GB 29685-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物性食品中林可霉素、克林霉素和大觀霉素多殘留的測定 氣相色譜—質(zhì)譜法

  G 中華人民共和國 國 家標(biāo)準(zhǔn)  9685 2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)  動物性食品中林可霉素 、克林霉素 和大觀霉素多殘留 的測定  氣相色譜 質(zhì)譜法  in 013布  2014施  中華人民共和國農(nóng)業(yè)部  中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會  發(fā)布  I 目   次  目   次  . I 前   言  . 物性食品中林可霉素、克林霉素和大觀霉素多殘留的測定  氣相色譜 .  .  2 規(guī)范性引用文件  .  3 原理  .  4 試劑和材料  .  5 儀器和設(shè)備  .  6 試料的制備與保存  .  料 的制備  .  料的保存  .  7 測定步驟  .  準(zhǔn)曲線的制備  .  取  .  化  .  定  .  白實驗  .  8 結(jié)果計算與表述  .  9 檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度  .  敏度  .  確度  .  密度  .  附錄  A .     言  本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。  本標(biāo)準(zhǔn)系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)。    動物性食品中林可霉素、克林霉素和大觀霉素多殘留 的測定  氣相色譜 質(zhì)譜法  本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物性食品中林可霉素、克林霉素和大觀霉素殘留 量 檢測的制樣和氣相色譜  本標(biāo)準(zhǔn)適用于 豬 、牛和雞的肌肉和 腎臟 以及牛奶和 雞蛋中 林可霉素、克林霉素和大觀霉素單個或多個藥物殘留量 的 檢測。  2 規(guī)范性引用文件  下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件， 其 隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或 修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。   準(zhǔn)化工作導(dǎo)則  第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則   6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法  3 原理  試料 中殘留的林可霉素、克林霉素和大觀霉素， 用磷酸緩沖液提取， 3三氯乙酸沉淀蛋白，離子對原理反相 凈化， N,甲基硅烷基）三氟乙酰胺 衍生， 氣相色譜 標(biāo)法定量 。  4 試劑和材料  以下所用的試劑，除特別注明外均為 分 析 純試劑，水為符合  6682 規(guī)定的一級水。  酸 林可霉素 標(biāo)準(zhǔn)品 ： 含量 99 ； 鹽酸 克林霉素 和鹽酸 大觀霉素標(biāo)準(zhǔn)品 ： 含量 95 。  N,甲基硅烷基）三氟乙酰胺  乙酸 ：優(yōu)級純。  甲醇 ：色譜純。  乙睛 ：色譜純。  正己烷 ：色譜純。  磷酸二氫鉀 ：優(yōu)級純。  磷酸 ：優(yōu)級純。    氫氧化鉀 ：優(yōu)級純。  三氯乙酸 ：優(yōu)級純。  十二烷基磺酸鈉 ：色譜純。  相萃取 柱 ： 60  或 相當(dāng)者 。  提取液  ： 取磷酸二氫鉀 g， 用 水溶解并稀釋至 1 000 用 磷酸調(diào)節(jié)   3三氯乙酸溶液 ： 取三氯乙酸 3.0 g，用水溶解并 稀釋 至 100  2 氫氧化鉀溶液 ： 取氫氧化鉀 11.6 g， 用 水溶解并 稀釋 至 100  十二烷基磺酸鈉溶液 ： 取十二烷基磺酸鈉 g，用水溶解 并稀釋 至 50  十二烷基磺酸鈉緩沖液 ： 取十二烷基磺酸鈉 g， 用水溶解，加 乙酸 1 用水稀釋 至 500  1 mg/可霉素、克林霉素 和 大觀霉素 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 ： 精密 稱取林可霉素、克林霉素 和 大觀霉素標(biāo)準(zhǔn)品 各 10 別 于 10 瓶中，用甲醇溶解 并 稀釋至刻度 ， 配 制成 濃度為 1 mg/ 林可霉素、克林霉素 和 大觀霉素 標(biāo)準(zhǔn) 貯備液。 2 8 避光保存，有效期 6 個月。  100 g/ 精密量取 1 mg/林霉素和大觀霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液 各 1.0 別于 10 瓶中， 用甲醇稀釋 至刻度，配制 成 濃度為 100 g/ 林可霉素、克林霉素 和 大觀霉素 標(biāo)準(zhǔn)工作液 。 2 8 避光保存 ，有效期 1 周。  5 儀器和設(shè)備  相色譜 配  。  析天平 ： 感量 1 g。  平 ： 感量 g。  凍高速離心機  熱恒溫水浴鍋  渦混合器  質(zhì)機  四氟乙烯離心管 ： 50  6 試料的制備與保存  料 的制備  、牛 和 雞的肌肉、肝臟和腎臟 組織  取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎 ， 并使 均 質(zhì)。   取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料 。   取 均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。   取 均質(zhì)后的 空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 ， 作為空白添加試料。  奶 和 雞蛋    取適量新鮮或冷藏的空白或供試牛奶 和 雞蛋，混合 ， 并使 均 質(zhì) 。   取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料 。   取 均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。   取 均質(zhì)后的空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 ， 作為空白添加試料。  料 的保存  組織 試料 以下 保存 。