ml 13歲 754 pg/ml 14歲 947 pg/ml 94例(78%) 180pg/ml,例 2,P.Brian Smith, Daniel K.Benjamin,Jr, etc. CLINICALAND VACCINE IMMUNOLOGY,Jul

11、y2007,結(jié)論 研究數(shù)據(jù)顯示, 健康兒童的1,3-D-葡聚糖水平高于健康成人 . 該指標(biāo)用于兒童感染性疾病的診斷應(yīng)慎重, 1,3-D-葡聚糖在兒童群體的正常值區(qū)間有待進(jìn)一步研究 .,兒童1,3-D-葡聚糖水平研究,28,非免疫功能低下兒童1,3-D-葡聚糖水平,29,血漿1,3-D葡聚糖檢測對血液病患者侵襲性真菌感染的診斷價(jià)值,本研究收集疑為IFI的血液病患者血漿標(biāo)本162例,其中化療后患者85例,造血干細(xì)胞移植后患者77例。 按照歐洲癌癥研究治療組織及真菌研究組(EORTC/MSG)診斷標(biāo)準(zhǔn),所有病例中有確定診斷2例,臨床診斷18例,擬診75例,排除診斷67例。 結(jié)果表明:以20 ng/m

12、 l為診斷界值,G試驗(yàn)的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值(PPV)和陰性預(yù)測值(NPV)分別為75%、91%、72.4%和92.4%。,例 3,劉芳,吳彤,等. 中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志Journal of Experimental Hematology 2009,30,在所有162例患者中,若無G試驗(yàn)作為診斷標(biāo)準(zhǔn),僅20例患者達(dá)到確診+臨床診斷真菌感染標(biāo)準(zhǔn),占總病例數(shù)12.3%。 若將G試驗(yàn)陽性作為微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn),則有71例達(dá)確診+臨床診斷標(biāo)準(zhǔn),占總病例數(shù)的43.8%。 在75例擬診病例中,其中51例真菌培養(yǎng)陰性而G試驗(yàn)陽性的患者,均對廣譜抗生素?zé)o效而經(jīng)過抗真菌治療病情好轉(zhuǎn),經(jīng)過臨床回顧性分析符合IFI,

13、故G試驗(yàn)使IFI診斷率提高了31.4%。,G試驗(yàn)對IF I診斷率的影響,31,小結(jié),1,3-D-葡聚糖是侵襲性真菌感染早期診斷、療效觀察、預(yù)后評估有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)診斷。 1,3-D-葡聚糖檢驗(yàn)其敏感性優(yōu)于GM 侵襲性真菌感染的診斷與治療是一個(gè)復(fù)雜過程，實(shí)驗(yàn)室與臨床應(yīng)密切聯(lián)系，為臨床醫(yī)生提供諸如顯微鏡檢查、真菌培養(yǎng)、血清學(xué)標(biāo)志物等多方面信息。,32,內(nèi)毒素定量檢測,Bacteria Endotoxin Test,33,檢驗(yàn)科醫(yī)生關(guān)注的問題,臨床的需求情況； 檢測的臨床意義以及和微生物培養(yǎng)的對比關(guān)系； 臨床臨檢的操作難易度； 儀器、試劑的價(jià)格和交易方式； 檢測項(xiàng)目是否有收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)； 檢測方法學(xué)的科學(xué)性如

14、何； 試劑的穩(wěn)定性和重復(fù)性； 后續(xù)服務(wù)；,34,臨床醫(yī)生關(guān)注的問題,檢測的臨床意義； 如何正確理解這些臨床意義； 與微生物培養(yǎng)以及PCT的對比關(guān)系； BET的適應(yīng)癥和分段區(qū)間解釋； BET測得值的影響因素有哪些？,35,前言,1892年,科學(xué)家Richard在研究霍亂弧菌的時(shí)候,發(fā)現(xiàn)革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜中有一種不溶性成分,它能夠引起人體發(fā)熱、休克、器官損害等病理表現(xiàn)，因其毒性效應(yīng)和性質(zhì)與外毒素有顯著差異，就用內(nèi)毒素這一術(shù)語來描述該物質(zhì)。隨后多年對革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜的超微結(jié)構(gòu)技術(shù)和生物分析技術(shù)，證實(shí)內(nèi)毒素是磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)。,36,革蘭陰性菌脂多糖（LPS）電鏡下結(jié)構(gòu)示意圖,O特異性抗原,核心

