幽門螺桿菌檢查方法.ppt

1、幽門螺桿菌檢查方法,金哲,分類,臨床診斷方法分類 無創(chuàng)檢查 血清學(xué)方法、同位素標(biāo)記尿素的呼氣試驗(yàn)、胃液PCR 創(chuàng)傷性檢查 形態(tài)學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù) 原理 微生物學(xué)方法、血清學(xué)方法、尿素酶依賴技術(shù)、形態(tài)學(xué)方法、基因診斷,一、微生物學(xué)方法,主要為細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)，診斷Hp感染的“金標(biāo)準(zhǔn)” 獲得抗原制備、藥敏試驗(yàn)、分型和致病性研究等所需的細(xì)菌 要求具有一定的厭氧培養(yǎng)條件和技術(shù)，作為常規(guī)診斷手段不易推廣,二、血清學(xué)方法,1、ELISA檢測：檢測外周血中Hp全菌及其組分（細(xì)胞毒素的抗體），主要用于不同人群中Hp感染情況的流行病學(xué)調(diào)查和根除治療后較長期（3月）的復(fù)查 一般不單獨(dú)用作醫(yī)院病人Hp感染

2、和根除（治療后一個(gè)月）的診斷依據(jù) 操作復(fù)雜但方法日益標(biāo)準(zhǔn)化，商品化試劑大大簡化了技術(shù)難度，但需昂貴的酶標(biāo)儀,二、血清學(xué)方法,2、免疫酶試驗(yàn) 用固定于玻片中的Hp菌，與病人血清中的Hp抗體結(jié)合，經(jīng)酶標(biāo)二抗顯色鏡檢進(jìn)行診斷 操作簡便，不需要特殊儀器，但準(zhǔn)確性稍差，判斷需要經(jīng)驗(yàn),二、血清學(xué)方法,3、膠乳凝集試驗(yàn) 用結(jié)合在膠乳顆粒上的Hp檢測微量血中的抗體 優(yōu)點(diǎn)是不需儀器，血樣需量少 但結(jié)果 需要經(jīng)驗(yàn)且準(zhǔn)確性不滿意,二、血清學(xué)方法,4、Western-blot 主要用于分析感染者血中對(duì)Hp多種抗原組分的抗體產(chǎn)生情況 可以控制抗原制備質(zhì)量和分析與其他類似菌的交叉反應(yīng) 但操作復(fù)雜，技術(shù)難度大且不穩(wěn)定，不作

3、常規(guī)診斷方法,由于Hp感染數(shù)周后血中才出現(xiàn)特異抗體，陰性者血中也可存在交叉反應(yīng)抗體（如空?qǐng)鰪澢腥荆?，且Hp根除后血中抗體可長時(shí)間（6個(gè)月）維持在陽性水平，故血清學(xué)陽性不能完全肯定病人有活動(dòng)性感染；陰性不能排除初期的感染。因此，血清學(xué)抗體的檢測只能用于流行病學(xué)篩查，而不能用于臨床診斷,三、尿素酶依賴技術(shù),1、呼氣試驗(yàn) 用13C或14C同位素標(biāo)記尿素讓病人口服后被Hp尿素酶分解，產(chǎn)生13CO214CO2，陽性者可在呼出氣中檢測出13C 豐度和14C活性，從而確診Hp感染 13C試驗(yàn): 優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確，特異，快捷，無創(chuàng)傷，無放射性 缺點(diǎn)：儀器價(jià)格昂貴,三、尿素酶依賴技術(shù),2、15N-尿氨排出試驗(yàn) 病人口服15N-尿素后，測定尿液中的15N豐度 優(yōu)點(diǎn):非侵襲性，無放射性，有一定定量意義，敏感性與特異性極高，能克服胃活檢標(biāo)本局限性 缺點(diǎn)：設(shè)備昂貴,三、尿素酶依賴技術(shù),3、快速尿素酶試驗(yàn) 原理:根據(jù)試劑pH值變化引起顏色變化來判斷Hp感染狀態(tài) 操作簡便易行 標(biāo)本中細(xì)菌數(shù)104以上時(shí)才能顯示陽性，而標(biāo)本的大小、反應(yīng)時(shí)間、環(huán)境溫度，觀察者主觀因素等均可影響結(jié)果,四、形態(tài)學(xué)方法,組織切片染色，組織學(xué)染色，免疫組化染色 可在顯微鏡下直接觀察細(xì)菌，可進(jìn)行胃粘膜的病理學(xué)診斷 需要胃鏡檢查和觀察者經(jīng)驗(yàn),五、基因診斷,插胃管吸取胃液或胃鏡下取胃液或活檢組織，提取DNA做PCR擴(kuò)增