GB5009.243-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)高溫烹調(diào)食品中雜環(huán)胺類物質(zhì)的測定.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.2 4 32 0 1 6食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)高溫烹調(diào)食品中雜環(huán)胺類物質(zhì)的測定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 7 - 0 3 - 0 1實(shí)施中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā) 布G B5 0 0 9.2 4 32 0 1 61 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)高溫烹調(diào)食品中雜環(huán)胺類物質(zhì)的測定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高溫烹調(diào)食品中2 -氨基- 3,4 -二甲基咪唑并4,5 - f 喹啉(M e I Q) ,2 -氨基- 3,8 -二甲基咪唑并4,5 - f 喹啉(M e I Q x) ,2 -氨基- 3,4,8 -三甲基咪唑并4,5 - f 喹啉(4,8 - D i M e I Q x) ,2 -氨基- 3,7,8 -三甲基咪唑并4,5 - f 喹啉(7,8 - D i M e I Q x) ,2 -氨基- 1 -甲基- 6 -苯基-咪唑并4,5 - b 吡啶(P h I P) 等雜環(huán)胺的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于烤魚、 烤肉及其制品中M e I Q、M e I Q x、4,8 - D i M e I Q x、7,8 - D i M e I Q x、P h I P的測定。2 原理試樣采用氫氧化鈉/甲醇溶液提取, 固相萃取柱凈化, 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測, 內(nèi)標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說明, 所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 氫氧化鈉。3.1.2 乙酸銨: 純度9 8%。3.1.3 甲醇: 色譜純。3.1.4 乙醇: 色譜純。3.1.5 正己烷: 色譜純。3.1.6 二氯甲烷: 色譜純。3.1.7 乙腈: 色譜純。3.1.8 冰乙酸: 色譜純。3.2 試劑配制3.2.1 氫氧化鈉溶液(4 0g/L) : 稱取4 0.0g氫氧化鈉, 用水溶解并定容至1L。3.2.2 氫氧化鈉溶液(4g/L) : 量取4 0g/L氫氧化鈉溶液(3.2.1)5 0m L, 加入4 5 0m L水, 混合均勻。3.2.3 4 0g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液(7 0+3 0, 體積分?jǐn)?shù)) : 量取4 0g/L氫氧化鈉溶液(3.2.1)7 0m L,加入3 0m L甲醇, 混合均勻。3.2.4 4g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液(4 5+5 5, 體積分?jǐn)?shù)) : 量取4g/L氫氧化鈉溶液(3.2.2)4 5m L, 加入5 5m L甲醇, 混合均勻。3.2.5 乙醇-二氯甲烷混合溶液(1 0+9 0, 體積分?jǐn)?shù)) : 量取1 0m L乙醇, 加入9 0m L二氯甲烷, 混合均勻。3.2.6 乙腈-水溶液(5+9 5, 體積分?jǐn)?shù)) : 量取5m L乙腈, 加9 5m L水, 混合均勻。G B5 0 0 9.2 4 32 0 1 62 3.2.7 乙酸-乙酸銨緩沖液: 稱取1.1 5 5g乙酸銨, 用4 5 0m L水溶解, 用乙酸調(diào)p H至5.00.5, 加水定容至5 0 0m L。3.2.8 乙酸緩沖液-乙腈混合溶液(5 0+5 0, 體積分?jǐn)?shù)) : 量取乙酸-乙酸銨緩沖液(3.2.7)5 0m L, 加入5 0m L乙腈, 混合均勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 雜環(huán)胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):M e I Q(C1 2H1 2N4,7 7 0 9 4 - 1 1 - 2) 、M e I Q x(C1 1H1 1N5,7 7 5 0 0 - 0 4 - 0) 、4,8 - D i M e I Q x(C1 2H1 3N5,9 5 8 9 6 - 7 8 - 9) 、7,8 - D i M e I Q x(C1 2H1 3N5,9 2 1 8 0 - 7 9 - 5) 、P h I P(C1 3H1 2N4,1 0 5 6 5 0 - 2 3 - 5) , 純度均大于9 9%。