15、多糖,脂質(zhì)A,37,內(nèi)毒素的定義和危害,內(nèi)毒素（Endotoxin）是革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜的脂多糖（LPS）成分，是革蘭陰性菌生長時(shí)釋放或死亡后裂解出來的毒性產(chǎn)物，其中起主要致病作用的是非結(jié)合的游離脂多糖（FLPS）。 內(nèi)毒素能夠直接作用于人體，激活組織內(nèi)的炎性細(xì)胞和炎癥因子，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)熱并產(chǎn)生全身性炎癥反應(yīng)（SIRS），繼而引起彌散性血管內(nèi)凝血、休克、多臟器功能衰竭等嚴(yán)重的病理生理癥狀，危及生命，由于內(nèi)毒素與革蘭陰性菌關(guān)系密切，所以內(nèi)毒素血癥在臨床非常常見。,38,內(nèi)毒素的理化性質(zhì),耐熱性：徹底滅活需250高溫干烤一小時(shí) 可濾過性：能夠穿透濾過膜 水溶性：LPS的O-特異性Ag呈親水性 被吸

16、附性：可被活性碳所吸附 易被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和強(qiáng)氧化劑破壞 不揮發(fā)性：加熱時(shí)，不隨水蒸氣揮發(fā),39,40,人體內(nèi)毒素的來源,外源性途徑,內(nèi)源性途徑,休克,大手術(shù)術(shù)后,感染,注射藥品 及溶液,開放性創(chuàng)傷,燒傷,骨折,肝臟疾病,外 內(nèi),內(nèi)毒素來源,41,內(nèi)毒素定量檢測的臨床意義,發(fā)熱原因的快速輔助診斷（ 1小時(shí)）； 早期判斷革蘭陰性菌的感染情況； （G菌所致）膿毒癥、MODS等重癥疾患的早期診斷 幫助臨床醫(yī)生快速合理篩選適當(dāng)?shù)乃幬?抗生素)； 判斷抗感染治療效果及預(yù)后； 腸源性內(nèi)毒素血癥的預(yù)判及評估； （G：革蘭染色；MODS:多臟器功能衰竭）,42,腸源性內(nèi)毒素血癥,應(yīng)激：應(yīng)激（stress）是指機(jī)體

17、在受到各種強(qiáng)烈因素（即應(yīng)激原）剌激時(shí)所出現(xiàn)的以交感神經(jīng)興奮和垂體-腎上腺皮質(zhì)分泌增多為主的一系列神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)以及由此而引起的各種機(jī)能和代謝的改變。 各類致病因素 人體處于應(yīng)激狀態(tài) 腸道屏障功能減弱 下消化道通透性增強(qiáng) 內(nèi)毒素進(jìn)入腸道周圍淋巴結(jié) 經(jīng)淋巴管進(jìn)入肝臟 超出肝臟能夠解毒、過濾的范圍 體循環(huán) 內(nèi)毒素血癥 發(fā)熱、炎癥,43,為什么BET能有助于診斷不明原因發(fā)熱？,發(fā)熱是人體為適應(yīng)外界環(huán)境變化而產(chǎn)生的一種以體溫升高為表現(xiàn)的生理征象，在生活中和臨床上非常常見，從來源上可分為內(nèi)源性和外源性兩大方面，但無論是哪種長時(shí)間的發(fā)熱都對人體有害，因此在臨床上快速明確病因給予及時(shí)妥善治療并使體溫恢復(fù)正常是

