7 葉綠體熒光觀察

1、實(shí)驗(yàn)七葉綠體和細(xì)胞核的的熒光觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 觀察葉綠體的自發(fā)熒光2. 觀察葉綠體和細(xì)胞核的次生熒光3. 熟悉熒光顯微鏡的使用方法二、實(shí)驗(yàn)原理熒光:某些物質(zhì)在定短波長的光（如紫外光）的照射下吸收光能進(jìn)入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，就能 在極短的時(shí)間內(nèi)放射出比照射光波長更長的光（如 可見光），這種光就稱為熒光熒光顯微術(shù):利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行觀察的一種 技術(shù)。自發(fā)熒光:生物體內(nèi)的物質(zhì)受激發(fā)光照射后直接發(fā)出熒光， 如葉綠素的火紅色熒光和木質(zhì)素的黃色熒光等。 次生熒光:有的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光, 如葉綠體和細(xì)胞核吸附吖啶橙后分別發(fā)桔紅色和綠色熒光。

2、 吖啶橙: 可對細(xì)胞中的DNA和RNA同時(shí)染色而顯示不同顏色的熒光，DNA呈綠色熒光，RNA 呈橙紅色熒光。熒光顯微鏡成像光源濾光片三、實(shí)驗(yàn)材料與用品實(shí)驗(yàn)材料：煙草、蠶豆、大蔥葉片試劑： 0.01%吖啶橙 0.9氯化鈉溶液 儀器與器材：普通顯微鏡，熒光顯微鏡刀片，眼科鑷子（直頭），載玻片，蓋玻片，滴管， 移液管。四、實(shí)驗(yàn)方法:1、普通顯微鏡觀察葉綠體形態(tài)和數(shù)量徒手切片或撕取表皮條沿斜面切下一薄層完整組織，置于載玻片上滴加0.9NaCl溶液加蓋片后輕壓置顯微鏡下觀察，觀察記錄細(xì)胞中葉綠體的形態(tài)、數(shù)目和分布狀況2、葉綠體自發(fā)熒光觀察葉片徒手切片，表皮條，提取的葉綠體置熒光顯微鏡下用紫外激發(fā)光照射標(biāo)本觀察記錄細(xì)胞中葉綠體的形態(tài)、數(shù)目和分布狀況。3、葉綠體、細(xì)胞核次生熒光觀察葉片徒手切片，表皮條，提取的葉綠體滴加0.01%吖啶橙，加蓋玻片染色1分鐘置熒光顯微鏡下觀察，用紫外激發(fā)光照射標(biāo)本，記錄細(xì)胞中 葉綠體和細(xì)胞核的形態(tài)、數(shù)目和分布狀況。五、注意事項(xiàng):1. 吖啶橙為 物質(zhì)，使用時(shí)注意不要涂到皮膚、實(shí)驗(yàn)臺(tái)等其它器皿上。用過的載玻片放到指定地 點(diǎn)統(tǒng)一處理。2. 使用熒光顯微鏡時(shí)要正確操作。3. 吖啶橙易分解，染色時(shí)要致處，觀察時(shí)動(dòng)作