3.3.2 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)4,7,8 - T r i M e I Q x(C1 3H1 5N5,1 3 2 8 9 8 - 0 7 - 8) , 純度大于9 9%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 雜環(huán)胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液: 將M e I Q、M e I Q x、4,8 - D i M e I Q x、7,8 - D i M e I Q x、P h I P(3.3.1) 分別用乙腈配制成濃度為1 0.0g/m L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。3.4.2 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液: 將4,7,8 - T r i M e I Q x(3.3.2) 用乙腈配制成濃度為1 0.0g/m L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。3.4.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液: 吸取雜環(huán)胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1) 及內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液(3.4.2) , 乙腈-水溶液(3.2.6) 稀釋, 得到雜環(huán)胺濃度分別為0.5g/L、1.0g/L、5.0g/L、2 0.0g/L、5 0.0g/L、1 0 0g/L, 內(nèi)標(biāo)濃度為2 0.0g/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。3.4.4 內(nèi)標(biāo)工作液: 吸取適量內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液(3.3.2) , 用乙腈配制成濃度為2 0 0g/L的內(nèi)標(biāo)工作液。3.5 材料3.5.1 微孔濾膜:0.2m, 有機(jī)系。3.5.2 苯乙烯二乙烯基苯共聚物固相萃取柱(L i c h r o l u tE N或相當(dāng)者,3m L,2 0 0m g) 。4 儀器與設(shè)備4.1 液相色譜儀-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀: 配有電噴霧離子源。4.2 電子天平: 感量為0.0 1m g、1m g。4.3 p H計(jì): 感量為0.0 1。4.4 高速離心機(jī), 轉(zhuǎn)速不低于1 00 0 0r/m i n。4.5 氮?dú)鉂饪s儀。4.6 固相萃取裝置。4.7 均質(zhì)器。4.8 旋渦振蕩器。5 分析步驟5.1 試樣制備烤魚、 烤肉及其制品取可食部分, 搗碎混勻, 標(biāo)識(shí)后-1 8冷凍保存。5.2 試樣處理5.2.1 提取: 稱取試樣2g( 精確到0.0 1g) 于5 0m L離心管中, 加入2 0 0L內(nèi)標(biāo)工作液(3.4.4) , 再加入G B5 0 0 9.2 4 32 0 1 63 9.8m L4 0g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液(3.2.3) , 均質(zhì)1m i n。均質(zhì)器刀頭分別用5.0m L4 0g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液(3.2.3) 各洗滌兩次, 洗滌液合并至樣品提取離心管中。試樣在1 00 0 0r/m i n條件下離心1 0m i n, 待凈化。5.2.2 凈化: 固相萃取柱(3.5.2) 預(yù)先依次用2m L甲醇、3m L4g/L氫氧化鈉溶液(3.2.2) 活化。量取1 0m L提取液加入固相萃取柱中, 棄去流出液后, 依次用3m L4g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液(3.2.4) 、2m L正己烷洗淋, 每次淋洗完后都需將柱體內(nèi)淋洗溶液抽干, 最后用1.5m L乙醇-二氯甲烷溶液(3.2.5) 洗脫, 洗脫流速小于1m L/m i n。洗脫液于3 5水浴下氮?dú)鉂饪s至近干后, 加入1.0m L乙酸緩沖液-乙腈混合溶液(3.2.8) , 渦旋混勻, 微孔濾膜(3.5.1) 過濾至進(jìn)樣小瓶, 待上機(jī)分析測定。5.3 測定5.3.1 液相色譜條件5.3.1.1 色譜柱:C1 8柱(2.5m,1 0 0mm2.1mm) 或相當(dāng)者。5.3.1.2 流動(dòng)相:A為乙酸-乙酸銨緩沖液(3.2.7) ,B為乙腈。梯度洗脫程序參見附錄A中A.1。5.3.1.3 流速:0.3m L/m i n。5.3.1.4 柱溫:4 0。5.3.1.5 進(jìn)樣量:5L。5.3.2 質(zhì)譜條件5.3.2.1 電離方式: 電噴霧電離正離子模式(E S I +) 。5.3.2.2 掃描方式: 多反應(yīng)監(jiān)測(MRM) 。5.3.2.3 其他質(zhì)譜條件見附錄B。