18、所有醫(yī)生的工作重點(diǎn)。 而臨床上最常見的發(fā)熱是病原微生物引起的發(fā)熱，內(nèi)毒素別名熱原，能夠直接作用于體溫調(diào)節(jié)中樞導(dǎo)致人體發(fā)熱，而內(nèi)毒素的主要來源是由革蘭陰性菌死亡后釋放出來，況且不論哪種因素引起的感染，均會(huì)引起人體免疫屏障功能降低，繼而使得腸道屏障被破壞，最終導(dǎo)致內(nèi)毒素或其他病原微生物從腸道進(jìn)入體循環(huán)血液，因此通過測得血中內(nèi)毒素的值，不僅可直接明確導(dǎo)致人體發(fā)熱的血液中內(nèi)毒素量的多少，而且還間接判斷了革蘭陰性菌和革蘭陽性菌的感染情況，因此得以診斷不明原因發(fā)熱,44,如何理解內(nèi)毒素定量檢測能夠早期判斷革蘭陰性菌的感染情況？,內(nèi)毒素是由革蘭陰性菌在生長時(shí)少量釋放、死亡后大量崩解的一種脂多糖成分，其中G-

19、菌脂多糖毒力核心是其三種組成成分中的脂質(zhì)A，脂多糖脂質(zhì)A 只有游離出G-菌才能發(fā)揮其毒性作用，因此內(nèi)毒素的多寡大致可與革蘭陰性菌成正相關(guān)，由于人體免疫系統(tǒng)的存在及臨床抗生素的使用導(dǎo)致革蘭陰性菌被殺滅，釋放出內(nèi)毒素，因此通過定量檢測內(nèi)毒素，可以早期判斷G-菌的感染情況，為臨床的早期治療提供診斷依據(jù)。,45,如何理解內(nèi)毒素可以作為膿毒癥、MODS等重癥疾患的早期預(yù)判指標(biāo)？,內(nèi)毒素的危害主要是激活多種炎性細(xì)胞和補(bǔ)體最有效的一種物質(zhì)，并能引起SIRS、DIC、SHOCK、MODS，而這些病理疾患往往非常不易在早期被發(fā)現(xiàn)，而且一旦罹患則很難被短時(shí)間內(nèi)治愈，并對人體各臟器系統(tǒng)造成極大的危害，所以，只要內(nèi)毒

20、素存在，患者的病情就很有可能發(fā)展并演變成為SIRS、DIC、SHOCK、MODS，因此，早期診斷、早期治療這些疾患在臨床上就顯得十分重要，且這一點(diǎn)容易被臨床醫(yī)生所忽視，所以，可以把血液中內(nèi)毒素水平作為SIRS、DIC、SHOCK、MODS等臨床常見重癥疾患的早期預(yù)判指標(biāo)。 膿毒癥= 全身炎癥反應(yīng)綜合癥SIRS+革蘭陰性菌感染G-,46,BET如何幫助臨床醫(yī)生快速篩選適當(dāng)?shù)乃幬锊⒑侠硎褂每股兀?臨床醫(yī)生往往通過患者的發(fā)熱癥狀、體征、血常規(guī)、微生物培養(yǎng)藥敏試驗(yàn)及其它影像學(xué)材料來綜合考慮合理使用抗生素，但始自20世紀(jì)90年代中期開始，國內(nèi)外的一些專家通過多次體外試驗(yàn)和臨床觀察中證明抗生素有誘發(fā)內(nèi)毒

21、素釋放的作用。例如：不同類抗生素誘發(fā)內(nèi)毒素的釋放量存在著差異，以抗革蘭陰性桿菌的臨床常用的四種抗生素為例:,47,抗生素與內(nèi)毒素釋放,頭孢他定（頭孢菌素類）培福新（奎諾酮類）依米配能（碳?xì)涿瓜╊悾┌⒚卓ㄐ牵ò被沁邦悾匆陨纤姆N抗生素都能殺滅革蘭陰性菌，但在菌量下降的同時(shí)上清液中的游離內(nèi)毒素值卻是交叉樣的上升，其中以頭孢他啶引起內(nèi)毒素釋放最為明顯。 因此，一旦檢測出內(nèi)毒素超標(biāo)，就提示臨床醫(yī)生必須注意應(yīng)選用既有殺菌作用又盡量不引起內(nèi)毒素釋放的抗菌藥物，內(nèi)毒素定量檢測以此來幫助臨床醫(yī)生快速篩選適當(dāng)?shù)乃幬?，特別是指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。,48,內(nèi)毒素定量檢測如何做到評價(jià)臨床治療的目的？,內(nèi)毒素已被

