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霉菌的檢測(cè),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x 1.了解糧食中真菌檢測(cè)的衛(wèi)生學(xué)意義和基本過(guò)程。 2.掌握分離培養(yǎng)和鑒定霉菌的方法及特點(diǎn)。 3.掌握常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌的鏡下鑒別特征。,二、儀器設(shè)備和試劑 1.器材 溫箱(2528)、振蕩器、天平、顯微鏡、玻塞三角瓶(300ml)、試管(15mm150mm)、平皿(直徑9cm)、吸管(1ml和10ml)、酒精燈、載物玻璃、蓋玻片、廣口瓶、牛皮紙袋(121滅菌20min、試管架、接種針、橡皮乳頭、金屬勺、刀等。,2.培養(yǎng)基 (1)PDA培養(yǎng)基:由于該培養(yǎng)基含有天然成分,霉菌、酵母發(fā)育良好。 (2)孟加拉紅培養(yǎng)基:培養(yǎng)基中加入氯霉素和孟加拉紅,能聯(lián)合抑制細(xì)菌,對(duì)樣品中的霉菌和酵母的選擇性好,且孟加拉紅能限制霉菌菌絲的擴(kuò)展生長(zhǎng),使菌落局限,便于計(jì)數(shù),已在國(guó)際上廣泛應(yīng)用。 (3)高鹽察氏培養(yǎng)基:專(zhuān)門(mén)用于糧食等水分含量較低樣品的霉菌計(jì)數(shù),由于含鹽量高,酵母、細(xì)菌都生長(zhǎng)不良,因而不必添加抗生素。,三、霉菌的檢測(cè)內(nèi)容,(1)采樣 (2)表面除菌 (3)接種與培養(yǎng) (4)計(jì)數(shù) (5)鏡檢與初分離 (6)常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌的鑒定,(1)采樣:采取有代表性的樣品250-500g,盡快檢驗(yàn)。 (2)表面除菌:無(wú)菌水反復(fù)沖洗。 (3)接種與培養(yǎng):糧粒均勻插到高滲察氏培養(yǎng)基中,5-10粒/皿。共100粒。 (4)計(jì)數(shù):選擇10-150間的數(shù)字進(jìn)行計(jì)數(shù)。 (5)鏡檢與初分離: (6)常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌的鑒定:,常見(jiàn)產(chǎn)毒霉菌的鑒定特征 (1)寄生曲霉:生長(zhǎng)較快,深綠色至暗綠色,絨狀。 (2)黃曲霉:生長(zhǎng)較快,開(kāi)始黃色,后變成黃綠色,絨狀。 (3)棕曲霉:生長(zhǎng)較快,暗土黃色,絨狀,背面黃褐色至紫褐色。 (4)構(gòu)巢曲霉:生長(zhǎng)較快,暗綠色,生閉囊殼部分呈黃褐色,絨狀,背面呈紫褐色。 (5)黃綠青霉:絨狀,表面突起或凹陷,淡黃灰綠色,有淺黃色滲出液,背面亮黃色。 (6)橘青霉:艾綠色,表面有放射狀溝紋,黃色滲出液,背面黃色。 (7)島青霉:生長(zhǎng)局限,致密叢生或繩狀,橙色、紅色、暗綠色的胡合體,背面褐色。,鏡檢觀察方法,一 直接檢查 不染色標(biāo)本的直接檢查: 直接采取標(biāo)本制片、顯微鏡下直接觀察,若發(fā)現(xiàn)真菌菌絲或孢子存在時(shí),即可初步判定為真菌污染。 染色標(biāo)本檢查 1)革蘭氏染色: 各種真菌均為革蘭氏陽(yáng)性,為深藍(lán)色。 2)乳酸酚棉藍(lán)染色(或是乳酸苯酚液): 直接滴加到載玻片上,再加入真菌涂開(kāi)進(jìn)行觀察。,糧食中常見(jiàn)污染的真菌形態(tài)特征,曲霉屬:分生孢子頭; 青霉屬:帚狀枝; 鐮刀菌屬
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