5.3.3 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定通過液相色譜將試樣溶液進(jìn)行分離后注入串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀中, 得到相應(yīng)的保留時(shí)間及信號響應(yīng)值, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相應(yīng)目標(biāo)化合物的濃度。進(jìn)行樣品測定時(shí), 如果檢出的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品一致, 并且在扣除背景后的樣品譜圖中, 各定性離子的相對豐度與濃度接近的同樣條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖相比, 最大允許相對偏差不超過表1中規(guī)定的范圍, 則可判斷樣品中存在對應(yīng)的待測物。在上述儀器條件下, 標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(MRM) 色譜圖參見附錄C中圖C.1。表1 定性確證時(shí)相對離子豐度最大允許偏差相對離子豐度/%5 02 05 01 02 01 0允許的相對偏差/%2 02 53 05 0 以雜環(huán)胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中雜環(huán)胺和內(nèi)標(biāo)的濃度比為橫坐標(biāo), 以峰面積比為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 按照內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量計(jì)算。待測樣液中雜環(huán)胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi), 超過線性范圍則應(yīng)重新分析。5.4 空白試驗(yàn)除不加試樣外, 均按5.2操作步驟進(jìn)行。G B5 0 0 9.2 4 32 0 1 64 6 結(jié)果計(jì)算試樣中雜環(huán)胺含量按式(1) 計(jì)算。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。X=cVm(1) 式中:X 試樣中雜環(huán)胺含量, 單位為微克每千克(g/k g) ;c 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算得出的樣液中雜環(huán)胺濃度, 單位為微克每升(g/L) ;V 樣液最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 樣液所代表的最終試樣的質(zhì)量, 單位為克(g) 。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示, 結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7 回收率和精密度本方法在0.5g/k g5 0g/k g添加濃度的回收率為6 3.3%1 2 4%, 精密度范圍為6.2 6%1 8.2%。8 其他方法的檢出限和定量限見表2。表2 檢出限和定量限表化合物檢出限g/k g定量限g/k gM e I Q0.10.5M e I Q x0.31.04,8 - D i M e I Q x0.21.07,8 - D i M e I Q x0.21.0P h I P0.10.5G B5 0 0 9.2 4 32 0 1 65 附 錄 A梯度洗脫程序 流動(dòng)相梯度洗脫程序見表A.1。表A.1 流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間m i n流動(dòng)相A%流動(dòng)相B%09 5.05.00.59 5.05.03.07 0.03 0.06.04 0.06 0.06.15.09 5.06.55.09 5.06.69 5.05.07.09 5.05.0G B5 0 0 9.2 4 32 0 1 66 附 錄 B質(zhì)譜參考條件 質(zhì)譜參考條件:a) 毛細(xì)管電壓:3.0k V。b) 離子源溫度:1 0 0。c) 脫溶劑氣溫度:3 5 0。d) 脫溶劑氣(N2) 流量:8 0 0L/h。e) 錐孔氣(N2) 流量:5 0L/h。f) 其他質(zhì)譜參數(shù)見表B.1。表B.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)MRM參數(shù)表序號標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)母離子m/z子離子m/z錐孔電壓V碰撞電壓V駐留時(shí)間s1M e I Q2 1 2.91 9 7.1a1 9 8.14 04 03 52 50.2 52M e I Q x2 1 3.91 3 0.9a1 9 9.04 04 03 62 60.3 234,8 - D i M e I Q x2 2 7.91 5 9.8a2 1 2.14 04 03 52 50.1 047,8 - D