22、國內(nèi)外專家公認(rèn)為是激活并產(chǎn)生多種（炎性）細(xì)胞和補(bǔ)體最有效的一種物質(zhì)，而對于人體而言，器官損害的程度與病情的輕重幾乎與各種炎性介質(zhì)釋放的多少成正比，由此可以分析：循環(huán)血中內(nèi)毒素值越低，炎性介質(zhì)釋放得越少，器官損害越弱，病情越輕；給予治療的同時(shí)復(fù)查內(nèi)毒素，就能判斷臨床治療效果的好壞。,49,內(nèi)毒素檢測結(jié)果的臨床意義分析,00.05EU/ml 正常 無明顯內(nèi)毒素血癥，尚不足以說明此時(shí)的內(nèi)毒素測得值與革蘭陰性菌感染及或膿毒癥有必然的聯(lián)系； 0.05 0.1EU/ml 輕、中度內(nèi)毒素血癥 輕、中度內(nèi)毒素血癥，此時(shí)的內(nèi)毒素測得值可被視為是革蘭陰性菌感染的輕度期或恢復(fù)期，及或膿毒癥的輕度時(shí)期或恢復(fù)期，應(yīng)給予

23、重視，建議每24小時(shí)動(dòng)態(tài)檢測一次，治療上可對癥處理； 大于0.1 EU/ml 重度內(nèi)毒素血癥 重度內(nèi)毒素血癥，此時(shí)的內(nèi)毒素測得值可被視為是嚴(yán)重革蘭陰性菌感染時(shí)分泌或死亡后大量釋放，及或膿毒癥的危重期，極易發(fā)生內(nèi)毒素的“瀑布式反應(yīng)”，建議每8小時(shí)動(dòng)態(tài)檢測一次，治療同上，同時(shí)應(yīng)考慮是否更換抗生素及改變抗生素使用的方式和劑量；,50,內(nèi)毒素在人體血液當(dāng)中的主要影響因素,外源性的內(nèi)毒素侵入 患者肝功能 血循環(huán)系統(tǒng)當(dāng)中以單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞系統(tǒng)為代表的微血管功能體系及免疫系統(tǒng) 患者腸道的屏障功能 革蘭陰性菌感染以及使用抗生素殺滅G菌后對內(nèi)毒素的釋放,51,檢測內(nèi)毒素的方法,定性檢測 凝膠法,

24、定量檢測 光度（濁度）法 動(dòng)態(tài)濁度法 終點(diǎn)濁度法 顯色（比色）法 動(dòng)態(tài)顯色法 終點(diǎn)顯色法,52,幾種檢測方法的比較,凝膠法檢測的特點(diǎn) “限量”檢測，是一種傳統(tǒng)經(jīng)典的檢測方法； 凝膠法是以試管內(nèi)反應(yīng)物凝膠牢固程度為判斷標(biāo)準(zhǔn)，易受人為因素影響； 限量檢查的最低檢測限僅為0.03EU/ml，因供試品稀釋倍數(shù)所限，容易被供試品干擾，誤差大。因此，凝膠法不適合在臨床用于體液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查；,顯色法檢測的特點(diǎn) 使用人工合成鱟三肽作為顯色基質(zhì)，細(xì)菌內(nèi)毒素與鱟試劑中C因子 系反應(yīng)所激活的凝固酶能使水解合成肽中的 精氨酸肽鏈釋放出游離的對硝基苯胺顯色，通過測量反應(yīng)液中的吸光度值而進(jìn)行定量分析的一種檢測方法。

