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文檔簡介
華中農業(yè)大學本科課程考試試卷 考試課程與試卷類型:基因操作原理 姓名:學年學期:2003-2004-2 學號: 考試時間:2004-05-28 班級: 一、填空題(每小題2分,共24分)1. 限制性內切酶的命名主要根據_來確定,以下各種書寫方式中哪種或哪幾種是正確_。 A: SalI; B: SmaI; C: HindIII; D: HindIII; E: Tth111I; F: Bsp1286I; G: NotI2. RNA polymerase 可識別啟動子并啟動基因的轉錄從而合成mRNA,_和_方法可用來檢測mRNA合成的起始位置。3. 在分子克隆常用的E.coli菌株中Dam 和Dcm 甲基化酶都是有活性的,它們可在DNA的特定位點作甲基化修飾,而許多限制性內切酶位點對甲基化是敏感的,如ClaI (AT/CGAT)。請問ClaI能切割以下哪個或哪些來自dam+ dcm+ E.coli菌株的DNA序列_。 (A) ATCGATA; (B) ATCGATG; (C) ATCGATC; (D) ATCGATT.4. 從高溫嗜熱細菌中發(fā)現(xiàn)高溫DNA polymerase后,使得PCR技術得以廣泛應用,在高溫下有活性的DNA polymerase有_、_、_、_。其中具有3-5外切活性的高溫DNA polymerase有_和_。5. DNase I 切割DNA的方式受條件的影響, 在Mn+存在下_ _,在Mg+存在下_。6. 限制性內切酶有其特定的識別位點,如EcoRI 的識別位點為 _;_限制性內切酶 與 _限制性內切酶切割DNA形成的末端相同。7. Lambda phage 的基因組在噬菌體顆粒中是_,在感染宿主細胞后主要以_形式存在。 8. Sequenase 是用于_的工具,與_最相似,但不同之處在于_ 。9. 在基因操作過程中有許多對人體有害的物質, 應小心使用, 常用的有害物質有 : _, _, _, _。10. Splicing by overlap extension 是一種_ 工作方式,可用于對兩個DNA片段作_連接。11. Competent cells 是一種處于_狀態(tài)的細胞, electroporation 是指一種將_(物質)通過_方式_遺傳轉移方法。12. 用于基因克隆的載體種類繁多,從克隆片段的大小來看,可分為常規(guī)克隆載體和大容量克隆載體。常見的大容量克隆載體有_,_,_,_。二、名詞解釋(每小題3分,共24分)1Klenow fragment2. BAC vector3. CIP4. IPTG/X-gal5. M13KO76. Site preference7. Nick translation8. Plateau effect ( in PCR)三、分析簡答題(每小題5分,共25分)1當利用質粒載體從基因組中克隆得到含有目標基因的DNA片段后,通過限制性內切酶切割該重組DNA可制作該目標DNA片段的物理圖譜。例如,選用3種內切酶切割重組pBlue-A,通過agarose電泳分析,得到如下大小的DNA片段。請標出酶切位點A的相對位置。EcoRI:10kb HindIII:10kbA酶:4kb, 3.5kb, 2.5kbHindIII和EcoRI :4kb, 6kbA酶和EcoRI:3.5kb, 2.5kb, 2.5kb, 1.5kbA酶和HindIII:4kb, 2.5kb, 1.0kb, 2.5kbpBlue-A10000 bps200040006000800010000/0EcoRI30005000700090001000HindIII2右圖是一個常用克隆載體的遺傳圖譜。請問該載體有何主要特點,利用該特點可作何用途,舉出一種構建該特點的方法。3 許多限制性內切酶切割DNA后可產生相同的突出末端,這些產物彼此之間可進行粘端連接。但在連接產物中相應位置的酶切位點就不存在了。例如某DNA片段用ClaI (AT/CGAT)酶切后,可與AccI (GT/CGAC)切割的載體連接,但在連接點處的ClaI和AccI位點都消失了,相應的序列變成了ATCGAC。右圖最上面的序列為ClaI/ AccI連接處的DNA序列。通過右邊步驟可在連接點處恢復ClaI位點,請指出每一步所用的關鍵酶和底物。SphI位點:GCATG/CRecovering ClaI-ATCGA CAAGCTT-TAGCTGGCC AA-ATCGA TT-TAGCT AA-ATCGATT-TAGCTAA-ATCGACCGGCATGCAAGCTT-TAGCTGGCCGTACGTTCGAA-ATCGACCGGCATG CAAGCTT-TAGCTGGCC GTACGTTCGAA-( )( )( , )( )4右圖是一個典型的E.coli表達載體,利用T7噬菌體的啟動子可達到高效表達的目的。在利用T7噬菌體的啟動子表達時,一般對宿主菌有一定要求,通常使用BL21(DE3)菌株。請問該載體利用T7噬菌體的啟動子高效表達外源基因的工作原理。5. 下圖是通過Kunkel法進行DNA定點誘變的流程示意圖。請結合流程步驟,簡述其工作原理。四、問答題 (每小題9分,共27分)1. 截至2004年5月17日,有9種真核生物、144種細菌和18中古細菌完成了基因組測序工作。在某一植物基因組測序過程中,通過生物信息分析發(fā)現(xiàn)一個全新的ORF,試問如何檢測該植物是否表達出相應ORF的蛋白質產物?如果存在該蛋白產物的話,請問如何找到與之發(fā)生相互作用并結合的其他蛋白質的編碼基因。2. 通過生物化學的的方法從某植物中分離到一個蛋白質活性因子,若要在E.coli中大量表達該蛋白質,試問如何分離得到該基因。3. 禽流感(AI) 是正粘病毒科流感病毒屬A 型流感病毒(AIV)引起的禽類的烈性傳染病。禽流感病毒中能引起AI 暴發(fā)流行的高致病力AIV 毒株僅有H5和H7兩個血清型。其基因組由8 條單鏈(-)RNA 組成, 編碼10 種蛋白(PA、PB1、PB2、HA、NA、N P、M1、M2、NS1、NS2)。目前已經測定了許多不同來原AIV的蛋白基因,其核苷酸序列在GenBank上注冊。從廣東分離到一株名為GD1/96(H5N1)的AIV,提取病毒基因組總RNA ,運用反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR) 技術分
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