雞蛋 和 牛奶 試料 2 8 以下 保存 。  7 測定步驟  質(zhì)匹配 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備  分別 精密量取 100 g/可霉素、克林霉素和大觀霉素標(biāo)準(zhǔn) 工作 液適量，用甲醇稀釋 ，配制 成濃度為 50、 100、 200、 400、 800、 1 600 和 3 200 g/L 的系列 混合 標(biāo)準(zhǔn) 溶 液，各 取 分別溶解經(jīng) 提取、凈化及吹干 的 空白試料 殘余物，充分混勻， 室溫吹干，加 N,甲基硅烷基）三氟乙酰胺 500 L 和乙腈 100 L，渦旋混合 1 封， 于 75 恒 溫箱 衍生反應(yīng) 1 h， 于 室溫 氮氣吹干，加正己烷 0.5 解殘余物 ，渦旋 混勻 ，供氣相色譜 定 。 以 測 得峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。  取  肉 和 腎臟 組織  稱取試料 （ 5g， 于 50 四氟乙烯離心管中，加提取液 10 蕩 5 5 000 r/0  上清液 于另一離心管中 ， 殘渣中加 提取液 10 重復(fù)提取一次 ， 合并 兩次 上清液，加 3三氯乙酸溶液 5 混勻， 8 000 r/心 10  上清液 ， 用 2  氫氧化鉀溶液調(diào) 十二烷基磺酸鈉溶液 2 渦混勻 ， 靜置 15 用。  奶 和 雞蛋 組織  稱取 試料（ 5g， 于 50 四氟乙烯離心管中，加 提取液 10 振蕩 5 5 000 r/0  上清液 于另一離心管中 ， 殘渣中加 提取液 10 重復(fù)提取一次 ， 合并 兩次 上清液，加 正己烷 5 混勻， 5 000 r/心 15 取下層液， 用 2  氫氧化鉀溶液調(diào)  十二烷基磺酸鈉溶液 2 渦混勻 ， 靜置 15 用。  化  依次用甲醇 3  3  十二烷 基 磺酸鈉緩沖液 3 化 ，取備用液過柱，用水 淋洗兩次， 每次 3  甲醇 4 脫，收集洗脫液， 于 40 水浴 氮氣吹 至近干 ，室溫 吹干 ， 加 N,甲基硅烷基）三氟乙酰胺 500 L 和乙腈 100 L，渦旋混合 1 封， 于 75 恒 溫箱 衍生反  應(yīng) 1 h，室溫氮氣吹干， 用 正己烷 0.5 解殘余物 ，渦旋混 勻 ，供氣相色譜 定 。  定  譜條件  色譜柱：毛細管色譜柱 5%苯基甲基聚硅氧烷）， （ 30 m  或相當(dāng)者 ；  進樣口溫度： 280 ；  進樣方式：  不分流 ；  進樣體積： 1 L；  模式：  恒流 ；  載氣：氦氣（  ；  柱流速： 1 mL/ 柱溫升溫程序 ：  表 1 柱溫升溫程序  起始溫度    終止溫度    升溫速率   /持時間  時間  50 150 150 300  20 0  質(zhì)譜條件  離子源溫度： 200  接口溫度： 280  質(zhì)譜采集（ 林可霉素和克林霉素掃描離子： 126（定量離子）， 127， 73 大觀霉素掃描離子： 145（定量離子）， 171， 187， 201 定法  性測定  通過樣品色譜圖的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間、 各色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品各色譜峰的特征離子相對照定性。樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間的相對偏差不大于 5；樣品特征離子的相對豐度 與濃度相當(dāng)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表 2 的規(guī)定，則可判斷樣品中存在相應(yīng)的被測物 。  表 2 定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差  相對離子豐度  50% 20%至 50% 10%至 20% 10% 允許的相對偏差  10% 15% 20% 50% 將供試試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離子面積之比作單點校正定量。  量測定  取試樣溶液和 標(biāo)準(zhǔn)溶液 ，按外 標(biāo)法 ，以峰面積 定量，標(biāo)準(zhǔn) 溶 液及試樣 溶 液中 林可霉素、克林霉素和大觀霉素 響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。在上述色譜 林可霉素、克林霉素和大觀  霉素 標(biāo)準(zhǔn)溶液和 空白 添加 試樣溶液 中特征離子質(zhì)量色譜圖 見附錄 A。  白實驗  除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作。  8 結(jié)果計算與表述  單點校準(zhǔn)：  或基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)：由 b，  求得 a和 b，則  試料中 林可霉素、克林霉素和大觀霉素 的殘留 量 （ g/， 按下式計算：   式中：  X 供試試料 中 相應(yīng)的 林可霉素、克林霉素或大觀霉素 的殘留量 ， g/     標(biāo)準(zhǔn)溶液中 相應(yīng)的 林可霉素、克林霉素或大觀霉素 濃度 ， g /L；                   C 供試試料 溶液中 相應(yīng)的 林可霉素、克林霉素或大觀霉素 濃度 ， g /L；                            標(biāo)準(zhǔn)溶液中 相應(yīng)的 林可霉素、克林霉素或大觀霉素 的衍生物的峰面積；  A 供試試料溶液中 相應(yīng)的 林可霉素、克林霉素或大觀霉素 的衍生物的峰面積；                             V 溶解 殘余物 體積 ，               m 供試試料質(zhì)量 ， g。      注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。  9 檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度  敏度  本方法 的檢測限， 林可霉素 和 克林霉素 為 15 g/觀霉素為 25 g/ 本方法 林可霉素 和 克林霉素在肌肉、牛奶 和 雞蛋中 的定量限為 20 g/腎臟中定量限為 50 g/大觀霉素 的定量限 為 50 g/ 確度  本方法 克林霉素 在 20 200 g/可霉素 在 20 3 000 g/ 大觀霉素 在 50 4 000 g/加濃度 水平上 回收率 為 70% 110%。                         &nb