25、此法試劑較昂貴，操作較復(fù)雜，在一定范圍之內(nèi)靈敏度、特異性較高，但檢測范圍窄；,53,動(dòng)態(tài)濁度法檢測的特點(diǎn),利用細(xì)菌內(nèi)毒素在與鱟試劑形成凝膠過程中濁度動(dòng)態(tài)變化定量測定細(xì)菌內(nèi)毒素水平 ； 動(dòng)態(tài)濁度法法檢測范圍寬，檢測范圍為 0.005EU/ml 100EU/ml，應(yīng)用范圍廣； 對樣本的內(nèi)毒素含量可以定量檢測，標(biāo)準(zhǔn)化程度高，適合用于臨床體液細(xì)菌內(nèi)毒素引起發(fā)熱及重癥疾病的早期診斷檢測；,54,內(nèi)毒素定量檢測系統(tǒng)的質(zhì)控,目標(biāo)值 實(shí)測平行對照值 （EU/ml/ 時(shí)間s） 0.5EU/ml 0.4689/ 1211s 0.4741/ 1208s 方法：用已知的內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品與鱟試劑反應(yīng)，如果不同梯度的目標(biāo)

26、值與實(shí)測值在可允許的范圍之內(nèi)，表示質(zhì)控良好（國家規(guī)定內(nèi)毒素測得值標(biāo)準(zhǔn)誤差在15%）。,55,7例內(nèi)毒素與血培養(yǎng)的結(jié)果比較,科室 內(nèi)毒素結(jié)果(EU/ml) 血培養(yǎng)結(jié)果 腦外科 0.4808 大腸埃希菌 ICU 0.2136 大腸埃希菌 ICU 0.5904 鮑曼不動(dòng)桿菌 ICU 0.1408 鮑曼不動(dòng)桿菌 腎內(nèi)科 13.4727 大腸埃希菌 肝移植科 2.1 大腸埃希菌 肝移植科 16.8792 大腸埃希菌 內(nèi)毒素超標(biāo),血培養(yǎng)陽性,56,8例內(nèi)毒素與痰培養(yǎng)的結(jié)果比較,科室 內(nèi)毒素結(jié)果(EU/ml) 痰培養(yǎng)結(jié)果 腦外科 3.0096 肺炎克雷伯菌、 鮑曼不動(dòng)桿菌 腦外科 3.2064 肺炎克雷伯菌

27、 腦外科 17.0976 肺炎克雷伯菌 腦外科 11.2776 銅綠假單胞菌、 鮑曼不動(dòng)桿菌 腎內(nèi)科 1.8264 肺炎克雷伯菌、 銅綠假單胞菌 肝移植科 2.79 鮑曼不動(dòng)桿菌 腎移植科 10.204 陰溝腸桿菌 ICU 8.0672 大腸埃希菌,57,內(nèi)毒素檢測與微生物培養(yǎng)的關(guān)系,內(nèi)毒素檢測 微生物培養(yǎng) 確定菌種 菌種確定 精確確定 指導(dǎo)用藥 檢測速度 1h 快 較慢 評估病情輕重 重疾早期預(yù)警 ,58,內(nèi)毒素定量檢測的適應(yīng)癥,各種急、慢性病理性發(fā)熱患者 各種類型“中重度感染、肝病、休克、腸道疾病、臟器功能衰竭、大手術(shù)術(shù)后”患者 慢性疾病長期臥床、免疫力低下患者 急診及ICU病房收治的生命體征不穩(wěn)定的患者,59,BET體液標(biāo)本范圍,血液 尿液 胸腔積液 腹腔積液 腦脊液,60,內(nèi)毒素血癥的預(yù)防和治療,針對病原菌合理使用敏感抗生素 盡量避免、減少腸源性內(nèi)毒素血癥的發(fā)生，針對不同原發(fā)疾病的患者可分別給予不同方式治療，如早期腸道營養(yǎng)、保護(hù)腸道粘膜（如谷氨酰胺）、促進(jìn)排便（如乳果糖、導(dǎo)瀉劑、中藥大黃等） 拮抗內(nèi)毒素治療，如內(nèi)毒素單克隆抗體、血漿